Стрептококк как санитарно-показательный микроорганизм

Пробиотики — препараты, оказывающие при приеме per os нормализирующее действие на организм человека и его микрофлору. Большинство пробиотиков — бактерии, но это могут быть и другие микроорганизмы, например, дрожжевые грибки.

30. Понятие об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса. Понятие об источниках инфекции, механизмах, путях и факторах передачи.

Инфекция (инфек­ционный процесс) - совокупность физиологических и патологических восста­новительно-приспособительных реакций, возникающих в восприимчивом макроор­ганизме при определенных условиях окру­жающей внешней среды в результате его взаимодействия с проникшими и размно­жающимися в нем патогенными или ус­ловно-патогенными бактериями, грибами и вирусами и направленных на поддержание постоянства внутренней среды макроорга­низма (гомеостаза). Сходный процесс, но вызванный простейшими, гельминтами и насекомыми — представителями царства Animalia, носит название инвазия.

Условия возникновения инфекционного процесса:

· Восприимчивый МакроО: состояние хозяина, его резистентностьт, входные ворота

· Микроб-возбудитель: патогенность, инфицирующая доза, скорость размножения

· Окружающая среда: оказывает опосредованное изменение на восприимчивость хозяина.

Выполнил

Студент II курса

Фирсов Евгений

Содержание

Микроэкология

В современной микроэкологии человека целесообразно выделить две субдисциплины: экзомикроэкологию и эндомикроэкологию.

Экзомикроэкология исследует взаимоотношения человека (как индивидуума, так и популяции людей) с микроорганизмами окружающей среды. В определенной мере часть этих задач решает санитарная микробиология, которая находится на стыке микробиологии, экологии, эпидемиологии и гигиены. При этом исходят из посылки, что человек и микроорганизмы окружающей среды совместно обитают в определенном участке биосферы (биотопе) с относительно стабильными абиогенными и биогенными характеристиками. Таким образом, в том или ином конкретном биотопе нашей планеты сформировалось и существует подвижное симбиотическое сообщество сравнительно однородной популяции людей и чрезвычайно гетерогенного комплекса микробных популяций.

Эндомикробиология (медицинская микроэкология) исследует симоиотические взаимоотношения между аутомикрофлорой и макроорганизмом, а также между сочленами микробного населения организма в норме и при патологии. На основе новых знаний разрабатываются методы и средства гармонизации этих взаимоотношений в интересах здоровья не только отдельного человека, но и сообщества людей в целом.

Санитарно-показательные микроорганизмы

Санитарная микробиология — раздел медицинской микробиологии, изучающий мик­роорганизмы, содержащиеся в окружающей среде и способные оказывать неблагоприятное воздействие на состояние здоровья человека. Она разрабатывает микробиологические; показатели гигиенического нормирования, методы контроля за эффективностью обез­зараживания объектов окружающей среды, а также выявляет в объектах окружающей сре­ды патогенные, условно-патогенные и санитарно-показательные микроорганизмы.

Санитарно-показательные микроорганизмы используют в основном для косвенного опре­деления возможного присутствия в объектах окружающей среды патогенных микроорга­низмов. Их наличие свидетельствует о загряз­нении объекта выделениями человека и жи­вотных, так как они постоянно обитают в тех же органах, что и возбудители заболеваний, и имеют общий путь выделения в окружаю­щую среду. Например, возбудители кишечных инфекций имеют общий путь выделения (с фекалиями) с такими санитарно-показательными бактериями, как бактерии группы ки­шечной палочки —(в группу входят сходные по свойс­твам бактерии родов Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella), энтерококки, клостридии перфрингенс. Возбудители воздушно-капельных инфекций имеют общий путь выделения с бактериями (кокками), постоянно обитаю­щими на слизистой оболочке верхних дыха­тельных путей, выделяющимися в окружаю­щую среду (при кашле, чиханье, разговоре), поэтому в качестве санитарно-показательных бактерий для воздуха закрытых помещений предложены гемолитические стрептококки и золотистые стафилококки.

Различают санитарно-показательные микроорганизмы кишечника (группа А) и верхних отделов дыхат. путей (группа Б). К группе А относятся кишечная палочка, энтерококк, Clostridium регfringens, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Lactobacterium bifidum, Lactobacterium plantarum, кишечный и дизентерийный бактериофаги, Bacteroides (Risiella). Присутствие санитарно-показательных микроорганизмов указывает на фекальное загрязнение воды, почвы, пищевых продуктов, а также посуды и инвентаря пищевых предприятий. Группа Б включает зеленящий (a ) стрептококк, гемолитич. (b ) стрептококк, стафилококк, которые учитывают преимущества при исследовании воздуха для косвенной индикации возможного наличия в нём возбудителей воздушно-капельных инфекций.

Санитарно-показательные микроорганизмы должны отвечать следующим основным требованиям:

1. должны обитать только в организме лю­дей или животных и постоянно обнаружи­ваться в их выделениях;

2. не должны размножаться или обитать в почве и воде;

3. сроки их выживания и устойчивость к различным факторам после выделения из ор­ганизма в окружающую среду должны быть равными или превышать таковые у патоген­ных микробов;

4. их свойства должны быть типичными и легко выявляемыми для их дифференциации;

5. методы их обнаружения и идентифика­ции должны быть простыми, методически и экономически доступными;

6. должны встречаться в окружающей среде в значительно больших количествах, чем па­тогенные микроорганизмы;

7. в окружающей среде не должно быть близ­ко сходных обитателей — микроорганизмов.

Санитарно-показательные микроорганизмы являются постоянными обитателями поверхностей и полостей человеческого или животного организма. Обнаружение и в объектах внешней среды свидетельствует о загрязнение выделениями человека или животного. Чем обильнее такое загрязнение, тем больше возможность попадания в объект патогенных микробов. Основными санитарно-показательными микроорганизмами в отношении кишечных инфекций, указывающими на фекальное загрязнение внешней среды (вода, почва), считают бактерии группы кишечных палочек (БГКП). В качестве дополнительных показателей при оценке некоторых объектов определяют наличие фекальных стрептококков (энтерококков) и клостридий.
Кишечные палочки как санитарно-показательные микробы наиболее полно соответствуют требованиям, предъявляемым к таким микроорганизмам. Они являются постоянными обитателями кишечника человека и теплокровных животных, в больших количествах выделяются в окружающую среду. Сроки их выживания во внешней среде немного превышают сроки сохранения патогенных представителей кишечных бактерий в тех же условиях или совпадают с ними.
К БГКП относятся не только эшерихии, но и представители родов цитробактер, энтеробактер, клебсиеллы. Для них характерны следующие признаки: короткие, грамотрицательные, неспорообразующие палочки, на среде Эндо они растут в виде темно-красных колоний с металлическим блеском или без него либо в виде розовых колоний с темным центром; сбраживают лактозу и глюкозу при 37°С в течение 24 ч с образованием кислоты и газа, не обладают оксидазной активностью. Отрицательная оксидазная проба позволяет дифференцировать семейство Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитов, обладающих ферментом оксидазой.
Все БГКП попадают во внешнюю среду только из кишечника человека и животных. Наибольшее санитарно-показательное значение в этой группе имеет E. coli, присутствие которой, например, в питьевой воде, рассматривается как признак свежего хозяйственно-бытового загрязнения, несомненно, фекального происхождения.
Присутствие энтерококков считают дополнительным показателем фекального загрязнения воды и других объектов. Однако их выделение требует сред более сложных при приготовлении и растут они медленнее. Энтерококки являются нормальными обитателями кишечника, но выделяются во внешнюю среду в меньших количествах, чем кишечные палочки. Энтерококки быстрее отмирают в воде и почве. Как правило, они не размножаются в этих объектах, что позволяет рассматривать их как показатель свежего фекального загрязнения.
К санитарно-показательным клостридиям относят группу грамположительных, спорообразующих анаэробных палочек, редуцирующих сульфит на сульфит-неомицинполимиксиновой среде (СПН) при инкубации в условиях 45°С в течение 12—24 ч. Эта группа в основном представлена CI. perfringens, которые встречаются в кишечнике большинства людей в значительно меньших количествах, чем кишечная палочка. Клостридии более, устойчивы, чем не образующие спор БГКП и энтерококки. Определение санитарно-показательных клостридий рекомендуют проводить в почве и воде, используемой на предприятиях пищевой промышленности, а также при выборе новых источников водоснабжения.
Санитарно-показательными микроорганизмами загрязнения воздуха закрытых помещений являются стафилококки (Staph, aureus), а также зеленящие и гемолитические стрептококки, постоянно обитающие на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и выделяющиеся в воздушную среду при разговоре, кашле, чиханье. Во внешней среде стрептококки сохраняют жизнеспособность в течение примерно тех же сроков, что и возбудители дифтерии, а стафилококки — даже дольше. Чем большее количество стрептококков обнаруживают в воздушной среде, тем вероятнее возможность заражения человека воздушно-капельными инфекциями. Нарастание обсемененности воздуха Staph, aureus и частое его обнаружение свидетельствуют о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии. В лечебных учреждениях вторичным источником обсеменения воздуха Staph, aureus могут быть загрязненные постельные принадлежности, белье, с которых эти микроорганизмы попадают в воздух, Наиболее полную картину воздушно-капельного загрязнения воздуха дает определение и стрептококков и стафилококков. Однако ввиду того, что стрептококки довольно трудно культивировать, в лабораторной практике ограничиваются выделением Staph, aureus.

