Селективная среда для бактероидов индия

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобретения повышение чувствительности среды. Питательная среда включает следуквдие ингредиенты, г/л: питательный бульон 20,9-22,1; глюкоза 0,475-1,275; эритрит 0,0057-0,017; тиаьп1н-бромид 0,0019-0,0085; магний серно-кисльй 0,285-0,765; калий хлористый 0,038- 0,34 аммоний хлористый 0,665-1,275, агар-агар 9,5-11,475; гентамицин 0,0001-0,00015; лизированная кровь 50- 150; вода дистиллированная до 1л. Првьппекие чувствительности среды достигается подбором питательной основы и дополнительным введением в ее состав стимуляторов роста бактероидов и ее селективности. Среда может быть приготовлена в сухом виде. 1 табл. с € (Л

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСтЕЕННЫЙ КОМИтат CCCP

БАКТЕР ОИДОВ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобретения 511 4 C 12 N I/20 С 12 q 1/04 повышение чувствительности среды.

Питательная среда включает следуюшие ингредиенты, г/л: питательный бульон

20,9-22,1; глюкоза 0,475-1,275, эритрит 0,0057-0,017., тиамин-бромид

0,0019-0,0085; магний серно-кислый

0,285-0,765; калий хлористый 0,0380,34, аммоний хлористый 0,665-1,275; агар-агар 9,5-11,475; гентамицин

0,0001-0,00015; лизированная кровь 50150; вода дистиллированная до 1 л.

Повышение чувствительности среды достигается подбором питательной основы и дополнительным введением в ее состав стимуляторов роста бактероидов и ее селектнвности. Среда может быть приготовлена в сухом виде. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике заболеваний, вызванных б акт ер оидами.

Цель изобретения — повышение чувствительности среды.

Пример I. Для приготовления среды минимального состава в колбу 10 с 950 мл дистиллированной воды вносят, r: питательный бульон 20,9, глюкозу

0,475, эритрит 0,0057, тиамин-бромид

0,0019, магний серно-кислый 0,285, калий хлористый 0,038, аммоний хло- 15 ристый 0,665, агар-агар 9.5. Все тщательно перемешивают и на огне, не допускания подгорания, доводят до кипения, кипятят 1-2 мин. Среду разливао ют во фчаконы, стерилизуют при 120 С 20 в течение 15 мин. рН готовой среды должен быть в пределах 7,0 -0,2;

Перед употреблением среду регенерируют на кипящей водяной бане 10 мин. Затем в охлажденную до 45-50 С 25 среду добавляют 50 г лизированной крови и 0,0001 r гентамицина, взбалтыьают и разливают в чашки Петри.

После застывания агарового студня производят посев исследуемого мате- 30

Пример 2. Для приготовления среды оптимального состава в колбу с 900 мп дистиллированной воды вносят, r: питательный бульон 21,6, глюкоза 0,9, эритрит 0,011, тиаминбромид 0,0045, магний серно-кислый

0,54, калий хлористый 0,081, аммоний хпористый 1,125, агар-агар 10,8. Все тщательно перемешивают и на огне, не 40 допуская пригорания, доводят до кипения, кипятят 1-2 мин. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при

120 С в течение 15 мин. рН готовой среды должен быть в пределах 7,0+0,2. 45

Перед употреблением среду регенерируют на кипящей водяной бане 10 мин.

Затем в охлажденную до 45-50 С среду добавляют 100 г лизированной крови и

0,0001 r гентамицина, взбалтывают 50 и разливают в чашки Петри. После застывания агарового студня производят посев исследуемого материала.

Пример 3. Для приготовления среды максимального состава в колбу с 850 мл дистиллированной воды вносят, г: питательный бульон 22,1, глюкоза 1.275, эритрит 0,017, тиаминбромид 0,0085, магний серно-кислый

0,765, калий хлористый 0,34, аммоний хлористый 1,275, агар -агар 11,475.

Все тщательно перемешивают и на огне, не допуская пригорания, доводят до кипения, кипятят 1-2 мин. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при о

120 С в течение 15 мин. рН готовой среды должен быть в пределах 7,0 ;0,2.

Перед употреблением среду регенерируют на кипящей водяной бане 10 мин.

Затем в охлажденную до 45-50 С среду добавляют 150 г лизированной крови и

0,00015 г гентамицина, взбалтывают и разливают в чашки Петри. После застывания агарового студня производят посев исследуемого материала.

Посев исследуемого материала на среду в чашки Петри производят петлей или шпателем, равномерно раслреде ляя его по всей поверхности среды. о

Посевы инкубируют при 37 С в течение

48-72 ч в условиях анаэростата, заполненного трехкомпонентной газовой смесью путем трехкратного вакуум— заместительного промывания.

Результаты испытаний питательной среды в экспериментах с чистыми куЛьтур ами р аз личных видов б актер оидов показывают высокую чувствительность среды по сравнению с контрльными (см. таблицу)

Скорость роста на опытной и контрольной средах варьирует от 48 ч инкубации — для быстрорастущих культур, до 72 ч — для культур наиболее требовательных по своим питательным потребностям.

Из данных таблицы видно, что чувствительность предлагаемой среды находится на уровне среды Шедлера фирма

"Libco" но значительно выше среды

Питательная среда для выделения б актера идо в, содержащая пит ат ел ьную основу, источник углерода, стимулятор роста, агар-агар, лизированную кровь и дистиллированную воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения чувствительности среды, она дополнительно содержит маг" ний серно-кислый, калий хлористый, аммоний zëoðèñòûé, гентамицин, в качестве питательной основы она содер1440918

Сухие питательные среды для анаэробных бактерий

Информация о продукции

Кол-во грамм на литр среды

Anaerobic agar (Brewer)

Агар для анаэробов по Бреверу

Рекомендуется для выделения и определения чувствительности к антимикробным воздействиям факультативных и облигатных анаэробов, а также изучения морфологии их колоний. Хранить при t +10 до +30С

Thioglycollate medium w\o indicator

Тиогликолевая среда без индикатора

Эта среда используется для культивирования широкого круга микроорганизмов, в частности облигатных анаэробов из клинического и другого материала. Хранить при t +10 до +30С

Thioglycollate medium w/o dextrose

Тиогликолевая среда без глюкозы

Эта среда используется для культивирования аэробных, анаэробных и микроаэрофильных микроорганизмов, для определения бактерий в ходе контроля стерильности материалов, а также для изучения ферментативных реакций в отношении различных углеводов. Хранить при t +10 до +30С.

Этот бульон используют для подсчета различных аэробных и анаэробных бактерий в желудочно-кишечном тракте. Хранить при t +10 до +30С.

Этот агар используют для подсчета различных аэробных и анаэробных бактерий в желудочно-кишечном тракте.

Предназначены для селективного выделения грамотрицательных анаэробов
Рекомендуемые среды: М291-12 фл, на 500г среды Хранить при t +2 +80С.

Предназначены для селективного выделения анаэробных грамположительных кокков
Рекомендуемые среды: М291-12фл на 500г среды. Хранить при t +2 +80С

Wilkins Chalgren anaerobic agar

Анаэробный агар по Вилкинсу-Чалгрену

Этот агар используют для выделения и культивирования, а также определения чувствительности методом разведения в агаре анаэробных бактерий.
Хранить при t +10 до +30С. Рекомендуемые добавки: FD001-24фл или FD002-24фл на 500 г среды

Non spore anaerobic supplement

Добавка для выделения неспоровых анаэробов

Обогатительная добавка для селективного выделения неспоровых анаэробов.
Рекомендуется для сред: М832-24фл, М863-31фл. на 500г среды. Хранить при t +2 +80С.

g.n.spore anaerobic supplement

Добавка для выделения грамотрицательных спорообразующих анаэробов

Обогатительная добавка с антибиотиками для селективного выделения грамотрицательных анаэробов. Рекомендуется для сред М832 – 24 фл, М863 – 31 фл, на 500 г. Среды. Хранить при t +2 +80С

Агар для анаэробов

Флакон 100г. 500г.

Агар для анаэробов рекомендуется для культивирования анаэробных бактерий, в частности, видов Clostridium и других микроорганизмов. Хранить при t +10 до +30С.

soyabean casein digest medium (tryptone soya broth w/o dextrose)

соево-казеиновая среда (триптон соевый бульон без глюкозы)

Эту среду рекомендуют для культивирования анаэробов из корневого канала зуба, крови и других материалов, можно использовать как основу для изучения ферментации углеводов. Хранить при t +10 до +30С.

CHO medium base

Основа среды для определения ферментации углеводов анаэробами

В данную основу можно вносить углеводы и определять у анаэробных бактерий способность к их ферментации. Асептически вносят 6,25мл 10% раствора углевода на 1000мл среды. Хранить при t +10 до +30С.

Listeria selective broth base

Основа селективного бульона для листерий

Эту среду с добавлением селективных веществ рекомендуют для селективного выделения и культивирования Listeria monocytogenes. Хранить при t +10 до +30С. Рекомендуемые добавки: FD063 – 14 фл или FD063I – 28 фл на 500г среды.

Предназначена для культивирования анаэробных микроорганизмов. Хранить при t +10 до +30С.

Enriched Thioglycollate Broth

Тиогликолевый бульон для накопления анаэробов

Предназначена для выделения , культивирования и идентификации различных облигатных анаэробных микроорганизмов. Хранить при t +10 до +30С.

Liver Meat Glucose Cysteine Broth

Мясо-печеночный сахарный бульон с цистином

Предназначена для культивирования прихотливых анаэробов. Хранить при t +10 до +30С.

Semisolid Liver Meat Medium

Полужидкая печеночно-мясная среда

Предназначена для культивирования прихотливых анаэробов. Хранить при t +10 до +30С

Forget Fredette Agar

Агар Фогета-Фредетта для выделения анаэробов

Предназначена для селективного выделения анаэробов из смешанных культур (ассоциаций) аэробов и анаэробов.

Anaerobic Agar w/o Dextrose

Агар для анаэробов без глюкозы

Предназначена для изучения ферментации углеводов клостридиями, стрептококками и др. Хранить при t +10 до +30С.

Tryptone Lactose Iron Agar

Лактозо-триптонный железосодержащий агар

Предназначена для идентификации анаэробов по подвижности, способности образовывать сероводород, ферментации лактозы. Хранить при t +10 до +30С.

Tryptone Lactose Iron Agar

Лактозо-триптонный железосодержащий агар

Предназначена для идентификации анаэробов по подвижности, способности образовывать сероводород, ферментации лактозы. Хранить при t +10 до +30С.

Soyabean Casein Digest Medium with 0.1% Agar

Соево-казеиновая среда с 0,1% агара

Предназнначена для культивирования анаэробов из зубного канала , крови и другого материала. Хранить при t +10 до +30С.

Gelatine Iron Agar

Предназначен для определения у микроорганизмов способности разжижать желатину и продуцировать сероводород. Хранить при t +10 до +30С

Агар Ломбарда-Доуэла для анаэробов

Флакон 100г. 500г.

Предназначен для культивирования и идентификации прихотливых анаэробных микроорганизмов. Хранить при t +10 до +30С

L.D. Esculin Agar

Агар Ломбарда-Доуэла с эскулином для анаэробов

Флакон 100г. 500г.

Предназначен для идентификации анаэробных бактерий в частности Bacteroides spр. на основе гидролиза эскулина. Хранить при t +10 до +30С

Anaerobic CNA Agar Base

Основа анаэробного агара CNA

Предназначен для селективного выделения анаэробных Streptococci. Хранить при t 2-8 C

Бульон MRS (Мана, Рогоза, Шарпа)

Флакон 100г. 500г.

Эта среда рекомендуется для культивирования лактобактерий.. Хранить при t 2 -8C

Tomato juice agar

Эта среда используется для культивирования и подсчета лактобактерий. Хранить при t +10 до +30С.

Агар MRS (Мана, Рогоза, Шарпа)

Флакон 100г. 500г.

Эта среда рекомендуется для культивирования лактобактерий. Хранить при t +10 до +30С.

Агар используют в качестве селективной среды для выращивания лактобактерий орального и фекального происхождения. Хранить порошок при t +10+300С.

Modified lactobacillus agar

Агар для выделения и идентификации Lactobacillus, модифицированный

Для культивирования и подсчета Lactobacilli. Хранить порошок при t +10+300С.

Rogosa SL broth

Бульон Рогоза (SL)

Бульон используют в качестве селективной среды для выращивания лактобактерий орального и фекального происхождения. Хранить при t 2-8 C

B.C.G. – dextrose agar (snyder test agar)

Сахарный бульон с бромкрезоловым зеленым (для теста Снайдера)

Эта среда рекомендуется для культивирования и оценки кариесогенных лактобактерий. Хранить порошок при t +10+300С.

Флакон 100г. 500г.

Эту среду используют для хранения лактобактерий и определения действия бактерий на молоко

Rogosa SL Agar w/ 0.15% Oxgall

Агар SL с желчью для лактобактерий

Предназначен для селективного выделения желчеустойчивых Lactobacilli. Хранить при t 2-80С

Бульон для бифидобактерий

Бульон для бифидобактерий используется для культивирования B. Infantis. Хранить порошок при t +10+300С

Агар для бифидобактерий

Агар для бифидобактерий используется для культивирования и сохранения многочисленных видов бифидобактерий. Хранить порошок при t +10+300С.

Bacteroides bile esculin agar (BBE)

Агар для бактероидов с желчью и эскулином

Эта среда используется для селективного выделения, идентификации и культивирования микроорганизмов группы Bacteroides fragilis.
Хранить при t +10 до +30С. Рекомендуемая добавка:FD062-17фл на 500г сухой среды

Bacteroides selective supplement

Селективная добавка для бактероидов

Рекомендуется для селективного выделения бактероидов
Рекомендуемая среда: М805-17 фл.,на 500 г среды. Хранить при t +2 +80С

Сlostridium difficile agar base

Основа агара для Сlostridium difficile

Среду со специальной добавкой используют для селективного выделения Clostridium difficile из пищевых продуктов и некоторого патологического материала.
Хранить при t +10 до +30С. Рекомендуемая добавка: FD010-15фл на 500г среды

Clostridium difficile supplement

Добавка для выделения Clostridium difficile

Рекомендуется для селективного выделения Clostridium difficile
Рекомендуемые среды: М836-15 фл. Хранить при t +2 +80С

Reinforced clostridial broth

Обогащенный бульон для клостридий

Флакон 100г. 500г.

