Устойчивость сифилиса во внешней среде

Глава 37. Возбудитель сифилиса

Treponema pallidum - возбудитель сифилиса включен в род Treponema (от лат. trepo - поворачивать, nemo - нить).

Т. pallidum открыта Ф. Шаудином в 1905 г. Большой вклад в изучение сифилиса внесли И. И. Мечников, П. Эрлих, Д. К. Заболотный и др.

Морфология. Т. pallidum - спиралевидная нить размером 8-18 × 0,08-0,2 мкм с мелкими, равномерными завитками. Число завитков 12-14. Концы трепонемы заострены или закруглены. Трепонемы подвижны. Обладают четырьмя видами движения. По Романовскому - Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет, поэтому они называются Т. pallidum - бледная трепонема. Плохое окрашивание объясняется малым содержанием нуклеопротеидов. Спирохеты можно выявлять в препаратах, окрашенных по Бурри, серебрением. Кроме того, их изучают в живом состоянии - в темном поле.

Возбудители сифилиса спор и капсул не имеют (см. рис. 4).

Культивирование. Бледные трепонемы очень требовательны к питательным средам. На искусственных питательных средах они растут только в присутствии кусочков мозга или почек кролика и асцитической жидкости. Растут медленно, 5-12 дней при температуре 35-36° С в анаэробных условиях. Бледные трепонемы хорошо размножаются в курином эмбрионе (поперечным делением). При выращивании на искусственных питательных средах трепонемы теряют вирулентность. Такие культуры называются культуральными. Культуры, выращенные в курином эмбрионе, называют тканевыми. Они обычно сохраняют вирулентность.

Ферментативными свойствами трепонемы не обладают. Однако культуральные штаммы различаются между собой по способности образовывать индол и сероводород.

Токсинообразование. Не установлено.

Антигенная структура. Бледная трепонема содержит несколько антигенных комплексов: полисахаридный, липидный и протеиновый. Серогруппы и серовары не установлены.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Бледные трепонемы малоустойчивы. Температура 45-55° С губит их через 15 мин. К низким температурам они устойчивы. При замораживании сохраняются до года. Спирохеты чувствительны к солям тяжелых металлов (ртути, висмута, мышьяка и др.). Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их в течение нескольких минут. Они чувствительны к бензилпенициллину, бициллину и др. Под влиянием некоторых факторов внешней среды и антибактериальных препаратов трепонемы могут образовывать цисты. В такой форме они длительно находятся в организме в латентном состоянии.

Восприимчивость животных. В естественных условиях животные сифилисом не болеют. Однако на обезьянах, как показали И. И. Мечников и Э. Ру, можно воспроизвести клиническую картину сифилиса: на месте введения образуется твердый шанкр. В настоящее время показано, что при заражении кроликов, морских свинок на месте введения или в другом месте на коже образуются язвы. На кроликах путем пассажей можно длительное время сохранять выделенный штамм трепонем.

Источники инфекции. Больной человек.

Пути передачи. Контакт бытовой (прямой контакт), преимущественно половой путь. Иногда сифилис может передаваться через предметы (посуду, белье). От больной сифилисом матери заболевание передается через плаценту ребенку (врожденный сифилис).

Патогенез. Входными воротами являются слизистые оболочки половых путей и ротовой полости.

Первичный период - спирохеты попадают на слизистую оболочку, и после инкубационного периода (в среднем 3 нед) на месте внедрения образуется язва, которая характеризуется плотными краями и дном - твердый шанкр. Образованию твердого шанкра сопутствует увеличение лимфатических узлов. Первичный период продолжается 6-7 нед.

Вторичный период - возбудители сифилиса по лимфатическим и кровеносным путям распространяются по всему организму. При этом на коже и слизистых оболочках образуются розеолы, папулы, везикулы. Продолжительность этого периода - 3-4 года.

