Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований.

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 05.11.2024

Санитарная микробиология – направление медицинской микробиологии, изучающее микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и на состояние среды его обитания.
Задачи санитарной микробиологии:
Исследование объектов внешней среды (воздух, почва, вода) для оценки их воздействия на здоровье человека.
Обследование здоровых лиц (работников пищевых, детских, лечебных учреждений) на носительство патогенных микроорганизмов.
Исследование пищевых продуктов с целью их гигиенической характеристики и эпидемиологической оценки; проведение специальных анализов на наличие патогенных микробов при пищевых отравлениях.
Контроль за дезинфекционными мероприятиями.

Принципы проведения санитарно- микробиологических исследований
Пробы отбирают с соблюдением всех условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта.
Исследования проводят быстро; допускается хранение материала в холодильнике не дольше 6 - 8 часов.
Для получения объективных результатов отбирают несколько проб из разных участков объекта, а также проводят повторные отборы и анализы проб.
Используют только стандартные и унифицированные методы исследования.
В работе используют комплекс тестов:
а) прямые – выявляют патогенные микроорганизмы,
б) косвенные – указывают на загрязнение объектов окружающей среды выделениями человека и животных.
Интерпретацию результатов санитарно- микробиологических исследований проводят с учетом других гигиенических показателей (химических, физических, органолептических и др.).

Методы санитарной микробиологии
Микроскопический
Бактериологический
Биологический (в основном для определения токсинов)
Микологические
Вирусологические

Проведение санитарно- микробиологических исследований направлено на:
Определение общего микробного числа (ОМЧ) исследуемого объекта;
Определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) в исследуемом объекте;
Выявление в исследуемых объектах патогенных микроорганизмов.

Общее микробное число (ОМЧ) – это общее количество микроорганизмов в единице объема или массы исследуемого объекта (в 1 мл или в 1 г).
Чем выше ОМЧ объекта, тем выше возможность присутствия в нём патогенных микроорганизмов.
Методы определения ОМЧ:
- прямой подсчет бактерий в счетных камерах с помощью обычного или фазово-контрастного микроскопа,
- количественный посев на плотные питательные среды.

Определение ОМЧ воздуха
Проводится в закрытых помещениях
Используют:
седиментационный метод
открытые чашки Петри со стерильной питательной средой расставляют в помещении. Бактерии из воздуха оседают на поверхность среды, затем чашки закрывают, инкубируют и подсчитывают количество выросших колоний.

аспирационный метод
Используют специальные аппараты, например, аппарат Кротова.
Скорость протягивания воздуха в среднем 25 л/мин.
ОМЧ определяют в 100 л воздуха.
На пути струи воздуха помещают чашку Петри с питательной средой, в результате чего бактерии из воздуха засеваются на среду. Затем инкубируют посевы и подсчитывают число колоний.
Нормы ОМЧ регламентированы для воздуха различных помещений.

Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ)
- это микроорганизмы, указывающие на загрязнение внешней среды выделениями человека или животных.
Присутствие СПМ в объекте внешней среды указывает на возможность наличия в этом объекте других, в т.ч. патогенных для человека, микроорганизмов, непосредственное обнаружение которых затруднено.
СПМ являются постоянные обитатели естественных полостей человека или животных, которые постоянно выделяются в окружающую среду.

СПМ делят на 3 группы:
группа А включает обитателей кишечника человека и животных, их расценивают как индикаторы фекального загрязнения (эшерихии, энтерококки, протеи, клостридии и др.),
группа В включает обитателей верхних дыхательных путей, их расценивают как индикаторы орального загрязнения (стрептококки, стафилококки),
группа С включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения (бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, грибы, актиномицеты, синезеленые водоросли).

СПМ различных объектов внешней среды

При количественном определении СПМ результаты исследований выражаются в 2 величинах:
- Индекс СПМ (например, коли-индекс)
- это количество СПМ, обнаруженное в единице объема или массы исследуемого объекта.
Для определения индекса СПМ используют:
1) метод мембранных фильтров,
2) метод бродильных проб.
- Титр СПМ (например, коли-титр)
- это наименьшее количество исследуемого объекта, в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.

Сущность метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры, на которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируют при + 37°, а затем подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и проводят перерасчет на 1 л, 1 кг или 1 г в зависимости от исследуемого материала.
Сущность метода бродильных проб заключается в посеве определенных объемов исследуемого субстрата на глюкозопептонную среду с индикатором и поплавком (для определения ферментации глюкозы), которые выдерживают при + 37°. Из всех помутневших пробирок делают высевы на среду Эндо с последующей идентификацией выросших колоний.
Коли-титр — величина, обратная коли-индексу.

Патогенные микроорганизмы (ПМ)
Обнаружение ПМ в объектах внешней среды производится:
путем прямого посева на питательные среды
путем посева после предварительной концентрации микроорганизмов с помощью фильтрации, центрифугирования, осаждения коагулянтами и т.д.
Идентификация ПМ производится согласно общепринятым схемам.
Согласно ГОСТу: “патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в питьевой воде и пищевых продуктах”.

Классификация
Семейство Enterobacteriobacteriaceae
Род Klebsiella включает в себя 4 вида: K.pneumoniae, K.oxytoca, K.planticola, K.terrigena.
В патологии человека наибольшее значение имеют K.oxytoca и K.pneumoniae, состоящий из трех подвидов: K.pneumoniae, K. ozaenae и K.rhinoscleromatis.
Относятся к V группе по Берджи (гр- мелкие палочки с закругленными концами, факультативный анаэроб).
Не имеют спор, неподвижны, имеют микрокапсулу

Оппортунистические инфекции (от лат. opportunus — удобный, выгодный, и лат. infectio — заражение, также англ. opportunity — возможность) — заболевания, вызываемые патогенами (бактерии, вирусы, грибы, простейшие), которые обычно не приводят к болезни у здоровых особей (с нормальной иммунной системой). Например, оппортунистическими инфекциями заражаются лица с иммунодефицитными состояниями.
Внутрибольничные инфекции (также госпитальные, нозокомиальные) — согласно определению ВОЗ, любые клинически выраженные заболевания микробного происхождения, поражающие больного в результате его госпитализации или посещения лечебного учреждения с целью лечения, а также больничный персонал в силу осуществления им деятельности, независимо от того, проявляются или не проявляются симптомы этого заболевания во время нахождения данных лиц в стационаре

К факторам внутрибольничной среды, способствующим распространению ВБИ относятся:
- наличие невыявленных носителей внутрибольничных штаммов среди медперсонала и пациентов;
- нарушение медперсоналом правил асептики и антисептики, личной гигиены;
- несвоевременное проведение текущей и заключительной дезинфекции, нарушение режима уборки;
- недостаточное оснащение ЛПУ дезинфекционными средствами;
- нарушение режима дезинфекции и стерилизации медицинских инструментов, аппаратов, приборов и т. д.;
- неудовлетворительное состояние пищеблоков, водоснабжения;
- отсутствие фильтрационной вентиляции.
Госпитальный штамм — это микроорганизм, изменившийся в результате циркуляции в отделении по своим генетическим свойствам, в результате мутаций или переноса генов (плазмид) обретший некоторые несвойственные «дикому» штамму характерные черты.Основные черты приспособления — это устойчивость к одному или нескольким антибиотикам широкого спектра действия, устойчивость в условиях внешней среды, снижение чувствительности к антисептикам. Госпитальные штаммы очень разнообразны, в каждой больнице или отделении возможно появление своего характерного штамма со свойственным только ему набором биологических свойств.

Klebsiella pneumoniae классифицируется как условно-патогенный микроб, находящийся в норме в определенных органах (например, в ЖКТ) в симбиотическом отношении с человеческим организмом, а в иных ситуациях являющийся причиной инфекционных заболеваний (например, при снижении общего и местного иммунитета).
Может вызвать пневмонию, плевриты, перикардиты, гаймориты, инфекции мочевыводящих путей, мозговых оболочек, суставов, абсцессы различной локализации, пищевые токсикоинфекции и даже сепсис.

Klebsiella rhinoscleromatis вызывает склерому - гранулематозное поражение слизистой оболочки носа (риносклерома) и верхних дыхательных путей. Характерно появление плотных узлов красного, розового, бледного цвета, сливающихся в опухоль хрящевой плотности. Поражению подвергаются ноздри, мягкое нёбо, язычок укорачивается, глотка и гортань стенозируются.
Klebsiella ozaenae вызывает озену — зловонный насморк, характеризующийся атрофическим процессом слизистой оболочки и костных стенок полости носа, сопровождающийся образованием секрета, засыхающего в зловонные корки, плотным слоем покрывающие слизистую оболочку. Могут поражаться глотка, гортань, трахея.

Klebsiella pneumoniae
(окраска по Бурри-Гинсу)

Клебсиеллы не требовательны к питательным средам. В МПБ образуют диффузное помутнение, а на МПА растут в виде слизистых, блестящих колоний.

Принципы микробиологической диагностики клебсиелл основаны на выделении и идентификации возбудителя.

Материал для исследований клебсиелл — кровь, СМЖ, гнойное отделяемое, испражнения, смывы и др.
Образцы засевают на селективно-дифференциальную среду К-2 (с мочевиной, рафинозой и бромтимоловым синим).
Колонии клебсиелл сочные и блестящие, имеют цвет от жёлтозеленого до голубого. Культуральные и биохимические особенности клебсиелл определяют на минимальном дифференцировочном ряду
Антигенную структуру клебсиелл исследуют в РА живой культуры диагностическими К-антисыворотками.
Для выявления AT применяют РСК

Лечение
Для лечения клебсиеллезов применяются антибиотики: ампициллин, аминогликозиды, тетрациклины, левомицетин, рифаксимин, нифуроксазид и т.п., однако в последнее время широко распространились штаммы клебсиелл, резистентных к антибиотикам. Также используются бактериофаги: Бактериофаг клебсиелл пневмонии очищенный жидкий и Бактериофаг клебсиеллезный поливалентный жидкий очищенный, Пиобактериофаг (комбинированный препарат). Бактериофаги действуют избирательно, только на клебсибелл (на комплекс бактерий для комбинированных бактериофагов,), не имеют противопоказаний, но они значительно менее эффективны, чем антибиотики.
При избыточном росте клебсиелл пневмонии Приказом Минздрава РФ № 231 от 9 июня 2003 г. Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» рекомендованы бактериофаги «Бактериофаг клебсиелл пневмонии», «Пиобактериофаг поливалентный очищенный жидкий» и «Бактериофаг клебсиелл поливалентный». Бактериофаг принимают 3 раза в сутки натощак за 1 час до еды.

Род Proteus относится к семейству Enterobacteriaceae и включает в себя три вида. Важную роль в патологии, особенно в качестве возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний и пищевых токсикоинфекций, играют два вида:
P. vulgaris и P. mirabilis.
Все представители рода Proteus – грамотрицательные палочки с закругленными концами, размером 0,4 – 0,6 х 1 – 3 мкм, спор и капсул не образуют. Склонны к полиморфизму, наблюдаются кокковидные и нитевидные формы. Иногда встречаются и неподвижные варианты, лишенные жгутиков (О-форма). Факультативные анаэробы. Температурный оптимум 37 °С, рН 7,2 – 7,4; температурные пределы роста от 20 до 38 "С.

Принципы санитарно-микробиологических исследований

Принципы, которыми руководствуются микробиологи при санитарно-микробиологических исследованиях, исходят из основной задачи, разрешаемой ими: определение возможности присутствия в исследуемом объекте патогенных микроорганизмов или токсинов, образующихся при их жизнедеятельности, а также обнаружение и оценка степени порчи изучаемого объекта (особенно пищевых продуктов). Эти принципы можно охарактеризовать следующим образом:

2. Проведение серийных анализов. Этот принцип исходит из особенностей исследуемых объектов. Как правило, вода, почва, воздух и другие объекты содержат разнообразные микроорганизмы, распределение которых неравномерно, к тому же микроорганизмы, находясь в биоценотических отношениях, подвергаются взаимному влиянию, что ведет к гибели одних и активному размножению других. Поэтому берут серию проб из разных участков исследуемого объекта, по возможности большее количество проб, что позволит получить более достоверную характеристику объекта. Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала — среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.

3. Повторное взятие проб. Данная операция необходима для получения сопоставимых результатов. Это связано прежде всего с тем, что исследуемые объекты весьма динамичны (вода, воздух и т.п.), сменяемость микрофлоры в них во времени и пространстве очень велика. Патогенные микроорганизмы попадают в окружающую среду, как правило, в небольшом количестве, к тому же и распределяются в ней неравномерно. Поэтому повторное взятие проб позволяет более точно определить биологическую контаминацию объектов окружающей среды.

4. Применение стандартных методов исследования, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями, что дает возможность в различных лабораториях получать сравнимые результаты.

5. Использование одновременно комплекса тестов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики. Применяют прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов и косвенный, позволяющий судить о загрязнении объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени. К косвенным тестам относится определение общего микробного числа, количественного и качественного состава санитарно- показательных микроорганизмов. Применение косвенных методов оценки потенциальной возможности загрязнения объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, использование обходного пути для изучения обсемененности материалов, является особенностью санитарно- микробиологических исследований.