Эта среда используется для культивирования и подсчета видов Clostridium и других анаэробов. Хранить при t +10 до +30С.

Агар для выделения клостридий

Флакон 100г. 500г.

Среду используют для селективного выделения Clostridium spp. из смешанных культур в клиническом материале. Хранить при t +10 до +30С.

Cooked meat medium (R.C.medium)

Среда с отваром мяса для анаэробов (среда R.C.)

Флакон 100г. 500г.

Среду используют для культивирования аэробов и анаэробов, особенно клинически значимых видов Clostridium.

Motility Nitrate Medium, Buffered

Полужидкий агар с нитратом, забуференный

Предназначена для выделения Clostridium perfringens на основе подвижности и нитратного теста. Хранить при t +10 до +30С.

Egg Yolk Agar Base

Основа желточного агара (для анаэробов)

Предназначена для выделения и идентификации Clostridia и определенных анаэробов.
Хранить при t +10 до +30С. Рекомендуемая добавка FD045-7 фл по 100мл на 500г сухой среды.

Tryptone peptone Glucose Yeast Extract Broth Base

Основа бульона для Clostridium botulinum

Предназначена для теста определения токсина Clostridium botulinum. Хранить при t +10 до +30С.

Бактероиды (Bacteroides) — микроорганизмы, входящие в состав условно-патогенной микрофлоры человека. Основными представителями многочисленного рода Bacteroides являются: В. fragilis, В. ureolyticum, В. thetaiotaomieron, B.melaninogenicus. Именно они чаще других вызывают анаэробные инфекции у человека.

Род Bacteroides представлен микробами двух групп:

• Аэробными бактериями B.urealyticus и B.gracilis, которые являются возбудителями инфекций органов дыхания, ЖКТ, мочевыделительной системы;
• Анаэробными бактериями B. fragilis и B. melaninogenicus, которые вызывают гнойно-воспалительные заболевания у лиц с иммунодефицитом.

Бактероиды содержатся в большом количестве в толстой кишке. При этом они значительно преобладают над аэробной микрофлорой и в сотни раз превышают количество кишечных палочек. Их физиологическое значение связано с антагонистической активностью, которую микробы проявляют к шигеллам, сальмонеллам и энтеропатогенным эшерихиям.

Свойства бактериодов

Морфология. Bacteroides spp. – палочковидные бактерии, имеющие средний размер и разнообразную форму: изогнутую, спиралевидную, овальную. Палочки не имеют жгутиков, спор и капсул, за исключением Bacteroides fragilis. Геномы изученных видов представлены кольцевыми двуцепочечными молекулами ДНК.

Тинкториальные свойства. Бактероиды окрашиваются по Граму в красный цвет и располагаются в мазке одиночно или парами. Тонкие ветвящиеся палочки могут содержать большие вакуоли.

Физиологические свойства. Большинство бактероидов — строгие анаэробы. Они растут в значительном диапазоне температур от 25 до 45 °С, оптимальное значение рН питательных сред 7—7,4. Микробы обладают малой устойчивостью во внешней среде. Они чувствительны к различным дезинфектантам. В качестве источника энергии бактерии используют химические соединения, а в качестве источника углерода – органические вещества.

Культуральные свойства. Бактероиды требовательны к питательным средам. Им необходимы специальные условия для роста и размножения — двуокись углерода и менадион. Для выделения чистой культуры в лабораторных условиях используют специальные сложные среды, обогащенные гемином, пептоном, дрожжевым экстрактом, глюкозой, бычьей желчью. Микробы размножаются медленно: посевы выдерживают в термостате в течение пяти суток. На пластинчатых средах с кровью бактероиды растут в виде мелких округлых выпуклых колоний, лишенных пигмента или имеющих черную, серую или темно-коричневую окраску с включениями в форме концентрически расположенных колец. При росте в жидких средах образуют равномерную муть с осадком.

Биохимические свойства. Большинство бактероидов не продуцируют каталазу, не ферментируют глюкозу, лактозу, мальтозу или расщепляют данные сахара с образованием кислот — янтарной, уксусной, пропионовой, изовалериановой, изомасляной и масляной. Они метаболизируют пептон и промежуточные продукты обмена. Бактероиды вовлечены в процессы утилизации белков и биотрансформации желчных кислот, восстановления холестерина, гидролиза мукополисахаридов.

Факторы патогенности бактероидов: эндотоксин – липополисахарид наружной мембраны клеточной стенки; О – антиген, структура которого остается неизученной; капсула; пили. Фимбрии, белки-адгезины и белки-агглютинины обеспечивают адгезию – позволяют микробам хорошо связываться с тканями хозяина. Капсула B.fragilis выполняет защитную функцию – уклонение от иммунного ответа хозяина. Большинство бактероидов аэротолерантны – устойчивы к токсическому действию кислорода. Ферменты инвазии, разрушающие ткани хозяина – нейраминидаза, фибринолизин, гепариназа, ДНК-аза, гиалуронидаза, хондроитинсульфатаза, гемолизин.

Эпидемиология

Различные штаммы бактероидов появляются у человека спустя 10 дней после рождения. Естественным их ареалом является толстый кишечник, а также дыхательные пути, полость рта, половые органы и мочевыводящий тракт. Для бактероидов характерен вертикальный путь передачи — от матери ребенку. В процессе рождения эти микробы становятся частью нормальной микрофлоры и не вызывают патологии.

В норме количество бактероидов в кале у детей и взрослых составляет 107 — 108 КОЕ/г. Эти бактерии участвуют в процессе переваривания пищи – в переработке жиров в организме. Снижение бактероидов в кале обусловлено длительной антибиотикотерапией или кишечными инфекциями бактериальной или вирусной этиологии. Увеличение количества бактероидов связано с обилием в рационе жирных продуктов.

Под воздействием негативных эндогенных и экзогенных факторов они приобретают патогенные свойства и вызывают гнойно-воспалительные заболевания брюшины, червеобразного отростка, мочевого пузыря, клапанов сердца, легких, мозговых оболочек, кожи, среднего уха, пазух носа.

Бактероиды находятся в полостных органах, связанных с внешней средой. Они отсутствуют у здоровых людей в стерильных внутренних органах и брюшной полости. При микробном дисбалансе патогенные штаммы бактериодов становятся возбудителями воспаления шейки матки, эндометрия, яичников, простаты, уретры. Эти заболевания отличаются упорным течением и частым рецидивированием. Бактероиды могут вызывать ДВС-синдром, который приводит к тяжелому флебиту и тромбозу. В тяжелых случаях наблюдается эндокардит и бактериемия. Травмы и повреждения кишечной стенки становятся причинами образования абсцессов в разных частях тела: печени, малом тазу, легких, головном мозге. Бактероиды способны вызывать опасные для жизни патологии – внутрибрюшной сепсис, перфорированный и гангренозный аппендицит, септический артрит, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона.

Бактероидозы являются осложнением оперативных вмешательств на толстом кишечнике, мочевых путях, матке. Обычно бактероиды обнаруживаются в ассоциациях с другими микробами.

Симптомы

Бактероиды являются представителями кишечного эубиоза — совокупности микробных популяций, населяющих толстый кишечник здорового человека. Они относятся к облигатной группе бактерий. Наряду с бифидобактериями, лактобактериями, кишечной палочкой и энтерококками бактероиды постоянно обитают в кишечнике. Резидентная микрофлора составляют около 90% от общего числа микроорганизмов.

Под воздействием неблагоприятных факторов внешней среды происходят изменения в составе нормальной кишечной микрофлоры, формируется дисбиоз, сопровождающийся рядом клинических симптомов. При снижении количества бактероидов нарушается их антагонистическая, иммунотренирующая и метаболическая функция. Причинами подобных расстройств являются: недоношенность, искусственное вскармливание, заболевания ЖКТ, длительное лечение антибиотиками, гормонами, цитостатиками, лучевая терапия.

Изменение количества представителей условно-патогенных кишечных микроорганизмов, в том числе и бактероидов соответствует 2, 3 и 4 степени дисбактериоза. При этом 3 и 4 степени характеризуются появлением тяжелых кишечных дисфункций. У больных возникает боль в животе, вздутие, урчание, тошнота и рвота, отрыжка, изжога, неустойчивый стул, при котором запоры сменяются поносами. Постепенно к данным признакам присоединяется симптомы стоматита, фарингита, холецистита, уретрита, пиелонефрита, пневмонии.

В мазке из влагалища здоровой женщины обнаруживают гарднереллы, бактероиды, фузобактерии, велионеллы, пептококки и другие. Эти микроорганизмы относятся к транзиторной микрофлоре — непостоянно присутствующей во влагалище. В норме их количество очень мало. Под воздействием ряда факторов молочнокислые бактерии уничтожаются, среда во влагалище становится щелочной, транзиторные микроорганизмы начинают активно размножаться, что приводит к развитию бактериального вагиноза. У женщины появляются выделения из половых путей с неприятным запахом пропавшей рыбы. Они жидкие, беловатые или сероватые. Больные жалуются на жжение, зуд, дизурические расстройства, боль или неприятные ощущения при половых контактах. Усиленное размножение бактероидов во влагалище может закончиться не только развитием бактериального вагинита. Они проникают в вышележащие отделы половой системы и вызывают цервицит, эндометрит, сальпингит, аднексит.

Мужчины также могут быть носителями транзиторных микробов. Обычно это лица, перенесшие венерические болезни, страдающие воспалением простаты или часто применяющие для профилактики антисептические средства. У мужчин воспалительный процесс не развивается, конкретные жалобы отсутствуют.

Диагностика

Основным методом диагностики заболеваний, вызванных бактероидами, является лабораторный. В микробиологический лаборатории исследуют кровь, гной, ликвор, мокроту, мочу, кал, отделяемое влагалища и другой биоматериал от больных, в зависимости от места локализации патологического процесса. Принцип взятия и транспортировки исследуемого материала – исключение контакта с атмосферным воздухом. Оптимальный вариант — доставка проб в шприцах с удаленным воздухом.

С помощью микроскопа и окраски мазка по Граму обнаруживают грамотрицательные биполярно окрашенные полиморфные палочки, располагающиеся по одиночке, парами или короткими цепочками.

Посевы инкубируют в анаэробных или микроаэрофильных условиях в течение 5-7 дней. Даже при кратковременной экспозиции с кислородом рост бактероидов прекращается. Нередко обращает на себя внимание отвратительный запах при росте микробов на питательных средах. После выделения и накопления чистой культуры идентифицируют полученный микроорганизм и определяют его чувствительность к антибиотикам.

• В. fragilis – мелкие, вогнутые, серовато-белые колонии без гемолиза.
• В. melaninogenicu — гладкие колонии черного цвета с зоной гемолиза вокруг.

Бактероидоз – классическая полиинфекция, при которой монокультуры практически не выделяются. Бактероиды обычно находятся в ассоциациях с клостридиями, фузобактериями, вейлонеллами, стрептококками.

Серологическое исследование проводят при септицемии и тяжелых воспалительно-гангренозных процессах. В крови больных быстро и в больших количествах вырабатываются антитела. Высокие титры антител определяют с помощью реакции агглютинации, преципитации в геле и непрямой гемагглютинации.

Ускоренная идентификации микробов бактероидной группы:

1. Прямая и непрямая реакция иммунофлюоресценции,
2. Радиоиммунологический метод,
3. ИФА.

Лечение

Чтобы избавиться от бактероидов, оказывающих патогенное воздействие на организм, необходимо пройти курс противомикробной терапии. Больным назначают антибиотики широкого спектра действия из группы пенициллинов, цефалоспоринов, фторхинолонов. Бактероиды устойчивы к макролидам и аминогликозидам. Чтобы лечение антибиотиками было эффективным, необходимо назначать препараты по результатам антибиотикограммы. В микробиологической лаборатории после идентификации возбудителя определяют его чувствительность к противомикробным средствам.

Чтобы предупредить заболевания бактероидной этиологии, необходимо выполнять следующие врачебные рекомендации:

• Соблюдать правила личной гигиены,
• Полноценно питаться,
• Проводить общеукрепляющие мероприятия,
• Принимать антибиотики по строгим показаниям,
• Для восстановления микрофлоры и нормализации пищеварительных процессов периодически пить про- и пребиотики, витамины, ферменты.

Название питательной среды	Аббревиатура или иное название среды	Назначение питательной среды
Сердечно-мозговая плотная среда	BHI-agar	Среда общего назначения. Должна быть обогащена гемином и витамином К. Обеспечивает рост облигатно- и факультативно анаэробных бактерий.
Бруцелла-агар с кровью	––	То же
Анаэробный кровяной агар	CDC anaerobe agar	Среда общего назначения (см.выше). Особо выделяется, как оптимальная для грамположительных анаэробных бактерий.
Агар Шедлера с кровью	Schаedler¢s agar	Среда общего назначения, обогащенная (см.выше). Считается оптимальной для выделения требовательных анаэробных бактерий.
Канамицин-ванкомицин кровяной агар	LKV-agar KLVB-agar	Для изоляции и селекции бактероидов и обнаружения пигментообразующих грам-отрицательных палочек. Обогащена гемином, витамином К1 и лаковой кровью.
Фенилэтилалкоголь агар	РЕА	Селективная среда. Подавляет рост факультативно анаэробных грамотрицательных палочек
Бактероидный желчно-эскулиновый агар	BBE-agar	Для селективного выделения и предварительной идентификации бактерий группы B.fragilis
Яично-желточный агар (вар.яично-желточный агар с неомицином)	EYA (NEYA)	Селективная и диагностическая среда для клостридий, а также для других анаэробов (некоторые виды превотелл и фузобактерий), образующих липазу и лецитиназу.
Бруцелла агар с цефокситином, циклоспорином и фруктозой	CCFA	Селективная и диагностическая среда для Clostridium difficile
Тиогликолевая среда, обогащенная	THIO medium	Среда с малым количеством агара, обогащенная гемином, витамином К, а также сывороткой крови (по показаниям). Для многих видов анаэробных бактерий.

В зарубежной практике для выделения и культивирования неспорообразующих облигатно анаэробных бактерий в качестве базовых питательны сред часто называют агар Шедлера (Schaеdler agar), среду для бруцелл, обогащенную кровью, витамином К и гемином (ее пропись приведена в разделе питательных сред для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам), анаэробный кровяной агар (СDС anaerobic agar).

Агар Шедлера включает (на литр)

Казеиновый пептон 5,7 г

Соевый пептон 1,0 г

Мясной пептон 2,5 г

Дрожжевой экстракт 3,0 г

Натрия хлорид 5,7 г

Дикалия гидрофосфат 0,8 г

Витамин К₁ 0,01 г

Баранья кровь 50,0 мл

Кровь добавляют стерильно в приготовленную, расплавленную и охлажденную до 45 о С среду перед разлитием в чашки Петри. Среда имеет несколько не отличающихся принципиально прописей, что не меняет ее назначения.

Для выделения и первичной идентификации B.fragilis и других представителей близкой к ней группы бактероидов нашла применение агаризованная желчно-эскулиновая среда (ВВЕ-agar) следующего состава (на литр).

Панкреатический перевар казеина 15,0 г

Перевар соевой муки 5,0 г

Желчь сухая 20,0 г

Натрия хлорид 5,0 г

Цитрат аммонийный железа 0,5 г

Витамин К₁ 0,01 г

Гентамицин 0,1 г

Гемин, витамин К₁ и гентамицин вводят в готовую и охлажденную до 45 – 50 о С среду. Желчь выполняет селекционирующую функцию (B.fragilis дает рост на средах с желчными солями). Гидролиз эскулина (с образованием эскулетина) в сочетании с солью железа придает черно-коричневую окраску среде вокруг колоний. Сами колонии B.fragilis и представителей ее группы округлые, имеют серую окраску и достигают диаметра 1 мм или более.

Имеется несколько других прописей, декларируемых как среды для бактероидов, которые, однако, не имеют в своем составе селективных или диагностических компонентов, а представляют собой обогащенные варианты сред обязательно с гемином и витамином К₁.

В качестве среды, обеспечивающей рост широкого круга анаэробных бактерий, включая бактероиды, и, в то же время, обладающей селективными свойствами, предложена среда, содержащая фенилэтиловый спирт в качестве селекционирующего агента. Последний подавляет рост факультативно анаэробных микроорганизмов, в т.ч. энтеробактерий. Среда известна как фенилэтилалкоголь агар или РЕА-аgar. Ее состав на литр.

Перевар соевой муки (папаиновый) 23,0 г

Дрожжевой экстракт 2,0 г

Натрия хлорид 5,0 г

Гемин (1% раствор) 10,0 мл

Витамин К₁ (1% раствор) 1,0 мл

Фенилэтиловый спирт 2,7 мл

Кровь баранья 50,0 мл

Два последних компонента добавляют в готовую, расплавленную и охлажденную до 45 – 50 о С среду непосредственно перед приготовлением чашек.

Для выделения фузобактерий предложена селективная среда с антибиотиками, FAA-среда (в некоторых работах она помечена как среда для требовательных анаэробов). Ее состав на литр

Натрия хлорид 5,0 г

Натрия пируват 1,0 г

Крахмал растворимый 1,0 г

L-цистина гидрохлорид 0,5 г

Натрия сукцинат 0,5 г

Натрия гидрокарбонат 0,4 г

Натрий фосфорнокислый пиро 0,25 г

Витамин К₁ 0,01 г

Ванкомицин 0,005 г

Джозамицин 0,003 г

Кровь баранья дефибринированная 50,0 мл

Эта же среда без антибиотиков предложена для культивирования широкого круга анаэробных бактерий. Некоторые авторы считают достаточно вводить в среду только неомицин (0,1 г/л) и ванкомицин (0,0075 г/л) для селективного выделения фузобактерий.

Селективными и, одновременно, диагностическими свойствами обладает среда для Fusobacterium necrophorum следующего состава (на литр).

Панкреатический перевар казеина 32,0 г

Магний сернокислый 5,0 г

Динатрия гидрофосфат 5,0 г

Кристаллический фиолетовый 0,023 г

Эмульсия яичного желтка (50%) 90,0 мл

Раствор фенилиэтолового спирта (0,27%) 1,35 мл

Эмульсия яичного желтка готовится следующим образом. Обрабатывают антисептиком 24 яйца. У 22 из них отделяют яичный желток и смешивают его с содержимым 2 других яиц. Добавляют 100 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Тщательно смешивают.

Аналогичный принцип заложен в пропись еще одной селективной и диагностической среды, рекомендованной к использованию Американским микробиологическим обществом. Среда известна как яично-желточный агар с неомицином (Egg Yolk Agar) или как агар Lombard-Dowell (LD agar) с неомицином. Среда рекомендована для выделения Fusobacterium necroрhorum, Prevotella intermedia, клостридий. LD agar является основой для многих вариантов питательных сред, используемых при работе с облигатно анаэробными бактериями. Состав ее на литр следующий.

Панкреатический перевар казеина 5,0 г

Дрожжевой экстракт 5,0 г

Натрия хлорид 2,5 г

L-триптофан 0,2 г

Натрий сернистокислый 0,1 г

Витамин К₁ 0,01 г

Натрия гидроокись (1 N) 5,0 мл

Селективный и диагностический вариант среды, приведенной выше, включает

LD агар 900,0 мл

Яично-желточная эмульсия 10,0 мл

Магний сернокислый (5% раствор) 0,02 мл

Динатрия гидрофосфат 0,5 г

Неомицина сульфат 0,01 г

Приготовление яичной эмульсии: смешивают содержимое 1 яйца с яичным желтком 11 яиц.

Эмульсию яичного желтка и неомицин вносят асептично в расплавленную и охлажденную до 45 – 50 о С среду перед ее разлитием в чашки Петри.

Дифференциация анаэробов идет по их способности продуцировать липазу, лецитиназу и протеазы (образование преципиата вокруг колоний –– лецитиназа, перламутовая переливающаяся окраска колоний –– липаза, зона просветления вокруг колоний –– протеаза).

Среди других вариантов LD агара значительным диагностическим потенциалом обладает также т.н. LD эскулин агар, имеющий следующий состав на литр.

Панкреатический перевар казеина 5,0 г

Дрожжевой экстракт 5,0 г

Натрия хлорид 2,5 г

Железа цитрат 0,5 г

L-триптофан 0,4 г

Витамин К₁ 0,01 г

Натрия гидроокись (1 N) 1,0 мл

Микроорганизмы, гидролизующие эскулин, меняют окраску среды вокруг колоний от красно-коричневой до темно-коричневой. Бактерии, продуцирующие H₂S образуют колонии черного цвета.

Для бактерий, дающих рост в присутствии желчи (B.fragilis и ее группа), предложен вариант этой же среды, содержащий сухую желчь или соли желчных кислот. Он имеет много общего с составом среды, уже приведенной ранее. Жидкий вариант (бульон LD) предложен для культивирования различных облигатно анаэробных бактерий.

В отечественных методических рекомендациях, названных в начале этой главы, также дано несколько прописей диагностических питательных сред. Для определения лецитиназной (лецитовителлазной) и липазной активности рекомендована среда следующего состава.

(120 мг% аминного азота) 1000,0 мл

Динатрия гидрофосфат 5,0 г

Калия дигидрофосфат 1,0 г

Натрия хлорид 2,0 г

Магний сернокислый 0,1 г

Гемин (1% раствор) 1 мл

Взвесь желтка 200,0 мл

Взвесь желтка рекомендовано готовить, используя 1 желток на 200 мл физиологического раствора.

Для определения протеолитической активности анаэробных бактерий предложено использовать среду с желатином.

(120 мг% аминного азота) 1000,0 мл

Натрия хлорид 5,0 г

Желатин 100,0 – 150,0 г

L-цистеин солянокислый 0,25 г

Гемин (1% раствор) 1,0 мл

Витамин К₁ (0,01% раствор) 1,0 мл

Для определения сахаролитических свойств анаэробов рекомендовано пользоваться пептонно-дрожжевым бульоном с добавлением необходимого углевода. Пропись бульона следующая (на литр).

Дрожжевой экстракт 10,0 г

Глюкоза или др.углевод 10,0 г

L-цистеин солянокислый 0,5 г

Гемин (1% раствор) 1,0 мл

К среде может быть добавлен резазурин как показатель редокс-потенциала. Подчеркивается необходимость вести работы в токе бескислородного газа. Прокипяченная (восстановленная) среда не должна иметь розовой окраски – резазурин в процессе кипячения должен быть обесцвечен.

В заключение приведем селективную и диагностическую среду, предложенную для выделения Clostridium difficile, которая имеет следующий состав (на литр).