Техника взятия крови на бруцеллез

Рекомендации

по правилам взятия проб крови от крупного рогатого скота

Условия взятия крови и ее сохранность до начала лабораторных исследований имеют важное значение при получении достоверных результатов. Во многом эти результаты зависят от техники взятия крови и используемых при этой инструментов.

При венепункции прокол окружающих вену тканей и стенки вен делают в один прием.

На результаты лабораторных исследований могут влиять факторы, связанные с индивидуальными особенностями и физиологическим состоянием организма животного, такие как: возраст; эмоциональное состояние и психический стресс; климатические и метеорологические условия и др.

Брать кровь надо по возможности утром, до кормления животных.

Рекомендуется произвести дегельминтизацию животных за 2 недели до взятия крови.

В целях отсутствия получения ложно-положительных результатов исследований рекомендуют брать кровь не позднее, чем за три недели до отела и не ранее чем через 3 недели после отела.

На точность и правильность результатов также оказывает влияние техника взятия крови, используемые при этом инструменты (иглы, шприцы и др.), пробирки, в которые берется, а в последующем хранится и транспортируется кровь, а также условия хранения и подготовки пробы к анализу.

Традиционные и широко используемые в настоящее время способы взятия крови с помощью иглы и/или шприца оказываются основными источниками лабораторных ошибок, приводящих к низкому качеству результатов анализов. Кроме того, эти методы не могут быть стандартизованы и не обеспечивают безопасность персонала, берущего кровь.

При взятии проб венозной крови методом самотека с использованием иглы и обычных пробирок высока вероятность попадания крови животного на руки ветеринарного специалиста. В этом случае руки ветеринарного работника могут стать источником передачи и распространения возбудителей гемоконтактных инфекций другому животному путем контаминации кровью инъекционной ранки. Ветеринарный работник сам может заразиться от источника инфекции.

Использование медицинского шприца с иглой для взятия крови следует также избегать из-за его недостаточной безопасности для ветеринарного персонала и невозможности исключения гемолиза крови при переносе пробы под давлением в пробирку.

Взятие крови с использованием вакуум-содержащих систем:

Для взятия проб венозной крови наиболее предпочтительно использовать вакуум-содержащие системы. Этот способ имеет ряд преимуществ, основным из которых является то, что кровь попадает непосредственно в закрытую пробирку, предотвращающую любой контакт ветперсонала с кровью животного.

Речь идёт не только об упрощении процедуры взятия крови, что само по себе немаловажно, но и о значительном снижении процента преаналитических ошибок, увеличении безопасности процедуры, снижении риска заражения скота, сохранения уровня надоев после процедуры и отсутствия осложнений у животных после взятия крови.

Вакуум-содержащая система представляет собой закрытую двухкомпонентную систему - вакуумный шприц-контейнер и специальную иглу. Выделение сыворотки или соединение крови с антикоагулянтом происходит в том же объёме шприца, в который берётся кровь, то есть после взятия крови сам шприц является транспортной пробиркой с антикоагулянтом или сывороткой.

Под действием вакуума кровь втягивается через иглу вакуумной системы напрямую из вены в пробирку и сразу же смешивается с химическим реактивом. Тщательно дозированный объем вакуума обеспечивает точное соотношение кровь/реагент в пробирке.

На основе возможностей вакуум-содержащихх систем был разработан новый метод взятия крови у крупного рогатого скота из хвостовой вены:

1. Кровь берут из v .с occygea (хвостовая вена).
2. Для взятия крови животное не фиксируют.
3. Хвост животного берут рукой в области средней трети и медленно поднимают вверх.
4. Место взятия крови, область 2-5 хвостовых позвонков, дезинфицируют спиртом или 5% раствором йода.
5. Кровь берут в средней трети тела 2-5 хвостовых позвонков, находящейся на линии, идущей вдоль хвоста и делящей его на 2 симметричные части.
6. Иглу вводят под углом 90° до упора на глубину 5-10 мм.

Преимущества взятия крови безопасными системами из хвостовой вены:

1. Сокращение времени взятия крови ветврачом; (до 200 животных за 2 часа)

2. Отсутствие фиксации животного;

3. Исключение контакта ветврача с кровью на всех этапах взятия и транспортировки крови;

4. Предупреждение распространения инфекций через кровь и загрязнения (контаминации) объектов окружающей среды; (особенно актуально при лейкозе КРС)

5. Минимизация осложнений и стресса у животных;

6. Отсутствие сокращения надоев в результате стресса и осложнений

7. Возможность получения стерильной крови.

Взятие крови с использованием кровобрательных игл и пробирок:

Иглы для взятия крови должны быть с коротким срезом и достаточно большим диаметром, чтобы не травмировать противоположную стенку вены и не вызвать повреждения эритроцитов. Иглы перед взятием крови обязательно стерилизуют кипячением. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригают, а кожу дезинфицируют дезинфицирующим раствором.

У крупного рогатого окота кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи.

Брать кровь для получения сыворотки надо по возможности утром, до кормления животных. Для серологического исследования берут по 7-10 мл крови от крупного рогатого скота.

При взятии крови из яремной вены иглу вкалывают на границе перехода верхней трети шеи в среднюю. Чтобы вызвать достаточное наполнение вены и уменьшать ее подвижность, вену сдавливает в середине шеи резиновым жгутом или пальцем. При проколе вены необходимо держать иглу в руке так, чтобы направление ее совпало с линией хода вены и чтобы срез иглы был направлен вверх, к голове. Иглу вкалывают под острым углом – в 20–30°. При попадании в вену из иглы вытекает кровь.

Кровь должна стекать по стенке пробирки по избежании разрушения эритроцитов и при необходимости немедленно смешиваться с достаточным количеством антикоагулянта.

Перед извлечением иглы из вены резиновый жгут снимают, пережимают вену пальцем выше места вкола, иглу извлекают, а место вкола некоторое время сдавливают тампоном для предотвращения образования гематомы. В заключении область венепункции дезинфицируют дезинфицирующим раствором.

Недостатки устоявшегося метода взятия крови из яремной вены кровопускательной иглой:

1. Разбрызгивание крови; (попадание крови на руки, кормушки и др. объекты окружающей среды).
2. Высокий риск распространения инфекций, опасных не только для животных, но и для человека; (туберкулез, бруцеллез, лейкоз КРС).
3. Необходимость фиксации животного.
4. Стресс у животного, ведущий к потерям молока (более 5%).
5. Осложнения после взятия крови; (гематомы, абсцессы).
6. Взятая кровь – нестерильна (т.е. контаминирована).

Хранение проб крови и сыворотки крови:

Цельную кровь, плазму и сыворотку для непродолжительного хранения помещают в холодильник (+2…+4°С), длительное хранение сыворотки требует температуры – 20°С.

Сыворотку крови получают методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают 30-60 мин при 20-30°С или 37-38°С, сгусток крови от стенок отделяют стальной спицей, а затем пробирки выдерживают при 4-10°С 20-24 ч.

Отстоявшуюся сыворотку сливают в сухие стерильные пробирки, закрывают пробками и направляют в лабораторию в течение первых суток и в исключительных случаях не позднее третьего дня после взятия крови.

Нарушение условий хранения проб может стать причиной погрешностей анализа. В результате длительного стояния сыворотки, над эритроцитами могут наступить сдвиги в концентрации ряда компонентов: повышается концентрация калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы, понижается содержание глюкозы вследствие гликолитических процессов.

При температуре около 20°С в цельной крови возрастает содержание аммиака, многие ферменты даже при температуре холодильника быстро теряют свою активность (креатинкиназа, кислая фосфатаза), в лактатдегидрогеназа, напротив, быстрее теряет активность при низких температурах.

Возникший при взятии или хранении гемолиз эритроцитов приводит к повышению концентрации калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы.

Неумелое встряхивание проб при перемешивании их содержимого или при транспортировке также может вызвать гемолиз эритроцитов.

Сыворотка крови должна быть доставлена в лабораторию в течение первых суток и в исключительных случаях не позднее третьего дня после взятия крови.

При пересылке сыворотки на большое расстояние, особенно летом, её необходимо консервировать 5%-ным раствором карболовой кислоты на физиологическом растворе из расчета на каждые 9 мл сыворотки 1 мл раствора карболовой кислоты или 1-2 капли раствора на 1 мл сыворотки.

Раствор карболовой кислоты необходимо подливать по каплям при постоянном встряхивании пробирки с сывороткой.

Сыворотку или кровь можно консервировать также борной кислотой (в порошке) из расчета 0,05-0,07 г (на кончике скальпеля) на одну пробирку с кровью (сывороткой).

На каждой пробе сыворотки или крови указывают ее номер или кличку животного или фамилию владельца животного.

Пробирки с кровью и сыворотками плотно закрывают стерильными пробками и устанавливают для пересылки в строго вертикальном положении.

Зимой сыворотки упаковывают и пересылают так, чтобы они не замерзли.

Пробы направляют с сопроводительной в двух экземплярах

Взятие крови для гематологических исследований

Кровь для гематологических исследований берут из ярёмной или каудальной (хвостовой) вены в специальные системы забора крови с антикоагулянтом или в пробирки с антикоагулянтами. В качестве антикоагулянтов используют трилон Б (ЭДТА-динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты) из расчета 0,1 мл 10 %-ного раствора на 1 мл крови, гепарин (5ед. на 1 мл крови) или 6%-ный раствор лимоннокислого натрия (0,1 мл на 1 мл).

Для предотвращения свертывания крови содержимое пробирки сразу же тщательно перемешивают. Стабилизированную кровь до исследования хранят в холодильнике при температуре 2-4 0 С и исследуют не позднее, чем через 36 часов с момента взятия.

Наиболее часто для бактериологического исследования на бруцеллез отсылают абортированный плод (выкидыш) или его органы, реже плаценту, околоплодную жидкость или плодные оболочки, молоко (молозиво), содержимое полости рогов матки, гигром, абсцессов, слизь или выделения из влагалища.

Нередко направляют на исследования все внутренние органы, трубчатую кость и измененные лимфатические узлы убитых с диагностической целью животных на санитарных бойнях.

Плод. Наиболее полное бактериологическое исследование может быть произведено при обследовании цельного плода. В этом случае рост бруцелл на питательных средах получается, как правило, в чистой культуре, а засеянные среды могут выдерживаться в термостате до месяца без развития на них посторонней микрофлоры. Одновременно могут быть произведены посевы из цельного плода для исследования на другие инфекционные заболевания, в частности на вибриоз, паратифозный и вирусный аборты, листериоз и трихомоноз (для крупного рогатого скота). Плод должен отсылаться в водонепроницаемой таре, лучше в замороженном состоянии (в летнее время применять сухой лед). При отсутствии льда плод отсылают с нарочным, специально проинструктированным, с таким расчетом, чтобы он был доставлен в лабораторию не позже суток после аборта. В целях предупреждения рассеивания инфекции плод накрывают марлевыми салфетками, пропитанными 2%-ным раствором едкого натра, 2%-ным раствором фенола или другим дезинфицирующим раствором.

Вместо цельного плода могут быть отосланы его органы, например желудок (с преджелудками), селезенка, трубчатая кость, печень, почки, легкое. Чаще бруцеллы выделяются из содержимого желудка

и селезенки. Перед экстирпацией желудка перевязывают 12-перстную кишку и пищевод на расстоянии 10—15 см от желудка. При отсылке отдельных органов нужно соблюдать такие же предосторожности, как и при отправке плода.

Посев из абортированных плодов или их органов производят на плотный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (ППГГА) без добавления в него красок. Могут быть сделаны посевы на косой агар в пробирки или в бактериологические чашки. Среды используют свежие в день их приготовления или давностью не более трех суток, выдержанные в холодильнике.

Посевы производят из содержимого сычуга (желудок), из селезенки, печени, костного мозга (трубчатая кость), легких, сердца (кровь), почек. Из сычуга и сердца посевы производят путем забора материала стерильной пастеровской пипеткой из глубины органа через фламбированный раскаленным шпателем участок ткани. Таким же образом засевают среды материалом из других органов, если ткань этих органов размягченная. Для засева материала из плотных тканей отбирают участки в местах локализации мелких белесоватых или желтоватых узелков или кровоизлияний, фламбируют шпателем, вырезают стерильным пинцетом кусочки массой 1—3 г, помещают в стерильную ступку с песком или в дробитель ткани, растирают в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и производят штриховые посевы.

Трубчатую кость распиливают поперек костной пилой, стерилизуют поверхность распила над пламенем спиртовки, пастеровской пипеткой берут из глубины костный мозг и делают штриховые посевы на средах.

Из каждого органа производят посевы на 2—3 чашки или засевают такое же количество пробирок. Из содержимого желудка телят и ягнят делают мазки на предметном стекле для окраски бруцелл по Козловскому или Граму. Для обнаружения вибрионов мазки лучше красить карболовым фуксином Циля, разведенным 1 : 5.

Ввиду возможной миграции Br. melitensis на крупный рогатый скот, а также в целях выделения некоторых биотипов Br. abortus следует производить культивирование засеянных пробирок или чашек в эксикаторах с пониженным содержанием кислорода и в обычных атмосферных условиях.

При культивировании посевов в микроанаэростатах дозирование углекислого газа осуществляют путем создания отрицательного давления, вследствие чего происходит засасывание в полость прибора нужного количества углекислого газа (10—15%). В обычных эксикаторах можно получить необходимое содержание СO₂ путем сжигания в них ваты, но в данном случае эксикатор нужно загружать пробирками или чашками не более половины его вместимости. Крышки эксикаторов должны быть хорошо отшлифованы. Проверку их герметичности производят ежедневно в течение 6—8 дней культивирования и при необходимости герметичность восстанавливают. Посевы выдерживают в термостате при 37,5—38,5° С в течение 25—30 дней, хотя рост бруцелл в большинстве случаев обнаруживается на 3— 8-й день культивирования.

Матка. Истечения из матки абортировавшего животного берут для бактериологического исследования в первые дни после выведения плода. Для получения этого материала животное фиксируют, раскрывают влагалище влагалищным зеркалом с осветителем, вводят при помощи корнцанга стерильный тампон в область шейки матки и собирают ее содержимое. При частично закрытой шейке матки делают попытку раскрыть ее путем массирования влагалища через прямую кишку. Если из рога матки жидкость не поступает, то в ее полость через шейку матки вводят 100—200 мл стерильного изотопического раствора хлорида натрия через катетер или резиновую трубку с наконечником, соединенные на другом конце со 100-граммовым шприцем. Через 1—2 мин, не вынимая трубки, получают смыв в шприц, переливают его в стерильный сосуд и отправляют в лабораторию.

Молоко. Перед взятием проб молока вымя коровы обмывают теплой водой с мылом и вытирают чистым полотенцем. Затем соски протирают марлевым тампоном, смоченным 75%-ным спиртом или 1%-ным раствором борной кислоты. Первые 2—3 струи молока из каждой четверти вымени собирают в отдельную посуду и обезвреживают кипячением. После этого в стерильные широкие пробирки из каждой четверти вымени надаивают приблизительно 15—20 мл молока. Можно брать после доения последние порции молока и быстро выдаивать одну струю непосредственно в пробирки или чашки с плотной питательной средой (ППГГА), содержащей ингибиторы.

Отобранные порции молока из каждой четверти вымени центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин и вводят морским свинкам заражающую дозу из верхнего слоя (сливки) и осадка. Этот же материал высевают на плотную среду с краской. В пробирках, поступивших в лабораторию с посевом, сделанным на месте, заменяют пробки и обрабатывают пробирки спиртом. Посевы культивируют в обычных атмосферных условиях при содержании в эксикаторе 10—15% СO₂. Молоко коров исследуют несколько раз с интервалом 5-10 дней.

Плацента, плодные оболочки. Для бактериологического исследования отбирают участок плаценты с утолщенными ворсинками и стенками, наличием на ее поверхности фибрина или гнойного экссудата. Как и плод, части плаценты или плодных оболочек следует отсылать в лабораторию в замороженном виде, соблюдая при этом указанные выше меры предосторожности.

В лаборатории поверхность плаценты обрабатывают тампонами, смоченными дезинфицирующим раствором, просушивают сухими тампонами, прижигают шпателем, вырезают участки, предназначенные для исследования, размельчают в условиях стерильности, как это указано для органов плода, и засевают на плотную среду с ингибиторами. Кусочки плаценты (размером приблизительно 0,5 X 0,5 см) рекомендуется опускать перед размельчением на 1—2 с в кипящую воду. Из мест с хорошо выраженной отечностью посев может быть произведен непосредственно пастеровской пипеткой.

