Возбудитель столбняка продуцирует экзотоксин

*365. При обследовании на бактерионосительство работников детского учреждения у воспитателя бактериолог выявил Сorynebacterium diphtheriae. Исследование возбудителя на токсигенность показало, что штамм не продуцирует экзотоксин. Какую реакцию применил бактериолог для определения у культуры токсигенности?

А. Реакцию агглютинации.

В. Реакцию кольцепреципитации.

С. Реакцию иммунофлюоресценции.

+D. Реакцию преципитации в агаровом геле.

Е. Реакцию связывания комплемента.

366. В детском саду запланирована вакцинация детей против коклюша. Какой препарат Вы назначите детям для вакцинации?

В. Типоспецифическую сыворотку.

D. Нормальный γ (гамма) - глобулин.

*367. Врач-отоларинголог при осмотре больного отметил гиперемию и значительный отек миндалин с желто-серым налетом. При микроскопии микропрепарата, приготовленного из налета, бактериолог выявил грамположительные палочки, располагающиеся под углом друг к другу. Какой предварительный диагноз Вы поставите больному?

D. Менингококковый назофарингит.

Е. Эпидемический паротит.

368. В клинику доставлен пациент в тяжелом состоянии, с высокой температурой, затрудненным дыханием. Бактериоскопическое исследование материала из зева и дыхательных путей позволило врачу предварительно диагностировать дифтерийный круп. Какой способ окраски применил бактериолог?

+А. Окраску по Нáйссеру.

В. Метод Циля-Нильсена.

С. Окраску по Бурри-Гинсу.

D. Метод Пешкова.

369. У ребенка с диагнозом "дифтерия" через 10 дней после введения антитоксической противодифтерийной сыворотки на коже появилась сыпь, которая характеризовалась сильным зудом. Ребенок также жаловался на боль в суставах и высокую температуру (38 °С). Что, по Вашему мнению, является причиной указанных признаков?

+А. Сывороточная болезнь.

В. Анафилактическая реакция.

D. Гиперчувствительность замедленного типа.

Е. Контактная аллергия.

*370. У больного с предварительным диагнозом "дифтерия" бактериолог взял материал и приготовил микропрепарат, в котором выявил палочки желто-коричневого цвета с темно-синими утолщениями на концах. Какой способ окраски применил бактериолог?

+А. Окраску по Нáйссеру.

В. Окраску по Лëффлеру.

С. Метод Циля-Нильсена.

D. Метод Козловского.

Е. Окраску по Романовскому.

371. У больного с предварительным диагнозом "дифтерия" бактериолог взял материал из зева и приготовил микропрепараты, в которых выявил тонкие палочки желто-коричневого цвета с утолщениями на концах темно-синего цвета (окраска по Найссеру) и палочки голубого цвета с синими утолщениями на концах (окраска по Лëффлеру). Палочки располагались под углом друг к другу. Какой вывод бактериолог может сделать на основании результатов микроскопического исследования?

+А. Выявлены патогенные коринебактерии.

В. Патогенные коринебактерии отсутствуют.

С. Выявлены Corynebacterium xerosis.

D. Выявлены Corynebacterium рseudodiphtheriticum.

Е. Выявлены Mycobacterium tuberculosis.

+А. Зерна волютина.

Двухлетнему ребенку, который был в контакте с больным дифтерией, внутрикожно в участок предплечья врач ввел дифтерийный токсин (доза 1/40 Dlm для морской свинки). С какой целью ребенку был введен дифтерийный токсин?

+А. Для проверки наличия противодифтерийного антитоксического иммунитета.

В. Для выработки активного иммунитета.

С. Для создания пассивного искусственного иммунитета.

D. Для выявления аллергической реакции.

Е. Для проверки наличия противодифтерийного антибактериального иммунитета.

Последнее изменение этой страницы: 2016-09-19; Нарушение авторского права страницы

Столбняк — тяжелая раневая инфекция, вызываемая Clostridium tetani, характеризуется по­ражением нервной системы, приступами тоничес­ких и клонических судорог.

Таксономия. С. tetani относится к отделу Firmicutes, роду Clostridium.

Морфологические свойства. Возбудитель - подвиж­ная (перитрих) грамположительная палочка, об­разует споры, чаще круглые, реже овальные, споры располо­жены терминально. В культуре старше 24 ч бактерии становятся грамотрицательными. Капсул не образуют.

Культуральные свойства. Облигатный анаэроб. На жидких питательных средах бактерии растут придонно, продуцируя сильный экзотоксин. На плотных питательных средах образуют прозрачные или слегка сероватые колонии с шероховатой поверхностью. Не расщепляют углеводов, обладают слабым протеолитическим действием.

Антигенная структура и токсинообразование. По жгутиковому Н-антигену делится на 10 сероваров; О-антиген является общим для всех представителей вида. Воз­будитель продуцирует два патогенных растворимых антигена — тетанолизин и тетаноспазмин, составляющих две фракции стол­бнячного экзотоксина.

Факторы патогенности. Основным фактором патогенности является экзотоксин. Тетанолизин и тетаноспазмин оказы­вают соответственно гемолитическое (вызывает лизис эритроци­тов) и спастическое (вызывает непроизвольное сокращение мышц) действие.

Резистентность. Являясь нормальным обитателем кишечника живот­ных, человека, клостридии попадают в окружающую среду, в почву с фекалиями, вообще в виде спор могут сохраняться годами. Споры столбняч­ной палочки отличаются термоустойчивостью: при кипячении погибают лишь через 50—60 мин..

Патогенез. Главным патогенетическим фактором является столбнячный токсин. Палочки столбняка остаются в раневой ткани, т.е. на месте внедрения, и не распространяются по организму. От места размножения возбудителя токсин распро­страняется по кровеносным и лимфатическим сосудам, по не­рвным стволам, достигает спинного и продолговатого мозга и поражает нервные окончания синапсов, секретирующих меди­аторы (ацетилхолин), в результате чего нарушается про­ведение импульсов по нервным волокнам.

Клиника. Инкубационный период составляет в среднем 6— 14 дней. У больных наблюдаются спазм жевательных мышц, затрудненное глотание, напряжение мышц затылка, спины (ту­ловище принимает дугообразное положение — опистотонус), груди и живота. Характерны постоянные мышечные боли, по­вышенная чувствительность к различным раздражителям, час­тые генерализованные судороги. Болезнь протекает при повы­шенной температуре тела и ясном сознании.

Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет не вы­рабатывается. От матери, вакцинированной против столбняка, новорожденным передается непродолжительный пассивный ан­титоксический иммунитет.

Микробиологическая диагностика. Для бактериологического исследования берут материал из раны и очагов воспаления, а также кровь. В культурах выявляют стол­бнячный токсин, проводя опыт на мышах, у которых разви­вается характерная клиническая картина. Обнаружение столбняч­ного токсина при наличии грамположительных палочек с круг­лыми терминальными спорами позволяет сделать заключение, что в исследуемом материале присутствует С. tetani.

Лечение. Адсорбированный столбнячный анатоксин.Получен путем обезвреживания формалином столбнячного токсина с последую­щей его очисткой, концентрацией и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Входит в состав ассоциированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины и других препаратов. Приме­няется для активной иммунизации против столбняка.

Противостолбнячная сыворотка.Получена из крови лоша­дей, гинериммунизированных столбнячным анатоксином. Применяется для профилактики и лечения столбняка..

Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный.Полу­чен из гамма-глобулиновой фракции крови людей-доноров, ревакцинированных очищенным столбнячным анатоксином. Применяется для пассивной экстренной профилактики столбняка в сочетании со столбнячным анатоксином при повреждениях кожных покровов, а также для лечения начав­шегося заболевания.

Профилактика: При обширных травмах необходимо об­ратиться к врачу. Проводится хирургическая обработка раны. На­дежным способом защиты от столбняка является специфическая профилактика, которая состоит в проведении плановой и эк­стренной иммунизации. Экстренная пассивная иммунизация осуществляется у привитых детей и взрослых в случаях травм, ожогов и обморожений путем введения 0,5 мл сорбированного столбняч­ного анатоксина; непривитым вводят 1 мл столбнячного анаток­сина и человеческий иммуноглобулин. Для создания искусственного активного иммунитета применяют адсорбированный столбнячный анатоксин в составе вакцин АКДС и АДС или секстанатоксина. Вакцинацию начинают с 3—5-месячного возраста и затем пе­риодически проводят ревакцинации.

Возбудитель столбняка – С. tetani. Вызывает остропротекающую неконтагиозную раневую инфекцию, при которой нервная система поражается экзотоксином микроба.

Болезнь возникает в результате различных травм и ранений при условии внесения в них спор возбудителя, что возможно при попадании почвы, и сопровождается тоническими и клоническими судорогами мышц.

Возбудитель столбняка открыт Н. Д. Монастырским (1883) и А. Николайером (1884), чистую культуру выделил в 1889 г. Китазато.

Морфология. С. tetani – крупная тонкая палочка с закругленными концами длиной 3-12 и шириной 0,3-0,8 мкм. В препаратах из пораженных тканей бактерии располагаются отдельно и группами по 2-3 клетки, из культур, особенно молодых, в жидких средах – в виде длинных изогнутых нитей. Столбнячная палочка подвижна (перитрих), имеет до 20 и более жгутиков; в старых культурах преобладают клетки без жгутиков. Капсулу не образует. Круглые споры, располагающиеся терминально, в 2-3раза шире клетки, в результате этого бактерия приобретает вид барабанной палочки. Споры формируются в культурах обычно через 2-3 суток, они также образуются и в организме. Палочки со спорами неподвижны. На 4-6 сутки культуры в жидких средах состоят исключительно из спор и почти не содержат вегетативных клеток, которые лизируются.

Вегетативные клетки хорошо окрашиваются спиртово-водными растворами анилиновых красок. Грамположительные, но в старых культурах часть бактерий грамотрицательные.

Культивирование. Возбудитель столбняка – строгий анаэроб. На поверхности плотных питательных сред растет в условиях анаэробиоза при остаточном давлении не выше 0,7 кПа. Оптимальные условия: рН 7,4-7,6 и температура 36-38 0 С; С. tetani. Споры границы роста лежат в пределах 14-43 0 С.

В среде Китта-Тароцци возбудитель растет медленно; обычно через 24-36 ч появляется интенсивное равномерное помутнение с незначительным газообразованием в виде единичных пузырьков, к 5-7 суткам выпадает рыхлый осадок, среда при этом становится прозрачной. Культуры, особенно на 3-5 сутки роста, издают своеобразный запах женого рога.

На глюкозо-кровяном агаре в анаэробных условиях образует нежные беловато-серые колонии с отростками и приподнятым центром, иногда в виде мелких круглых, напоминающих капельки росы. Колонии окружены слабой зоной гемолиза (2-4 мм). Если чашки дополнительно выдержать при комнатной температуре, зона гемолиза увеличится, при обильном посеве гемолиз может быть по всей поверхности среды. В высоком столбике агара через 1-2 суток вырастают плотные колонии, напоминающие чечевичное зерно, иногда диск (R-форма). В столбике желатина через 5-12 суток появляется рост в виде елочки и происходит медленное разжижение субстрата. Молоко свертывается медленно с образованием на 5-7 сутки мелких сгустков казеина, мозговая среда чернеет при продолжительном культивировании.

Биохимические свойства. В отличие от других патогенных клостридий возбудитель столбняка характеризуется слабой биохимической активностью: не сбраживает моносахариды и многоатомные спирты. Однако некоторые штаммы могут ферментировать глюкозу в зависимости от концентрации в среде ионов железа.

С. tetani обладает слабыми протеолитическими свойствами, вызывая медленную ферментацию протеинов и пептонов до аминокислот, которые затем разлагаются с образованием угольной кислоты, водорода, аммиака, летучих кислот и индола.

Токсинообразование. Возбудитель столбняка лишен факторов инвазивности, но обладает способностью синтезировать экзотоксин высокой активности. Столбнячный токсин получен и описан Берингом и Китазато (1890). Токсин обусловливает всю специфику патогенеза и клиническую картину столбняка.

В составе столбнячного экзотоксина два компонента – тетаноспазмин и тетанолизин (тетаногемолизин). Тетаноспазмин избирательно действует на нервную систему и вызывает тонические сокращения поперечнополосатых мышц, тетанолизин – неспецифический гемолиз эритроцитов. Тетаноспазмин – основной токсический фактор, обладающий свойством нейротоксина, поражающего моторные нейроны центральной нервной системы; Цитопатический эффект в отношении клеток других тканей не проявляет. Вырабатывается в организме и культурах на вторые сутки инкубирования и достигает максимума на 5-7 сутки. Очищенный кристаллизованный тетаноспазмин – термолабильная протеаза, состоящая из 13 аминокислот с преобладанием аспарагина. Токсичность кристаллического тетаноспазмина составляет 66х10 6 ЛД₅₀ для белых мышей на 1 мг азота токсина. Тетанолизин – разрушающийся в присутствии кислорода гемолизин, имеющий общие свойства с бетатоксином С. perfringens, пневмолизином пневмококков и О-стрептолизином гемолитических стрептококков. В культуральной жидкости накапливается в значительном количестве уже через 20-30 ч; в старых культурах разрушается. Обладает гемолитическим, кардиотоксическим и летальным действиями.

Процессы образования тетаноспазмина и тетанолизина взаимно не обусловлены: некоторые штаммы могут продуцировать большое количество тетанолизина и малое тетаноспазмина.

Экзотоксин возбудителя столбняка нестоек и легко разрушается при высокой температуре (при 60 0 С – через 30 минут, при 65 0 С – через 5 минут), а также под влиянием прямых солнечных лучей, ионизирующих излучений и химических веществ: перманганата калия, азотнокислого серебра, йода, кислот, щелочей. Антибиотики и сульфаниламиды не разрушают этот токсин. Он не проникает через стенку кишечника и не инактивируется ферментами желудочно-кишечного тракта. Под действием формалина при 35-38 0 С переходит в анатоксин – нетоксический иммуногенный препарат.

К ферментам патогенности клостридий столбняка следует отнести РНК-азу и фибринолизин. РНК-аза токсична для лейкоцитов и ингибирует фагоцитоз; фибринолизин способствует всасыванию тетаноспазмина.

Антигенная структура. Подвижные штаммы клостридий столбняка в своем составе имеют соматический О- и жгутиковый Н-антигены. Термолабильный Н-антиген определяет типовую специфичность микроба. Описано 10 сероваров возбудителя столбняка, различающихся по структуре Н-антигена, обозначаемых цифрами I, II, III, IV и т. д. В природе чаще других встречают серовары I и II. Все они продуцируют иммунологически однородный экзотоксин, нейтрализуемый противостолбнячной сывороткой. Термостабильный О-антиген относится к групповым.

Антигенная структура столбнячного токсина изучена недостаточно.

Устойчивость. Вегетативные клетки С. tetani малоустойчивы к воздействию различных факторов внешней среды. Температура 60-70 0 С убивает столбнячные палочки в течение 30 минут, растворы обычных дезинфицирующих препаратов – через 15-20 минут.

Споры, напротив, весьма резистентны. В почве, высохшем кале, на различных предметах (гвозди, щепки, сельскохозяйственные орудия, колючки растений и др.), защищенных от света, они сохраняются в течение многих лет (так, например, на кусочке сухого дерева – до 11 лет). Прямой солнечный свет инактивирует споры через 3-5 суток. Во влажной среде при нагревании до 80 0 С сохраняют жизнеспособность 6 ч, а при нагревании до 90 0 С – 2 ч. Они также относительно устойчивы к различным дезинфектантам: 1 % раствор сулемы 5 % раствор фенола убивают их через 8-10 ч, 5 % раствор креолина – за 5, 1 % раствор формалина – за 6 ч, 0,5 % раствор соляной кислоты – за 30 минут, 10 % настойка йода – за 10, 1 % раствор азотнокислого серебра – за 1 минуту.

Патогенность. К столбняку восприимчивы все виды сельскохозяйственных животных, но наиболее чувствительны лошади. Болеют также собаки, кошки и дикие млекопитающие. Описаны случаи столбняка у кур, гусей и индюков. К столбнячному токсину исключительно восприимчив человек. Холоднокровные – лягушки, змеи, черепахи, крокодилы – невосприимчивы к столбняку при температуре ниже 20 0 С, но введенный токсин длительное время циркулирует в их организме.

Из лабораторных животных наиболее восприимчивы белые мыши, морские свинки и кролики. Инкубационный период у белых мышей продолжается до 36 ч, у морских свинок – до 48 ч, у кроликов – до 3-4 суток. Болезнь у них развивается по типу общего или восходящего (tetanus ascendes) столбняка. Особенно характерно клиническая картина проявляется у белых мышей: ригидность хвоста и инокулированной лапки. Конечность вытянута, ограничена в подвижности, туловище искривлено в сторону инокулированной лапки, постепенно процесс захватывает и вторую половину тела. Положенная на спину мышь не может самостоятельно перевернуться. Погибающие животные принимают характерную позу с искривлением тела и вытянутыми лапками. Гибель их наступает в течение от 12 ч до 5 суток.

Патогенез. Основной патогенетический фактор при столбняке – экзотоксин, и в первую очередь тетаноспазмин, представляющий собой нейротоксин. Он не поражает кожу и не оказывает цитотоксического действия. Ферменты протеазы и фибринолизин, расплавляя кровяные сгустки и тромбы, способствуют распространению токсина за пределы очага размножения микробов. При глубоком ранении споры в условиях анаэробиоза быстро вегетируют, происходит интенсивное размножение бактерий и синтез токсина.

Экзотоксин поражает двигательные нервные центры, спинной и головной мозг, что в конечном итоге обусловливает основной симптомокомплекс столбняка. Под влиянием токсина снижается активность холинэстеразы и соответственно гидролиз ацетилхлорида, неизбежно ведущий к избыточному его образованию, вследствие чего концевая пластинка нервно-мышечного синапса приходит в состояние повышенного автоматического возбуждения. Судороги приводят к расстройству дыхания, развивается ларинготрахеоспазм, наступает гипоксия, респираторный и метаболический ацидоз. Под действием избыточного количества молочной кислоты может развиваться отек мозга. Животные погибают в результате асфиксии или паралича сердца.

Эпизоотологические данные. К столбняку восприимчивы все виды домашних животных, особенно молодняк. Птицы относительно устойчивы. К столбняку восприимчив человек. Болезнь неконтагиозна.

Источник возбудителя – животные-клостридионосители, выделяющие возбудитель с калом. Основной путь заражения – при попадании спор возбудителя столбняка в раны, особенно глубокие с разрывом мышц.

Предубойная диагностика. У больных животных отмечаются напряженность, оцепенение, судороги мышц. Первые признаки болезни: затруднение в приеме корма и пережевывании, судороги жевательных мышц, напряженная походка, неподвижность ушных раковин, выпадение третьего века, наблюдается синюшность слизистых, иногда острый отек легких, перистальтика замедлена; у крупного рогатого скота прекращается жвачка, расширяется рубец, кал и моча выделяются с трудом. Животные стоят, широко расставив конечности. У овец и коз наблюдается судорожное сокращение мышц шеи, голова запрокинута (опистотонус).

Послеубойная диагностика. Характерных для столбняка патологоанатомических изменений не обнаруживают. Мышцы могут иметь цвет вареного мяса, разрывы волокон, мелкие гнездные кровоизлияния. В почках и печени иногда отмечают дегенеративные изменения, а на плевре и эпикарде – кровоизлияния. Диагноз болезни обычно устанавливают по данным предубойного исследования, а при необходимости проводят лабораторные исследования и биопробу на мышах.

Лабораторная диагностика. В лабораторию для исследования направляют кусочки тканей из глубоких слоев раневых поражений, гной, выделения из ран. При генерализации процесса возбудитель можно обнаружить во внутренних органах, поэтому берут от трупа кусочки печени и селезенки массой по 20-30 г и 10 мл крови. При возникновении столбняка вследствие родов или аборта направляют выделения из влагалища и матки, а при подозрении – труп новорожденного животного.

При исследовании выделяют возбудитель столбняка и его токсин. Мазки окрашивают по Граму. Наличие в препаратах грамположительных палочек с круглыми терминальными спорами дает основание подозревать столбняк. Однако нередко находят сапрофитные бактерии (С. tetanomorphum и С. putrificum), очень похожие на клостридии столбняка. Поэтому микроскопия имеет только ориентировочное значение.

Материал засевают в среду Китта-Тароцци. Культуру микроскопируют и, если она загрязнена, прогревают 20 минут при 80 0 С или 2-3 минуты при 100 0 С. Затем производят пересев методом фракционирования на чашки Петри с глюкозокровяным агаром и выращивают в анаэробных условиях. После появления роста отбирают характерные колонии и производят отсев для выделения чистой культуры.

Биопробу проводят для обнаружения токсина в патологическом материале и культуре. Исследуемый материал растирают в стерильной ступке с кварцевым песком, добавляют двойной объем физиологического раствора. Смесь выдерживают 60 минут при комнатной температуре, после чего фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр. Фильтрат вводят внутримышечно в бедро задней лапки двум мышам в дозе 0,5-1 мл. Для достижения более быстрого результата рекомендуют вводить фильтрат в область корня хвоста в смеси с хлористым кальцием.

Если исследуют культуру возбудителя, то для накопления токсина ее предварительно выдерживают при 37-38 0 С в термостате 6-10 суток, фильтруют (или центрифугируют) и вводят в дозе 0,3-0,5 мл двум белым мышам.

Биопробу можно проводить и на морских свинках. Животные погибают обычно в течение от 12 ч до 5 суток. Наблюдают за подопытными животными не менее 10 суток.

Столбнячный токсин в культурах может быть обнаружен и при помощи реакций нейтрализации (РН) и непрямой гемагглютинации (РНГА) с танизированными эритроцитами.

Специфическая профилактика. У животных некоторых видов отмечается естественная устойчивость к столбняку. Известно, что крупный рогатый скот и свиньи болеют реже, чем другие виды животных. Предполагают, что у них с кормом поступают споры возбудителя столбняка, которые вегетируют в пищеварительном тракте с образованием токсина, который, всасываясь в очень небольших количествах, вызывает иммунитет. В нативных сыворотках коров, зебу, буйволов, баранов обнаруживают столбнячный антитоксин, в меньшем количестве его находят в сыворотках лошадей и верблюдов.

Принято считать, что иммунитет при столбняке в основном антитоксический. Вакцинация животных столбнячным анатоксином сообщает им стойкий и напряженный иммунитет, продолжающийся несколько лет. В 1924 г. французские исследователи Рамон и Декомбе получили анатоксин, который в дальнейшем активно использовали для профилактики столбняка.

У нас в стране применяют высокоэффективный концентрированный столбнячный анатоксин, представляющий собой преципитат 1 % квасцового анатоксина, изготовленный из нативного столбнячного токсина путем обработки его формалином, теплом, алюмокалиевыми квасцами и фенолом. Применяют его с профилактической целью в местностях, энзоотически неблагополучных по столбняку, особенно там, где зарегистрированы частые случаи заболевания взрослых животных и молодняка. Иммунитет наступает через 30 суток после прививки и сохраняется у лошадей в течение 3-5 лет, у других видов животных – не менее года.

Для пассивной иммунизации и лечения больных животных предложена антитоксическая противостолбнячная сыворотка ги-периммунизированных столбнячным анатоксином лошадей.

Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. Больных животных к убою не допускают. При установлении болезни после убоя тушу со всеми органами и шкурой уничтожают. Остатки кормов, навоз, подстилку сжигают. Все обезличенные продукты (ноги, вымя, уши, кровь и др.), полученные от убоя других животных, смешанные с продуктами убоя от больных животных уничтожают.

Проводят санитарную обработку: механическая очистка помещения, смывание загрязнений с поверхностей 1 % раствором едкого натра (70-80 0 С), дезинфекция 5 % раствором едкого натра (70-80 0 С) и тщательное протирание поверхностей в момент нанесения раствора швабрами и т. п.; через 3, 6, 24 ч - дезинфекция повторяется 3 % раствором формальдегида и 3 % раствором едкого натра или хлорной известью с 5 % активного хлора (1 л/м 3 ). Спецодежду кипятят.