Что такое арбитраж вич анализа

При положительном результате ИФА пациенту рекомендуют обратиться к инфекционисту Центра СПИД или специализированных клиник для консультации и проведения повторного исследования крови. Дополнительно назначают специальный подтверждающий тест – иммунный блотинг, принцип которого заключается в выявлении антител к определенным белкам ВИЧ, или гликопротеидам (gp). На нитроцеллюлозу нанесен вируснный АГ (env,pol полимераза,gag - сердцевина) - инкубация с образцами- промывка -+АТ к IgGпациента. Меченные щелочной фосфатазой, икуб, отмвыка+хромоген - появление специф. окраш полос - наличие АТ. Результат: + - наличие 1/2 полос env+-pol+-gag, не опред. - pol +gag, отр - нет полос

При выявлении антител к одному из гликопротеидов - gp 41, 120, 160 – результат считают положительным. В случае обнаружения антител к другим белкам вируса ответ расценивают как сомнительный и рекомендуют повторить обследование через 3 и 6 месяцев. Отсутствие антител к белкам вируса в реакции иммунного блотинга означает, что первый ИФА был ложноположительным.

Следует правильно понимать, что позитивный результат ИФА на антитела к ВИЧ – это не диагноз. Только врач может поставить диагноз ВИЧ-инфекции после повторного ИФА, врачебного осмотра и проведения дополнительных лабораторных тестов. И только врач может исключить этот диагноз при отрицательных повторных результатах ИФА.

Если человек попал в ситуацию, потенциально опасную по передаче ВИЧ, ему рекомендуется как можно раньше обратиться за медицинской помощью и начать проведение постконтактной профилактики АРВ-препаратами, не дожидаясь, пока истекут необходимые для появления антител и проведения ИФА 3 месяца.

Тесты 1 уровня- серологич. скрининговое обслед-е ИФА;

Тесты 2 уровня - арбитражные исследования первично серопозитивных проб ИФА - макс возможные наборы тест-систем;

Тесты 3 уровня - скрининговые арбитражные и подтверждающие исследования ИФА, иммуноблотинг.

2. Проточная цитофлюориметрия

3. СД4 - 200 - критический уровень

(ВИЧ – медленно прогрессирующее заболевание с многолетней репликацией вируса в лф, мф и клетках нервной ткани, вызывающей нарушение иммунной и нервно-психической регуляции организма => гибель больного от поражений вторичного порядка, обусловленных нарастающим иммунодефицитом. ВИЧ относится к РНК-содержащим ретровирусам. Способен синтезировать в клетках хозяина ДНК своего генома. Вирусная ДНК включается в геном лиц, где ее экспрессия создает условия развития хронической инфекции. Вирус иммунодефицита человека генетически и антигенно неоднороден: выделены ВИЧ-1 и ВИЧ-2. При заражении ВИЧ-1 продолжительность жизни составляет 10-12 лет, а ВИЧ-2 – свыше 20-25 лет. Впервые был выделен в 1983 от больного лимфоаденопатиейв институте Пастера и в 1984 в США.

Чувствителен к действию детергентов. ПАВ, спиртов, хлорсодерж., перекись (1-3% хлорамин, 3% хлорной извести - через 15 мин). Полная инактивация при56С 30мин. Устойчив к УФ. Сохраняется на высушенных субстратах 7 сут.

Патогенез - цитопатическое действие на ИКК (разрушение, нарушение функций, спонтанная поликлональная активация В-л, гипергаммаглобулинемия). АГ вируса выступают в роли суперантигенов - гиперактивация специфичных и неспецифичных клонов - апоптоз - дефицит. Время от момента заражения до появления антител -3нед -3 мес. до 6 мес

Пути заражения ВИЧ инфекцией: -парантеральный -внутриутробный-вертикальный - половой

1стадия : Латентный период. Период вирусоносительства без клинической манифестации. ПЦР

2 стадия: Первичной манифестации. От 2 нед до неск месяцев. острая инфекция(похожа на грипп,высокая тем-ра, инфекц.мононуклеоз) от 1 недели до месяца, ИФА ВИЧ- отрицателен.