Аналогично проводят посевы из плодных оболочек. Более результативными, однако, бывают посевы, сделанные из амниотической жидкости на плотные среды.

Содержимое гигром, абсцессов и других полостей. Для получения содержимого патологической полости делают стерильно пункцию ее стенки иглой со шприцем. Пересылают пунктат в лабораторию в термосах со льдом. Посевы производят на плотные среды с ингибиторами.

Кровь. Посев крови делают в колбы вместимостью 200—250 мл, содержащие 100 мл жидкой питательной среды. На 100 мл среды добавляют 20 мл крови, взятой стерильно из яремной вены. Для посева крови используют среду Первушина, бульон альбими, трнптозный бульон, МПБ, содержащий 1% глюкозы и 2—3% глицерина.

Посевы крови от крупных животных лучше делать в колбы со средами непосредственно из вены. Для этой цели в ватную пробку колб, содержащих среду, монтируют тонкую резиновую трубку, конец которой соединяют с кровопускательной иглой. Всю систему, кроме иглы, стерилизуют завернутой в бумагу. Иглу стерилизуют отдельно. Взятие крови проводят стерильно. Посевы крови можно делать непосредственно в пробирки, подготовленные таким же образом.

Хорошие результаты получаются при высевах крови на комбинированные среды. В колбы вначале вводят плотную среду (ПГ1ГГА). После затвердения скошенного, агара в колбу вводят одну из указанных выше жидких сред в таком количестве, чтобы более половины плотной среды не покрывалось жидкой средой. Затем в колбу вводят свежевзятую стерильно кровь или делают посев крови непосредственно из яремной вены, как указано выше. Культивирование продолжается до 1 мес. Периодически раз в 3—4 дня контролируют рост бруцелл. При посевах на жидкие среды периодически производят отсев на косой плотный агар (ППГГА). При комбинированном методе отсевы не требуются.

По данным отечественной литературы, гемокультуры бруцелл успешно могут быть получены на куриных эмбрионах. Ряд иностранных авторов также рекомендует этот метод. Кровь, стерильно взятую в небольшом количестве (0,1—0,3 мл), вводят нескольким эмбрионам 4—7-дневного возраста в аллантоисный мешок (желток). Посев производят при просвечивании яиц. Место укола обрабатывают спиртом и смазывают спиртовым раствором йода, после извлечения иглы отверстие в скорлупе заливают парафином. Инкубация длится (при 37,5—38,5° С) 5—6 сут. Затем из желточного мешка делают посевы на плотную питательную среду. Н. Д. Анина-Радченко и Н. Ф. Браславец (1952) даже такой загрязненный материал, как мочу и гной, предварительно засевали в куриные эмбрионы и получили хороший результат. Они считают, что прямой посев на питательные среды в четыре раза менее эффективен по сравнению с методом предварительного инкубирования в курином яйце.

Моча. Для исследования мочу берут стерильно мочевым катетером в количестве 75—100 мл. Пробу мочи в количестве 50 мл центрифугируют при 2000—3000 об/мин в течение 10—20 мин. Жидкость над осадком удаляют, а из осадка готовят взвесь в 0,3—0,5 мл МПБ и засевают на плотную среду с ингибиторами.

Кал. К исследованию кала у животных прибегают редко. Пробы вежевзятого кала массой 1 г суспензируют в 50 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия и фильтруют через несколько слоев марли для удаления грубых частиц. Затем фильтрат центрифугируют при 1000—2000 об/мин в течение 3—5 мин. Жидкость над осадком сливают в стерильную посуду, добавляют к ней гипериммунную бруцеллезную сыворотку в соотношении 1 : 100 и ставят и водяную баню (на 2 ч) или в термостат (на 3—4 ч) при температуре 37—38° С. Затем жидкость центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость удаляют, осадок взвешивают в стерильном изотоническом растворе и снова центрифугируют в течение 5 мин. Эту манипуляцию повторяют дважды, после чего осадок заседают на плотный агар с генцианвиолетом (1 : 200000) в бактериологические чашки или пробирки. Этим же материалом могут быть заражены морские свинки.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Разнообразные клинические проявления бруцеллеза приводят к необходимости широкого использования лабораторных методов исследования: бактериологического, биологического, сероло­гического и аллергического. Комплекс лабораторных исследований с обязательным учетом клинических, эпидемиологических и эпизоотологических данных обеспечивает правильную диагностику заболевания.

Бактериологический метод.Для исследования на бруцеллез в лабораторию поступает патологический материал от больных людей (кровь, мокрота, гной, суставная жидкость, пунктат из селезенки, моча), сельско­хозяйственных животных (абортированный плод, лимфатические узлы, паренхиматозные органы, кровь, моча, молоко, молочные продукты) и различные объекты окружающей среды (вода, навоз). Материал для исследования забирают в стерильную посуду.

Исследование крови необходимо проводить во время лихо­радочного состояния больного до лечения антибиотиками, так как в этот период наблюдается наибольший процент выделения культур. Кровь в количестве не менее 10 мл стерильно берут из локтевой вены и засевают по 5 мл в два флакона среды Кастанеда. Начиная с четвертого дня, посевы ежедневно просматривают и, при отсутствии роста культуры, поверхность агара орошают бульоном путем осторожного покачивания фла­кона. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии бруцелл. Если в течение месяца роста бруцелл не обнаруживают, то делают контрольный высев из бульона среды Кастанеда на твердую питательную среду.

При обследовании людей на бруцеллез для удобства доставки флаконов с кровью можно пользоваться транс­портной жидкой средой, которую готовят заранее и хранят в лаборатории в течение полугода. Кровь доставляют в лабораторию в транспортной среде, засевают на среду Каста­неда и исследуют по общепринятой схеме.

Бруцеллы можно выделить из костного мозга, мочи, спинно­мозговой жидкости, грудного молока, желчи, мокроты, трупного материала и т. д. Исследуемый материал по 0,1 мл засевают на плас­тинки питательного агара и по 5-10 мл на жидкие питатель­ные среды. Для задержки роста посторонней микрофлоры при исследовании загрязненного материала к среде добавляют генцианвиолет (1:200 000) или антибиотики (пенициллин 0,25 ед/мл и стрептомицин 0,05 ед/мл).

Особого внимания заслуживает получение культуры из моло­ка сельскохозяйственных животных. Забор молока у овец, коров, верблюдов и коз рекомендуется проводить путем сдаивания его последних порций из каждого соска вымени по 10 мл в стерильную посуду. Если исследовать молоко в течение первых суток не удается, то его консервируют добавлением сухой борной кислоты 1 %, генцианвиолета 1:25 000. Для исследования молока из больших емкостей забирают 100 мл верхнего слоя, затем перемешивают и набира­ют еще 100 мл.

Лучшие результаты дает посев сливок, полученных центри­фугированием молока при 2,5-3 тыс. об/мин в течение 3-5 мин или путем отстаивания в течение одних суток в холо­дильнике. Сливки в количестве 0,1-0,2 мл засевают на твердую питательную среду с подавителем посторонней микрофлоры (4-6 пробирок на 1 пробу).

Бактериологический метод считается самым достоверным, т. к. выделение бруцелл является неопровержимым доказа­тельством бруцеллезной инфекции. Отрицательные результаты бактериологического исследования не дают права для заключе­ния об отсутствии заболевания.

Биологический метод.Для выделения бруцелл из материала, загрязненного посто­ронней микрофлорой или содержащего малые концентрации возбудителя, в качестве биологической пробы используют морских свинок (весом 250-300 г) или белых мышей (весом 17-18 г). Исследуемый материал в объеме не более 0,5 мл вводят под­кожно в паховую область белой мыши и 1 мл морской свинке.

Вскрытие белых мышей производят через 20-25 дней, а мор­ских свинок - через 30-35 дней после введения материала. Перед вскрытием у свинок кровь из сердца исследуют в реакции агглютинации. Для посевов у морских свинок берут лимфатические узлы (паховый, подчелюстной, шейный, парааортальный), кусочки селезенки, печени, костный мозг, кровь, мочу; у белых мышей - лимфатические узлы (пахо­вый, аксиллярный, парааортальный, подчелюстной), кусочки селезенки и печени. Лимфатические узлы, кусочки печени и селе­зенки помещают в стерильную чашку. Костный мозг извлекают пипеткой из рассеченной бедренной кости. Посевы крови из сердца, мочи и костного мозга производят стерильной пипеткой непосредственно на питательную среду (агар и бульон). Лимфа­тические узлы и органы перед посевом надсекают ножницами, берут стерильной деревянной палочкой, вносят первоначально в пробирку с агаром, раздавливают и тщательно втирают мате­риал в поверхность питательной среды. Затем остатки посевного материала переносят в пробирку с бульоном. Палочка должна быть длиной 25-30 см, диаметром 4-5 мм, хорошо отструганная, с несколько заостренным концом. После использования ее погру­жают на 1 час в дезраствор.

Все посевы дублируют (часть помещают в условия повышен­ного содержания углекислоты), выдерживают при 37 °С до 30 дней. Для предотвращения высыхания питатель­ных сред пробирки заливают парафином или закрывают резино­выми колпачками.

Посевы просматривают каждые 3-4 дня. Из помутневших бульонов делают высев в пробирки со скошенным агаром. Коло­нии бруцелл на пластинчатом агаре становятся видимыми на 5-7 сутки, иногда позднее. По истечении 30 дней наблюдение прекращают. Если за это время рост не появился, посевы уничто­жают, а результаты бактериологического исследования считают отрицательными.

Результат оценивают положительно при выделении хотя бы одной колонии бруцелл. Идентификацию возбудителя бруцеллеза проводят по: по характеру роста культуры на плотных питательных средах; морфологии микроба в мазках, окрашенных по Граму, Козловскому; агглютинации со специфической бруцеллезной сывороткой на стекле и объемным методом; свечению на 3-4+ культур, обработанных бруцеллез­ной люминесцирующей сывороткой.

Культуры предварительно проверяют на наличие признаков диссоциации, одним из перечисленных выше методов.

Дифференциации (определение видов и биоваров) подлежат культуры в S-форме после идентификации.

Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного комитета номенклатуры бактерий и Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу в 1972 г. были определены единые тесты для проведения идентификации и дифференциации бруцелл для всех стран мира.

Серологические и аллергические методы исследования на бруцеллез.Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.

В случае малой обсемененности пробы и отрицательных результатов, полученных при посеве исследуемого материала на питательные среды и заражении лабораторных животных, серологический метод может быть единственным, позволяющим диагностировать бруцеллез. В зависимости от целей исследования используют те или иные серологические методы.

При проведении эпидемиологического исследования в очагах применяют реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и объемную (Райта), реакцию Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилакти­ческой вакцинацией населения можно ограничиться постанов­кой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.

Для диагностики острого и подострого бруцеллеза ставят реакцию Хеддльсона, Райта и РПГА. В случаях отрицательного результата используют реакцию Кумбса.

При диагностике хронического бруцеллеза и проведении диспансерного наблюдения за переболевшими рекомендуют наряду с реакциями Хеддльсона, Райта, РПГА, использовать реакцию Кумбса и аллергическую пробу (Бюрне).

Серологические реакции и аллергическая кожная проба по своему диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменить друг друга. Это обусловливает необходимость применения комплексного серологического метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза.

В ранние сроки от начала заболевания (первые 6 месяцев) диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического. Серологические реакции в этот период оказы­ваются положительными почти в 95 % случаев. По мере удлине­ния срока заболевания процент положительных серологических реакций начинает снижаться. При проведении обследования необходимо учитывать, что высокие титры антител всегда указывают на наличие инфекции, антитела в низких титрах или их полное отсутствие не исключает возможности заболевания. В связи с этим рекомендуется про­водить повторные исследования с интервалом 1-2 недели, особенно при подозрении на острую форму бруцеллеза.

Для постановки диагноза бруцеллеза у крупного рогатого скота применяют серологические и аллергические методы. Обследование начинают с постановки роз-бенгал пробы (РБП). Сыворотки, с которыми получена положительная РПБ, исследуют в РА Райта, РСК (РДСК), РПГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих анти­тел. Исследование проводят двукратно с промежутком в 30 дней.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ

Занятие 3.

Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; Нарушение авторского права страницы

Читайте также:

• Требник последование во время чумы
• Нольпаза для лечения хеликобактер пилори
• Гемодинамическая поддержка при септическом шоке
• Одонтогенный сепсис что это такое
• Распространение туляремии в мире воз