Результаты исследований по экспертизе на бруцеллез

Именем Российской Федерации

10 июня 2011 года

Петровский районный суд Ставропольского края в составе:

председательствующего судьи Былинкин В.П. – единолично,

при секретаре судебного заседания Грачеве К.В.,

с участием: пом. прокурора Петровского района Баранова М.А.;

ответчика – Магомедова Г.Г. и его представителя адвоката Исаковой Т.Ш.;

третьего лица Ковалева А.С.;

представителя третьего лица по доверенности Себряева С.Н.,

рассмотрев в открытом судебном заседании гражданское дело по иску прокурора Петровского района Ставропольского края в интересах неопределенного круга лиц к Магомедову Г.Г. о возложении обязанности сдать на убой овец.

Согласно п. 4.2 СП 3.1.7.2613-10 4.2. противоэпизоотические мероприятия по ликвидации очагов бруцеллеза организуют и контролируют органы государственного ветеринарного надзора в установленном порядке.

В соответствии с п. 4.6 СП 3.1.7.2613-10 индивидуальным владельцам запрещается самостоятельный убой больных и положительно реагирующих на бруцеллез животных, реализация населению продуктов животноводства (молочные продукты). Для убоя животные, по согласованию с ветеринарными специалистами, должны быть доставлены на мясоперерабатывающие предприятия, имеющие соответствующее разрешение.

Согласно п. 3.2.11.3 ВП 13.3.1302-96, при выявлении больных бруцеллезом овец, вcё неблагополучное поголовье животных этих видов подлежит немедленному убою.

В соответствии с п. 3.2.1.8 ВП 13.3.1302-96 владельцы животных обязаны осуществлять своевременную сдачу больных бруцеллезом животных или полную ликвидацию всего неблагополучного поголовья по указанию ветеринарных специалистов.

На основании ч.1, ст. 45 ГПК РФ прокурор вправе обратиться в суд с заявлением в защиту прав, свобод и законных интересов неопределенного круга лиц.

В судебном заседании пом. прокурора Петровского района Баранов М.А. уточнил исковые требования и просил суд изменить процессуальный статус ответчика Ковалева А.С. и признать его третьим лицом, не заявляющим самостоятельных требований относительно предмета спора в соответствии со ст.43 ГПК РФ, так как Ковалев А.С. какое-либо отношение в данному овепоголовью, являющемуся собственностью Магомедова Г.Г., отношения не имеет. Кроме того, согласна свидетельства о государственной регистрации права от *** в настоящее время указанная недвижимость – сарай, в котором содержится данное овцепоголовье, является его собственностью, и в настоящее время у Ковалева А.С. с Магомедовым Г.Г. только имеется договоренность о продажи указанной недвижимости последнему.

В судебном заседании ответчик Магомедов Г.Г. и его представитель адвокат Исакова Т.Ш. исковые требования прокурора не признали и просили суд отказать в их удовлетворении, так как считают их необоснованными по следующим основаниям. В настоящее время у Магомедова Г.Г. в собственности на территории кошары, расположенной по адресу: . ж/д. будка 5 км., микрорайон Промзона, находится всего 220 овец, из которых 98 овцематки, 100 голов ягнят и 22 голов баранов.

О том, что необходимо было сообщать на ветеринарную станцию о завозе животных он не знал. *** и.о. обязанности УВЛ . --- ему было выдано предписание об обязании принять меры по обеспечению проведения ветеринарно-профилактических мероприятий (исследований и обработок) на принадлежащем ему овецепоголовье, для чего необходимо: - в срок до *** провести регистрацию поголовья с/х животных. ..; - в срок до *** создать условия для проведения осмотра, исследований и обработок животных; - в срок до *** провести ветеринарно-профилактические обработки. .. и прочее.

За ввоз поголовья МРС он был административно наказан, с чем он не возражал. Однако он сразу пояснял, что МРС была ранее вакцинирована, имеются бирки и защипы на ухе.

*** сотрудниками Петровской районной станции по борьбе с болезнями животных был произведен отбор проб крови для серологического исследования на бруцеллез, что отражено в акте ---.

Согласно результата исследования по экспертизе --- от *** было получено: положительных - 61 проба на бруцеллез, сомнительных - 16 проб на бруцеллез, отрицательных - 44 пробы на бруцеллез.

По его мнению, приобретенное им овецепоголовье у --- было полностью вакцинировано. Магомедов Г.Г. считает, что его овцы заболеванием бруцеллеза не страдают.

В соответствии с инструкцией по применению вакцины против бруцеллеза с/х животных из штамма 19 живой сухой следует, что она представляет собой живую культуру бруцеллез вакцинного штамма, которая сохраняется согласно биологическим свойствам у молодняка д. XXX-10 месяцев, у взрослых животных д. XXX-х лет и более. Согласно порядка применения о проведенной вакцинации животных по каждому стаду (отаре) составляется акт, в котором указывается наименование фермы, количество животных и др.

В неблагополучных хозяйствах всех овец и коз с острым течением болезни (аборты) сдают на убой. Овец и коз, к которым ранее не применяли противотуберкулезные вакцины, исследуют на бруцеллез. Также согласно инструкции по применению вакцины на убой сдают только реагирующих животных, а остальных прививают вакциной за 1-2 месяца до осеменения. В дальнейшем все поголовье подвергают ежегодной реиммунизации без предварительного исследования на бруцеллез за 1-2 месяца до осеменения. Поголовье овец благополучного хозяйства, ранее иммунизированное против бруцеллеза, прививают ежегодно вакциной без исследования.

Также применение вакцинации против бруцеллеза регламентировано наставлениями по применению вакцины живой сухой против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма бруцелла абортус 19, утвержденных Министерством сельского хозяйства и продовольствия РФ (Минсельхозпрод России) и начальником Департамента ветеринарии от *** ---, где отражено тоже самое, что и в инструкции.

Бруцеллез (Brucellosis) — хроническая инфекционная болезнь, проявляющаяся часто абортами, задержанием последа, эндометритами и расстройством воспроизводительной способности животных.

Клинические проявления указанной инфекционной болезни в его хозяйстве не проявлялись и не проявляются, что говорит о здоровом овцепоголовье.

Также по результатам исследования были выявлены не только больные животные, но и животные с отрицательной и сомнительной реакцией. Он считает, что сотрудники веслужбы обязаны были провести повторные анализы, чего не было сделано. И также считает, что в акте эпизоотолого- эпидимиологического обследования от *** необоснованно указано, что диагноз заболевания бруцеллез установлен, так как кроме лабораторных исследований должны учитываться и клинические данные, о которых члены комиссии не упоминали.

Согласно п. 4.4.8. СП 3.1.7.2613-10 от *** N 39 руководители животноводческих хозяйств вне зависимости от форм собственности при наложении ограничений по бруцеллезу на хозяйство обязаны согласовать с органами ветеринарного и государственного санитарно-эпидемиологического надзора условия вывоза положительно реагирующего на бруцеллез поголовья для убоя и переработки. Остальное поголовье хозяйства, давшее отрицательные результаты серологического исследования, подлежит иммунизации противобруцеллезной вакциной согласно наставлению по ее применению.

Он считает, что истцом не учтены требования законодательства о части того, что на убой могут быть направлены только больные животные, а в иске указано все поголовье.

Также неоднократно в устной форме сотрудниками ветеринарной службы ему предлагалось сдать на убой животных именно в Георгиевский мясокомбинат, где принимают на убой животных стоимостью 15 рублей за 1 кг. в живом весе. Все его попытки предложить другой мясокомбинат отклоняются, в связи чем он будет вынужден обращать в антикоррупционный совет и антимонопольный союз за защитой своих прав. По его информации иные мясокомбинаты также имеют право на прием инфицированных животных и стоимость животных при приеме намного выше.

В судебном заседании представитель администрации муниципального образования г.Светлограда, Петровского района, Ставропольского края по доверенности Себряев С.Н. поддержал исковые требования прокурора, просил суд их удовлетворить, так как считает, что очаг бруцеллеза, находящийся в данном поголовье овец, принадлежащем ответчику, может привести к заболеванию как домашних, так и диких животных на прилегающих территориях как муниципального образования села -.- так и расположенного рядом муниципального образования города -.-, а также может привести к заболеванию людей на территориях указанных муниципальных образований.

Он пригласил Магомедова Г.Г. и пояснил ему, что плохая ситуация с животными и необходимы документы на указанных животных, которые могли бы что-то прояснить, но документов по настоящее время предоставлено не было.

Представляет суду свой запрос и ответ

Магомедову Г.Г. зам. главного госветинспектора Петровского района *** было выдано предписание --- о проведении мероприятий по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных, которое было вручено Магомедову Г.Г. ***.

Предписание --- от *** о проведении мероприятий по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных Магомедов Г.Г. не выполнил, в результате чего постановлением мирового судьи судебного участка №1 Петровского района Магомедов Г.Г. признан виновным в совершении правонарушения, предусмотренного ч.1, ст.19.5 КОАП РФ, и ему назначено наказание в виде штрафа -.- рублей.

Третье лицо – Ковалев А.С. в судебном заседании не возражал против удовлетворения исковых требований прокурора и пояснил, сто ему на праве собственности принадлежит земельный участок, находящийся по адресу: . ж/д будка 5 км. (в районе переезда на . ), с находящимися на нем строениями: жилой дом и сараи, что подтверждается соответствующими свидетельствами о государственной регистрации права на недвижимое имущество. Данной недвижимостью он не пользовался и в январе -.- года договорился с Магомедовым Г.Г. о продаже указанной недвижимости. Магомедов Г.Г. дал ему задаток, а о оформлении купли-продажи они договорились произвести после полного расчета, однако договор купли-продажи до настоящего времени не оформлен, Магомедов Г.Г. не рассчитался с ним, поэтому данная недвижимость находится в его собственности. От сотрудников ветеринарной службы он узнал, что завезенные Магомедовым Г.Г. овцы на территорию его кошары больны бруцеллезом, и поэтому ему как собственнику необходимо будет проводит противоэпидемиологические мероприятия.

Свидетель --- в судебном заседании показал, что в октябре -.- года он приобрел в СПК колхоз имени . овец в количестве 359 голов, о чем имеется письменный договор купли-продажи от ***. В декабре 2010 года часть купленных им овец в количестве 100 голов он продал Магомедову -.- о чем он написал расписку от ***. Документы, необходимые для вывоза проданных им Магомедову Г.Г. с территории . он не оформлял, т.к. не знал какие именно документы оформляются при этом, он считает, что об этом ему должны были сообщить сотрудники ветеринарной службы. Он знает, что все купленные им овцы, в том числе те, которые он продал Магомедову Г.Г., были привиты от бруцеллеза штаммом 19. В подтверждении чего он привез журнал противоэпизоотических мероприятий СПК колхоза -.- за 2007-2009 годы, в котором имеется запись от *** --- о том, что на ОТФ произведена вакцинация 410 голов овцематок от бруцеллеза штаммом 19. Также у него имеется ветеринарная справка от ***, выданная Подлесненским ветеринарным участком . о том, что принадлежащие ему 50 голов МРС подвергнуты исследованию на бруцеллез экспертиза --- от *** и направляются в .

Суд, заслушав представителя истца помощника прокурора Петровского района Баранова М.А., ответчика и его представителя, третьего лица, представителей третьих лиц, исследовав материалы гражданского дела и предоставленные доказательства, считает, что исковые требования прокурора подлежат удовлетворению по следующим основаниям.

*** Магомедову Г.Г. зам. главного госветинспектора Петровского района выдано предписание --- о проведении мероприятий по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных, которое было вручено Магомедову Г.Г. ***.

Предписание --- от *** о проведении мероприятий по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных Магомедовым Г.Г. не исполнено, в результате чего постановлением мирового судьи судебного участка №1 Петровского района Магомедов Г.Г. признан виновным в совершении правонарушения, предусмотренного ч.1, ст.19.5 КОАП РФ, и ему назначено наказание в виде штрафа -.- рублей.

Так, ответчиком Магомедовым Г.Г. в судебном заседании не предоставлено достоверных сведений о том, что якобы приобретенные им у --- в . по расписке последнего от *** 100 голов овец, были привиты от бруцеллеза, и не предоставлено соответствующей ветеринарной справки, что данное поголовье овец в указанное время исследованы на бруцеллез. А из предоставленных ответчиком акта --- от ***, описей животных, ветеринарной справки от ***,

Доводы Магомедова Г.Г. о том, что 3 декабря им получено соответствующее ветеринарное свидетельство о том, что при исследовании 20 голов овец, вывозимых из . свидетельствуют о том, что данных животных Магомедов Г.Г. перевозил в . для убоя, как указано в данном свидетельстве.

Кроме того, Магомедовым Г.Г. не предоставлено суду соответствующих ветеринарных документов, а именно ветеринарной справки формы --- и описи животных, которые он должен получить в соответствующей ветеринарной службе и иметь при вывозе поголовья овец с территорий . и . при перемещении животных в . для последующего выращивания поголовья.

Согласно п. 4.2 СП 3.1.7.2613-10 4.2. противоэпизоотические мероприятия по ликвидации очагов бруцеллеза организуют и контролируют органы государственного ветеринарного надзора в установленном порядке.

В соответствии с п. 4.6 СП 3.1.7.2613-10 индивидуальным владельцам запрещается самостоятельный убой больных и положительно реагирующих на бруцеллез животных, реализация населению продуктов животноводства (молочные продукты). Для убоя животные, по согласованию с ветеринарными специалистами, должны быть доставлены на мясоперерабатывающие предприятия, имеющие соответствующее разрешение.

Согласно п. 3.2.11.3 ВП 13.3.1302-96, при выявлении больных бруцеллезом овец, вcё неблагополучное поголовье животных этих видов подлежит немедленному убою.

В соответствии с п. 3.2.1.8 ВП 13.3.1302-96 владельцы животных обязаны осуществлять своевременную сдачу больных бруцеллезом животных или полную ликвидацию всего неблагополучного поголовья по указанию ветеринарных специалистов.

Решение может быть обжаловано в Ставропольский краевой суд в срок 10 дней.

Бруцеллез (Brucellosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечения, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства.

Изучая причины мальтийской лихорадки, английский врач Д. Брюс в 1886 – 1887 гг. установил, что виновником ее является специфический микрококк, названный им Micrococcus melitensis. Дальнейшие исследования показали, что источником возбудителя мальтийской лихорадки являются козы, пораженные инфекцией, а причиной заражения людей — потребление молока от таких коз. Несколько позже Micrococcus melitensis был выделен у овец.

В1897 г. датские ученые Банг и Стриболд установили, что массовые аборты у коров вызывает микроорганизм, названные B. abortus bovis. В 1914 г. Траум обнаружил очень сходный микроорганизм, названный Br. abortus suis, при массовых абортах у свиней.

Для диагностики бруцеллеза в 1897 г. Райтом была предложена серологическая реакция агглютинации, а в 1922 г. Берне разработал внутрикожную аллергическую пробу, облегчающую распознавание болезни.

Долгое время мальтийская лихорадка у людей и массовые аборты у домашних животных считались самостоятельными заболеваниями. В 1918 – 1920 гг. Ивенс, Мейер и Фезье, изучая биологические свойства возбудителя мальтийской лихорадки и массовых абортов у крупного рогатого скота, обнаружили их чрезвычайную близость. Эти исследования явились основанием объединить указанных возбудителей, в том числе и возбудителя массовых абортов у свиней, в одну родовую группу под наименованием Brucella (в честь Брюса), а вызываемые ими заболевания именовать бруцеллезом.

В России начало изучения бруцеллеза было положено работами Е. И. Марциновского (1911), но детальному изучению заболевание подверглось в различных местностях СССР лишь с 1935 г. Большой вклад в изучение бруцеллеза сельскохозяйственных животных внесли отечественные ученые: С. Н. Вышелесский, П. Ф. Здродовский, П. А. Вершилова, М. К. Юсковец, Е. С. Орлов, Р. А. Цион, А. П. Бессонов и др. Были всесторонне изучены биологические свойства возбудителя, усовершенствованы методы диагностики, показаны значение в борьбе с бруцеллезом вакцинальной профилактики и пути ее совершенствования.

Клинические признаки бруцеллеза у крупного рогатого скота

Длительность инкубационного периода 2 – 3 недели. Первым показателем развившегося инфекционного процесса служит появление в крови инфицированных животных агглютининов в постепенно нарастающих титрах.

У коров основным клиническим признаком бруцеллеза является аборт и реже рождение нежизнеспособного приплода. Коровы, заразившиеся до покрытия, в большинстве случаев приносят нормальный приплод. Аборт чаще всего происходит на 5 – 8-м месяце. За 1 – 2 дня до наступления аборта у коров отмечается припухание наружных половых органов, выделение из влагалища бесцветной или буроватой жидкости и набухание вымени. После аборта происходит задержка последа и развивается эндометрит, сопровождающийся обильными слизисто-гнойными или гнойно-фибринозными выделениями. При тяжело протекающем эндометрите повышается температура тела, снижаются удои, отмечается потеря веса, убыстряется СОЭ; умеренный лейкоцитоз. Эндометритам нередко сопутствуют серозные или серозно-катаральные маститы. В процессе могут вовлекаться яичники и фаллопиевы трубы, что приводит к нарушению полового цикла и временному или стойкому бесплодию.

У отдельных животных в связи с абортом или независимо от него можно наблюдать развитие серозных бурситов или серофибринозных артритов. Последние в большинстве случаев возникают в суставах передних конечностей — запястном, путовом, коленном, локтевом. У быков бруцеллез, хотя и редко, сопровождается развитием орхитов и эпидидимитов.

Лабораторная диагностика бруцеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований. Бактериологическое исследование в основном применяют при первичной постановке диагноза на бруцеллез в ранее благополучных хозяйствах.

В лабораторию направляются пробы крови (сыворотки) для серологического исследования, абортивный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей или желудок плода, кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое животных берут паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пораженные суставы, у самцов — семенники. Объектом исследования могут быть молочные продукты (брынза, сыр, масло), объекты внешней среды.

При массовых диагностических исследованиях ставят пробирочную РА, роз бенгал пробу (РА на стекле), РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком (КР). Диагностикумы для этих исследований, а также бруцеллин ВИЭВ для аллергической диагностики готовятся на Щелковском биокомбинате.

По данным К. В. Шумилова до 1952 года борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота в нашей стране сводилась к проведению диагностических исследований и удалению из стад больных животных, без применения противобруцеллезных вакцин. В связи с осложнением эпизоотической ситуации в 1953 году в систему противобруцеллезных мероприятий была включена иммунизация животных вакциной из штамма B. abortus 19.

Вакцину из штамма B. abortus 19 применяли до 1970 года. За 20 лет применения вакцины многие хозяйства, даже области, были оздоровлены от болезни. Однако в регионах с широким распространением бруцеллеза эффективность оздоровительных мероприятий оказалась низкой. В первую очередь, это было обусловлено высокой агглютиногенностью вакцины. Агглютинины и комплементсвязывающие антитела, вырабатывающиеся в ответ на введение вакцины, сохраняются в организме животных до 5 – 8 лет и затрудняют дифференциацию иммунизированных животных от больных бруцеллезом.

С 1971 по 1974 год вакцину из штамма B. abortus 19 использовали только на телках 5 – 8 месячного возраста. С 1974 года и по настоящее время в России в комплексе противобруцеллезных мероприятий применяются вакцины из штаммов B. abortus 82 и 19. Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма № 82 отличается от вакцины из штамма 19 слабым серологическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологических реакций дифференцировать вакцинированных животных.

За 30 лет работы с применением вакцины из штамма B. abortus 82 и смены пяти поколений коров к 2004 году (К. В. Шумилов) количество неблагополучных по бруцеллезу пунктов и заболевших животных значительно сократилось.

Сухая живая вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B. abortus 75/79-АВ разработана сотрудниками ВГНКИ и Алтайской НИВС с использованием культуры штамма 75/79, выделенного от коровы, ранее иммунизированной вакциной из штамма B. abortus 82. После многократных пассажей выделенного штамма через организм морских свинок и телок и целенаправленной селекции на питательных средах, был получен новый вакцинный штамм 75/79-АВ. Вакцины не обладает абортогенными свойствами, что дает возможность проводить иммунизацию маточного поголовья независимо от сроков стельности. Вакцина является слабоагглютиногенной; агглютинины и комплементсвязывающие антитела регистрируются у привитых животных в течение трех месяцев после иммунизации, что делает возможным их исследование по истечении указанного срока. У животных, иммунизированных вакциной, выраженный иммунитет сохраняется в течение года, что позволяет за указанный срок оздоравливать неблагополучные хозяйства от бруцеллеза.

Штамм B. abortus КВ 17/100, находящийся в R-форме, получен путем целенаправленной селекции по культуральным, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам из вакцинного штамма B. abortus 104М, находящегося в S-форме. Адъювант-вакцина не индуцирует синтез S-бруцеллезных антител в диагностических титрах у животных, не сенсибилизированных бруцеллами. Адъювант-вакцина индуцирует синтез S-бруцеллезных антител у крупного рогатого скота с латентной формой бруцеллеза, что позволяет за счет быстрого удаления из стад таких животных, ускорить оздоровление хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу.

Адъювант-вакцина не абортогенна и может быть использована для иммунизации маточного поголовья крупного рогатого скота независимо от сроков стельности.

Разнообразные клинические проявления бруцеллеза приводят к необходимости широкого использования лабораторных методов исследования: бактериологического, биологического, сероло­гического и аллергического. Комплекс лабораторных исследований с обязательным учетом клинических, эпидемиологических и эпизоотологических данных обеспечивает правильную диагностику заболевания.

Бактериологический метод.Для исследования на бруцеллез в лабораторию поступает патологический материал от больных людей (кровь, мокрота, гной, суставная жидкость, пунктат из селезенки, моча), сельско­хозяйственных животных (абортированный плод, лимфатические узлы, паренхиматозные органы, кровь, моча, молоко, молочные продукты) и различные объекты окружающей среды (вода, навоз). Материал для исследования забирают в стерильную посуду.

Исследование крови необходимо проводить во время лихо­радочного состояния больного до лечения антибиотиками, так как в этот период наблюдается наибольший процент выделения культур. Кровь в количестве не менее 10 мл стерильно берут из локтевой вены и засевают по 5 мл в два флакона среды Кастанеда. Начиная с четвертого дня, посевы ежедневно просматривают и, при отсутствии роста культуры, поверхность агара орошают бульоном путем осторожного покачивания фла­кона. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии бруцелл. Если в течение месяца роста бруцелл не обнаруживают, то делают контрольный высев из бульона среды Кастанеда на твердую питательную среду.

При обследовании людей на бруцеллез для удобства доставки флаконов с кровью можно пользоваться транс­портной жидкой средой, которую готовят заранее и хранят в лаборатории в течение полугода. Кровь доставляют в лабораторию в транспортной среде, засевают на среду Каста­неда и исследуют по общепринятой схеме.

Бруцеллы можно выделить из костного мозга, мочи, спинно­мозговой жидкости, грудного молока, желчи, мокроты, трупного материала и т. д. Исследуемый материал по 0,1 мл засевают на плас­тинки питательного агара и по 5-10 мл на жидкие питатель­ные среды. Для задержки роста посторонней микрофлоры при исследовании загрязненного материала к среде добавляют генцианвиолет (1:200 000) или антибиотики (пенициллин 0,25 ед/мл и стрептомицин 0,05 ед/мл).

Особого внимания заслуживает получение культуры из моло­ка сельскохозяйственных животных. Забор молока у овец, коров, верблюдов и коз рекомендуется проводить путем сдаивания его последних порций из каждого соска вымени по 10 мл в стерильную посуду. Если исследовать молоко в течение первых суток не удается, то его консервируют добавлением сухой борной кислоты 1 %, генцианвиолета 1:25 000. Для исследования молока из больших емкостей забирают 100 мл верхнего слоя, затем перемешивают и набира­ют еще 100 мл.

Лучшие результаты дает посев сливок, полученных центри­фугированием молока при 2,5-3 тыс. об/мин в течение 3-5 мин или путем отстаивания в течение одних суток в холо­дильнике. Сливки в количестве 0,1-0,2 мл засевают на твердую питательную среду с подавителем посторонней микрофлоры (4-6 пробирок на 1 пробу).

Бактериологический метод считается самым достоверным, т. к. выделение бруцелл является неопровержимым доказа­тельством бруцеллезной инфекции. Отрицательные результаты бактериологического исследования не дают права для заключе­ния об отсутствии заболевания.

Биологический метод.Для выделения бруцелл из материала, загрязненного посто­ронней микрофлорой или содержащего малые концентрации возбудителя, в качестве биологической пробы используют морских свинок (весом 250-300 г) или белых мышей (весом 17-18 г). Исследуемый материал в объеме не более 0,5 мл вводят под­кожно в паховую область белой мыши и 1 мл морской свинке.

Вскрытие белых мышей производят через 20-25 дней, а мор­ских свинок - через 30-35 дней после введения материала. Перед вскрытием у свинок кровь из сердца исследуют в реакции агглютинации. Для посевов у морских свинок берут лимфатические узлы (паховый, подчелюстной, шейный, парааортальный), кусочки селезенки, печени, костный мозг, кровь, мочу; у белых мышей - лимфатические узлы (пахо­вый, аксиллярный, парааортальный, подчелюстной), кусочки селезенки и печени. Лимфатические узлы, кусочки печени и селе­зенки помещают в стерильную чашку. Костный мозг извлекают пипеткой из рассеченной бедренной кости. Посевы крови из сердца, мочи и костного мозга производят стерильной пипеткой непосредственно на питательную среду (агар и бульон). Лимфа­тические узлы и органы перед посевом надсекают ножницами, берут стерильной деревянной палочкой, вносят первоначально в пробирку с агаром, раздавливают и тщательно втирают мате­риал в поверхность питательной среды. Затем остатки посевного материала переносят в пробирку с бульоном. Палочка должна быть длиной 25-30 см, диаметром 4-5 мм, хорошо отструганная, с несколько заостренным концом. После использования ее погру­жают на 1 час в дезраствор.

Все посевы дублируют (часть помещают в условия повышен­ного содержания углекислоты), выдерживают при 37 °С до 30 дней. Для предотвращения высыхания питатель­ных сред пробирки заливают парафином или закрывают резино­выми колпачками.

Посевы просматривают каждые 3-4 дня. Из помутневших бульонов делают высев в пробирки со скошенным агаром. Коло­нии бруцелл на пластинчатом агаре становятся видимыми на 5-7 сутки, иногда позднее. По истечении 30 дней наблюдение прекращают. Если за это время рост не появился, посевы уничто­жают, а результаты бактериологического исследования считают отрицательными.

Результат оценивают положительно при выделении хотя бы одной колонии бруцелл. Идентификацию возбудителя бруцеллеза проводят по: по характеру роста культуры на плотных питательных средах; морфологии микроба в мазках, окрашенных по Граму, Козловскому; агглютинации со специфической бруцеллезной сывороткой на стекле и объемным методом; свечению на 3-4+ культур, обработанных бруцеллез­ной люминесцирующей сывороткой.

Культуры предварительно проверяют на наличие признаков диссоциации, одним из перечисленных выше методов.

Дифференциации (определение видов и биоваров) подлежат культуры в S-форме после идентификации.

Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного комитета номенклатуры бактерий и Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу в 1972 г. были определены единые тесты для проведения идентификации и дифференциации бруцелл для всех стран мира.

Серологические и аллергические методы исследования на бруцеллез.Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.

В случае малой обсемененности пробы и отрицательных результатов, полученных при посеве исследуемого материала на питательные среды и заражении лабораторных животных, серологический метод может быть единственным, позволяющим диагностировать бруцеллез. В зависимости от целей исследования используют те или иные серологические методы.

При проведении эпидемиологического исследования в очагах применяют реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и объемную (Райта), реакцию Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилакти­ческой вакцинацией населения можно ограничиться постанов­кой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.

Для диагностики острого и подострого бруцеллеза ставят реакцию Хеддльсона, Райта и РПГА. В случаях отрицательного результата используют реакцию Кумбса.

При диагностике хронического бруцеллеза и проведении диспансерного наблюдения за переболевшими рекомендуют наряду с реакциями Хеддльсона, Райта, РПГА, использовать реакцию Кумбса и аллергическую пробу (Бюрне).

Серологические реакции и аллергическая кожная проба по своему диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменить друг друга. Это обусловливает необходимость применения комплексного серологического метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза.

В ранние сроки от начала заболевания (первые 6 месяцев) диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического. Серологические реакции в этот период оказы­ваются положительными почти в 95 % случаев. По мере удлине­ния срока заболевания процент положительных серологических реакций начинает снижаться. При проведении обследования необходимо учитывать, что высокие титры антител всегда указывают на наличие инфекции, антитела в низких титрах или их полное отсутствие не исключает возможности заболевания. В связи с этим рекомендуется про­водить повторные исследования с интервалом 1-2 недели, особенно при подозрении на острую форму бруцеллеза.

Для постановки диагноза бруцеллеза у крупного рогатого скота применяют серологические и аллергические методы. Обследование начинают с постановки роз-бенгал пробы (РБП). Сыворотки, с которыми получена положительная РПБ, исследуют в РА Райта, РСК (РДСК), РПГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих анти­тел. Исследование проводят двукратно с промежутком в 30 дней.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ

Занятие 3.

Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; Нарушение авторского права страницы