3-стадия: ассимптомной инфекции (д-з.ставится на основании эпид.анализа и лаб-ых исследований)Отсутствуют клинические признаки, длится от 1 года до 10 лет.Продолжительность зависит от образа жизни, материального достатка и др)

4-стадия:персистирующая генерализованная лимфоаденопатия (увеличение лимф. узлов)

5-стадия: пре СПИД - от 2до 10 лет.Переход от ВИЧ-инфекции к стадии вторичных заболеваний + оппортунистические инфекции (кандидоз полости рта, туберкулёз лёгких,опоясывающий лишай,локализ.форма саркомы Капоши)Снижение массы тела на 10%, немотивированная лихорадка, диарея,общая слабость. и др.)

Риск передачи ВИЧ в мед.уч. При парантеральном пути передачи (от пациента к персоналу и наоборот). При в/в; в\м; и др. инъекциях. При переливании крови и кровезаменителей, стоматолог, хирург, гинекологическом кабинете.

КЛ диагностика ВИЧ-инфекции имеет 3 направления: 1. Установление факта инфицированности ВИЧ, диагноза ВИЧ инфекции; 2. Определение стадии клинического течения б-ни и выявление вторичных заб-ий; 3. Прогноз прогрессии клин течения заб-ия и лаб контроль проводимого лечения.)

95. Микробиологические методы диагностики туберкулеза и определения лекарственной резистентности возбудителя.

Включает микроскопию препаратов, окрашенных по Цилю - Нильсену для выявления микобактерий туберкулеза (кислотоустойчивых бактерий, КУБ),

Сбор мокроты для анализа на КУБ. На исследование направляются три пробы мокроты от каждого пациента. Первую пробу мокроты пациент собирает через 1-2 ч после сна под наблюдением медицинского работника. Вторая проба мокроты собирается больным в тот же день через несколько часов после взятия первой пробы. Третья проба - утром следующего дня.

Пациенту следует откашливать мокроту из более глубоких отделов легких. Во время забора мокроты медработник должен стоять за спиной больного. Для исследования необходимо получить достаточное количество мокроты (3-5 мл), содержащей плотные гнойные частицы, а не слюну.

Техника приготовления и окраски препаратов Бактерии чаще обнаруживаются в плотных гнойных частицах мокроты. Результат исследования в большей степени зависит от правильного выбора этих частиц. Гнойные частицы выбирают из 4-6 разных мест, распределяют по предметному стеклу тонким слоем. Мазок можно приготовить и другим способом. Стекло с отобранной мокротой покрывают другим предметным стеклом и, придавливая друг к другу, тщательно растирают, раздвигая стекла в противоположном направлении.

Подготовленные мазки просушивают на воздухе в течение 15-30 мин. Подогревать препарат для высушивания не рекомендуется, так как при этом легко происходит разрушение микробных клеток. Высушенный мазок фиксируют трехкратным проведением его в течение 3-5 с через среднюю и наиболее яркую часть пламени спиртовки. Нужно избегать следующих ошибок: 1) изготовлений слишком толстых препаратов (трудно искать бактерии), 2) фиксирования плохо высушенных мазков (получается плохая окраска), 3) недостаточной фиксации, ведущей к сползанию препарата, 4) длительной фиксации над пламенем, вызывающей обугливание мокроты, что сильно отражается на качестве окраски.

Окраска по Цилю - Нильсену Предметные стекла помещают на мостик с промежутками между краями. Мазки накрывают фильтровальной бумагой. На всю поверхность фильтровальной бумаги, покрывающей стекло, наносят карболовый фуксин Циля (1 г основного фуксина растворя ют в 10 мл этилового спирта, раствор выливают в 100 мл 50 г/л раствора карболовой кислоты). Стекло с мазком медленно нагревают над пламенем спиртовки до появления пара. Не допускается кипение или высушивание окрашивающего раствора на предметном стекле. Если раствора недостаточно, его можно добавить еще и нагреть второй раз. Мазок с прогретым раствором оставляют на 5 мин, после чего фильтровальную бумагу удаляют пинцетом и помещают в бачок для сбора отходов. Каждое предметное стекло аккуратно ополаскивают отдельно под слабой струей воды из водопроводного крана до полного удаления окрашивающего раствора. Мазок держат ребром к струе воды. Не разрешается смывать и обесцвечивать одновременно несколько мазков во избежание перекрестного заражения. Все стекла помешают на мостик и обрабатывают, каждый из них индивидуально, 250 г/л раствором серной кислоты до полного отхождения краски. Смывают каждое предметное стекло как описано выше. Затем каждый мазок обрабатывают 96% этиловым спиртом в течение 5 мин и промывают водой. Обесцвеченные, промытые стекла с мазками докрашивают (3 г/л водным раствором метиленового синего в течение 60 с), промывают, как описано выше, оставляют сушить на воздухе.

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Все инфекционные заболевания нуждаются в своевременной точной диагностике. ВИЧ и СПИД — не исключение. Поставленный вовремя диагноз позволяет принять необходимые терапевтические меры и продлить пациенту жизнь. Как же определить наличие или отсутствие заболевания с максимальной точностью?

Диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа

Сегодня, наверное, каждый человек слышал о ВИЧ и СПИДе и знает, что эти заболевания очень опасны, что передаются они в основном во время незащищенного барьерным способом полового акта. А между тем, первые случаи инфицирования были зафиксированы не так давно — в 1978 году (у нескольких мужчин-гомосексуалов из США и Швеции). Сам вирус был открыт в 1983 году.

В первую очередь ВИЧ атакует и разрушает лимфоциты (Т-лимфоциты, или хелперы). Они отвечают за иммунный ответ организма, распознавание и уничтожение инфицированных клеток. В результате заболевший теряет способность противостоять инфекциям.

У здорового человека количество Т-лейкоцитов составляет 1200–3000 клеток/мкл. После ВИЧ-инфицирования число клеток снижается. При этом заболевший продолжает чувствовать себя нормально. Данный период болезни может длиться на протяжении многих лет. Но наступает момент, кода количество клеток-хелперов достигает критической отметки. Это может проявиться следующими проблемами:

кандидоз полости рта и ЖКТ;
опоясывающий лишай (герпес);
неделями не спадающая высокая температура;
ночная потливость;
диарея;
частые ОРЗ и ОРВИ и др.

Если число Т-лимфоцитов снижается до 200 клеток/мкл, то диагностируют СПИД. Организм больного в таком состоянии не может сопротивляться даже простейшим микроорганизмам — от дрожжей до вирусов. У здорового человека к ним развивается резистентность, тогда как страдающего СПИДом они могут довести до летального исхода. Чаще всего возбудителями смертельных заболеваний становятся токсоплазма, криптоспоридии, цитомегаловирус. Кроме того, снижение лимфоцитов провоцирует образование злокачественных опухолей.

При отсутствии должного лечения пациенты с ВИЧ-инфекцией не переступают порог выживаемости в 10 лет. Грамотно и своевременно назначенная терапия затормаживает развитие болезни, в разы увеличивая продолжительности жизни больного. ВИЧ-положительный человек в таком случае может дожить до преклонных лет.

Основной метод диагностики инфекции — анализ крови. С момента заражения до появления антител в крови проходит 1–3 месяца.

Разные виды лабораторных анализов венозной крови, взятой натощак, позволяют обнаружить наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции в крови. Рассмотрим виды этих исследований.

Скрининговое исследование иммуноферментными (ИФА) методами представляет собой выявление антител к антигенам ВИЧ-типов: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Уже со второй недели после инфицирования могут появиться антитела, хотя они способны обнаружиться и позже — через несколько месяцев. В последующее время количество антител растет и сохраняется в крови пациента. При наличии антител в большинстве случаев клинические признаки ВИЧ не проявляются 2–10 лет.
Отметим, что данный тест не всегда точен, возможен ложноположительный результат. В любом случае при положительном результате назначается повторный анализ через 2-3 недели.
Верификационное исследование методом иммуноблота проводится, если описанный выше анализ дважды дал положительный результат. Данное исследование сочетает анализ ИФА и метод электрофореза, который позволяет разделить по молекулярному весу входящие в состав вируса антигены. Данное исследование имеет максимальную точность.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени дает возможность определить концентрацию вирусной РНК в плазме крови. Тест проводят в целях ранней диагностики возможного инфицирования после случая повышенного риска (на 7–10 день после предположительного инфицирования).
Также данный анализ назначается для оценки эффективности применяемой терапии, для решения вопроса о начале антиретровирусной терапии, о проведении кесарева сечения у инфицированных беременных за 4 недели до родов.
Такое исследование крови проводят новорожденным детям инфицированных матерей. Полученный дважды положительный ответ говорит о заражении ребенка.

Поводом пройти исследование на ВИЧ-инфекцию может стать множество причин. Тест необходим перед оперативным вмешательством, в случае планирования беременности, риск приобретения данной инфекции несут случайные половые контакты. Отдельная категория граждан (врачи, педагоги, работники пищевых производств, продавцы пищевой продукции и др.) обязана проходить тест в рамках оформления медицинской книжки, являющейся обязательным условием допуска к работе.

Что касается тревожных симптомов, то обычно врачи назначают анализ на ВИЧ при следующих состояниях:

Резкая потеря веса.
Диарея, длящаяся более трех недель.
Лихорадка неясного происхождения.
Увеличение лимфатических узлов в разных областях.
Лейкопения и лимфопения.
Тяжелые инфекционные заболевания: пневмония, кандидоз внутренних органов, туберкулез, манифестный токсоплазмоз, частые случаи обострения герпесвирусной инфекции и другие.

Специальной подготовки перед сдачей венозной крови не требуется. Единственное — это воздержание от приема пищи в течение 8–10 часов. Также накануне рекомендуется избегать физических и эмоциональных нагрузок, отказаться от употребления алкоголя.

Вся процедура забора венозной крови занимает не более пяти минут. После взятия материала место укола дезинфицируют и заклеивают специальным пластырем. Так как анализ берется натощак, во избежание головокружения после забора крови следует выпить сладкий чай или съесть кусочек шоколада.

В государственных поликлиниках, чтобы получить направление на анализ, придется сначала посетить участкового терапевта. В частных же медицинских центрах нужно просто заполнить заявку на анализ. Для этого в клинике попросят предъявить паспорт или какой-либо другой документ, удостоверяющий личность (миграционная карта, водительские права, военный билет и т. д.). Документ позволит идентифицировать результаты анализа. Впрочем, тест на ВИЧ можно сделать и анонимно. В этом случае заявке и образцу крови, который отправляется на анализ в лабораторию, присваивается номер, известный лишь пациенту и медицинскому персоналу. Однако результаты анонимных исследований не могут быть представлены для госпитализации, в женские консультации и не могут быть зарегистрированы в ОРУИБ (Отдел регистрации и учета инфекционных болезней).

Следует помнить, что интерпретировать результаты исследования и поставить точный диагноз способен только врач. Полученный результат ни в коем случае не может быть поводом для самолечения, к тому же одни и те же результаты у разных пациентов могут говорить о противоположной клинической картине.

Показывает объем выявленной РНК вируса иммунодефицита человека, выраженный в C/ml (копии/мл). Интерпретировать результаты следует следующим образом:

РНК не выявлена, либо значение ниже предела чувствительности метода (20 копий/мл).
Меньше 20 копий/мл — РНК выявлена в концентрации на пределе чувствительности метода, характеристика с удовлетворительной точностью невозможна.
От 20 до 10 6 копий/мл — полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен.
Больше 10 6 копий/мл — РНК выявлена в указанной концентрации, выходящей за верхний предел линейного диапазона.

Анализы на ВИЧ можно сдать в частных клиниках. В этом случае стоимость скринингового исследования иммуноферментными методами в среднем составит от 400 до 800 рублей. Срок выполнения исследования — один рабочий день, хотя возможна и срочная диагностика, в таком случае ответ будет получен через 2 часа.

Верификационное исследование методом иммуноблота обойдется в 3000–5000 рублей. Результаты станут известны через 3–7 рабочих дней.

Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени представляет собой более сложный анализ, поэтому его стоимость намного выше — она составляет 10 000–12 000 рублей. Результаты исследования готовятся в среднем 10–14 рабочих дней.

Согласно законодательству все иммунные анализы в государственных медицинских учреждениях проводятся бесплатно. В обязательном порядке проверку на ВИЧ-инфекцию проходят беременные женщины, пациенты, готовящиеся к оперативному вмешательству и госпитализации. В остальных случаях направление на данное исследование назначается по усмотрению врача.

Пройти анализ на ВИЧ-инфекцию сегодня не составляет сложности. Сама процедура практически безболезненна и занимает считанные минуты. Современное оборудование и методики проведения теста позволяют получить максимально точные результаты.

Вопреки некоторым мнениям, ВИЧ не является приговором. Инфицированные люди способны прожить долгую, полноценную жизнь. Они могут иметь семью, детей, без опасений общаться с окружающими. Главное при этом выполнять особые правила гигиены и бытового поведения, знать, как свести к минимуму риск заражения домочадцев. А в случае возникновения сомнительных или спорных ситуаций — обращаться к специалистам: врачам, психологам. Но ни в коем случае не замыкаться и не ставить на жизни крест.

Fact Sheet 102

ЧТО ТАКОЕ ТЕСТИРОВАНИЕ НА ВИЧ?
КАК Я МОГУ ТЕСТИРОВАТЬСЯ?
КОГДА МНЕ НЕОБХОДИМО ТЕСТИРОВАТЬСЯ НА ВИЧ?
ЕСТЬ ЛИ ТЕСТЫ, КОТОРЫЕ ПОКАЗЫВАЮТ РЕЗУЛЬТАТ РАНЬШЕ, ЧЕМ ОСТАЛЬНЫЕ?
ЧТО ОЗНАЧАЕТ, ЕСЛИ У МЕНЯ ПОЗИТИВНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ?
МОГУ ЛИ Я СОХРАНЯТЬ РЕЗУЛЬТАТЫ ТЕСТА НА ВИЧ В ТАЙНЕ?
НАСКОЛЬКО ТЕСТЫ ТОЧНЫЕ?
ИТОГ

КАК Я МОГУ ТЕСТИРОВАТЬСЯ?
Про тест на ВИЧ в США можно договориться в любой поликлинике или у частного врача. Обычно результат анализа готов через две недели. В разных странах Восточной Европы и Центральной Азии ситуация с тестами разная. Лучше всего спросить где и как можно тестироваться в местной поликлинике.

Домашние анализы: нельзя сделать анализ на ВИЧ дома. Существующие наборы домашних тестов на ВИЧ предназначены только для сбора крови. После сбора анализа Вам необходимо послать пробы в лабораторию, где осуществляется анализ на ВИЧ.

КОГДА МНЕ НЕОБХОДИМО ТЕСТИРОВАТЬСЯ НА ВИЧ?

Около 5% людей необходимо больше двух месяцев, чтобы начать производить антитела. Есть задокументированный случай, когда человек одновременно подвергался заражению ВИЧ и гепатитом С. Антитела на ВИЧ не определялись на протяжении года после заражения. Анализ через 3 или 6 месяцев после возможной опасности заражения определяет практически все случаи инфицирования ВИЧ. Тем не менее, не существует гарантий относительно того, когда определенный человек начнет производить достаточно антител, чтобы они определялись тестом на ВИЧ. Если у Вас проявляются какие-либо неожиданные симптомы, посоветуйтесь с Вашим врачом и подумайте о повторном тесте на ВИЧ.

Анализы на вирусную нагрузку или нуклеиновую кислоту обычно не используются для того, чтобы определить, был ли человек инфицирован ВИЧ, поскольку они значительно дороже, чем анализ на антитела. Кроме того, у них несколько выше частота появления ошибок.

ЧТО ОЗНАЧАЕТ, ЕСЛИ У МЕНЯ ПОЗИТИВНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ?
Позитивный результат на ВИЧ означает наличие у Вас антител на ВИЧ, то есть инфицирование ВИЧ. Результат теста Вы получите от консультанта, который должен объяснить, чего ожидать и где получить медицинскую помощь и эмоциональную поддержку.

МОГУ ЛИ Я СОХРАНЯТЬ РЕЗУЛЬТАТЫ ТЕСТА НА ВИЧ В ТАЙНЕ?
Сделать анонимный тест на ВИЧ можно во многих местах. Вы не должны называть себя, сдавая анализ или получая результаты анализа в поликлинике. Анонимный тест можно повторять неограниченно.

Если Вы получили позитивный результат на ВИЧ при неанонимном тесте, или получаете любые медицинские услуги, связанные с ВИЧ, Ваше имя может быть предоставлено в некоторые учреждения системы здравоохранения.

Центр профилактики и контроля за заболеваниями США (The Centers for Disease Control and Prevention (CDC) предложил в 1998 году всем штатам вести реестр ВИЧ-инфицированных людей. На данный момент это предложение пока не вошло в силу. В разных странах Восточной Европы и Центральной Азии, система реестров обстоит по-разному.

НАСКОЛЬКО ТЕСТЫ ТОЧНЫЕ?

В двух случаях возможно получение ложных результатов:

Дети, рожденные ВИЧ-позитивными матерями, могут показывать ложные результаты на протяжении нескольких месяцев, поскольку мамы передают детям антитела, борющиеся с инфекцией. Даже если ребенок не инфицирован ВИЧ, у него присутствуют антитела на ВИЧ и результат анализа будет положительным. В данном случае, необходимо использовать другие анализы, например, анализ на вирусную нагрузку.

Как упоминалось выше, те, кто недавно подвергался риску инфицирования, могут получить негативные результаты анализа, если анализ сдан слишком быстро после момента инфицирования.

При положительном результате ИФА пациенту рекомендуют обратиться к инфекционисту Центра СПИД или специализированных клиник для консультации и проведения повторного исследования крови. Дополнительно назначают специальный подтверждающий тест – иммунный блотинг, принцип которого заключается в выявлении антител к определенным белкам ВИЧ, или гликопротеидам (gp). На нитроцеллюлозу нанесен вируснный АГ (env,pol полимераза,gag — сердцевина) — инкубация с образцами- промывка -+АТ к IgGпациента. Меченные щелочной фосфатазой, икуб, отмвыка+хромоген — появление специф. окраш полос — наличие АТ. Результат: + — наличие 1/2 полос env+-pol+-gag, не опред. — pol +gag, отр — нет полос

При выявлении антител к одному из гликопротеидов — gp 41, 120, 160 – результат считают положительным. В случае обнаружения антител к другим белкам вируса ответ расценивают как сомнительный и рекомендуют повторить обследование через 3 и 6 месяцев. Отсутствие антител к белкам вируса в реакции иммунного блотинга означает, что первый ИФА был ложноположительным.

Тесты 1 уровня- серологич. скрининговое обслед-е ИФА;

Тесты 2 уровня — арбитражные исследования первично серопозитивных проб ИФА — макс возможные наборы тест-систем;

Тесты 3 уровня — скрининговые арбитражные и подтверждающие исследования ИФА, иммуноблотинг.

2. Проточная цитофлюориметрия

3. СД4 — 200 — критический уровень

Чувствителен к действию детергентов. ПАВ, спиртов, хлорсодерж., перекись (1-3% хлорамин, 3% хлорной извести — через 15 мин). Полная инактивация при56С 30мин. Устойчив к УФ. Сохраняется на высушенных субстратах 7 сут.

Патогенез — цитопатическое действие на ИКК (разрушение, нарушение функций, спонтанная поликлональная активация В-л, гипергаммаглобулинемия). АГ вируса выступают в роли суперантигенов — гиперактивация специфичных и неспецифичных клонов — апоптоз — дефицит. Время от момента заражения до появления антител -3нед -3 мес. до 6 мес

Пути заражения ВИЧ инфекцией: -парантеральный -внутриутробный-вертикальный — половой

1стадия : Латентный период. Период вирусоносительства без клинической манифестации. ПЦР

4-стадия:персистирующая генерализованная лимфоаденопатия (увеличение лимф. узлов)

5-стадия: пре СПИД — от 2до 10 лет.Переход от ВИЧ-инфекции к стадии вторичных заболеваний + оппортунистические инфекции (кандидоз полости рта, туберкулёз лёгких,опоясывающий лишай,локализ.форма саркомы Капоши)Снижение массы тела на 10%, немотивированная лихорадка, диарея,общая слабость. и др.)

Включает микроскопию препаратов, окрашенных по Цилю — Нильсену для выявления микобактерий туберкулеза (кислотоустойчивых бактерий, КУБ),

Окраска по Цилю — Нильсену Предметные стекла помещают на мостик с промежутками между краями. Мазки накрывают фильтровальной бумагой. На всю поверхность фильтровальной бумаги, покрывающей стекло, наносят карболовый фуксин Циля (1 г основного фуксина растворя ют в 10 мл этилового спирта, раствор выливают в 100 мл 50 г/л раствора карболовой кислоты). Стекло с мазком медленно нагревают над пламенем спиртовки до появления пара. Не допускается кипение или высушивание окрашивающего раствора на предметном стекле. Если раствора недостаточно, его можно добавить еще и нагреть второй раз. Мазок с прогретым раствором оставляют на 5 мин, после чего фильтровальную бумагу удаляют пинцетом и помещают в бачок для сбора отходов. Каждое предметное стекло аккуратно ополаскивают отдельно под слабой струей воды из водопроводного крана до полного удаления окрашивающего раствора. Мазок держат ребром к струе воды. Не разрешается смывать и обесцвечивать одновременно несколько мазков во избежание перекрестного заражения. Все стекла помешают на мостик и обрабатывают, каждый из них индивидуально, 250 г/л раствором серной кислоты до полного отхождения краски. Смывают каждое предметное стекло как описано выше. Затем каждый мазок обрабатывают 96% этиловым спиртом в течение 5 мин и промывают водой. Обесцвеченные, промытые стекла с мазками докрашивают (3 г/л водным раствором метиленового синего в течение 60 с), промывают, как описано выше, оставляют сушить на воздухе.

Читайте также: