Мониторинговые исследования на африканскую чуму свиней

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

Отбор проб для вирусологических исследований. Для обнаружения вируса африканской чумы свиней, антигена или генома от павших или убитых с диагностической целью свиней отбирают массой 5-10 г - селезёнку (1/3 часть), портальные, желудочные и подчелюстные (или мезентериальные) лимфоузлы (целиком), лёгкое (5х5 см) и почку (1/3 часть), 3-5 мл крови (или сгусток). Кроме того, рекомендуется в случае аутолизиса трупа отбирать грудинную или трубчатую кость.

Отбор проб для серологических исследований. Минимальное количество проб, которые должны быть отобраны для серологических исследований, рассчитывают с учётом 10%-ой серопревалентности заболевших с 95%ой достоверностью для обследования каждого помещения.

Пробы крови отбирают их полой вены не менее 10 мл от каждой свиньи [3].

Для лабораторных исследований применяют следующие методы: реакцию гемадсорбции (РГАд) в культурах клеток, реакцию прямой иммунофлюоресценции (РПИФ), полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в формате электофорезной детекции, ПЦР в формате реального времени, применяют твёрдофазный иммуноферментный анализ (ТФ – ИФА) (сэндвич-вариант). В сомнительных случаях окончательный диагноз устанавливают заражением подозрительным материалом (кровь, суспензия селезенки и лимфатических узлов) свиней, вакцинированных против классической чумы. Заражение свиней (биопроба) проводят в специализированной лаборатории с соблюдением особых мер предосторожности. Серологические типы вируса определяют в реакции преципитации (РП), реакции связывания комплемента (РСК), реакции задержки геамадсорбции (РЗГАд) и другими методами. [2]

Реакция прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) ставят в вирусологических лабораториях для прямого обнаружения вирусного антигена в клетках органов свиней, подозреваемых в заражении вирусом африканской чумы свиней. Внутриклеточный антиген обнаруживают люминесцентной микроскопией препаратов мазков-отпечатков, окрашенных ФИТЦ-иммуноглобулинами (специфические антитела к вирусу африканской чумы свиней, меченные флуоресцеинизотиацианатом). Лучшими органами для РПИФ являются селезёнка и лимфоузлы. Исследование может быть выполнено в течение 2-4 час [2].

Оценку результатов микроскопии проводят по условной четырех крестовой шкале при окуляре 10х20-объективе 10. В положительных случаях наблюдают сверкающую, желто-зеленого цвета флуоресценцию клеток с включениями или очаговыми флуоресцирующими комплексами диффузного и гранулярного антигена, в одном из 10-50 полей зрения.

При визуальном учёте реакцию считают положительной при окрашивании хромогенного субстратного раствора в лунках, в которых предварительно инкубировали исследуемые и специфический антиген в сине-зеленый цвет и отсутствии окрашивания субстрата в лунках, в которых предварительно инкубировали нормальный антиген.

Анализ по выявлению вируса АЧС включает выделение ДНК и амплификации специфического фрагмента в полимеразной цепной реакции и электрофорез в агарозном геле [3].

Реакция считается положительной, если полоса в соответствующем треке располагается в геле точно на таком же расстоянии от старта, что и полоса положительного контроля амплификации. Размер апликонов после проведения ПЦР- 485 п.н.

Реакция считается отрицательной, если в соответствующих треках полос не обнаружено или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом расстоянии от старта) [4].

Для обнаружения антигена вируса африканской чумы свиней применяют ПЦР в формате реального времени. Реакции заключается в использовании специфического флюоресцентно-меченного зонда, сайт гибридизации которого лежит между сайтами связывания основных диагностических праймеров. В случае присутствия в исследуемом образце генома возбудителя, зонд будет связываться с его ДНК и прибор регистрирует накопление флуоресцентного сигнала в ходе реакции. Регистрация сигнала происходит через стенки пробирки в режиме реального времени [1].

Учёт результатов проводят по анализу кривых накопления флуоресцентного сигнала по каналу FAM с помощью программного обеспечения используемого прибора.

Положительными считают результаты реакции при значениях Ct, не превышающих 35.

Образцы, для которых не определено значение Ct (кривая флуоресценции не пересекает пороговую линию) – результаты считают отрицательными [4].

Белоусова Л.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии. М.: КолосС, 2006. — 248 с [Текст] с.131-140.

Госманов Р.Г., Колычев Н.М. Ветеринарная вирусология М.: KoлoсC, 2006. — З04 c. [Текст] с.151-153.

Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, А.А., Е.С. Воронин и др.; Под ред. А.А. Сидорчука. - М.: Колосс, 2007.-671с [Текст] с.206-275.

Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Черных О.Ю., Шевкопляс В.Н. Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных. Учебное пособие. Краснодар. – 2009. – 575 С. [Текст] с.340-402

федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору

О реализации мероприятий, проводимых территориальными управлениями Россельхознадзора в рамках ликвидации и недопущения распространения АЧС на территории Российской Федерации

10 июня 2014 г.

Россельхознадзор информировал Комиссию Правительства Российской Федерации по предупреждению и ликвидации АЧС на территории Российской Федерации о реализации мероприятий, проводимых территориальными управлениями Россельхознадзора в рамках ликвидации и недопущения распространения АЧС на территории Российской Федерации.

В целях контроля за соблюдением требований законодательства Российской Федерации в области ветеринарии на свиноводческих предприятиях за 4 месяца 2014 года территориальными управлениями Россельхознадзора проведено 7485 проверок хозяйствующих субъектов, занимающихся содержанием, разведением, убоем свиней, переработкой, хранением и реализацией продукции свиноводства.

В ходе проведения контрольно-надзорных мероприятий территориальными управлениями Россельхознадзора за 4 месяца 2014 года выявлено 4717 нарушений законодательства Российской Федерации, 401 из которых касались соблюдения хозяйствующими субъектами ветеринарно-санитарных правил. Также выявлено 25 нарушений по обеспечению безвыгульного содержания животных в личных подсобных хозяйствах и других категориях хозяйств, за исключением специализированных промышленных свиноводческих предприятий, 45 нарушений по обеспечению работы промышленных свиноводческих ферм в режиме предприятия закрытого типа, 933 факта нарушения ветеринарно-санитарных правил на предприятиях по убою свиней и их переработке.

По результатам проверок территориальными управлениями Россельхознадзора в текущем году выдано 2330 предписаний по устранению выявленных нарушений, 51 из которых было выдано повторно.

По результатам проверок должностными лицами управлений Россельхознадзора в отношении хозяйствующих субъектов приняты меры административного воздействия в виде 4183 штрафов на общую сумму 22235,4 тыс. рублей.

В органы прокуратуры переданы для дальнейшего рассмотрения материалы по 28 проверкам, в суды направлено 48 ходатайств о приостановлении деятельности предприятий по содержанию или убою животных.

В результате по решению суда деятельность 22 предприятий была приостановлена.

В качестве привлеченных специалистов сотрудники территориальных управлений Россельхознадзора приняли участие в 166 проверках, проводимых прокуратурами субъектов Российской Федерации.

С целью контроля за распространением АЧС и оценки риска возникновения этого заболевания в субъектах Российской Федерации организованы мониторинговые исследования. За 4 месяца 2014 года в рамках мониторинговых исследований на АЧС исследовано 145258 проб биологического материала.

По данным территориальных управлений Россельхознадзора на территории Российской Федерации за 4 месяца 2014 года отстреляно 26825 кабанов, в том числе в рамках любительской и спортивной охоты — 21022 особи, а в рамках мониторинговых исследований — 4732.

С целью проведения лабораторных исследований на АЧС в 2014 году отобрано 21446 проб от кабанов. При проведении исследований получено 245 положительных результатов.

Контроль за осуществлением мероприятий при ввозе на территорию Российской Федерации продуктов и сырья, полученных от свиней

Россельхознадзором усилен контроль за осуществлением мероприятий при ввозе на территорию Российской Федерации продуктов и сырья, полученных от свиней. Территориальными управлениями Россельхознадзора проверено 57077 партий продуктов и сырья, полученных от свиней, задержано 409 партий данной продукции (4223 тонны), ввезенных из-за рубежа. Составлено 832 акта задержания и возврата продукции в страну вывоза. Также территориальными управлениями Россельхознадзора задержана 191 партия (391 тонна) продукции свиноводства, ввезенной из других субъектов Российской Федерации.

О реализации мер по информационному обеспечению мероприятий по предотвращению возникновения и распространения АЧС на территориях субъектов Российской Федерации

Россельхознадзором и его территориальными управлениями проводится активная работа по реализации информационной политики, направленной на систематическое доведение через электронные и печатные средства массовой информации материалов, отражающих аспекты, связанные с опасностью АЧС, специфичностью возбудителя этой болезни, меры по предотвращению заноса и распространения вируса АЧС, необходимые действия граждан в случае возникновения заболевания АЧС или подозрения на это заболевание.

Публикуемые Россельхознадзором информационные материалы отражают текущую ситуацию с распространением АЧС на территории Российской Федерации, факты выявления нарушений законодательства, повлекшие за собой возникновение АЧС, а также сведения о привлечении лиц, виновных в этих нарушениях, к ответственности.

Территориальными управлениями Россельхознадзора за 4 месяца 2014 года в печатных СМИ опубликовано 615 статей; 987 статей размещено на официальных сайтах управлений. По теме АЧС по телевидению проведено 104 выступления.

Организовано 2789 сходов граждан, на которых до владельцев животных была доведена информация о заболевании АЧС, возможных последствиях при его возникновении, а также о действиях, которые необходимо предпринять при возникновении АЧС. Населению роздано более 48000 листовок, содержащих необходимую информацию.

По тематике АЧС в адрес заинтересованных организаций территориальными управлениями Россельхознадзора направлено 4379 писем.

Ключевые слова: АЧС, Контрольно-надзорные мероприятия, Информационное обеспечение, Контроль, Ввоз, Мониторинг, Свиноводческая продукция

Африканская чума свиней (лат. Pestis Africana suum), африканская лихорадка, восточно африканская чума, болезнь Монтгомери – высококонтагиозная вирусная болезнь домашних и диких свиней, характеризуется лихорадкой, цианозом кожи и обширными геморрагиями во внутренних органах, протекает в виде эпизоотии. Относится к списку А согласно Международной классификации заразных болезней животных.

Лабораторные мониторинговые исследования на африканскую чуму свиней являются крайне необходимыми.

Отбор проб патологического материала и его доставка требуют выполнения ряда условий, обеспечивающих сохранение активности возбудителя в отобранных пробах и предусматривающих надежную упаковку, т.к. нарушение упаковки сопряжено с риском попадания вируса во внешнюю среду, что может привести к возникновению новых очагов болезни на благополучных по АЧС территориях.

Для установления диагноза или мониторинга АЧС при исследовании павших или убитых с диагностической целью домашних свиней отбирают:

— лимфатические узлы (подчелюстные, портальные и мезентеральные);

— кусочки селезенки по 5,0 – 10,0 граммов;

— кусочки легкого и почек, убитых в стадии агонии или не позже чем через 10 час после гибели.

От животных с повышенной температурой тела, имеющих клинические признаки болезни, отбирают пробы крови в количестве 3-5 мл, в специальные вакуумные пробирки с антикоагулянтом (6% раствор ЭДТА — вакутейнеры с фиолетовой крышкой), в соотношении 1:20 и пробы сывороток крови.

Отбор проб патологического материала от диких свиней (кабанов)

— лимфатические узлы (подчелюстные, портальные и мезентеральные);

— кусочки селезенки по 5,0 – 10,0 граммов. В случае аутолизиса трупа рекомендуется отбирать грудинную или трубчатую кость, независимо от ее состояния, отбирают от каждой обнаруженной павшей или отстрелянной охотниками дикой свиньи, независимо от пола, возраста и сезона года.

Упаковка и транспортировка патологического материала

Пробы указанных органов по 5 – 10 граммов помещают в стерильные флаконы, которые герметически закрывают резиновыми пробками, этикетируют, обрабатывают 5% раствором Хлорамина-Б или осветленным, 20% раствором хлорной извести, обвертывают марлей, смоченной одним из указанных дезинфицирующих растворов, укладывают в полиэтиленовые пакеты.

На внешней стороне пакета указывают номер пробы, который должен соответствовать номеру, указанному в сопроводительном документе. Если транспортировка занимает более чем 24 часа, пробы органов перед упаковкой замораживают при минус 10-18оС.

Пакеты с пробами герметично завязывают и помещают в термоконтейнер для транспортировки с хладоэлементами. Содержимое термоконтейнера перекладывают абсорбционным материалом для защиты от повреждений и предотвращения утечки жидкости.

На содержимое термоконтейнера составляют, в двух экземплярах, сопроводительное письмо, в котором описывают происхождение проб, указывают их номера, соответствующие маркировке пакета.

Закрытый и опечатанный контейнер снаружи обрабатывают смесью этанола (спирта ректификата) и эфира (1:1) и доставляют в сопровождении ветеринарного специалиста (с нарочным) в ветеринарную лабораторию.

Пробы отправляют в лабораторию с сопроводительным письмом, содержащим информацию о виде, поле и возрасте свиней, ставших источниками материалов. Указывается личный номер или кличка каждого животного, делается краткое описание клинических признаков, прикрепляется составленный протокол патологоанатомического вскрытия. Если животные содержались на свиноферме, следует уточнять данные по поводу категории и местонахождения каждой особи, которое закреплено за ее номером.

При подозрении АЧС среди диких свиней должно быть обозначено географическое место отстрела или локализации павшего животного на территории охотничьих угодий, заповедника и проч. Пробы органов и крови хранят и транспортируют в термосе при температуре 4-8оС, не более 24 ч после отбора. При более длительном хранении пробы замораживают при минус 10-18оС.

Грипп (инфлюэнца) птицы (Grippus (influenzae) avium, классическая чума птиц, европейская чума птиц) — высококонтагиозная, с острым течением болезнь, характеризующаяся явлениями септицемии, поражением органов дыхания и пищеварения.

Общие положения

1.1. Лабораторный мониторинг проводится в рамках мероприятий по предупреждению гриппа птиц на территории Российской Федерации.

1.2. Лабораторно-диагностические исследования проводятся в соответствии с Ветеринарными правилами лабораторной диагностики гриппа А птиц, Правилами по борьбе с гриппом птиц, Правилами по организации и проведению профилактических мероприятий по предупреждению гриппа птиц на территории Российской Федерации.

Организация проведения лабораторного мониторинга

2.1. Исследования на грипп птиц проводят в ветеринарных лабораториях, имеющих необходимое оборудование, кадровый состав, диагностические наборы.

2.3. ФГУ ЦМВЛ является учреждением, осуществляющим методическое руководство деятельностью межобластных ветеринарных лабораторий и ветлабораторий субъектов Российской Федерации (областных, краевых, республиканских) при проведении мониторинга, сбор и обработку данных, составление сводного отчета по результатам исследований на грипп птиц.

2.4. Составление сводного плана мониторинга возлагается на ФГУ Центральную научно-методическую ветеринарную лабораторию. Сводный план мониторинга утверждается руководителем Россельхознадзора.
Ветеринарные лаборатории субъектов Российской Федерации, ФГУ межобластные ветеринарные лаборатории разрабатывают совместно с территориальными управлениями Россельхознадзора и органами управления в ветеринарии в субъектах Российской Федерации на основании Методических рекомендаций по лабораторному мониторингу гриппа птиц в Российской Федерации план мониторинга по гриппу на следующий календарный год к 1 декабря текущего года. Одновременно с планом субъектовые ветлаборатории составляют и передают в межобластные ветеринарные лаборатории данные о потребности в диагностических препаратах для диагностики гриппа птиц (ИФА, РТГА, РДП, ПЦР) с учетом объемов планируемых исследований, птицепоголовья в птицеводческих хозяйствах и населенных пунктах, обследования водоемов и периодичности отбора проб согласно настоящему порядку мониторинга.
ФГУ межобластные ветеринарные лаборатории составляют сводный план по региону обслуживания с учетом собственных исследований и направляют его к 10 декабря текущего года в ФГУ ЦНМВЛ вместе с информацией о потребностях в диагностических наборах.
ФГУ ЦНМВЛ составляет и направляет в Россельхознадзор сводный план мониторинга, информацию о потребности в диагностических наборах для выполнения работ по мониторингу гриппа птиц по каждому региону.

3. Мониторинговые исследования домашней птицы

3.1. Исследованию подлежит птица промышленных стад и племенных птицехозяйств, частного сектора (с индивидуальных подворий), птица, содержащаяся в птицепитомниках, зоосадах, синантропная птица, обитающая на территории птицехозяйств, птица, ввозимая на территорию Российской Федерации, а также при купле-продаже внутри страны, ввозимое на территорию Российской Федерации инкубационное яйцо.

3.2. В период карантина (в течение 21 дня) для исследования на наличие антител к вирусу гриппа птиц типа А отбирают не менее 25 проб сывороток крови от каждой партии птицы (если партия составляет более 1000 особей); при поставке от 10 до 1000 голов птицы — 10 проб; менее 10 — пробы крови отбираются от каждой птицы.

3.3. При ввозе на территорию Российской Федерации эмбрионов и инкубационного яйца для контроля на грипп используют метод ПЦР-диагностики. С этой целью отбираются трахеальные и клоакальные смывы от 25 птиц, 30 эмбрионов/инкубационных яиц. Для исследования рекомендуется формировать объединенные пробы: одну пробу из смывов от 5 голов птиц, одну пробу из 5 эмбрионов/инкубационных яиц.

3.4. Серологическое обследование мелких видов птиц (волнистые попугайчики, канарейки и др.) не проводят, а в период их содержания в карантине (в течение 21 дня) осуществляют отбор проб помета в зависимости от ввозимой партии. Отбор проб рекомендуется проводить индивидуально от каждой птицы или в виде общей пробы от птиц, содержащихся в одном вольере/клетке. В данном случае также можно отбирать клоакальные и/или трахеальные смывы, при этом отбор проб проводится аналогично отбору проб сывороток крови п.3.2.

3.5. Схемы серологического обследования птицеводческих хозяйств и подворий.
В благополучных племенных и товарных птицеводческих предприятиях яичного и мясного направления (куроводческих, индейководческих, гусеводческих и др.) отбирается от каждого стада птицы, содержащейся в одном птичнике (зале, корпусе), по 25 проб крови.
В страусоводческих хозяйствах обследованию подлежат 15% от стада взрослой птицы и 10% от молодняка.
Отбор проб в бройлерных хозяйствах проводится в момент убоя птицы в количестве не менее 25 проб сыворотки крови от стада птицы из одного птичника (зала).
В личных хозяйствах граждан отбирается не менее 25 проб сыворотки крови от птицы из одного населенного пункта, если количество птицы в населенном пункте более 100 голов, при этом необходимо обеспечить сбор проб крови от птицы из разных дворов, если в населенном пункте разведением птицы занимаются одновременно несколько граждан.
В населенных пунктах, где поголовье птицы составляет менее 100 голов, серологическое обследование не проводят. В данных населенных пунктах ведется наблюдение за клиническим состоянием птицы. В случае обнаружения признаков заболевания отбирается материал для лабораторного исследования в соответствии с пунктом 3.7.
На территории крупных птицеводческих хозяйств, комбикормовых предприятий отбирать по 10 проб крови от синантропных птиц (голуби, воробьи и др.).

3.6. В случае получения положительных результатов серологических исследований проводится отбор проб для вирусологических исследований и ПЦР-диагностики в соответствии с пунктом 3.7.

3.7. При подозрении на грипп птиц (наличие клинических, патологоанатомических признаков заболевания, внезапном падеже) в стадах домашней птицы рекомендуется проводить отбор проб для проведения ПЦР-диагностики и вирусологических исследований. Для исследований отбираются клоакальные и/или трахеальные смывы, помет, патматериал (головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участки кишечника). Отбор и транспортировку трупов птиц, проб биоматериала и патматериала осуществляют в соответствии с пунктом 7.

Мониторинговые исследования дикой птицы

4.1. Мониторинг дикой птицы необходимо проводить сезонно: весна, лето, осень (т.е. весенняя миграция, гнездование после вылупления птенцов, осенняя миграция) с привлечением зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации.

4.2. Во время сезонных совместных экспедиций ветеринарных специалистов, зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации пробы рекомендуется отбирать в местах массового гнездования птиц, зимовок, а также на пути основных миграционных маршрутов. Видовой состав птицы, подлежащей мониторингу, определяется в соответствии с особенностями каждого региона с привлечением специалистов охотоуправлений или зоологов. Исследованиям подвергаются синантропные (воробьи, голуби, грачи, вороны), полусинантропные (чайки), а также дикие мигрирующие виды водоплавающих и околоводных птиц (утки, гуси, массовые виды куликов, колониально гнездящиеся цапли и др.). Периодичность отбора проб указана в п.5. От отловленных птиц рекомендуется отбирать пробы сывороток крови, клоакальные и/или трахеальные смывы. Отловленные нетравмированные птицы, если применялся метод живоотлова, в случае отрицательного результата отпускаются. В случае положительного результата птицы умерщвляются бескровным методом и отправляются в лабораторию для дальнейших исследований. При проведении отстрела птиц или в случае их умерщвления в диагностических целях берутся клоакальные, трахеальные смывы и пробы патматериала.
Помет от дикой птицы, а также клоакальные, трахеальные смывы и патматериал исследуются методом ПЦР.

4.3. Для предупреждения отстрела редких видов птиц в состав совместной экспедиции включается специалист-орнитолог, зоолог или охотовед.

4.4. При выявлении в дикой природе случаев внезапного падежа птиц или в случае обнаружения при клиническом обследовании птицы на водоемах характерных клинических признаков болезни проводится отбор патматериала на вирусовыделение и для ПЦР-диагностики.

Рекомендуемая периодичность отбора проб

5.1. Домашняя птица обследуется: в благополучных регионах — 2 раза в год; в неблагополучных регионах и в угрожаемой зоне — один раз в месяц (каждый птичник, каждый населенный пункт): ввозимая из-за рубежа птица, эмбрионы, инкубационное яйцо — при ввозе, в период карантинирования.

5.2. Дикая птица обследуется: в благополучных регионах — 3 раза в год (весна, лето, осень); в неблагополучных районах — 1 раз в квартал.

6.1. Иммуноферментный анализ (непрямой метод ИФА для выявления антител к гриппу типа А) — исследуют сыворотки крови с целью выявления антител к вирусу гриппа птиц у кур из птицеводческих предприятий, фермерских хозяйств, населенных пунктов и ввозимых из-за рубежа; патологический материал, экстраэмбриональную жидкость зараженных куриных эмбрионов на наличие вируса гриппа птиц.

6.2. Иммуноферментный анализ (конкурентный метод ИФА для выявления антител к гриппу птиц Н5) — исследуются сыворотки крови различных видов птиц на наличие антител к гриппу птиц Н5.

6.3. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) — исследуют сыворотки крови кур реагирующих положительно в ИФА; сыворотки крови других видов птиц (гусей, уток, индеек, голубей, дикой птицы и др.).

6.4. Реакция диффузионной преципитации (РДП) — исследуют сыворотки крови с целью выявления антител к вирусу гриппа у птиц различных видов. РДП может быть использована для выявления вируса гриппа птиц при исследовании патматериалов и для идентификации изолятов при проведении вирусологических исследований.

6.5 Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) — исследования проводят:
при внезапном падеже птицы или характерных для гриппа клинических признаках;
при получении у птиц положительных результатов серологических исследований в ИФА и РТГА;
с целью определения типа гемагглютинина и нейраминидазы выделенных штаммов (ВНИИЗЖ, ВГНКИ);
при исследовании мяса птицы, полуфабрикатов, субпродуктов, яйца, куриных эмбрионов;
при исследовании комбикормов и мясокостной муки.

6.6. Серологические и вирусологические исследования рекомендуется проводить согласно действующей нормативной документации и наставлениям к диагностическим наборам. РТГА проводится с обязательной постановкой контроля проб сывороток крови на спонтанную агглютинацию. Сыворотка крови обрабатывается обязательно от термолабильных и в случае необходимости от термостабильных ингибиторов.

6.7. Диагностические наборы (ИФА, РТГА, РДП и ПЦР) получают ФГУ ЦНМВЛ, межобластные ветлаборатории и ветлаборатории субъектов Российской Федерации в соответствии с заявками.

7.1. Отбор проб сывороток крови и патологического материала от всех категорий птицы организуют совместно специалисты СББЖ и районных, межрайонных, зональных ветеринарных лабораторий или диагностических кабинетов. Отбор проб осуществляет ветеринарный специалист, имеющий специальную подготовку.

7.2. Отбор проб сывороток крови. Отбор проб крови у птиц осуществляется в соответствии с планом мониторинга из подкрыльцовой вены, или при забое птицы взятие проб крови у больной или подозреваемой в заражении птицы проводят с соблюдением требований безопасности. Транспортировка проб сывороток крови в лабораторию осуществляется в стеклянных или пластиковых пробирках, закрытых крышками (пробками). Пробирки маркируются. В сопроводительном документе указывается: вид и возраст птицы, наименование предприятия и адрес (Ф.И.О. владельца, адрес), количество проб, дата отбора проб.

7.3. Отбор проб патологического и биологического материалов. При подозрении на грипп птиц (наличие клинических, патологоанатомических признаков заболевания, внезапного падежа) осуществляют отбор проб патматериала: головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участки кишечника, почки, сердце. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5-10 трупов или патматериал от 5-10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10-15 голов (смывы от 5 голов можно объединять в одну пробу), 1 пробу помета от стада. Пробу помета отбирают: примерно по 1 грамму помета из 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.

Доставку трупов птиц и отобранных проб патматериала (органов, тканей) в лаборатории осуществляют в кратчайшие сроки во влагонепроницаемой таре, герметично упакованной. При доставке проб в течение 24 часов отобранные органы и ткани помещают в пластиковые контейнеры, герметичные целлофановые пакеты, упаковывают в широкогорлые термосы (небьющиеся) с сухим льдом или хладоэлементами.
Если доставка образцов длится более 24 часов, они охлаждаются и доставляются на льду (можно использовать хладоэлементы). Хранение суспензий из органов возможно до 4 дней при 4°С. Для увеличения сроков хранения образцы хранят при температуре -80°С. Хранение при 20°С может отрицательно сказаться на выделении вируса.
Образцы фекалий рекомендуется хранить и осуществлять их доставку при 4°С.
Клоакальные и трахеальные смывы можно доставлять в сухом виде или в транспортных средах.

7.4. Отбор проб биоматериала (трахеальные и клоакальные смывы, помет) осуществляется в целях мониторинговых исследований от клинически здоровой птицы, птицы, подозреваемой в заражении вирусом гриппа, и осуществляется аналогично отбору проб сывороток крови по пункту 3.2.
В населенных пунктах отбираются клоакальные и/или трахеальные смывы от 5-10 домашних птиц (при наличии в населенном пункте водоплавающей птицы отбор проб проводится прежде всего от данных видов).
Сбор проб помета осуществляется с 5 подворий одного населенного пункта (5 проб).
В случае выявления падежа дикой птицы или обнаружения диких птиц с характерными клиническими признаками заболевания вблизи населенных пунктов, расположенных у водоемов, отбор проб патологического материала осуществляют в соответствии с пунктом 7.3.
Для взятия и транспортировки смывов используют транспортные среды. Правила пересылки смывов в соответствии с пунктами 7.2 и 7.3.

7.5. Отбор проб от дикой птицы осуществляется в соответствии с п.4 и п.п.7.2, 7.3, 7.4 с привлечением зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации.
При направлении на исследование проб сывороток крови, патматериалов или биоматериалов от дикой птицы необходимо указывать вид птицы, место отбора проб, количество проб, примерный возраст (взрослая, молодняк), дату отбора.

7.6. Пробы сыворотки крови и патматериал направляют нарочным с сопроводительным письмом в ветлаборатории субъектов Российской Федерации или в межобластные ветеринарные лаборатории.

Начальник противоэпизоотического отряда

Читайте также: