Ифа вектор бест на сифилис

ИФА — иммуноферментный анализ — является одним из самых прогрессивных методов диагностики сифилиса. Он выявляет признаки присутствия возбудителя заболевания на разных стадиях последнего. В основе анализа лежит выявление специфических антител, которые появляются в крови больного при внедрении в организм бледной трепонемы (бактериального возбудителя).

Метод ИФА работает не только для группы заболеваний, передающихся половым путем. В равной степени он применим и для диагностики самых разных болезней инфекционного характера. Принцип проведения анализа был разработан еще в 60-х годах прошлого столетия. Однако активно использоваться он начал только спустя 20 лет.

Сейчас ИФА применяется для диагностики сифилиса, СПИДа, туберкулеза и многих других болезней. Для обнаружения антител используются специально разработанные ферменты, активно реагирующие на специфические белки крови.

В каких случаях назначают ИФА?

Больной может сам прийти в клинику для проведения анализа, если у него присутствуют подозрительные симптомы (характерные высыпания на теле, повышенная температура, боли в мышцах и пр.). Однако на определенных стадиях недуг не проявляется столь явно. Через несколько недель после инфицирования симптомы исчезают, и пациент может ошибочно считать себя выздоровевшим. По этой причине существует ряд случаев, когда анализ ИФА проводится в обязательном порядке:

При устройстве на работу на предприятия, где есть контакт с большим количеством людей, продуктами питания, детскими и медицинскими товарами.
При постановке на учет беременной. Болезнь передается от больной матери младенцу, поэтому важно ее вовремя выявить.
При донорстве крови. Перед тем как сдавать кровь, донор обязан проверить ее на наличие опасных инфекций, в том числе и сифилиса.
Во время подготовки к операции. Проведение такого рода вмешательств подразумевает прямой контакт с кровью больного. Это может быть небезопасно для медперсонала и других пациентов клиники.
При обнаружении симптомов у одного из половых партнеров. В этом случае второй партнер также обязан сдать кровь на пробу.
При прохождении воинской службы, а также в случае тюремного заключения. Обе ситуации предполагают продолжительный контакт с большим количеством людей. Поскольку недуг передается не только половым, но и контактно-бытовым путем, любой человек из окружения инфицированного находится под угрозой.

Как проводится?

Главная особенность ИФА — высокая точность данных. Позволяет не просто обнаружить антитела, но и определить их количественное соотношение.

Это значит, что иммуноферментный анализ позволяет с 99,99%-ной вероятностью выявить болезнь и одновременно определить, на какой стадии развития болезнь в данный момент находится.

При проведении ИФА у пациента берут кровь из вены. Затем ее особым образом подготавливают и размещают на полистироловой панели со множеством лунок. При диагностике в сыворотку крови добавляют специальные ферменты, которые при наличии антител/антигенов недуга образуют с ними прочные соединения.

Результатом образования таких соединений становится изменение цвета плазмы крови в лунке (с бесцветного — на ярко-желтый). Работнику лаборатории достаточно визуально оценить результат, чтобы понять, что на панели — кровь больного.

Трактовка результатов

При ИФА на сифилис оценивают наличие 3 классов антител (иммуноглобулинов): A, M и G. Эти вещества образуются в крови инфицированного человека в строго определенной последовательности:

Наличие иммуноглобулина A указывает на то, что с момента заражения бледной трепонемой прошло больше месяца.
Антитела M выявляются при длительном присутствии инфекции в организме. Также они могут быть реакцией на обострение хронической болезни.
Иммуноглобулин G организм вырабатывает на самом пике заболевания, а также после уже проведенного лечения.

Интенсивность окрашивания плазмы крови в ярко-желтый цвет при проведении ИФА напрямую указывает на количество антител. Если цвет плазмы слегка желтоватый, результаты ставят под сомнение и процедуру повторяют. При отрицательном результате цвет плазмы не меняется и остается прозрачным.