Третий период - развивается при нелеченом сифилисе. В этот период в органах, тканях, костях, сосудах образуются грануляционные разрастания - гуммы или гуммозные инфильтраты, склонные к распаду. Этот период может продолжаться несколько лет (в скрытой форме). Больной в этот период незаразен. При нелеченом сифилисе (в некоторых случаях), спустя много лет, может наступить поражение центральной нервной системы: при поражении головного мозга - прогрессивный паралич, при поражении спинного мозга - спинная сухотка. Эти заболевания возникают при локализации трепонем в мозговой ткани, что приводит к тяжелым органическим и функциональным изменениям в организме.

Иммунитет. Естественного иммунитета нет. При заболевании сифилисом развивается "нестерильный" инфекционный иммунитет. Его называют шанкерный, так как при повторном заражении твердый шанкр не образуется, но все последующие периоды развиваются. При сифилисе обнаруживают IgC и IgM, а также реагины IgE, которые в присутствии кардиолипидного антигена связывают комплемент.

Профилактика. Санитарно-просветительная работа, раннее выявление больных сифилисом. Специфическая профилактика. Не разработана.

Лечение. Пенициллин, бициллин, биохинол и др.

1. Опишите морфологию спирохет и методы окраски.

2. Что такое твердый шанкр?

3. Какой материал для исследования Вы будете брать в разные периоды заболевания сифилисом?

4. Каков иммунитет при сифилисе?

Цель исследования: выявление бледной трепонемы и серодиагностика.

1. Содержимое твердого шанкра (первичный период).

2. Содержимое розеол, папул, везикул (вторичный период).

3. Кровь (вторичный, третий и четвертый периоды).

Способы сбора материала

2. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

3. Серологический: 1) реакция Вассермана (РСК);

2) осадочные реакции.

4. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ).

Ход исследования

Реакция Вассермана. Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента (табл. 52). Отличается она тем, что при реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген. Например, липоидный экстракт из бычьего сердца - кардиоантиген. Ввиду неспецифичности антител, реагирующих с этим антигеном, их называют реагинами. Реакция с неспецифическим антигеном объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидными экстрактами, образуют комплекс, который связывает комплемент, и поэтому гемолиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза - положительная реакция - серологически подтверждает диагноз "сифилис". При постановке серологических реакций нужно использовать также специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные.

Таблица 52. Постановка реакции Вассермана

Примечание. 1) ++++ полная задержка гемолиза; - гемолиз; 2) антиген № 1 неспецифический (липоидная фракция бычьего сердца); 3) антигены № 2 и 3 специфические, приготовленные из культур трепонем.

Осадочные реакции. 1. Реакция Кана. Сыворотку больного инактивируют при 56° С 30 мин. К антигену (экстракт липидов бычьего сердца) прибавляют 0,6% холестерина для повышения чувствительности реакции (табл. 53).

Таблица 53. Схема постановки реакции Кана

Учет результата: появление преципитации отмечается как положительная реакция.

2. Реакция Закса - Витебского (цитохолевая осадочная реакция) является модификацией реакции Кана. Авторы применили более концентрированный антиген, к которому прибавлен холестерин, что способствует более быстрому образованию преципитата.

Реакция иммобилизации трепонем (РИТ). Это наиболее специфичная реакция в диагностике сифилиса.

В настоящее время разработана методика этой реакции: взвесь трепонем получают из измельченного яичка кролика, зараженного Т. pallidum, и сохраняют в специальной среде, не угнетающей подвижность трепонем. В пробирку вносят 1,7 мл взвеси тканевых трепонем, добавляют 0,2 мл испытуемой сыворотки, 0,1 мл свежего комплемента.

Контроли: в 1-ю пробирку вместо испытуемой сыворотки вносят сыворотку здорового лица; во 2-ю - наливают инактивированную сыворотку морской свинки. Все пробирки помещают в эксикатор или анаэростат, заполняют их смесью газов (1 объем углекислоты и 19 объемов азота) и ставят в термостат при 35° С. Затем исследуемый материал наносят на стекло и изучают подвижность трепонем в темном поле. Принцип реакции заключается в том, что сыворотка больного сифилисом в присутствии комплемента угнетает движение бледной трепонемы. Определяют процент иммобилизованных трепонем.

Результат считают положительным, если иммобилизованных трепонем выше 50%; слабоположительным - от 30-50%; отрицательным - ниже 20%.

1. Какой материал используют для лабораторной диагностики сифилиса в разные периоды заболевания?

2. Каковы методы лабораторного исследования при диагностике сифилиса?

3. Какими антигенами нужно пользоваться при постановке реакции Вассермана?

4. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции иммобилизации трепонем (РИТ)? Какой материал берут у обследуемого, что в нем определяют?

Сифилис является настоящим бичем современности. Это венерическое заболевание занимает одно из первых мест среди болезней, передающихся половым путем. Возбудителем его является бледная трепонема – представитель спирохет, обладающей хорошей устойчивостью к условиям окружающей среды.

Трепонема паллидум – что это?

Многим известно, что трепонема паллидум – это возбудитель сифилиса, однако что собой представляет этот патоген, известно не всем. Этот спиралевидной формы микроорганизм внешне напоминает штопор, который суживается к концам и имеет широкую среднюю часть. В среднем трепонема состоит из 8–14 равномерных завитков. Оформленного ядра она не имеет: ядерная мембрана полностью отсутствует, а ДНК разделена на хромосомы.

Размножается патоген поперечным делением, с интервалом 30–33 часа. Передвигается трепонема вращением вокруг своей оси. При инфицировании слизистых оболочек организма она словно ввинчивается в них. Происходит это быстро за счет высокой подвижности патогена, поэтому инкубационный период непродолжителен.

Бледная спирохета плохо устойчива к воздействию факторов окружающей среды, поэтому быстро погибает вне организма. Для нормальной ее жизнедеятельности необходимы влажные условия, поэтому единственной средой ее обитания вне органов и тканей человека является вода. Открытые водоемы со стоячей водой нередко содержат данный возбудитель. Однако это не означает, что обычный контакт с подобным источником спирохет приведет к заболеванию.

Стоит отметить, что бытовой сифилис встречается крайне редко и многие специалисты вовсе не верят в возможность его развития. Главным условием для инфицирования является контакт патогена с поврежденной слизистой оболочкой, кожей.

Однозначно сказать, сколько живет вне организма бледная трепонема, сложно. Продолжительность жизни спирохеты во многом определяется условиями окружающей среды, в которую она попадает. Бледная трепонема является возбудителем такого страшного заболевания как сифилис, однако малоустойчива к внешним воздействиям.

После деления новые спирохеты, попав в неблагоприятные условия, погибают в течение нескольких часов. Однако, уже находясь в организме человека, патоген способен длительное время сохранять жизнеспособность. Установлено, что даже после гибели пациента с сифилисом бледные трепонемы сохраняют активность до 96 часов.

Как было отмечено выше, трепонема, возбудитель сифилиса, неспособна долго существовать вне человека. Спирохеты плохо переносят высокие температуры, высушивание. Так, при 55 градусах бледная трепонема погибает уже спустя четверть часа.

Пагубно на патоген воздействуют и антисептические средства:

Трепонема неспособна перенести кипячение, она быстро погибает при подобном способе дезинфекции. Однако микроорганизм устойчив к воздействию низких температур. Проводимые эксперименты подтвердили, что при температуре –78 градусов спирохеты сохраняли жизнеспособность в течение года.

Бледная трепонема – что это за анализ?

Чтобы определить заболевание на ранней стадии, осуществляют определение антител к бледной трепонеме. Для этого исследуют образец крови пациента.

Подобные анализы на антитела к возбудителю сифилиса могут осуществляться по одной из следующих методик:

ДНК трепонемы можно обнаружить и в соскобе элементов сыпи, язвочек или эрозий. Эксудат этих образований обязательно отравляется на обследование при подозрении на сифилис.

Анализы на антитела к бледной трепонеме назначаются в следующих случаях:

• обследование лиц, контактирующих с больным сифилисом;
• наличие сыпи, характерной для сифилиса.

Каким путем передается сифилис?

В подавляющем большинстве случаев инфицирование бледной трепонемой происходит в результате полового акта с больным сифилисом. Человек с данным заболеванием заразен в течение 3–5 лет с момента инфицирования, однако на поздних стадиях сифилиса вероятность заражения низкая.

Среди других способов инфицирования выделяют:

• трансплацентарный – от больной матери ребенку при родах;
• профессиональный – инфицирование медработников при выполнении манипуляций;
• бытовой – через предметы обихода, при пользовании с больным общими средствами гигиены.

В последнее время все большую актуальность приобретает проблема бытовой формы заболевания. Большинство людей слышало о таком способе инфицирования, однако как передается бытовой сифилис – известно не всем. Возможность заражения обусловлена тем, что бледные трепонемы способны сохранять вирулентность в окружающей среде некоторое время.

Самыми заразными биологическими средами в этом плане являются:

• грудное молоко;
• слюна;
• семенная жидкость.

Лечение бледной трепонемы

Для того чтобы излечить сифилис, трепонема должна быть полностью удалена из организма. Лечение проводится антибактериальными препаратами. Трепонема паллидум сохраняет чувствительность к антибиотикам пенициллинового ряда, которые являются препаратом выбора при сифилисе. Схема лечения и дозировка рассчитываются индивидуально, согласно стадии заболевания и форме сифилиса. Лечение активных форм заболевания проводится в условиях стационара, при латентной форме – амбулаторно.

В качестве лекарственных средств используют:

• макролиды: Эритромицин, Кларитромицин;
• цефалоспорины: Цефтриаксон.

Бледная трепонема (Treponema pallidum) является возбудителем сифилиса. Это венерическое заболевание известно с древних времен, однако его возбудитель был открыт только в 1905 году австрийскими учеными Э. Гоффманом и Ф. Шаудином. Его назвали бледной (pallidum) спирохетой.

Специфические признаки сифилиса после манифестного течения самопроизвольно исчезают, а далее вновь появляются, меняя свою окраску. Длительность рецидивирующего течения заболевания протекает около 2-х лет и является важнейшим признаком раннего сифилиса. Сифилиды, лишенные эпителия, содержат большое количество бледных трепонем. С годами заразность больных сифилисом уменьшается.

Бледная трепонема относится к отряду Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae, роду Treponema. Спирохеты обладают уникальным строением и морфологией. Они широко распространены в природе. Это тонкие, довольно длинные, гибкие и подвижные бактерии. Патогенными для человека являются четыре подвида Treponema pallidum:

• Treponema pallidum pallidum вызывает сифилис.
• Treponema pallidum pertenue является причиной фрамбезии (невенерический сифилис, тропическая гранулема).
• Treponema carateum вызывает заболевание пинта.
• Treponema pallidum endemicum является причиной эндемического сифилиса (невенерический сифилис детского возраста, беджел).

Заболевания, вызванные патогенными трепонемами, имеют хроническое волнообразное течение. Сифилис распространен повсеместно, а пинта, фрамбезия и беджел встречаются только в тропических странах и имеют доброкачественное течение.

Рис. 1. Вид бледной трепонемы в электронном микроскопе.

Устойчивость возбудителей во внешней среде

• Бледная трепонема устойчива к низким температурам. До одного года выдерживает замораживание. Хранятся патогенные штаммы возбудителей в бескислородной среде при низких температурах (20 — 70°С) или высушенными из замороженного состояния.
• Трепонемы сохраняют свою вирулентность на предметах окружающей среды до момента высыхания. При температуре до 42°С активность бактерий вначале повышается, а затем они погибают. При нагревании до 60°С трепонемы сохраняют свою активность в течение 15 минут. Более 3-х суток возбудители сифилиса сохраняют свои патогенные свойства в трупном материале.
• Вне организма человека бактерии быстро погибают. При температуре 100°С они погибают мгновенно. Бледные трепонемы чувствительны к дезинфицирующим средствам и некоторым антибиотикам.

Рис. 2. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции.

Возбудители сифилиса в организме больного

В организме человека бледная трепонема паразитирует в тканях, а перемещается по кровяному руслу и лимфатическим сосудам. По окончании инкубационного периода в организме больного отмечаются первичные изменения в виде твердого шанкра.

В этот период бактерии находятся в очагах поражения и тканевой жидкости в спиралевидной форме, а сам больной становится распространителем инфекции. Особенно заразны больные во вторичном периоде — периоде рецидивного сифилиса. Периоды затихания заболевания связаны с тем, что большая часть трепонем находится внутриклеточно (в фагоцитах). В таком состоянии бактерии не способны размножаться и распространяться по организму.

Бледные трепонемы способны укрываться от негативного воздействия факторов окружающей среды, превращаясь в L-формы и цисты, что объясняет хроническое течение заболевания. На поздних стадиях сифилиса заразность больных минимальная. Общее количество возбудителей снижено. Реакция организма на инфекцию ослаблена.

Рис. 3. Микроскопия мазка, приготовленного методом серебрения. Возбудители сифилиса имеют темную окраску. В желтый цвет окрашены клетки инфицированных тканей.

Характеристика возбудителя: внешнее строение

Бледная трепонема по внешнему виду напоминает штопор. Она имеет 8 — 14 равной величины завитков, высота которых уменьшается на концах. Спиралевидная форма возбудителя сохраняется во всех случаях и при любых условиях. Длина микроорганизма составляет от 5 до 15 мкм, ширина — 0,2 мкм.

Рис. 4. На фото возбудитель сифилиса Treponema pallidum (вид в электронном микроскопе).

Концы у большинства трепонем заострены. На них расположены выросты дискообразной формы (блефаропласты) с прикрепленными к ним в количестве 10 — 11 фибриллами.

Фибриллы тянуться вдоль тела трепонемы и обвивают его, обеспечивая бактерии спиралевидную форму. С каждого конца отходит по 2 самостоятельных пучка фибрилл. Они располагаются под наружной стенкой, проходя над цитоплазматической мембраной. Под цитоплазматической мембраной также обнаружены фибриллы. Они более тонкие и многочисленные. Фибриллы наружного пучка обеспечивают трепонеме движение, они в два раза толще. Они представляют собой длинные трубочки, состоящие из белка флагелина, достаточно устойчивого к воздействию ряда ферментов. Фибриллы внутреннего слоя играют роль каркаса.

На одном из концов бактерии имеется два округлых образования (губчатое тело). Оно обеспечивает активное проникновение бактерий в клетки хозяев.

Бледные трепонемы могут осуществлять поступательные (назад и вперед), вращательные, сгибательные, волнообразные (судорожные) и винтообразные движения.

Рис. 5. На фото бледная трепонема (культуральная форма).

Рис. 6. На фото бледные трепонемы с увеличением в 3000 раз (темнопольная микроскопия). Данный вид исследования позволяет регистрировать форму и движение живых бактерий.

Внутреннее строение бледных трепонем (ультраструктура)

Тело бактерии окружено слизевидным бесструктурным веществом (микрокапсулой). Эта мукополисахаридная субстанция защищает трепонемы от фагоцитов и антител. Капсульное вещество продуцируется самой трепонемой.

Цитоплазматическая мембрана бактерий выполняет ряд жизненно важных функций: транспортную, защитную, является местом локализации антигенов и ферментов, она принимает активное участие в делении клетки, L-трансформации и спорообразовании. Цитоплазматическая мембрана имеет трехслойное строение. Ее внутренний слой образует в протоплазматическом цилиндре многочисленные выросты, за счет чего осуществляется активный перенос извне питательных веществ. От состояния цитоплазматической мембраны зависит жизнедеятельность бактерий.

Протоплазматический цилиндр находится под наружной стенкой. Структура цитоплазмы бледных трепонем мелкогранулярная. В прозрачную гиалоплазму погружены гранулы-рибосомы и множество пластинчатых структур. Рибосомы обеспечивают синтез белка в бактериальной клетке. В цитоплазме также присутствует нуклеотид, не имеющий ограничительной мембраны. Он тянется по всей длине протоплазматического цилиндра.

Мезосомы являются производными цитоплазматической мембраны. Они занимают половину или целую ось поперечника трепонемы. Мезосомы снабжают энергией бактериальную клетку в точках усиленного роста при спорообразовании и делении. Их функция аналогична митохондриям. Мезосомы различаются по характеру строения, но количество их всегда очень большое.

Рис. 7. Ультраструктура бледной трепонемы. Мукопротеидный чехол сверху, далее трехслойная клеточная стенка, внутри — цитоплазматическая мембрана и цилиндр с нуклеотидом, мезосомами, рибосомами и другими включениями. На фото хорошо просматриваются фибриллы, идущие вдоль тела бактерии.

Размножение бледных трепонем

Размножение возбудителей сифилиса происходит путем поперечного деления. Деление бактериальной клетки длится около 33 часов и происходит только при температуре около 37 °C. Иногда бледные трепонемы делятся сразу на несколько частей.

Рис. 8. На фото бледные трепонемы.

Формы существования возбудителей сифилиса

В неблагоприятных условиях (воздействие антибиотиков, антител, физических и химических факторов окружающей среды, истощение питательной среды) бактерии трансформируются в L-формы, распадаются на зерна, образуют цисты и кокковые формы. В таких формах трепонемы могут длительно существовать в организме больного, а потом реверсировать, обуславливая рецидив сифилиса.

Бледные трепонемы в L-форме способны проникать в организм человека даже при отсутствии повреждений на коже и слизистых оболочках, проходят через фильтры, которые применяются при обработке кожи.

При заражении цист-формами бактерий отмечается удлинение инкубационного периода, возникновение скрытых форм заболевания и развитие устойчивости к антибактериальным препаратам.

Неблагоприятные условия существования приводят к тому, что бледная трепонема превращается в цисту. Она сворачивается в клубок, а вокруг образуется бесструктурная прозрачная оболочка (чехол), состоящий иногда из нескольких слоев. Все морфологические элементы возбудителя при этом сохраняются. Существование цист покоя объясняет существование скрытых форм заболевания, длительное и вялое течение, устойчивость к антибактериальным препаратам. По мере давности заболевания количество цист увеличивается. Исследователями доказано, что цистообразование — это защитная реакция, обеспечивающая выживание и размножение возбудителей сифилиса.

В L-формы трепонемы превращаются под воздействием целого ряда факторов. Трепонемы приобретают шаровидную форму, из-за блокировки синтеза истончается клеточная стенка, приостанавливается размножение, но сохраняется рост и интенсивность синтеза ДНК. В цитоплазме L-форм бактерий определяется гигантский нуклеотид, внутри которого находится большое количество нитей, содержащих ДНК.

• Спиралевидные формы бледных трепонем преобладают на ранних стадиях сифилиса. В этот период бактерии располагаются внеклеточно, интенсивно делятся, что делает их уязвимым к действию антибиотиков.
• Во вторичном периоде рецидивного сифилиса трепонемы располагаются не только внеклеточно, но и внутри фагоцитов, обнаруживается большое количество цист, более устойчивых к лечению.
• На поздних стадиях заболевания отмечается значительное снижение спиралевидных форм трепонем, увеличение числа цист и L-форм. Общее количество возбудителей снижено. Реакция организма ослаблена.

Рис. 9. Хорошо просматриваются бактерии в мазках, приготовленных методом импрегнации серебром (методика Левадити).

Бледные трепонемы под микроскопом

• Хорошо просматриваются трепонемы с помощью фазово-контрастной (темнопольной) микроскопии. В свежеприготовленном мазке с живыми возбудителями в темном поле видны плавно изгибающиеся спиралевидные бактерии. От сапрофитных спирохет, которые встречаются в полости рта и на слизистых оболочках половых органов, бледные трепонемы отличаются равномерностью завитков, они более тонкие, осуществляют плавные волнообразные движения и способны сгибаться под углом.
• Хорошо просматриваются бактерии в мазках, приготовленных методом импрегнации серебром (методика Левадити). Трепонемы окрашиваются в черный цвет и хорошо видны на фоне окрашенных в желтый цвет клеток исследуемых тканей. Серебро осаждается на бактериальных клетках, увеличивая их диаметр.
• Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции. Бактерии в мазке, обработанные люминесцирующей сывороткой, светятся в ультрафиолетовых лучах люминесцентного микроскопа.

Рис. 10. На фото бледные трепонемы под микроскопом: импрегнация серебром (фото слева), микроскопия в темном поле (фото посередине), реакция иммунофлюоресценции (фото справа).

Культуральные свойства возбудителей сифилиса

Бледные трепонемы являются облигатными анаэробами — живут и растут в условиях отсутствия молекулярного кислорода. Бактерии практически не растут на искусственных питательных средах. Для их выращивания используются среды, содержащие лошадиную и кроличью сыворотки, на которых бледные трепонемы растут медленно и теряют вирулентные свойства. Рост происходит при температуре 35 0 С. Колонии возбудителей сифилиса появляются на 3 — 5 (на некоторых средах на 7 — 9) сутки.

Рис. 11. На фото рост колоний бледных трепонем.

Биохимические свойства бледных трепонем

Биохимические свойства возбудителей сифилиса изучены мало. Ряд штаммов продуцируют сероводород и индол. Некоторые штаммы разжижают желатин, другие — глюкозу, сахарозу, галактозу и мальтозу с образованием кислоты. Некоторые штаммы разлагают только глюкозу. Несколько штаммов возбудителей подвергают гемолизу эритроциты человека.

Рис. 12. На фото бледные трепонемы. Вид в электронном микроскопе.

Возбудителем сифилиса является бледная трепонема (спирохета), открытая в 1905 г. Шаудинном и Гофманом. Согласно классификации Берджи, она относится к отряду Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae Schaudinn, роду Treponema Schaudinn.

Название “бледная трепонема” она получила из-за слабой способности воспринимать анилиновые краски. Микроорганизм имеет спиралевидную форму, (длина его 4-14 мкм, толщина 0,2-0,25 мкм. Восстанавливает нитрат серебра в металлическое серебро, которое откладывается на поверхности микроба и делает его видимым в тканях: при окраске по Морозову трепонемы выглядят коричневыми или почти черными. При окраске по Романовскому-Гимзе приобретают бледно-розовый цвет. Трепонема очень подвижна, для нее характерно вращательное, поступательное, толчкообразное, маятникообразное (качательное), сгибательное, контрактивно-судорожное движение. Плавное поступательное движение бледной трепонемы является важным дифференциально-диагностическим признаком.

Бледная трепонема покрыта снаружи слизистым полисахаридно-липоидным чехлом, который защищает ее от воздействия антител и антибиотиков. Концы трепонемы заострены, не всегда одинаковы, имеют головчатые (пузырчатые) образования (блефаропласты), к которым прикреплены фибриллы — органы движения. Помимо чехла имеется наружная стенка, а под ней цитоплазматическая мембрана, состоящие каждая из трех слоев, различных по химическому составу. Между ними находятся поверхностные и глубокие фибриллы. В составе цитоплазмы имеются рибосомы, мезосомы, вакуоли и лизосомы. Мезосомы являются аналогами митохондрий и выполняют дыхательную функцию, участвуют в обмене и делении трепонемы.

При неблагоприятных условиях существования (воздействие антибиотиков, недостаток питания и др.) трепонемы образуют “формы выживания” - цисты и L-формы. Образование цист происходит путем свертывания трепонем в клубок и покрытия их общей муциноподобной оболочкой, ие пропускающей лекарственных веществ. В форме цисты спирохеты могут существовать длительное время, не оказывая, по-видимому, на организм человека выраженного патологического действия. Возникает условие равновесия между макро- и микроорганизмом. При ослаблении защитных сил организма происходит реверсия цист.

В связи с этим лечение сифилиса должно быть массивным, с применением больших доз пенициллина, так как низкие его концентрации способствуют возникновению устойчивых форм трепонем к лекарственному препарату и обусловливают их переход в цисты и L-формы. Последние также весьма устойчивы к воздействию антител и лечебных препаратов. При реверсии возбудитель принимает обычную спиралевидную форму. Наличием в организме бледных трепонем в L-форме некоторые авторы пытаются объяснить длительное бессимптомное течение сифилиса. Предполагается еще существование зернистых, невидимых фильтрующихся форм бледных трепонем.

Бледная трепонема размножается путем поперечного деления (через 30-33 ч). Не исключены и другие способы ее размножения. Получение культуры бледной трепонемы возможно, но для этого необходимы сложные условия, а культуральные трепонемы (более толстые и грубые) быстро теряют морфологические и патогенные свойства. Вместе с тем антигенные свойства их очень близки. Оптимальная температура роста 35° С.

Бледная трепонема не является однородным антигеном. Она содержит термолабильный белковый (разрушается при нагревании до 76-78 °С) и термостабильный полисахаридный (не разрушается при нагревании до 100 °С) антигены, а также два липоидных антигена, идентичных кардиолипиновому, и липоидный, отличающийся от предыдущего серологически и химически. Фагоцитированные трепонемы остаются большей частью жизнеспособными, т. е. фагоцитоз у них незавершенный. Иногда трепонемы в лейкоцитах заключены в полимембранную фагосому.

Во внешней сухой среде вне организма бледная спирохета быстро погибает, однако во влажной атмосфере она долго сохраняет подвижность (во влажных носовых платках — в течение 11-100 ч, в капле — 1-5 сут, в трупном материале — 48 ч). Описаны заражения людей от трупов. При лечении пенициллином бледная трепонема из сифилидов исчезает через 10-11 ч, бициллином — через 5-8, бийохинолом — через 92 ч. На трепонему губительно действуют высыхание и высокая температура. При нагревании до 60 °С она гибнет в течение 15 мин, при 100 °С — моментально. В то же время при низкой температуре она хорошо сохраняется. По данным Тернера, бледная трепонема при температуре −70 °С сохраняет вирулентность в течение 9 лет. Цитратная кровь, содержащая бледные трепонемы и хранящаяся при температуре 4—6 °С, остается заразной для кролика в течение 3 дней. Вне организма трепонема весьма чувствительна к различным химическим соединениям она моментально погибает под влиянием сулемы (1:1000), 0,5%-ного раствора фенола, 0,05%-ного раствора хлоргексидинбиглюконата, быстро гибнет при контакте с 5%-ным раствором гидрокарбоната натрия, этиловым спиртом (70%-ным), теряет подвижность в мыльной пене.

Антигены трепонем плохо изучены. Установлено, что в составе трепонем имеются белковые, полисахаридные и липидные комплексы. Антигенный состав культуральных и тканевых трепонем настолько близок, что антигены, приготовленные из культуральных трепонем, можно использовать для РСК при диагностике сифилиса. В организме человека трепонемы стимулируют выработку антител, которые вызывают иммобилизацию и гибель живых подвижных трепонем, связывают комплемент в присутствии суспензии T. pallidum или родственных спирохет, а также выявляются в непрямой РИФ. Возбудитель сифилиса не образует экзотоксинов.

До настоящего времени пока нет такого метода, при котором бы удавалось стабильно получать культуры трепонем. Патогенные для человека бледные трепонемы никогда не удавалось культивировать на искусственных питательных средах, в куриных эмбрионах или культурах клеток. Те разновидности их штаммов, которые растут в анаэробных условиях, являются, вероятно, сапрофитными спирохетами, близкими возбудителю сифилиса. Физиология их остается мало изученной. Трепонемы относятся к хемоорганотрофам, не имеют каталазы и оксидазы, могут сбраживать углеводы. Они растут на очень богатых средах, содержащих до 11 аминокислот, витамины, соли, сывороточный альбумин. Наилучшим способом выращивания патогенных спирохет является заражение кролика в яичко (экспериментальный орхит).

Вы читаете пособие по сифилису, написанное профессором БГМУ Н. З. Яговдиком.