6. Проведение оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов при использовании санитарно-микробиологических тестов с учетом других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т. д.). Всегда необходимо учитывать, что развитие микробов тесно связано с другими факторами окружающей среды, которые могут оказывать как благоприятное, так и неблагоприятное влияние, усиливая или ограничивая возможности размножения патогенных микроорганизмов и накопления их токсинов. Следует учитывать и то, что почти любой объект исследования имеет собственную микрофлору, которая вызывает специфические биохимические процессы, и те изменения в объектах, которые обусловлены посторонними микроорганизмами. Грамотный микробиолог должен хорошо знать ход биохимических процессов, происходящий в норме в исследуемом объекте (почва, вода), технологию производства, уметь определить характер вредного воздействия попавших микробов, возможные последствия такого воздействия и рекомендовать конкретные мероприятия по их предупреждению.

7. Ответственность специалистов за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов. При санитарно-микробиологическом исследовании выявляется степень порчи пищевых продуктов (или других объектов), пригодность их к употреблению, возможная опасность для здоровья населения. Запрещение использовать пищевые продукты, воду водоемов и др., закрытие предприятия из-за санитарного неблагополучия наносят определенный экономический ущерб. Ответственность за такое решение несет врач санитарной службы.

В целях предотвращения попадания и развития патогенных микроорганизмов на пищевые продукты на предприятиях пищевой и перерабатывающей промышленности, общественного питания постоянно проводят санитарно- микробиологический контроль всех объектов, контактирующих с продукцией — воздуха, воды, оборудования, тары, упаковочных материалов, рук обслуживающего персонала, а также непосредственных источников обсеменения продукции — сырья, вспомогательных материалов.

Общая характеристика методов саиитарио-микробиологических исследований

При организации планового санитарно-микробиологического контроля на предприятиях пищевого профиля используют, прежде всего, косвенные методы определения присутствия патогенных микроорганизмов. При этом для оценки санитарного состояния объектов окружающей среды используют количественные и качественные микробиологические показатели.

Количественные показатели характеризуют степень обсемененности данного объекта микроорганизмами, т.е общее микробное число в единице веса (объема) — обычно в 1г (1см3). Существует два метода определения микробной обсемененности: метод прямого подсчета и метод количественного посева проб исследуемого объекта или его разведений на питательные среды.

Прямой подсчет микроорганизмов в исследуемом объекте проводится под микроскопом в счетных камерах Горяева или в камерах, специально сконструированных для счета бактерий. Предварительно пробу исследуемого объекта подвергают обработке, чтобы получить гомогенную взвесь. Для лучшего учета бактерий в исследуемую суспензию добавляют краситель, чаще всего эритрозин. Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь.

Метод прямого подсчета применяется в экстренных случаях, когда необходимо срочно дать ответ о количественном содержании бактерий, например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и т. п. Метод прямого подсчета кажется простым и удобным, однако он имеет ряд существенных недостатков, снижающих его ценность и из-за этого довольно редко используется. Существенным недостатком его является невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата, не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах. И наконец, метод прямого подсчета не дает возможности отличить живые микроорганизмы от погибших. Создание автоматических приборов для регистрации общей микробной обсемененности, таких как фотоэлектрические и электронные счетчики, делает метод прямого подсчета более перспективным.

Метод количественного посева исследуемого материала на плотные питательные среды применяется наиболее часто. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри (начиная с большего разведения, каждое разведение отдельной пипеткой) и заливают расплавленным и остуженным до 45—50 °С мясопептонным агаром — МПА (глубинный посев). Для равномерного смешивания чашки слегка двигают по поверхности стола и после застывания агара помещают в термостат.

После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведения высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. Если посевы выращивали при 30°С, то показателем общей обсемененности исследуемого материала является КМАФАнМ (или МАФАнМ). КМАФАнМ не определяют только у продуктов, при производстве которых используют заквасочные культуры. В зависимости от вида продукта и способа его производства этот показатель может свидетельствовать об общем санитарно- эпидемиологическом состоянии продукта, свежести или начальной стадии порчи внешне доброкачественного продукта, хотя во многих случаях метод считается приблизительным из-за невозможности выявить все микроорганизмы в объекте на одной питательной среде, т.к. их физиолого-биохимические свойства различны. Кроме того, режим инкубации также не соответствует требованиям всех микроорганизмов в ассоциации, не дают роста микробы, находящиеся в комочках исследуемого объекта, а если и наблюдается рост колоний, то, возможно, не из одной особи. Наконец, часть микроорганизмов теряет способность к размножению в силу антагонизма, конкуренции и других причин. Несмотря на недостатки этого показателя, для многих продуктов КМАФАнМ нормируется.

В обязательном порядке контролируются санитарно- показательные микроорганизмы, обнаружение которых также является косвенным показателем биологической контаминации исследуемого материала патогенными микроорганизмами. Превышение нормативов по допустимому содержанию санитарно-показательной микрофлоры свидетельствует о возможном присутствии тех или иных патогенных микробов.

Для количественной характеристики применяются две группы методик: определения титра и индекса.

Титр — это тот наименьший объем исследуемого материала (в миллилитрах) или весовое количество (в граммах), в котором обнаружена хоть одна особь санитарно-показательного микроорганизма. Например, для определения титра кишечной палочки в воде засевают несколько разных объемов (от 100 до 0,1 или до 0,01 мл в зависимости от предполагаемой степени загрязнения объекта) в жидкие сахарные питательные среды. Размножение в них кишечных палочек регистрируется по наличию брожения-расщепления углевода до кислоты и газа. Пересев на плотные дифференциально-диагностические среды и идентификация выросших колоний позволяют выяснить те объемы, в которых присутствовала кишечная палочка. Затем с помощью специальных таблиц, определяют ко ли-титр. Набор таблиц входит в ГОСТ.

Индекс — количество особей санитарно-показательного микроба, обнаруженного в определенном объеме (количестве) исследуемого объекта. Для воды, молока, других жидких продуктов — в 1 л, для почвы, и пищевых продуктов — в 1 г. Индекс — величина, обратная титру, поэтому перерасчет титра в индекс и обратно можно производить по формуле:

Соответственно для почвы и пищевых продуктов:

титр =———— ; индекс = —-—. (2)

Индекс чаще определяют путем применения мембранных фильтров или посева различных разведений исследуемых субстратов на питательные среды.

Выбор того или иного санитарно-показательного микроорганизма зависит от исследуемого объекта и конкретной задачи. Соответственно говорят, например, о титре или индексе протея или маслянокислых бактерий и т.п. Нередко (и во многих ГОСТах это узаконено) одновременно исследуется и ведется количественный учет двух или более санитарно-показательных микроорганизмов.Качественные показатели указывают на отсутствие (присутствие) микробов конкретных видов в определенной массе продукта.

Прямое выявление в пищевых продуктах патогенных или условно-патогенных микробов и их ядов проводится в соответствии с существующими нормативными документами. Обычно проверяют наличие микроорганизмов p.p.Salmonella, Staphylococcus, Cl.botulinum и их токсинов, Cl.perfringens, Bac.cereus и др. Согласно требованиям ГОСТов патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в определенном объеме (массе) материала, подвергнутого исследованиям (25, 50 г и т.д.).

Санитарно-микробиологическое исследование объекта на присутствие патогенных микроорганизмов проводится работниками СЭС в плановом порядке, а также внепланово — по эпидемическим показаниям. Для определения патогенных микроорганизмов могут быть использованы следующие методы :

• прямой посев исследуемого материала в питательные среды;

• предварительная концентрация патогенных микроорганизмов пропусканием исследуемого объекта (жидкой консистенции) через мембранные фильтры или посевом в среды накопления;

• обнаружение патогенных микроорганизмов методом заражения чувствительных животных (биопроба);

• применение ускоренных методов: серологических, люминесцентно-серологических и радиоизотопного.

Для иллюстрации последней группы методов ниже представлена общая характеристика ускоренных методов исследования воды. Наибольшее применение получил метод люминесцентно-серологический, который в настоящее время рекомендуется для обнаружения в воде микроорганизмов
p.p.Escherichia, Salmonella, Shigella, Vibrio и др. Метод иммунофлюоресценции основан на способности антител, предварительно обработанных различными флюорохромами (флюоресцеина изотиоцианат, родамина сульфохлорид, родамина сульфофторид и др.), адсорбироваться на поверхности микробной клетки и вызывать ее свечение. Метод флюоресцирующих антител применяется в трех модификациях: прямой, непрямой и непрямой метод с добавлением комплемента. При прямом методе_капшо исследуемой воды, в которой предполагается наличие патогенных бактерий, помещают на предметное стекло, обрабатывают специфической к искомому микроорганизму люминесцирующей сывороткой и наблюдают под люминесцентным микроскопом. На темном фоне препарата при положительном результате видна яркая флюоресценция по периферии клеток.
При непрямом методе обработка препаратов происходит в два этапа: специфической иммунной сывороткой выявляют присутствие соответствующих бактерий, на следующем этапе обнаруживают образовавшийся комплекс обработкой меченой иммунной сывороткой, содержащей антитела к глобулинам специфической сыворотки. Этот метод имеет существенное преимущество перед прямым, так как для выявления любых бактерий используется одна меченая сыворотка против антител — глобулинов, содержащихся в специфической сыворотке (как правило, глобулинов кролика).

При непрямом методе с добавлением комплемента препарат обрабатывают в 3 этапа: сначала специфической к искомому микробу иммунной сывороткой, затем — комплементом, который адсорбируется на комплексе антиген — антитело, и, наконец, иммунной противокомплементарной флюоресцирующей сывороткой.

Для повышения эффективности метода следует предварительно концентрировать бактерии в исследуемой воде на мембранных фильтрах центрифугированием или посевом в среды обогащения. В этом случае люминесцентно- серологическим методом удается обнаружить энтеробактерии при наличии в пробах воды даже единичных клеток в 1 мл. Метод флюоресцирующих антител рекомендуется применять при индикации в воде возбудителей туляремии, чумы, бацилл сибирской язвы. Однако люминесцентно-серологический метод является только сигнальным методом индикации патогенных бактерий в воде, и при положительном его результате должно проводиться тщательное бактериологическое исследование воды.

Для ускоренного обнаружения БГКП в воде был предложен радиоизотопный метод (Корш J1.E., 1978). Принцип метода заключается в определении количества БГКП по количеству метаболической двуокиси углерода, выделяемой при жизнедеятельности бактерий из элективных сред, меченных 14С. Результат можно получить через 5-6 ч.

Принципы и методы санитарно-микробиологических исследований

Второй принцип – проведение серийных анализов исходит из особенностей исследуемых объектов. Как правило, вода, почва, воздух и другие объекты содержат разнообразные микроорганизмы, распределение которых неравномерно. К тому же микроорганизмы, находясь в биоценотических отношениях, подвергаются взаимному влиянию, что ведет к гибели одних и активному размножению других. Поэтому берут серию проб из разных участков исследуемого объекта, по возможности большее количество проб, что позволит получить более достоверную характеристику объекта. Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала – среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.

Третий принцип – повторное взятие проб – необходимо для получения сопоставимых результатов. Это связано, прежде всего, с тем, что исследуемые объекты весьма динамичны (вода, воздух и т.п.), сменяемость микрофлоры в них во времени и пространстве очень велика. Патогенные микроорганизмы попадают в окружающую среду, как правило, в небольшом количестве, да и распределяются в ней равномерно. Поэтому повторное взятие проб позволяет более точно определить биологическую контаминацию объектов окружающей среды.

Четвертый принцип – применение стандартных и унифицированных методов, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями, что дает возможность получить сравнимые результаты.

Пятый принцип – использование при оценке исследуемых объектов одновременно комплекса тестов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики. Применяют прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов и косвенный - позволяющий судить о загрязнении объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени. К косвенным тестам относится определение общего микробного числа, количественного и качественного состава санитарно-показательных микроорганизмов. Применение косвенных методов оценки потенциальной возможности загрязнения объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, использование как бы обходного пути для изучения обсемененности материалов, является особенностью санитарно-микробиологических исследований.

Шестой принцип – заключается в проведении оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов при использовании санитарно-микробиологических тестов других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т.д.). Всегда необходимо учитывать, что развитие микробов тесно связано с другими факторами окружающей среды, которые могут оказывать как благоприятное, так и неблагоприятное влияние, усиливая или ограничивая возможности размножения патогенных микроорганизмов и накопления их токсинов. Следует учитывать и то, что почти любой объект исследования имеет собственную микрофлору, которая вызывает специфические биохимические процессы, и те изменения в объектах, которые обусловливаются посторонними микроорганизмами. Санитарный микробиолог должен хорошо знать ход биохимических процессов, происходящих в норме и в исследуемом объекте (сырье, пищевые продукты, готовом изделии и т.д.), технологию производства, уметь определить характер вредного воздействия попавших микробов, возможные последствия такого воздействия и рекомендовать конкретные мероприятия по их предупреждению. Нередко врачу приходится прибегать к помощи специалистов в области общей, сельскохозяйственной, промышленной, ветеринарной микробиологии и решать вопрос при непосредственном участии соответствующих специалистов.

Седьмой принцип – ответственность врачей санитарной службы за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов. При санитарно-микробиологическом исследовании выявляется степень порчи пищевых продуктов (или других объектов), пригодность их к употреблению, возможная опасность для здоровья населения. Если пищевые продукты возможно реализовать, врач должен дать обоснованную рекомендацию о наиболее рациональном способе их обработки и употреблении. Запрещается использовать пищевые продукты, воду водоемов и др. Закрытие предприятия из-за санитарного неблагополучия наносит определенный экономический ущерб. Ответственность за такое решение несет врач санитарной службы. Для большей объективности в оценке полученных результатов и заключениях врачи пользуются специальными инструкциями, нормативами, ГОСТами, разработанными профильными санитарно-микробиологическими учреждениями и утвержденными Министерством Здравоохранения. Эти стандарты периодически пересматриваются и приводятся в соответствие с изменениями, которые вытекают из практического опыта, материальных возможностей, современного уровня знаний и развития техники.

Санитарная микробиология

Авторский коллектив: зав. кафедрой микробиологии ПГМА, профессор Э.С. Горовиц; канд. мед. наук, доцент кафедры микробиологии С.В. Поспелова.

Методические рекомендации предназначены для самостоятельной работы студентов при подготовке к практическим занятиям и выполнении учебно-исследовательских работ.

Методические рекомендации адресованы студентам лечебного, педиатрического, медико-профилактического, стоматологического факультетов и факультета высшего сестринского образования медицинской академии.

Рецензент: Зав. кафедрой эпидемиологии ПГМА,

профессор И.В. Фельдблюм

Предмет санитарной микробиологии с3

Принципы и методы проведения санитарно-микробиологических исследований с3

Основные группы санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) с5

Санитарная микробиология воды с11

Санитарная микробиология почвы с14

Санитарная микробиология воздуха с15

Санитарно-микробиологические исследования в медицинских учреждениях с16

Тестовые задания с19

Санитарная микробиология – наука, изучающая микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и экологическую ситуацию в различных биотопах. Главная задача практической санитарной микробиологии – раннее обнаружение патогенной микрофлоры во внешней среде. При этом следует помнить, что человек и теплокровные животные являются основным резервуаром возбудителей большинства инфекционных заболеваний и подавляющее число возбудителей передается с помощью аэрогенного и фекально-орального механизмов.

Началом развития санитарной микробиологии можно считать 1888 год, когда французский врач Е. Масе предложил считать кишечную палочку показателем фекального загрязнения воды.

Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований

Правильный забор проб. Его проводят с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта. Соблюдается стерильность. При невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 часов.

Серийность проводимых анализов. Большинство исследуемых объектов содержит самые разнообразные микроорганизмы, распределенные крайне неравномерно. Проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы смешивают, а затем точно отмеряют необходимое количество материала (обычно среднее по отношению к исследуемому материалу в целом).

Повторность отбора проб. Как правило, в исследуемых объектах состав микрофлоры меняется достаточно быстро, кроме того, патогенные микроорганизмы распределяются в них неравномерно. Соответственно повторный отбор проб позволяет получить более адекватную информацию.

Применение только стандартных методов исследования – дает возможность получать сравнимые результаты в различных лабораториях.

Использование комплекса тестов: прямых (выявляющих патогены) и косвенных.

Оценка объектов по совокупности полученных результатов – с учетом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических и т.д.)

Методы проведения санитарно-микробиологических исследований

Практическая санитарная микробиология использует два основных метода оценки санитарно-эпидемического состояния среды.

Методы прямого обнаружения возбудителя. Являются наиболее точными и надежными критериями оценки эпидемической опасности внешней среды. Основной недостаток – низкая чувствительность.

Трудность выделения патогенных микроорганизмов на питательных средах обусловливают следующие факторы:

Сравнительно низкое содержание патогенных микроорганизмов во внешней среде, составляющих 1/30000 всего видового состава микрофлоры внешней среды. Кроме того, она распределена неравномерно.

Выделение одного возбудителя не всегда свидетельствует о присутствии других видов патогенов. То есть, необходимо проводить исследования практически в отношении каждого патогена, что не осуществимо.

Изменчивость патогенов. Последние, попадая во внешнюю среду, приобретают новые свойства, затрудняющие их распознавание.

Конкурентные взаимоотношения между патогенами и сапрофитами при совместном выращивании на питательных средах.

Недостаточная элективность питательных сред и необходимость использования лабораторных животных и культур тканей.

Методы косвенной индикации возможного присутствия возбудителя во внешней среде.

Используют два критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:

Общее микробное число (ОМЧ)

Содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ)

- Общее микробное число (ОМЧ) определяют путем подсчета всех микроорганизмов в 1 грамме или 1 мл субстрата.

При этом исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако, это не всегда так, так как ОМЧ может быть большим за счет сапрофитов, а патогены могут отсутствовать. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами.

ОМЧ определяют двумя методами:

Прямой подсчет. Проводят под микроскопом с помощью специальных камер, например, Петрова или Горяева, либо специальных электронных счетчиков. Предварительно исследуемую пробу гомогенизируют и вносят краситель (обычно эритрозин). Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь. Метод применяют в экстренных случаях. При необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток – невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата. Не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах. И, наконец, нельзя отличить живые от погибших микроорганизмов.

Количественный посев на питательные среды. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным до 45-50 0 С МПА. Равномерно смешивают жидкости и после застывания агара чашки помещают в термостат. После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведений высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. При этом выявляются лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные бактерии, способные размножаться на МПА. Таким образом, получаемые цифры значительно ниже истинного количества микроорганизмов в исследуемом объекте.

- Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. Исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен экстрактами человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов.

Принципы, которыми руководствуются при санитарно-микробиологических исследованиях, исходят из основной задачи, разрешаемой ими: определение возможности присутствия в исследуемом объекте патогенных микроорганизмов или токсинов, образующихся в результате жизнедеятельности; обнаружение и оценка степени порчи изучаемого объекта (особенно пищевых продуктов).

Первым принципом является правильное взятие проб для санитарно-микробиологических исследований с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта, правил стерильности.

Второй принцип - проведение серийных анализов. Серию проб берут из разных участков исследуемого объекта, что позволит получить более достоверную характеристику объекта. Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала - среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.

Третий принцип - повторное взятие проб (получение сопоставимых результатов).

Четвертый принцип - применение стандартных и унифицированных методов исследования, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями. Это позволяет в различных лабораториях получать сравнимые результаты.

Пятый принцип - одновременное использование комплекса тестов при оценке исследуемых объектов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики.

Шестой принцип - проведении оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов, полученных при использовании санитарно-микробиологических тестов с учетом других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т. д.).

Седьмой принцип - ответственность сотрудников санитарной службы за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов.

Для большей объективности оценки получаемых результатов врачи пользуются специальными инструкциями, нормативами, ГОСТами, разработанными профильными санитарно-микробиологическими учреждениями и утвержденными Министерством здравоохранения и социального развития РФ. Эти стандарты периодически пересматриваются и приводятся в соответствие с изменениями, которые вытекают из практического опыта, материальных возможностей, современного уровня знаний и развития техники.

Методы санитарно-микробиологических исследований

Санитарная микробиология при индикации и идентификации санитарно-показательных, патогенных микроорганизмов, при определении общей микробной обсемененности объектов окружающей среды использует методы, которые применяются в диагностических микробиологических лабораториях:

- микроскопической (при индикации и прямом подсчете микроорганизмов в исследуемом объекте);
- бактериологический - выделение микроорганизмов и их идентификация;
- биологический - заражение чувствительных животных;
- ускоренные (инструментальные) методы (реакция иммунофлюоресценции, радиоизотопный метод и др.).

Комплекс тестов, используемых для разносторонней и полноценной санитарно-микробиологической характеристики объектов окружающей среды:

- определение количества аэробных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ);
- определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов;
- индикация в исследуемых объектах патогенных микроорганизмов и их токсинов;
- определение степени микробной порчи изучаемых объектов или продуктов.

Существует два метода определения КМАФАнМ:

- метод прямого подсчета (в счетных камерах Горяева или в камерах, для счета бактерий, на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь);
- метод количественного посева различных разведений образцов и проб исследуемого объекта на плотные питательные.

Выявляются лишь мезофильные, аэробные или факультативно-анаэробные бактерии.

Оба метода являются относительными, приблизительными. Для получения сравнимых результатов определение общего микробного числа исследуемых объектов проводится по стандартным, конкретным для каждого случая методикам, регламентированным соответствующими ГОСТами.

Читайте также: