Вич генотип кач кол

Все инфекционные заболевания нуждаются в своевременной точной диагностике. ВИЧ и СПИД — не исключение. Поставленный вовремя диагноз позволяет принять необходимые терапевтические меры и продлить пациенту жизнь. Как же определить наличие или отсутствие заболевания с максимальной точностью?

Диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа

Сегодня, наверное, каждый человек слышал о ВИЧ и СПИДе и знает, что эти заболевания очень опасны, что передаются они в основном во время незащищенного барьерным способом полового акта. А между тем, первые случаи инфицирования были зафиксированы не так давно — в 1978 году (у нескольких мужчин-гомосексуалов из США и Швеции). Сам вирус был открыт в 1983 году.

В первую очередь ВИЧ атакует и разрушает лимфоциты (Т-лимфоциты, или хелперы). Они отвечают за иммунный ответ организма, распознавание и уничтожение инфицированных клеток. В результате заболевший теряет способность противостоять инфекциям.

У здорового человека количество Т-лейкоцитов составляет 1200–3000 клеток/мкл. После ВИЧ-инфицирования число клеток снижается. При этом заболевший продолжает чувствовать себя нормально. Данный период болезни может длиться на протяжении многих лет. Но наступает момент, кода количество клеток-хелперов достигает критической отметки. Это может проявиться следующими проблемами:

• кандидоз полости рта и ЖКТ;
• опоясывающий лишай (герпес);
• неделями не спадающая высокая температура;
• ночная потливость;
• диарея;
• частые ОРЗ и ОРВИ и др.

Если число Т-лимфоцитов снижается до 200 клеток/мкл, то диагностируют СПИД. Организм больного в таком состоянии не может сопротивляться даже простейшим микроорганизмам — от дрожжей до вирусов. У здорового человека к ним развивается резистентность, тогда как страдающего СПИДом они могут довести до летального исхода. Чаще всего возбудителями смертельных заболеваний становятся токсоплазма, криптоспоридии, цитомегаловирус. Кроме того, снижение лимфоцитов провоцирует образование злокачественных опухолей.

При отсутствии должного лечения пациенты с ВИЧ-инфекцией не переступают порог выживаемости в 10 лет. Грамотно и своевременно назначенная терапия затормаживает развитие болезни, в разы увеличивая продолжительности жизни больного. ВИЧ-положительный человек в таком случае может дожить до преклонных лет.

Основной метод диагностики инфекции — анализ крови. С момента заражения до появления антител в крови проходит 1–3 месяца.

Разные виды лабораторных анализов венозной крови, взятой натощак, позволяют обнаружить наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции в крови. Рассмотрим виды этих исследований.

• Скрининговое исследование иммуноферментными (ИФА) методами представляет собой выявление антител к антигенам ВИЧ-типов: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Уже со второй недели после инфицирования могут появиться антитела, хотя они способны обнаружиться и позже — через несколько месяцев. В последующее время количество антител растет и сохраняется в крови пациента. При наличии антител в большинстве случаев клинические признаки ВИЧ не проявляются 2–10 лет.
  Отметим, что данный тест не всегда точен, возможен ложноположительный результат. В любом случае при положительном результате назначается повторный анализ через 2-3 недели.
• Верификационное исследование методом иммуноблота проводится, если описанный выше анализ дважды дал положительный результат. Данное исследование сочетает анализ ИФА и метод электрофореза, который позволяет разделить по молекулярному весу входящие в состав вируса антигены. Данное исследование имеет максимальную точность.

• Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени дает возможность определить концентрацию вирусной РНК в плазме крови. Тест проводят в целях ранней диагностики возможного инфицирования после случая повышенного риска (на 7–10 день после предположительного инфицирования).
  Также данный анализ назначается для оценки эффективности применяемой терапии, для решения вопроса о начале антиретровирусной терапии, о проведении кесарева сечения у инфицированных беременных за 4 недели до родов.
  Такое исследование крови проводят новорожденным детям инфицированных матерей. Полученный дважды положительный ответ говорит о заражении ребенка.

Поводом пройти исследование на ВИЧ-инфекцию может стать множество причин. Тест необходим перед оперативным вмешательством, в случае планирования беременности, риск приобретения данной инфекции несут случайные половые контакты. Отдельная категория граждан (врачи, педагоги, работники пищевых производств, продавцы пищевой продукции и др.) обязана проходить тест в рамках оформления медицинской книжки, являющейся обязательным условием допуска к работе.

Что касается тревожных симптомов, то обычно врачи назначают анализ на ВИЧ при следующих состояниях:

• Резкая потеря веса.
• Диарея, длящаяся более трех недель.
• Лихорадка неясного происхождения.
• Увеличение лимфатических узлов в разных областях.
• Лейкопения и лимфопения.
• Тяжелые инфекционные заболевания: пневмония, кандидоз внутренних органов, туберкулез, манифестный токсоплазмоз, частые случаи обострения герпесвирусной инфекции и другие.

Специальной подготовки перед сдачей венозной крови не требуется. Единственное — это воздержание от приема пищи в течение 8–10 часов. Также накануне рекомендуется избегать физических и эмоциональных нагрузок, отказаться от употребления алкоголя.

Вся процедура забора венозной крови занимает не более пяти минут. После взятия материала место укола дезинфицируют и заклеивают специальным пластырем. Так как анализ берется натощак, во избежание головокружения после забора крови следует выпить сладкий чай или съесть кусочек шоколада.

В государственных поликлиниках, чтобы получить направление на анализ, придется сначала посетить участкового терапевта. В частных же медицинских центрах нужно просто заполнить заявку на анализ. Для этого в клинике попросят предъявить паспорт или какой-либо другой документ, удостоверяющий личность (миграционная карта, водительские права, военный билет и т. д.). Документ позволит идентифицировать результаты анализа. Впрочем, тест на ВИЧ можно сделать и анонимно. В этом случае заявке и образцу крови, который отправляется на анализ в лабораторию, присваивается номер, известный лишь пациенту и медицинскому персоналу. Однако результаты анонимных исследований не могут быть представлены для госпитализации, в женские консультации и не могут быть зарегистрированы в ОРУИБ (Отдел регистрации и учета инфекционных болезней).

Следует помнить, что интерпретировать результаты исследования и поставить точный диагноз способен только врач. Полученный результат ни в коем случае не может быть поводом для самолечения, к тому же одни и те же результаты у разных пациентов могут говорить о противоположной клинической картине.

Показывает объем выявленной РНК вируса иммунодефицита человека, выраженный в C/ml (копии/мл). Интерпретировать результаты следует следующим образом:

1. РНК не выявлена, либо значение ниже предела чувствительности метода (20 копий/мл).
2. Меньше 20 копий/мл — РНК выявлена в концентрации на пределе чувствительности метода, характеристика с удовлетворительной точностью невозможна.
3. От 20 до 10 6 копий/мл — полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен.
4. Больше 10 6 копий/мл — РНК выявлена в указанной концентрации, выходящей за верхний предел линейного диапазона.

Анализы на ВИЧ можно сдать в частных клиниках. В этом случае стоимость скринингового исследования иммуноферментными методами в среднем составит от 400 до 800 рублей. Срок выполнения исследования — один рабочий день, хотя возможна и срочная диагностика, в таком случае ответ будет получен через 2 часа.

Верификационное исследование методом иммуноблота обойдется в 3000–5000 рублей. Результаты станут известны через 3–7 рабочих дней.

Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени представляет собой более сложный анализ, поэтому его стоимость намного выше — она составляет 10 000–12 000 рублей. Результаты исследования готовятся в среднем 10–14 рабочих дней.

Согласно законодательству все иммунные анализы в государственных медицинских учреждениях проводятся бесплатно. В обязательном порядке проверку на ВИЧ-инфекцию проходят беременные женщины, пациенты, готовящиеся к оперативному вмешательству и госпитализации. В остальных случаях направление на данное исследование назначается по усмотрению врача.

Пройти анализ на ВИЧ-инфекцию сегодня не составляет сложности. Сама процедура практически безболезненна и занимает считанные минуты. Современное оборудование и методики проведения теста позволяют получить максимально точные результаты.

Во­пре­ки не­ко­то­рым мне­ни­ям, ВИЧ не яв­ля­ет­ся при­го­во­ром. Ин­фи­ци­ро­ван­ные лю­ди спо­соб­ны про­жить дол­гую, пол­но­цен­ную жизнь. Они мо­гут иметь семью, де­тей, без опа­се­ний об­щать­ся с окру­жа­ю­щи­ми. Глав­ное при этом вы­пол­нять осо­бые пра­ви­ла ги­ги­е­ны и бы­то­во­го по­ве­де­ния, знать, как свес­ти к ми­ни­му­му риск за­ра­же­ния до­мо­чад­цев. А в слу­чае воз­ник­но­ве­ния со­мни­тель­ных или спор­ных си­ту­а­ций — об­ра­щать­ся к спе­ци­а­лис­там: вра­чам, пси­хо­ло­гам. Но ни в ко­ем слу­чае не за­мы­кать­ся и не ста­вить на жиз­ни крест.

Общая процедура генотипирования. Независимо от вида теста (см. ниже) процедура генотипирования всегда начинается одинаково - на первом этапе производится выделение РНК из плазмы крови пациента. Как правило, для этого используют ту же порцию плазмы, в которой был повторно обнаружен повышенный уровень вирусной нагрузки в ходе количественного анализа РНК ВИЧ. Минимальное содержание РНК в пробе, предназначенной для генотипического анализа, составляет 1000 копий

На втором этапе полученный генетический материал подвергают амплификации для того, чтобы получить достаточное количество матрицы для работы на последующих этапах. Обычно для этого используют хорошо всем знакомую технику ПЦР. Для повышения чувствительности используют протокол, включающий предварительное ультрацентрифугирование плазмы с целью концентрации вирусных частиц, а иногда дополнительный этап гнездового (nested) ПЦР.

Наконец, третий этап посвящен собственно анализу наличия мутаций лекарственной устойчивости в составе генома ВИЧ. Для этого применяют один из двух подходов.

Альтернативный подход заключается в анализе не всей последовательности генома, а лишь отдельных его позиций, связанных с лекарственной устойчивостью ВИЧ. К их числу относятся LiPA-тест (Line probe assay; INNO-LiPA HIV-1 RT, INNO-LiPA Protease, Murex Innogenetics) и технология микрочипов (Genechip, HIV PRT 440 assay, Affymetrix).

Принципы обоих методов схожи: на первом этапе фрагменты ДНК - пробники, содержащие известные мутации, с помощью блотинга переносят на нитроцеллюлозные фильтры в виде отдельных полос (LiPA-тест) или в виде пятен вносят в силиконовые ячейки (Genechip). На последующих этапах амплифицируют РНК, выделенную от пациента, при этом в полученный ампликонвводят метку - биотин (LiPA- тест) или флуоресцеин (Genechip). За гибридизацией ампликонов с пробниками следует этап детекции, основанной на ферментативной реакции (LiPA-тест) или флуоресценции, соответственно.

Ни тот, ни другой методы широкого применения не получили, и в настоящее время коммерческие их варианты не производятся. Главная причина этого состоит в том, что оба подхода дают неполную информацию о составе генома ВИЧ и при этом обладают целым

рядом технических несовершенств. Так, количество полос, которые можно нанести на LiPA-тест, ограничено физически; напротив, число пробников, которые можно разместить на чипе, практически ничем не лимитировано. Тем не менее, при разработке чипов возникают трудности другого рода, связанные с высокой вариабельностью генома ВИЧ, в том числе и в участках, прилегающих к позициям, связанным с устойчивостью. Эти вариации (включая подтип-специфические) мешают гибридизации ампликона вплоть до полного отсутствия позитивного сигнала; вследствие этого в ходе испытаний Genechip была выявлена недостаточная эффективность в отношении неВ-подтипов и многочисленные проблемы с интерпретацией. Стоимость LiPA-теста сравнима со стоимостью прямого секвенирования, хотя по мере ее снижения эти сравнительно простые и не требующие дорогостоящего оборудования системы могли бы найти применение в практике лабораторий развивающихся стран, тем более, что у них есть и достоинства - они способны выявлять мутации, содержащиеся в 1-10% популяции вирусов (для сравнения, известные на сегодня тесты выявляют мутантный вирус, составляющий минимум 20-25% популяции).

Принципы прямого секвенирования генома ВИЧ. В России разрешены к применению три вида коммерческих тестов для генотипирования ВИЧ - Viroseq HIV-1 (Abbott Laboratories), TruGene HIV-1 genotyping assay (Siemens) и АмплиСенс HIV-Resist-Seq (ЦНИИ эпидемиологии). За рубежом также используются некоторые другие тест-системы, например, GeneSeq HIV (ViroLogic) и HIV GenoSure (LabCorp). Во многих странах мира к использованию также разрешены многочисленные in-house тест-системы (разумеется, после того, как они докажут свою надежность в сравнительных испытаниях), однако в России такой способ лабораторного анализа не практикуется.

В основе всех трех тестов, применяемых в лабораториях для генотипирования ВИЧ, лежит принцип так называемого циклического секвенирования (cycle sequencing). Сам принцип, в основе которого лежит остановка синтеза цепи, был разработан еще в 70-х годах прошлого века Фредериком Сэнгером (Fredrick Sanger) и с тех пор успешно применяется в разных модификациях.

Процесс циклического секвенирования сильно напоминает хорошо всем известную полимеразную цепную реакцию (ПЦР): в составе реакционной смеси, кроме матрицы - исследуемой ДНК (продукта реакций

ОТ и ПЦР), тоже находятся дезокси- нуклеотидтрифосфаты (dNTPs), праймеры, фермент ДНК-полимераза и буфер. Принципиальное отличие заключено в том, что, кроме dNTPs, к смеси в небольшом количестве добавлены так называемые дидезокситрифос- фаты нуклеотидов (ddNTPs).

Эти молекулы - производные dNTPs способны присоединяться к последнему нуклеотиду строящейся цепочки, однако потенциальная связь для присоединения следующего нуклеотида у них отсутствует, и после встраивания любого из ddNTPs синтез новой цепи ДНК прекращается (терминируется), поэтому ddNTPs получили название терминаторов. Это событие происходит не часто, потому что в смеси в избытке находятся dNTPs, а терминаторы присутствуют в недостатке, конкурируя с обычными нуклеотидами за встраивание в цепочку (например, в составе тест-системы TruGene это соотношение составляет 300:1). В результате циклической ре-

В первом случае (dye-terminator)

используются меченые ddNTPs (каждый - своей меткой со специфичной длиной волны), при этом все они добавляются в одну пробирку, а электрофорез проводится в одном капилляре. Образующиеся фрагменты оказываются помечены на З'-конце. В составе секвенатора - машины для проведения последней стадии секвенирования прибор для электрофореза соединен с лазерным регистрирующим устройством, которое распознает не только положение (размер) фрагмента, но и связанную с ним метку, соответствующую последнему З'-нуклеотиду в цепочке каждого фрагмента. Этот подход применен в тест-системах Viroseq и АмплиСенс.

Во втором случае (dye-primer) метят праймеры, при этом приходится использовать четыре разные пробирки, в каждой из которых находится лишь один из ddNTPs, а разделение фрагментов проводить в разных ячейках электрофореза. Тест-система Тш- Gene основана на применении именно такого варианта циклического секвенирования, который в составе этого теста именуется CLIP-реакцией (от cross- linking immuno precipitation; происхождение этого сокращения не вполне ясно). Для получения объединенного (комбинированного) результата регистрации применяется специальное программное обеспечение, и данные о генотипе, полученные обоими методами, выглядят практически одинаково. Читать визуальные результаты легко: каждый из четырех цветных пиков кривой соответствует одному из нуклеотидов, а порядок пиков - порядку нуклеотидов в составе ДНК; впрочем, для прочтения таких кривых также применяются специальные программы, и конечным результатом секвенирования, который получает оператор, становится четырехбуквенный текст последовательности ДНК (sequence).

Сравнение тест-систем для генотипирования ВИЧ. Все три тест-системы предназначены для секвенирования одной и той же области генома - гена ро/, кодирующего все ферменты ВИЧ. Известно, что специфические мутации в PR и RT сосредоточены в позициях 10-93 и 41-236, соответственно. Все тесты анализируют эти позиции, однако несколько различаются координатами исследуемых участков.

Тест Viroseq определяет полную последовательность участка, кодирующего протеазу (PR) (с 1 по 99 аминокислоту), а также секвенирует обратную транскриптазу (RT) с самого начала до 335-ой аминокислоты

• (отсчет начинается индивидуально для каждого белка). Область анализа TruGene включает почти полную последовательность PR (4-99) и ограничивается частью PR, в которой встречаются мутации устойчивости
• (36-247) . В отличие от первых двух тестов, Амплисенс не только способен анализировать мутации в PR (1-99) и RT (30-265), но также в зависимости от комплектации может включать в себя набор для секвени-

рования области, кодирующей инте- гразу (IN) (91-288), а при необходимости дополнительно анализировать участок гена env, кодирующий петлю V3 др120, с целью определения тропизма ВИЧ (см. далее).

В практике лечения ВИЧ-инфекции все чаще применяются ралтегравир и маравирок, поэтому тест-системы Viroseq и TruGene также готовятся к модернизации, в результате которой усовершенствованные наборы будут включать в свой состав набор реагентов для анализа IN и др120.

Каждая из тест-систем имеет собственное программное обеспечение для анализа, редактирования и интерпретации результатов генотипирова- ния, а также позволяет получать последовательности в форматах, пригодных для последующего дополнительного изучения с применением инструментов on-line (*.txt, *.fasta) и научных исследований. Подробнее об интерпретации результатов генотипирования с применением всех тест-систем речь пойдет в следующей главе.

Надежная работа всех трех тестов обеспечивается при вирусной нагрузке от 1000 копий РНК/мл, хотя значительная часть образцов с содержанием вируса от 300 до 1000 копий РНК/мл также поддается анализу; иногда для этого требуется предварительное концентрирование вирусных частиц из большого объема плазмы, а в ряде случаев к протоколу добавляют еще один раунд ПЦР (nested PCR). Время выполнения анализа составляет от трех до пяти дней.

Информация об исследовании

ПРАВИЛА ПРОВЕДЕНИЯ ОБСЛЕДОВАНИЯ НА ВИЧ-ИНФЕКЦИЮ

Первичный этап (скрининг) исследования на ВИЧ.

Внимание! При сдаче исследования АТ и АГ к ВИЧ 1/2 для первичного скрининг исследования в соответствии с законодательством РФ обязательно предоставление следующих данных и документов:

1) Для жителей Москвы и Московской области

• Фамилия, имя, отчество
• День, месяц и год рождения
• Сведения о регистрации
• Паспорт
• Страховой полис (серия и номер страхового полиса, наименование страховой компании).

2) Для жителей других регионов РФ и иностранных граждан дополнительно – ксерокопию (скан) паспорта.

• Фамилия, имя, отчество
• День, месяц и год рождения
• Сведения о регистрации
• Страховой полис (серия и номер страхового полиса, наименование страховой компании)
• Ксерокопия (скан) паспорта

В случае не предоставления указанной выше информации, для пациентов с предварительными положительными и сомнительными результатами скрининг исследования АТ и АГ к ВИЧ ½ (скрининг) (кач.), результат исследования не может быть выдан.

Анализ можно сдать анонимно: при этом пациент регистрируется как аноним с индивидуальным номером заказа (п.2, ст.8 ФЗ РФ № 38-ФЗ), при обязательном указании года рождения и места жительства (субъект РФ).

Обращаем Ваше внимание! Что результаты первичного (скрининг) исследования являются только результатами лабораторного исследования и не являются результатом освидетельствования или заключением о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции. По результатам скрининг исследования следует обратиться в муниципальный центр-спид для проведения добровольного освидетельствования на наличие ВИЧ.

Результаты исследования на ВИЧ независимо от их результата выдаются только при личном обращении пациента в лабораторное отделение. При обследовании несовершеннолетних (до 14 лет) детей — законному представителю, указанному в заказе.

Результаты выдаются при предъявлении договора, сметы и документа, удостоверяющего личность самого пациента или представителя пациента, указанного в заказе.

По телефону и электронной почте результаты исследований не сообщаются.

С помощью данного теста исследуемые образцы сыворотки/плазмы крови можно одновременно протестировать на наличие антигена ВИЧ 1 и 2 типов и антител к ВИЧ 1 и 2 типа.

Вирус иммунодефицита человека относится к семейству РНК-содержащих ретровирусов и подсемейству лентивирусов, т.е. вирусов медленных инфекций. ВИЧ генетически и антигенно неоднороден, по своей структуре разделяется на 1 и 2 тип. При внедрении в клетки человека вирус образует в их геноме участок ДНК, который в дальнейшем образует новые ВИЧ в неограниченном количестве. На поверхности поврежденных клеток появляются антигены вируса. Ответом на их появление со стороны иммунной системы является образование специфических антител к вирусу первого или второго типа. За последние три года число официально зарегистрированных в России ВИЧ-инфицированных лиц растёт в геометрической прогрессии. Стремительное распространение ВИЧ-инфекции в стране может приобрести неконтролируемый характер. Поэтому одной из главных задач в настоящее время является использование более совершенных методов её диагностики, обеспечивающих выявление заражённых лиц на самых ранних стадиях инфекции. К таким методам относятся лабораторные серологические тесты, определяющие как белковые структуры вируса, так специфические антитела к вирусу.

Показания к назначению исследования

1. Увеличение лимфатических узлов более двух областей;
2. Лейкопения с лимфопенией;
3. Ночная потливость;
4. Резкое похудание неясной причины;
5. Диарея более трех недель неясной причины;
6. Лихорадка неясной причины;
7. Планирование беременности;
8. Предоперационная подготовка, госпитализация;
9. Выявление следующих инфекций или их сочетаний: туберкулез, манифестный токсоплазмоз, часто рецидивирующая герпесвирусная инфекция, кандидоз внутренних органов, повторные невралгии герпес-zoster, вызванная микоплазмами, пневмоцистой или легионеллами пневмония;
10. Саркома Капоши в молодом возрасте;
11. Случайные половые контакты.

Подготовка к исследованию

Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 11 часов, натощак (между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8-ми часов, воду можно пить в обычном режиме), накануне исследования — легкий ужин с ограничением приема жирной пищи.
За 1-2 часа до сдачи крови воздержаться от курения, не употреблять сок, чай, кофе, можно пить негазированную воду. Исключить физическое напряжение (бег, быстрый подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение. За 15 минут до сдачи крови рекомендуется отдохнуть, успокоиться.

С этим исследованием сдают

1. ВИЧ — инфекция;
2. ложноположительный результат, требующий повторных или дополнительных исследований* );
3. исследование неинформативно у детей до 18 мес, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.

1. не инфицирован (соблюдены диагностические сроки проведения анализа);
2. серонегативный вариант течения инфекции (антитела вырабатываются поздно);
3. терминальная стадия СПИД (нарушено образование антител к ВИЧ);
4. исследование не информативно (диагностические сроки не соблюдены).

Антитела и антигены к ВИЧ 1, 2, антитела и антигены к вирусу иммунодефицита человека

Вирусная нагрузка при гепатите С – мера тяжести заболевания, которая определяется путем подсчета количества вирусов в 1 миллилитре крови. Показатель выражается численно, а измеряется в международных единицах на 1 мл (МЕ/мл). Инфекционная нагрузка указывает степень инфицирования, концентрацию вирусных частиц в организме и влияет на вероятность человека заразить окружающих.

Кому и когда назначают анализ на вирусную нагрузку

Вирусная нагрузка – один из важнейших критериев оценки состояния пациентов, зараженных гепатитом. Для выявления РНК вируса в крови прибегают к разным видам полимеразной цепной реакции (ПЦР) – генотипированию, количественной, качественной. Анализ выполняется при:

• оценке общего состояния людей с выявленным вирусным гепатитом;
• положительном тесте на антитела к HCV;
• подборе дозы препарата для уничтожения возбудителя гепатита.

По результатам обследования врач-инфекционист определяет степень активности возбудителя в организме пациента. Количественная ПЦР-диагностика выполняется до и во время лечения антивирусными лекарствами. В первом случае уточняют дозу и продолжительность лечения, а во втором – эффективность назначенной терапии. Снижение инфекционной нагрузки указывает на положительный терапевтический ответ и высокую вероятность полного выздоровления.

Подготовка к сдаче крови

Для подсчета количества частиц вируса гепатита С (ВГС) исследуют кровь, взятую из локтевой вены. Забор образцов для ПЦР-диагностики выполняют в процедурном кабинете. При соблюдении правил антисептики исключается риск занесения инфекции в биоматериал извне. Выполнение всех процедурных условий предотвращает недостоверные результаты.

По данным исследования удается охарактеризовать вирусный процесс – определить активность возбудителя гепатита, специфичность иммунного ответа.

Сдаче крови предшествует несложная подготовка:

1. за сутки отказываются от приема медикаментов;
2. в день обследования ограничивают физические нагрузки;
3. за 8 часов исключают прием пищи и красящих напитков;
4. анализ сдают до полудня натощак;
5. перед входом в процедурный кабинет необходимо спокойно посидеть 15-20 минут.

Погрешности в результатах анализа чаще всего связаны с:

• неправильным хранением биоматериала;
• приемом лекарств перед забором крови;
• допущением ошибки лаборантами.

При необходимости повторного проведения ПЦР-диагностики кровь сдают в той же лаборатории.

Современные методы выявления количества вируса

Для определения степени активности вирусного гепатита необходимо подсчитать количество РНК в организме больного. С этой целью выполняют разные виды тестов, отличающихся по степени чувствительности.

При определении количества РНК возбудителя гепатита удается подобрать минимальную терапевтическую дозу, необходимую для уничтожения инфекции.

Методы определения количества возбудителя гепатита С в крови:

• Количественная ПЦР-диагностика. Тест высокой чувствительности выявляет вирусные РНК в сыворотке крови от 50 МЕ/мл. К нему прибегают несколько раз – до начала терапии, во время приема антивирусных препаратов, после завершения лечения. — рекомендуемый

• Метод транскрипционной амплификации. Один из самых чувствительных тестов применяется для обнаружения и подсчета количества вирусных частиц. По полученным данным удается выявить минимальную инфекционную нагрузку – до 10 МЕ/мл.

• Радиоиммунологический анализ. Суть теста заключается в использовании меченых изотопов, которые вступают в реакцию с вирусной частицей. Во время радиометрии подсчитывают количество вирионов в крови.

• Метод разветвленной ДНК. Сегодня гибридизационный анализ используется крайне редко, что связано с его невысокой чувствительностью – от 500 МЕ/мл. К преимуществам метода относят невысокую стоимость, быстрое получение результатов. Метод разветвленной ДНК используется инфекционистами только при подтвержденном вирусном гепатите С для определения динамики лечения.

• Способ иммуноблоттинга. Этот тест чувствительнее иммуноферментного анализа. Для определения количества вирионов сначала отделяют плазму от клеток крови. В ходе исследования выявляют не только вирусные частицы, но и антитела к ним. Для выполнения теста нужно от 3 часов до 2 дней.

Для уточнения диагноза определяют генотипы ВГС. В соответствии с результатами теста составляют подходящую схему терапии, оценивают шансы на выздоровление.

В вирусологии зарегистрировано 11 генотипов HCV, которые имеют подтипы. На территории РФ чаще выявляются 1a, 1b и 3b генотипы. В первом случае риск хронизации воспаления и рецидива вирусной инфекции очень высокий. Однако с момента появления на рынке современных противовирусных препаратов первые 6 генотипов вируса поддаются лечению с вероятностью выше 96%, даже при циррозе печени, самые распространенные схемы лечения (ссылка).

Расшифровка вирусной нагрузки при гепатите С

Результаты лабораторных исследований интерпретируют врачи разных специализаций – гастроэнтеролог, инфекционист, гепатолог. В зависимости от содержания вирионов определяют степень прогрессирования гепатита. Высокая вирусная нагрузка свидетельствует об остром воспалении печени. При правильном подборе медикаментов и успешном лечении она снижается.

Для упрощения подсчетов:

Подставляйте результат вашего анализы, который стоит перед знаком умножить, и вы получите количество вируса на миллилитр крови. Учтите, что единицы измерения могут отличаться (копий/мл, ме/мл).

Если затрудняетесь или есть вопросы, вы всегда можете написать нашему дежурному врачу-инфекционисту (чат в правом нижнем углу экрана). Он бесплатно расшифрует ваши анализы и проконсультирует.

Таблица вирусной нагрузки при гепатите С:

Вирусная нагрузка, в МЕ/мл	Оценка нагрузки	Характер репликации (самокопирования) ВГС
600-30 000	низкая	неактивная
30 000 — 800 000	средняя	активная
свыше 800 000	высокая	высокоактивная

Впервые тест выполняют при подтверждении диагноза для оценки общего состояния. В зависимости от типа и количества РНК ВГС выбирают подходящие препараты, дозу и сроки терапии. Спустя 2 недели делают повторный анализ, чтобы определить эффективность лечения. При снижении инфекционной нагрузки схему терапии не меняют.

При назначении препаратов прямого противовирусного действия (ПППД) курс лечения занимает 8, 10, 12 или 24 недели.

Что значит для больного высокая или низкая нагрузка

Инфекционная нагрузка – показатель, отражающий степень активности вирионов и опасность больного человека для окружающих. Если она низкая, это свидетельствует о хорошей сопротивляемости организма возбудителю гепатита. От концентрации РНК HCV во многом зависит результативность и продолжительность лечения.

По результатам повторного теста определяют необходимость внесения корректив в схему лечения. Если тест дает положительный результат, то есть уровень вирионов в плазме крови снижается, терапию продолжают без изменений. Лечение гепатита С с любой вирусной нагрузкой проводят лекарствами, которые связываются с белками ВГС и препятствуют их самокопированию:

Если выявляют более 400 000 МЕ/мл, это свидетельствует об интенсивной репликации вирионов. При высокой активности инфекционных агентов возрастает риск осложнений – холестаза, фиброза и цирроза печени, печеночной энцефалопатии, брюшной водянки, гепатоцеллюлярной карциномы.

Могут ли быть ошибки в результатах анализа

Погрешности в ПЦР-диагностике – редкость. Но если полученные данные противоречат результатам других исследований, проводят повторный анализ. Не исключены ложноположительные результаты при:

• приеме лекарств от ВИЧ-инфекции;
• обострениях инфекционных болезней;
• беременности;
• аутоиммунных нарушениях.

Небольшая нагрузка при повышенном уровне печеночных ферментов в 90% случаев свидетельствует о ложноотрицательном результате.

Ошибки в измерениях иногда связаны с:

• нарушением правил асептики при заборе крови;
• неправильным хранением биоматериала;
• загрязнением исследуемой крови химическими реагентами;
• низкой квалификацией лаборантов;
• забором крови во время лечения препаратами гепарина.

Незначительные погрешности возможны при проведении ПЦР-исследования в разных лабораториях. Поэтому гепатологи и гастроэнтерологи советуют в течение всего периода лечения гепатита сдавать анализы в одной и той же клинике.

Инфекционная нагрузка отражает тяжесть течения болезни. По полученным данным определяют подходящую дозу противовирусных лекарств, оценивают результативность терапии. В случае параллельного генотипирования вируса удается не только подобрать медикаменты от гепатита, но и спрогнозировать терапевтический ответ.

Что делать дальше, как избавиться от вируса?

Главное не паниковать, сейчас гепатит лечится не сложней гриппа. Для назначения терапии современными препаратами необходимы следующие данные:

1. Вирусная нагрузка (Количественный анализ методом ПЦР)
2. Генотип вируса (Анализ на генотипирование)
3. Уровень фиброза (Фибросканирование, эластография)

Когда у вас на руках есть результаты всех этих анализов, вы можете по таблице определиться со схемой лечения. Мы рекомендуем обратиться к лечащему врачу и проконсультироваться на предмет назначения терапии современными противовирусными препаратами прямого действия. Многие врачи до сих пор назначают малоэффективную терапию интерферонами + рибавирином, имейте ввиду, и настаивайте на терапии новыми лекарствами.

Спасибо за то, что дочитали до статью конца. Если остались вопросы, дежурный врач-инфекционист всегда готов ответить на них (чат в правом нижнем углу экрана).