Непосредственное (прямое) выявление патогенных микроорганизмов в естественных субстратах, в том числе и в пищевых продуктах, связано с большими трудностями, несмотря на разработанные методы их ускоренного количественного определения. Это обусловлено тем, что:

- патогенные микроорганизмы находятся в окружающей среде непостоянно;

- количество патогенных микроорганизмов, поступающих в окружающую среду, значительно меньше, чем представителей нормальной микробиоты;

- в субстратах они распределены неравномерно;

- при посеве на питательные среды патогенные микроорганизмы часто подавляются сапротрофными формами в конкурентной борьбе за питательные вещества, так как они плохо приспособлены к существованию вне организма хозяина и для их выделения и культивирования необходимы специальные, дорогостоящие питательные среды;

- работа с патогенными микроорганизмами требует создания особых условий по организации работ и соответствующей квалификации персонала.

Даже при учете влияния всех перечисленных обстоятельств в ходе выполнении анализа, полученный при этом отрицательный результат не гарантирует отсутствия патогенных микроорганизмов в объектах окружающей среды. Поэтому оценку санитарного состояния объектов проводят косвенным путем, устанавливая факт их загрязнения выделениями человека и животных. Так как основными источниками патогенных микроорганизмов являются человек и животные, то чем обильнее объект окружающей среды загрязнен соответствующими выделениями, тем больше вероятность попадания в этот объект и патогенных микробов.

Установить факт загрязнения объекта выделениями человека или животного можно путем определения в этом объекте микроорганизмов, являющимися представителями нормальной микробиоты здорового организма. Состав нормальной микробиоты организма человека довольно постоянен и мало меняется при инфекционных заболеваниях. Для многих видов микроорганизмов полость рта, кишечник, верхние дыхательные пути, другие слизистые оболочки и кожа являются естественной, а нередко и единственной средой обитания. С выделениями человека представители этой микробиоты поступают во внешнюю среду. Обнаружение представителей нормальной микробиоты тела человека в каком-либо объекте свидетельствует о загрязнении этого объекта соответствующими выделениями, а следовательно, и о возможном присутствии в этом объекте патогенных микроорганизмов. Обнаруживаемые в таких случаях микробы являются показателями санитарного неблагополучия и потенциальной опасности объекта и поэтому названы санитарно-показательными.

Таким образом, санитарно-показательные микроорганизмы служат индикатором загрязнения объектов выделениями человека и животных и, следовательно, вероятного присутствия в этих объектах патогенных микроорганизмов.

Однако не все микроорганизмы, составляющие нормальную микробиоту тела человека, могут считаться санитарно-показательными. Санитарно-показательные микроорганизмы должны отвечать ряду требований:

- микроорганизмы должны постоянно содержаться в выделениях человека и теплокровных животных и поступать в окружающую среду в больших количествах;

- они не должны иметь другого природного, постоянного места обитания, кроме организма человека и животных;

- после попадания в окружающую среду они должны сохранять жизнеспособность в течение времени, близкому к срокам выживания патогенных микроорганизмов, поступающих в окружающую среду тем же путем;

- они не должны размножаться в окружающей среде;

- попав во внешнюю среду, они не должны изменять свои биологические свойства;

- они должны быть достаточно типичными, чтобы их идентификация осуществлялась без особого труда;

- методы их идентификации должны быть простыми, доступными и экономичными.

Санитарно-показательные микроорганизмы условно разделены на три группы:

Первая группа включает обитателей кишечника человека. Они являются индикаторами фекального загрязнения среды. В эту группу входят бактерии группы кишечных палочек (или колиформные бактерии), энтерококки, сульфитредуцирующие клостридии (включая Clostridium perfringens), колифаги.

Вторая группа включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки, которые являются индикаторами воздушно-капельного загрязнения среды. К этой группе относятся стафилококки.

Третья группа включает сапротрофные микроорганизмы, обитающие во внешней среде. Они являются индикаторами процессов самоочищения. К ней относятся бактерии аммонификаторы и нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, актиномицеты, цианобактерии и грибы.

Бактерии группы кишечных палочек (БГКП-колиформные) являются постоянными обитателями кишечника и постоянно выделяются с фекалиями в окружающую среду в больших количествах. К этой группе относят грамотрицательные, не образующие спор палочки, ферментирующие глюкозу, лактозу и манит, не обладающие оксидазной активностью. В группу, кроме Escherichia coli, входят бактерии других родов семейства Enterobacteriaceae: Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia, которые также встречаются в кишечнике человека и теплокровных животных, но в отличие от E. сoli, имеют более широкий ареал распространения (некоторые виды этих микроорганизмов обитают в почве, воде, на растениях). Истинная (фекальная) кишечная палочка E. сoli считается показателем свежего фекального загрязнения и отличается от других БГКП своими биохимическими свойствами. Одним из них является способность сбраживать углеводы при повышенной температуре в 44÷45°С.

Индекс БГКП - это количество бактерий данной группы в единице объема или массы продукта (обычно в КОЕ/см 3 или КОЕ/г). Чем больше величина этого показателя, тем опаснее данный объект или продукт.

Титр БГКП - это минимальное количество (объем или масса) продукта, в котором БГКП должны отсутствовать (обычно в см 3 или г). Чем меньше величина коли-титра, тем опаснее данный объект или продукт с точки зрения микробиологической безопасности.

Выявление БГКП при обследовании предприятия или какого-либо объекта свидетельствует о его неудовлетворительном санитарном состоянии.

Энтерококки относятся к роду Enterococcus и представляют собой грамположительные, неспорообразующие овальные бактерии, которые в мазках из культур, выращенных на жидких средах, располагаются парами или короткими цепочками. До 1984 года эти микроорганизмы относили к роду Streptococcus, что до сих пор находит отражение в некоторых НТД и других литературных источниках.

Все виды и варианты энтерококков имеют санитарно-показательное значение и отвечают требованиям, предъявляемым к данной группе микроорганизмов. Главным достоинством является их устойчивость к неблагоприятным внешним воздействиям. Они устойчивы к нагреванию до 65ºС в течение 30 мин, к высоким концентрациям поваренной соли от 6,5 до 17%, к активной кислотности среды в диапазоне от 3 до 12 ед. Эти особенности энтерококков позволяют дифференцировать их от стрептококков. Некоторые трудности при идентификации энтерококков связаны с несколько большими затратами времени на их определение по сравнению с БГКП, и с необходимостью использовать питательные среды сложного состава.

Клостридии также выделяются в окружающую среду с фекалиями, но в меньших количествах, чем БГКП и энтерококки. К санитарно-показательным клостридиям относят Clostridium perfringens и Clostridium sporogenes. Это крупные, полиморфные, грамположительные палочки, формирующие споры по субтерминальному типу. Основным биохимическим признаком, позволяющим отличить кишечные клостридии от свободноживущих, является способность первых восстанавливать сульфиты и вызывать соответственно почернение железосульфитной среды за счет образования FeS. Следует отметить, что почернение указанной среды могут вызывать другие бактерии (например, E. сoli), а C. рerfringens может размножаться и во внешней среде. Однако возможная неадекватность результатов, связанная с этими фактами, легко устраняется с помощью прогревания при температуре 80ºС в течение 15 ÷ 20 мин. Кроме того, способность спор C. рerfringens массово прорастать только после температурного шока, позволяет определить давность фекального загрязнения объекта – присутствие в прогретых пробах только споровых форм свидетельствует о давнем загрязнении, а если в непрогретых пробах выявляются в большом количестве вегетативные формы, то это указывает на свежее фекальное загрязнение.

Колифаги, или бактериофаги кишечных бактерий – эшерихий, сальмонелл и шигелл, постоянно обнаруживаются в местах, где эти бактерии присутствуют. Как показатели фекального загрязнения они имеют определенные недостатки: бактериофаги выживают в окружающей среде дольше, чем соответствующие бактерии ( 8÷9 месяцев против 4÷5 месяцев соответственно) и они не всегда специфичны, т.е. способны существовать и на других бактериях. Но эти недостатки компенсируются такими важными свойствами колифагов, как высокая устойчивость к дезинфектантам и такой же частотой выделения из объектов окружающей среды, какая наблюдается у многих других вирусов (например, вируса полиомиелита, гепатита А и др.). Таким образом, обнаружение колифагов в каком-либо объекте может указывать как на присутствие в нем бактерий группы кишечных палочек, так и возбудителей вирусных инфекций.

Стафилококки попадают в воздух с кожных покровов и с выделениями слизистых оболочек верхних дыхательных путей. Их наличие указывает на возможность присутствия в воздушной среде, на предметах и продуктах микроорганизмов, среди которых могут быть возбудители ангины, коклюша, туберкулёза и других инфекций, передающихся воздушно-капельным, воздушно-пылевым путем или контактным путем. Особое значение имеют гемолитические стафилококки, токсины которых вызывают лизис клеток крови (или гемолиз).

Стафилококки обладают повышенной устойчивостью к различным физическим и химическим факторам, а их способность выживать в воде значительно дольше, чем выживают бактерии группы кишечных палочек и энтерококки, позволяет считать эти микроорганизмы санитарно-показательными при оценке санитарного состояния воды как искусственных, так и природных бассейнов.

Показатели фекального и воздушно-капельного загрязнения используются для оценки санитарного состояния производственной среды. Сырья и продукции. Очевидно, что чем больше санитарно-показательных микроорганизмов присутствует в исследуемом объекте, тем больше он загрязнён выделениями человеческого организма и тем выше вероятностьнахождения в нём патогенных микроорганизмов - возбудители опасных инфекционных заболеваний.

Согласно требованиям Государственных стандартов в некоторых случаях в пищевых продуктах и сырье проводят прямое выявление патогенных, условно-патогенных микроорганизмов и их ядов в соответствии с существующими нормативными документами. Как правило, выявляют наличие сальмонелл, золотистого стафилококка, протея. Для ряда пищевых продуктов установлены дополнительные требования по выявлению C. botulinum и их токсинов, C. perfringens, B. сereus и других микроорганизмов.

Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) – это представители нормальной микрофлоры, которые выделяются естественным путем в окружающую среду и там сохраняются, поэтому служат показателями санитарного неблагополучия, потенциальной опасности исследуемых объектов. Так, если на объектах обнаруживают нормальных обитателей кишечника, делают заключение о наличии фекального загрязнения и возможном присутствии патогенных энтеробактерий. Так как патогенных представителей меньше и выделить их труднее, то вначале выявляют санитарно-показательные микроорганизмы в окружающей среде, а после их выявления можно проводить поиск патогенных.

СПМ условно разделяют на 3 группы:

1.Группа А включает обитателей кишечника человека и животных, эти микроорганизмы расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят бактерии группы кишечной палочки (БГКП) – эшерихии, энтерококки, протеи, сульфитвосстанавливающие клостридии (С. perfringens), термофилы, бактериофаги, ацинетобактер, аэромонады.

2.Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки. В нее входят a- и b-гемолитические стрептококки, стафилококки (плазмокоагулирующие, лецитиназоположительные, гемолитические и антибиотикоустойчивые).

3.Группа С включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения. В нее входят бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, целлюлозобактерии, сине-зеленые водоросли.

Санитарно-показательные микробы должны отвечать следующим требованиям: они должны постоянно содержаться в выделениях человека и теплокровных животных и поступать в окружающую среду в больших количествах; не должны иметь другого природного резервуара, кроме организма человека и животных; после выделения их в окружающую среду, должны сохранять жизнеспособность в течение сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов, выводимых из организма теми же путями; СПМ не должны размножаться в окружающей среде; не должны изменять свои биологические свойства в окружающей среде; должны быть типичными, чтобы их диагностика, индикация и идентификация осуществлялась без особого труда.

Санитарно-показательные бактерии окружающей среды.

1.Вода – бактерии группы кишечной палочки (БГКП), энтерококки, стафилококки.

2.Почва – БГКП, энтерококки, термофилы, возбудители газовой гангрены.

3.Воздух – бета-гемолитические стрептококки, стафилококки.

4.Пищевые продукты – БГКП, энтерококки, стафилококки, протей.

5.Предметы обихода – БГКП, фекальные стрептококки, стафилококки.

САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СМЫВА С РУК: ЦЕЛЬ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ.

Цель: Научиться брать смыв с рук и проводить санитарно-бактериологическое исследование для оценки санитарного состояния рук. Знать состав среды Кесслера.

День 1: Взятие смыва с рук стерильной увлажненной салфеткой и посев в среду Кесслера для обнаружения E.coli. Инкубация в термостате 44 о С 24 часа.

День 2: Учет роста на среде Кесслера (состав среды Кесслера (МПБ + желчь + лактоза + генцианфиолетовый + поплавок) - (газообразование при 44 0 С).Пересев на среду Эндо.

День 3: Учет роста красных колоний на среде Эндо. Приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия. Оксидазный тест.

МИКРОФЛОРА ВОЗДУХА

Микрофлору воздуха можно условно разделить на постоянную, часто встречающуюся, и переменную, представители которой, попадая в воздух из свойственных им мест обитания, недолго сохраняют жизнеспособность. Постоянно в воздухе обнаруживаются пигментообразующие кокки, палочки, дрожжи, грибы, актиномицеты, спороносные бациллы и клостридии и др., т.е. микроорганизмы, устойчивые к свету, высыханию. В воздухе крупных городов количество микроорганизмов больше, чем в сельской местности. Над лесами, морями воздух содержит мало микробов (в 1 м3 – единицы микробных клеток). Дождь и снег способствуют очищению воздуха от микробов.

В воздухе закрытых помещений микробов значительно больше, чем в открытых воздушных бассейнах, особенно зимой, при недостаточном проветривании. Состав микрофлоры и количество микроорганизмов, обнаруживаемых в 1 м3 воздуха (микробное число воздуха), зависят от санитарно-гигиенического режима, числа находящихся в помещении людей, состояния их здоровья и других условий.

При чихании, кашле, разговоре в воздух выбрасывается множество капелек жидкости, внутри которых содержатся микроорганизмы. Мелкие капельки образуют стойкие аэрозоли и могут часами удерживаться в воздухе во взвешенном состоянии. Заражение бактериями в этом случае происходит воздушно-капельным путем, так передаются грипп, корь, коклюш, легочная форма чумы и др.

МИКРОФЛОРА ВОДЫ

Вода является естественной средой обитания микроорганизмов, она отражает микробный пейзаж почвы, так как микроорганизмы попадают в воду с частичками почвы. В воде формируются биоценозы с преобладанием микроорганизмов, которые адаптировались к определенным условиям. В 1 мл воды количество микробов может превышать несколько миллионов.

Количественный и качественный состав микробиоценозов зависит от физико-химического состояния, температуры, рН, от концентрации минеральных и органических веществ, кислорода, углекислого газа, скорости движения воды, от массивности поступления ливневых и сточных вод.

С экологической точки зрения всю микрофлору водоемов разделяют на две группы: автохтонную (или водную) и аллохтонную, попадающую извне. Автохтонная флора – это микроорганизмы, живущие и размножающиеся в воде. К ним относятся аэробные кокки: микрококки, сарцины; бактерии рода Proteus, рода Pseudomonas; представители рода Leptospira. Анаэробных бактерий в чистых незагрязненных водоемах мало. Микроорганизмы воды играют важную роль в круговороте веществ в природе. Они выполняют роль мусорщиков, расщепляют клетчатку, органические отходы. Вместе с загрязненными ливневыми, талыми и сточными водами в озера и реки попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтерококки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций – брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций и др., поэтому вода является фактором передачи многих инфекционных заболеваний. Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный вибрион, легионеллы).

Вода артезианских скважин практически не содержит микроорганизмов. Микрофлора воды океанов и морей содержит различные микроорганизмы, например, галофильные вибрионы, поражающие моллюски и некоторые виды рыб, при употреблении которых в пищу развивается пищевая токсикоинфекция.

По степени микробного заражения воды различают три зоны: полисапробная зона – сильно загрязненная вода, бедная кислородом, богатая органическими веществами, в 1 мл ее содержание бактерий достигает 1 млн; мезосапробная зона – умеренно загрязненная вода, в ней происходит минерализация органических веществ с активными процессами нитрификации и окисления; олигосапробная зона чистой воды, в ней количество микроорганизмов в 1 мл воды составляет десятки и сотни, E.coli встречается в количестве нескольких клеток в 1 л воды.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩИХ И ТЕРМОТОЛЕРАНТНЫХ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ.

Определение общих колиформных бактерий (ОКБ).При анализе почв, для которых предполагается невысокая степень фекального загрязнения, рекомендуется использовать титрационный метод. В качестве ускоренного метода для ана­лиза слабозагрязненных почв можно использовать метод мем­бранной фильтрации. При анализах проб с предполагаемой высокой степенью фекального загрязнения целесообразно про­водить прямой посев разведении суспензии на поверхность среды Эндо.

Титрационный метод. Из первого разведения почвенной сус­пензии (1:10), прошедшей предварительную обработку, сте­рильной пипеткой берут 10 мл, что соответствует 1 г почвы, и засевают во флаконы с 50 мл жидкой лактозо-пептонной среды или среды Кесслера. Посев меньших количеств (0,01 г; 0,001 г и т.д.) делают по 1 мл из соответст­вующих разведении почвенной суспензии в пробирки с 9 мл той же среды. Посевы инкубируют в течение 48 ч при 37±1 0 С. Через 24±2 ч инкубации проводят предварительную оценку посевов. При отсутствии газообразования и помутнения через 48 ч инкубации выдают отрицательный ответ.

При наличии в посевах признаков роста (помутнения и газообразования или только помутнения) производят высев на среду Эндо и инкубируют в течение 18—24 ч при температуре 37±1 0 С. При наличии роста на поверхности среды Эндо розо­вых или красных колоний, малиновых с металлическим блес­ком или без него проводят микроскопию колоний с последую­щей постановкой оксидазного теста.

Метод мембранной фильтрации. Метод основан на фильтра­ции установленного объема — 5-10 мл почвенной суспензии первого разведения (1:10). Метод фильтрации почвы через мембранные фильтры проводится так же, как и фильтрация воды.

После окончания фильтрования фильтр переносят, не пере­ворачивая его, на питательную среду Эндо с добавлением розоловой кислоты.

Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной пробы, номера и даты посева.

Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инку­бируют посевы при температуре 37±1 0 С в течение 24±2 ч.

Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобною типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра, подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и подтверждают их принадлежность к ОКБ (наличие оксидазной активности, отношение к окраске по Граму, ферментация лактозы до кислоты и газа).

Прямой поверхностный посев на агаризованные питательные среды. Посев почвенной суспензии в количестве 0,1 или 0,2 ми производят на поверхность среды Эндо шпателем. Посев при анализе сравнительно чистых почв производят из разведений от 1:10 до 1:1000, т.е. от 10 -1 до 10 -3 . При работе с загрязненными почвами обычно используют разведения до 10 -6 . Посевы выращивают в термостате при 37±1°С в течении 24 ч и проводят идентификацию выросших микроорганизмов аналогично тому, как изложено при описании титрационного метода и подсчета количества колиформных бактерий в 1 г почвы. Для этого среднее число колиформных колоний, выросших на чашке, умножают на степень десятикратного разведения. Ре­зультат выражают индексом.

Последнее изменение этой страницы: 2016-04-26; Нарушение авторского права страницы