Ложноположительный результат ИФА

На протяжении всей жизни человеку довольно часто приходится делать ИФА на сифилис (перед устройством на работу и пр.). Положительный результат всегда становится стрессом. Однако не стоит паниковать раньше времени! Иногда ИФА может дать ложноположительный результат. В этом случае есть смысл провести повторное обследование.

Специалисты не советуют беспокоиться после первого же положительного результата ИФА, поскольку это исследование направлено на выявление не самой бледной трепонемы, а антител, которые организм вырабатывает в ответ на атаку патогенных бактерий. ИФА — анализ с высокой точностью (вероятность погрешности меньше 1%). При наличии сомнений врачи не ставят диагноз сразу же, а предлагают пациенту сдать кровь еще раз.

Ложноположительный ответ ИФА возможен при болезнях:

соединительной ткани, суставов (васкулит, ревматоидный артрит и пр.);
сердца (главным образом это касается воспалительных заболеваний: миокардита, эндокардита);
эндокринной системы (диабет);
инфекционных (гепатит, туберкулез и пр.).

Ложноположительный результат может быть при беременности или в том случае, если незадолго до ИФА пациенту была проведена вакцинация. Изменить итоги анализа не в лучшую сторону способно и употребление алкоголя, наркотиков.

В достаточно большом количестве случаев положительную реакцию дает проверка крови пациентов, которые уже прошли лечение. У 10% излеченных положительная реакция остается на всю жизнь, поскольку в крови постоянно циркулирует определенное количество антител как иммунный ответ на возникшее однажды заболевание.

Ложноотрицательный результат

Наряду с ложноположительным возможна и ложноотрицательная реакция. В самом начале болезни, когда трепонема только попала в организм, антитела вырабатываются в недостаточном для выявления количестве. Ферменты могут их не зафиксировать, поэтому итоги ИФА оказываются отрицательными.

При наличии подозрений на сифилис (пациент имел незащищенный половой акт, тем или иным образом контактировал с возможными больными и пр.) проводится повторный анализ.

Обследование контактных лиц

Существует определенный протокол действий на тот случай, если у пациента со 100%-ной достоверностью был выявлен недуг. В первую очередь обследование проходит его половой партнер: муж, жена, другие лица, вступавшие с зараженным в интимную связь. В этом плане медики категоричны. Обследование сексуальных партнеров является обязательным во избежание распространения опасного заболевания.

Лечение проходят все члены семьи больного, даже если их анализы показали отрицательный результат. Помним: сифилис — острозаразная болезнь, передающаяся контактно-бытовым путем. Дети и другие члены семьи могут получить трепонему во время пользования санузлом, общими полотенцами, посудой.

Действия после подтверждения диагноза

Как только данные ИФА на сифилис подтвердились, инфицированный и контактировавшие с ним лица проходят терапию антибиотиками. Все рекомендации врача — дозировку, периодичность приема лекарств — необходимо соблюдать в точности!

На время лечения работающим гражданам выдается справка с зашифрованным согласно МКБ-10 диагнозом. После полного излечения медицинская книжка продлевается. Выздоровевший работник может приступать к своим непосредственным обязанностям. Работодатель не вправе отказать ему в восстановлении на рабочем месте.

Таковы основные данные по проведению ИФА. Заразившимся нужно помнить: постановка диагноза не ставит крест на всей последующей жизни больного. Сейчас существуют эффективные препараты, позволяющие надежно излечивать это заболевание. Вовремя проведенные обследование и лечение позволяют избежать самых опасных последствий недуга и защитить от него других членов общества.

Новые наборы для экспресс-диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом Ханта-IgМ-экспресс-БЕСТ и Ханта-IgG-экспресс-БЕСТ more

ID] => 2325 [TIMESTAMP_X] => 18.06.2019 09:49:14 [

TIMESTAMP_X] => 18.06.2019 09:49:14 [MODIFIED_BY] => 9321 [

MODIFIED_BY] => 9321 [DATE_CREATE] => 18.06.2019 09:49:14 [

DATE_CREATE] => 18.06.2019 09:49:14 [CREATED_BY] => 9321 [

CREATED_BY] => 9321 [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2324 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2324 [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [SORT] => 1000 [

SORT] => 1000 [NAME] => Сифилис [

NAME] => Сифилис [PICTURE] => [

PICTURE] => [LEFT_MARGIN] => 17 [

LEFT_MARGIN] => 17 [RIGHT_MARGIN] => 18 [

RIGHT_MARGIN] => 18 [DEPTH_LEVEL] => 3 [

DEPTH_LEVEL] => 3 [DESCRIPTION] => [

DESCRIPTION] => [DESCRIPTION_TYPE] => text [

DESCRIPTION_TYPE] => text [SEARCHABLE_CONTENT] => СИФИЛИС [

SEARCHABLE_CONTENT] => СИФИЛИС [CODE] => [

SOCNET_GROUP_ID] => [LIST_PAGE_URL] => /prod/index.php [

LIST_PAGE_URL] => /prod/index.php [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2325 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2325 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

EXTERNAL_ID] => [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) [PATH] => Array ( [0] => Array ( [ID] => 2316 [

ID] => 2316 [CODE] => root_ifa [

CODE] => root_ifa [XML_ID] => [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => [

IBLOCK_SECTION_ID] => [SORT] => 100 [

SORT] => 100 [NAME] => Иммуноферментная диагностика [

NAME] => Иммуноферментная диагностика [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 1 [

DEPTH_LEVEL] => 1 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2316 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2316 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) [1] => Array ( [ID] => 2324 [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2316 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2316 [SORT] => 900 [

SORT] => 900 [NAME] => ИППП [

NAME] => ИППП [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 2 [

DEPTH_LEVEL] => 2 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2324 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2324 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) [2] => Array ( [ID] => 2325 [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2324 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2324 [SORT] => 1000 [

SORT] => 1000 [NAME] => Сифилис [

NAME] => Сифилис [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 3 [

DEPTH_LEVEL] => 3 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2325 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2325 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) ) ) [SECTIONS_COUNT] => 0 )

РекомбиБест антипаллидум-IgG (комплект 2)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител класса IgG к Treponema pallidum.

Срок годности: 12 месяцев

РекомбиБест антипаллидум-суммарные антитела (комплект 3/авто)
(Для автоматических анализаторов)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к Treponema pallidum.

РекомбиБест антипаллидум-суммарные антитела (комплект 1)

РекомбиБест антипаллидум-суммарные антитела (комплект 3)

РекомбиБест антипаллидум-суммарные антитела (комплект 2)

РекомбиБест антипаллидум-суммарные антитела (комплект 4)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к Treponema pallidum.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител класса IgM к Treponema pallidum.

Набор реагентов для подтверждения наличия антител к Treponema pallidum методом иммунного блоттинга.

ЛюмиБест антипаллидум (комплект 1)

ЛюмиБест антипаллидум (комплект 2)

Набор реагентов для выявления антител к Treponema pallidum методом иммунофлюоресценции.

Набор реагентов для выявления антител к Treponema pallidum в реакции гемагглютинации.

Набор реагентов для определения ассоциированных с сифилисом антител к кардиолипину в реакции преципитации.

Набор для внутрилабораторного контроля качества ИФА "Сыворотка, содержащая антитела к Treponema pallidum".

Антипаллидум-контрольная панель сывороток

Набор образцов сывороток, содержащих и не содержащих антитела к Treponema pallidum.

Что такое ИФА на сифилис

ИФА на сифилис — доступный и высоко информативный тест

ИФА — это иммуноферментный анализ, применяющийся в качестве высокочувствительного теста в диагностике различных патологий, в том числе сифилиса. Позволяет выявить заболевание и максимально точно определить его стадию.

Сифилис зарождается при проникновении в организм бактерии Treponema pallidum (Трепонема бледная). Через 2 — 4 недели на кожных покровах образуется твёрдый шанкр в локализации, где произошло внедрение, чаще всего характерная для сифилиса папула образуется на половых органах, что означает начальный этап первичного сифилиса. По мере развития заболевания папулы преобразуются в язвы, а затем в большинстве случаев исчезают, что даёт пациенту ложную надежду на самоизлечение. Но латентный период переходит в стадию вторичного сифилиса, при этом трепонемы распространяются уже по всему организму, проникая в ткани и органы. На коже и слизистых оболочках образуются множественные высыпания. При отсутствии лечения наступает следующий этап — третичный сифилис с формированием гумм и поражением ЦНС, сердца, костной ткани, ЖКТ, ротовой полости и других органов.

Выявление антител подтверждает инфицирование

ИФА определяет первичный, вторичный, третичный (чаще всего только на начальном этапе), врождённый, рецидивный и латентный сифилис. Суть метода заключается в обнаружении антител, которые организм вырабатывает в ответ на внедрение трепонемы. На начальном этапе болезни образуются антитела класса М, через несколько недель к ним присоединяются иммуноглобулины класса G. Концентрация тех или иных антител меняется в зависимости от этапа развития сифилиса, что позволяет определить стадию болезни. При выполнении ИФА используется истинная трепонема бледная либо её антигены, поэтому тест относится к трепонемным анализам.

Преимущества и недостатки метода

Любой метод исследования не лишен недостатков

Ранее в диагностике сифилиса применялись различные методы, такие как: РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), RW (реакция Вассермана), МР (микрореакция преципитации), РСК (реакция связывания комплемента) и другие тесты. Разнообразие анализов в качестве отборочных тестов и отсутствие единой системы нередко приводило к путанице, а в результате — к негативным последствиям, например, когда донор с ложноотрицательным результатом становился посредником в заражении реципиентов. С 2006 года тестирование стало более стандартизированным, ИФА был признан одним из наиболее эффективных методов диагностики и используется в настоящее время в качестве проверочного теста при обнаружении положительного результата нетрепонемного анализа.

Нетрепонемные тесты являются скриннинговыми

Теперь нетрепонемные анализы используются для выявления возможного заражения сифилисом у всех групп населения, то есть являются скрининг-тестами. При сомнительном либо положительном результате назначается ИФА либо иной трепонемный анализ. ИФА стал одним из ведущих тестов на сифилис благодаря своим преимуществам:

высокая чувствительность, позволяющая выявить антитела к трепонеме в очень низкой концентрации;
высокая специфичность достигается за счёт использования антигенов трепонемы бледной;
объективность результатов благодаря автоматическому учёту;
лёгкость постановки реакции осуществляется благодаря полной комплектации наборов для диагностики;
универсальность теста: может применяться для профилактического обследования населения, для диагностики всех стадий болезни и проверки сомнительных результатов.

Антитела к Treponema pallidum схожи на некоторые виды иммуноглобулинов, образующихся при иных видах инфекции, поэтому несмотря на специфичность ИФА ложноположительные результаты могут выявляться в небольшом количестве. Ещё один недостаток ИФА заключается в том, что по мере развития болезни число антител снижается, что может привести к ложноотрицательному результату.

Показания к проведению исследования.

Период беременности — показание для проведения анализа

ИФА проводится как подтверждающий тест после нетрепонемного анализа, но может выступать и в качестве отборочного анализа. Назначается в следующих случаях:

плановое тестирование при устройстве на некоторые виды работ;
плановое выявление риска инфицирования;
госпитализация, предоперационный период;
донорство;
беременность;
обследование при симптомах сифилиса.

Заподозрить сифилис можно по специфичному признаку — образованию твёрдого шанкра, а также болевым ощущениям в суставах и костях, отёчности половых органов, повышению температуры тела до 38 °С, увеличению лимфоузлов. В качестве профилактики рекомендуется проходить исследование регулярно при активной сексуальной жизни со сменой партнёров.

Подготовка к исследованию

В лихорадочный период стоит воздержаться от теста

Для минимизации риска получения ложного результата следует выполнять правила.

Образец крови сдаётся на голодный желудок, в зависимости от лаборатории период голода должен составлять от 4 до 12 часов.
В предыдущие сутки исключается алкоголь и жирная пища, курение ограничивается минимум за час до исследования.
Накануне анализа пить можно только чистую воду, не допускается употребление соков, кофе, лекарственных препаратов.
Все иные исследования и медицинские манипуляции проводятся после сдачи теста.
Не следует сдавать анализ, если в предыдущие дни отмечалось лихорадочное состояние либо проводилась вакцинация.
Женщинам не рекомендуется проходить тест в период менструации.

Расшифровка результатов

Положительный результат свидетельствует о наличии вируса

наличие инфицирования трепонемой бледной;
ложноположительный результат при наличии иных факторов;
последствия вылеченного ранее сифилиса.

отсутствие заражения;
инкубационный (ранний первичный) период сифилиса;
поздний период, в том числе поздние этапы развития третичного сифилиса.

Ложноположительный результат и его причины

Ложноположительный тест может быть при сахарном диабете

Treponema pallidum является спирохетой, содержащей 42 семейства генов, 17% из них аналогичны белкам иных видов бактерий, что провоцирует в небольшом количестве случаев положительный результат при наличии заражения другими микроорганизмами. Например, при ряде аутоиммунных заболеваний выявляются антифосфолипидные антитела, схожие с антителами при сифилисе. На рубеже XXI века было установлено, что в данном случае разница между антителами заключается в факторе зависимости, при аутоиммунных болезнях антитела зависимы от p2-гликопротеина-1, при сифилисе — не зависимы. Но на сегодняшний день вопрос о возникновении ложноположительных реакций остаётся открытым, так как причина таких результатов не всегда ясна.

По статистике чаще всего ложноположительные результаты проявляются в следующих случаях:

гепатиты;
лепра;
инфаркт миокарда;
интоксикация;
заболевания соединительной ткани;
аутоиммунные патологии;
сахарный диабет;
беременность;
период менструации;
поствакцинальный период.

Трепонема имеет сходство с другими возбудителями

Treponema pallidum является не единственным видом трепанем, к патогенным возбудителям относятся и другие спирохеты: Treponema pertenue (возбудитель явса), Treponema bejel (возбудитель беджеля), Treponema carateum (возбудитель пинты) и многие другие. При микроскопическом осмотре они мало отличаются от бледной трепонемы, а антитела против них схожи на иммуноглобулины при сифилисе.

Положительный результат может отражать наличие болезни в прошлом, так как иммуноглобулины класса G способны задерживаться в кровотоке годами.

Ложноотрицательный результат и его причины.

В инкубационном периоде результат может быть отрицательным

На начальном этапе болезни ИФА показывает отрицательный результат, этот период является инкубационным, когда первичный сифилис ещё не наступил, и отсутствуют характерные признаки болезни. Инкубационный период по сравнению с данными по инфицированию сифилисом середины XX века увеличился на 7 — 10 дней, в настоящее время составляет около 3 недель. Это означает, что после проникновения трепонемы в организм, ложноотрицательный результат будет выявляться на протяжении 3-х, а иногда и более недель.

Третичный сифилис при отсутствии терапии обычно развивается через 3 — 5 лет с момента инфицирования, в некоторых случаях болезнь может проявиться через 10 — 15 лет на фоне бессимптомного протекания и перехода сифилиса из одной стадии в другую. К этому времени число антител значительно снижается или они отсутствуют вовсе, что приводит к ложноотрицательному результату. По некоторым данным на некорректный ложный итог могут повлиять различные инфекционные заболевания, сахарный диабет, приём некоторых антибиотиков.

Г.А. Киселева, В.Н. Беднова, Г.А. Дмитриев

Отдел микробиологии Центрального кожно-венерологического института Минздрава РФ, Москва

Показано значение иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса. Изложены принцип иммуноферментного анализа и схемы его проведения в зависимости от класса выявляемых противотрепонемных антител. Указаны типы иммуноферментных тест-систем по антигену . Дана оценка результатов при проведении иммуноферментного анализа, в частности, для положительных образцов сывороток крови приведена количественная оценка результатов по титру и коэффициенту позитивности. Обозначены отечественные иммуноферментные тест-системы, разрешенные к применению в практике здравоохранения и находящиеся на разных стадиях внедрения.

В лабораторной диагностике сифилиса ведущее место занимает серодиагностика. В нашей стране согласно Приказу Минздрава СССР N 1161 от 2 сентября 1985 г. "О совершенствовании серологической диагностики сифилиса" для серодиагностики сифилиса используются микрореакция (МР) преципитации с кардиолипиновым антигеном - отборочный тест; реакция связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами - диагностический тест; реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ) и реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - специфические тесты. Однако МР и РСК недостаточно чувствительны при ранних и поздних формах заболевания, а также они чаще дают ложноположительные результаты. Для РИТ и РИФ используется антиген из патогенных бледных трепонем ; эти реакции технически сложны, поэтому их применение ограничено рамками централизованных лабораторий.

В последние десятилетия в ЦКВИ Минздрава РФ и ряде производственных предприятий разработаны методики постановки иммуноферментного анализа (ИФА), который является специфическим тестом на сифилис [1 - 5].

Метод ИФА - высокочувствителен и специфичен, он рекомендуется для диагностики всех форм сифилиса и распознавания ложноположительных результатов, полученных в других серологических тестах. Преимуществом ИФА является то, что будучи специфической реакцией он с успехом может использоваться и как скрининг-тест при массовых обследованиях на сифилис благодаря возможности автоматизации постановки и учета результатов реакции [6 - 8].

Принцип ИФА заключается в соединении комплекса антиген - антитело с конъюгатом, меченным ферментом, выявляемым с помощью субстратной смеси. В настоящее время в нашей стране тест-системы ИФА разрабатываются по трем схемам проведения реакции.

Первая схема: на твердофазном носителе (чаще лунки полистиролового планшета) фиксируется антиген возбудителя сифилиса, после чего он инкубируется с испытуемой сывороткой или плазмой крови. При наличии в этом материале от пациентов противотрепонемных антител происходит их связывание в комплекс антиген - антитело (1-я фаза реакции). После удаления несвязавшихся иммуноглобулинов следует инкубация с меченными ферментом антителами к иммуноглобулинам человека (конъюгат), в ходе которой на поверхности носителя происходит присоединение к имеющимся комплексам антиген - антитело антител, меченных ферментом (2-я фаза). После удаления несвязавшегося конъюгата в ходе инкубации с раствором субстрата (в случае использования пероксидазного конъюгата это ортофенилендиамин, 5-аминосалициловая кислота или тетраметилбензидин в сочетании с перекисью водорода) происходит взаимодействие фермента с субстратом, в результате чего развивается цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанных сывороточных антител (3-я фаза). Результат реакции оценивается спектрофотометрически с выводом цифровых данных, что исключает субъективность оценки, или визуально, что может быть полезно при отсутствии в лабораториях соответствующего оборудования. По такому принципу в настоящее время построено большинство тест-систем ИФА для диагностики сифилиса.

Вторая схема - ИФА с фиксированными антителами, или "ловушка для антител". Здесь на твердофазном носителе фиксируются афинно очищенные антитела к определенному классу иммуноглобулинов (M, C или A), которые находятся в испытуемых сыворотках крови (1-я фаза реакции). Образование комплекса антитело - специфический иммуноглобулин выявляют с помощью конъюгата, состоящего из антигенов бледной трепонемы, меченных ферментом (2-я фаза). При инкубации с субстратом (3-я фаза) в случае наличия сифилитических антител в испытуемой сыворотке или плазме крови наступает окрашивание раствора. В нашей стране разрабатываются подобные тест-системы для выявления противотрепонемных IgM.

Третья схема ИФА используется в тест-системах для выявления суммарных антител, специфических для определения антигена, независимо от их класса. Ее суть заключается в том, что специфические сывороточные антитела одновременно взаимодействуют с антигеном, зафиксированным на твердофазном носителе, и с тем же антигеном, меченным ферментом, при совместной инкубации сыворотки крови и конъюгата (1-я фаза реакции). Наличие фермента в образовавшемся комплексе определяют с помощью субстрата (2-я фаза).

Результаты ИФА при использовании всех тест-систем с автоматическим учетом регистрируют на спектрофотометре для планшет немедленно после остановки реакции с измерением оптической плотности (ОП) раствора субстрата при длине волны 492 нм. Выведение спектрофотометра на нулевой уровень ("бланк") осуществляют по воздуху. Учет результатов реакции проводят согласно методике и цифровым данным, изложенным в инструкции по применению, имеющейся в каждом используемом наборе. При автоматическом учете результатов реакции по величине цифровых показателей ОП в лунках с испытуемыми образцами судят о концентрации специфических антител в исследуемой сыворотке крови. В связи с этим данный метод оценки результатов называют количественным. Образец сыворотки крови учитывают как положительный, если значение ОП данного образца выше критического уровня (ОП_крит), вычисляемого по формуле при осуществлении каждой постановки реакции или иным способом в соответствии с инструкциями по применению.

К сожалению, при учете результатов реакции все тест-системы ИФА невозможно привести к единому стандарту. Один и тот же образец может давать в разных тест-системах совершенно иной уровень окрашивания раствора субстрата. Это зависит от конструкции самой тест-системы, используемого антигена, концентрации конъюгата и др., а также от величины ОП_крит. Поэтому более точной оценкой результатов ИФА является титр противотрепонемных антител для каждого положительного образца. С целью определения титра производят последовательные двукратные разведения испытуемой сыворотки крови. За титр принимают наибольшее разведение сыворотки крови, дающее положительный результат. Титр является количественным показателем уровня специфических антител в данном образце и степени его позитивности. Это имеет особое значение при оценке эффективности противосифилитического лечения, но следует учитывать, что повторное исследование сыворотки крови следует проводить с той же тест-системой.

При применении тест-системы с визуальным учетом результатов также рекомендуется определение титров противотрепонемных антител в резко положительных (4+) образцах сыворотки. Титром считается последнее разведение сыворотки крови, с которым получен слабоположительный (2+) результат.

Недостатком количественного метода исследования с целью определения титра антител в сыворотке крови является его неэкономичность. В этой связи АО "Вектор-Бест" предлагает другой критерий для характеристики концентрации антител - коэффициент позитивности (КП), равный отношению оптической плотности, полученной для каждого образца, к критической оптической плотности: КП=ОП/ОП_крит.

Определения КП целесообразно проводить при выяснении динамики выработки антител у пациента в процессе наблюдения за ним после лечения сифилиса, при этом обязательно нужно использовать ту же тест-систему, что и до лечения больного. Эта методика не требует финансовых затрат и дает представление об эффективности лечения.

Как при визуальном, так и при спектрофотометрическом учете результатов ИФА бывают сомнительные случаи, которые при автоматическом учете располагаются в "серой зоне" (интервал от ОП_крит - 10% до ОП_крит + 10%). Те значения ОП, которые лежат выше этой зоны, соответствуют положительному результату, а те, которые находятся ниже - отрицательному. Образцы с сомнительным результатом подлежат повторному исследованию.

В настоящее время ряд предприятий осуществляет производственный выпуск оригинальных тест-систем ИФА на сифилис в виде многокомпонентных наборов, содержащих все реагенты, необходимые для проведения реакции, и инструкцию по их применению.

В зависимости от используемых антигенов все тест-системы ИФА для выявления противотрепонемных антител разделяются на:

1) лизатные (первое поколение), в которых в качестве антигена, иммобилизованного на твердой фазе или входящего в состав конъюгата, используется нативный антиген (лизированный или обработанный ультразвуком возбудитель инфекции, полученный в культуре);

2) рекомбинантные (второе поколение), в которых используются полученные генно-инженерным способом белки - аналоги определенных белковых антигенов возбудителя;

3) пептидные (третье поколение), использующие синтетические фрагменты белков.

Сравнительная характеристика отечественных тест-систем ИФА на сифилис представлена в таблице.

№ по каталогу	Наименование и краткое описание	Количество определений
D-1851	РекомбиБест антипаллидум-IgG (комплект 1)	2x96
D-1852	12x8
D-1854	24x8
D-1855	2x96
D-1857	24x8
D-1856	12x8
D-1875	480
D-1858	12x8
D-1860	24
D-1810	100
D-1812	80
D-1820	100
D-1822	400
D-1838	24 фл. по 0,2 мл
D-1840

Сравнительная характеристика тест-систем ИФА на сифилис
Тест-система	Внедрение в медицинскую практику	Характеристика тест-системы
Тест-система	Внедрение в медицинскую практику	Вид тест-системы по антигену	Класс выявляемых антител	Схема проведения реакции	Число фаз реакции	Учет результатов
"АТ-Трепонема-ИФТС" ГП "Аллерген"	Утверждена	Лизатная	IgM, IgG	1	3	Kачественный
"Люис-Скрин" ЗАО "Ниармедик" и АОЗТ "Диаклон"	"	"	IgM, IgG	1	3	Kачественный и количественный
"РекомбиБест-антипаллидум" АО "Вектор-Бест"	"	Рекомбинантная	IgG	1	3	Kоличественный
"ИФА-антитрепонема" ЗАО "Вектор-Майстар"	"	"	IgG	1	3	"
"ЭKОлаб-антипаллидум-скрин" ТОО "ЭKOлаб"	"	"	IgG	1	3	"
"РекомбиБест-антипаллидум-суммарные антитела" и "РекомбиБест-антипаллидум-суммарные антитела- стрип" АО "Вектор-Бест"	В стадии утверждения	"	IgM, IgG	3	2	"
"ИФА-АНТИ-LUES" НПО "Диагностические системы"	"	Лизатная	IgG	1	3	"
"Рекомбинант-сифилис" ФАО "Ферейн"	"	Рекомбинантная	IgG	1	3	"
"РекомбиБест-антипаллидум-IgM-стрип" АО "Вектор-Бест"	В стадии разработки	"	IgM	2	3	"

Диагностика сифилиса с помощью ИФА представляет собой эффективный метод. Необходимо более широко его использовать в виде скринингового и диагностического тестов на сифилис, но обязательным при этом должно быть высокое качество выпускаемых тест-систем. Недопустимы продажа и использование в медицинской практике тест-систем, не имеющих утвержденной фармакопейной статьи и разрешения Минздрава РФ на их применение в практике здравоохранения. Все утвержденные и рекомендованные к применению тест-системы ИФА прошли государственные испытания в ЦКВИ Минздрава РФ, который в процессе их промышленного выпуска осуществляет систематический контроль качества. К применению в медицинской практике разрешаются тест-системы, чувствительность и специфичность которых не ниже 95%.

При условии выпуска стабильных высококачественных промышленных серий тест-систем, хорошо организованного контроля их качества и снабжения серологических лабораторий дерматовенерологической службы соответствующей аппаратурой возможна замена общепринятого комплекса серологических реакций на сифилис комплексом ИФА с МР преципитации с кардиолипиновым антигеном.

Вестник дерматологии и венерологии, N 1-1998, стр. 39-41.

1. Котровский А.В. Разработка и клиническая оценка методики постановки иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя для серодиагностики сифилиса: Дис. . канд.мед.наук. М 1986;195.

2. Бабий А.В. Клинико-серологическая оценка модифицированного иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса: Дис. . канд.мед.наук. М 1990;127.

3. Беднова В.Н., Дмитриев Г.А., Бабий А.В. и др. Новая тест-система иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса. Вестн дерматол 1995;1:19 - 20.

4. Беднова В.Н., Дмитриев Г.А., Бабий А.В., Милонова Т.И. Новая тест-система ИФА на сифилис. Вестн дерматол 1994;4:51.

5. Сидорова Е.В., Ляхов В.Ф. Значение определения противотрепонемных IgM-антител в серодиагностике сифилиса. Информ. аналит. бюлл. Заболевания, передаваемые половым путем. 1995;4:11 - 13.

6. Овчинников Н.М., Беднова В.Н., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передаваемых половым путем. М:Медицина 1987;303.

Читайте также: