Дифференциальная диагностика рожи свиней от листериоза

Пастереллез

Пастереллез – инфекционная болезнь, характеризующаяся септицемией и воспалительно-геморрагическими процессами во внутренних органах, на серозных и слизистых оболочках.

Классификация возбудителя:

Сем: Pasteurellaceae
Род: Pasteurella
Вид: P.multocida

Восприимчивые животные:

болеют многие виды сельскохозяйственных и диких животных, в т.ч. птицы (холера птиц).

Патогенез и факторы вирулентности:

заражение животных происходит алиментарным и воздушно-капельным путями;
возбудитель размножается и проникает в кровь и лимфу, вызывая септицемию;
эндотоксины и агрессины повреждают стенки сосудов, вызывая массовые кровоизлияния, появляются отеки. Все это приводит к омертвлению тканей.

Методы диагностики:

A. Бактериологический метод:

1. Материал для исследований:
паренхиматозные органы, кровь, головной мозг, трубчатая кость – посмертно.

a. методы окраски:
простой метод (метиленовая синь, по Граму, Романовскому – Гимзе;

b.
микрокартина:
короткие палочки до 1,5 мкм, расположенные одиночно;В патологическом материале палочки окрашиваются биполярно
(интенсивно по полюсам) метиленовой синью, в мазках культур – кокковидные палочки, расположенные одиночно, попарно, реже цепочками;

d. спор не образуют;

e. образуют капсулу;

3.
Культивирование:

a. посев на питательные среды:
МПА и МПБ с сывороткой крови.

b. особенности выделения культуры:

· оптимальная температура +37 o С;

· срок культивирования 18-20 часов.

d. Биохимические свойства:

· обладают сахаролитической активностью;

· не разжижают желатин;

· гемолиз не вызывают;

· обладают каталазной активностью.

4. Биопроба:
заражают подкожно белых мышей и кроликов, внутримышечно голубей.

Рожа свиней

Классификация возбудителя

Род: Erysipelothrix
Вид: E. rhusiopathiae

Восприимчивые животные

Преимущественно свиньи в возрасте от 3 до 12 месяцев. Могут болеть ягнята, овцы, птица и др.; восприимчив человек; носителями являются морские и пресноводные рыбы.

Патогенез и факторы вирулентности:

заражение происходит в основном алиментарно,
проникновение бактерий вначале оседают в миндалинах и солитарных фолликулах, где они размножаются и своими токсинами вызывают сенсибилизацию организма, которая проявляется в виде различных поражений кожи,
гематогенным и лимфогенным путем разносится по всему организму, вызывая сепсис,
факторами вирулентности являются эндотоксины и агрессины.

Методы диагностики

A. Бактериологический метод:

1. материал для исследования:
труп целиком, паренхиматозные органы,
сердце, трубчатая кость

a. методы окраски:
простой метод, по Граму;

b. микрокартина:
тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки до 1,5 мкм

d. спор не образуют;

e. капсулу не образуют;

a. Посев на питательные среды:
МПА, МПБ, МПЖ, ПЖА, среда Сент-Иваньи (МПА с 0,1% кристаллвиолета и 1% азида натрия).

b. Особенности выделения возбудителя:

· оптимальная температура 37 o С;

· срок культивирования 18-20 часов – до 48 часов

c. культуральные свойства:

· на МПА – мелкие, росинчатые, прозрачные колонии,

· на МПБ – легкое помутнение,

· на МПЖ – равномерные отростки, отходящие от центрального стержня.

d. биохимические свойства:
обладают сахаролитическими свойствами, не расщепляют салицин; образуют сероводород.

4. биопроба:
заражают белых мышей, голубей, кроликов.

B. Серологические методы:

o РА: выделенная культура с лечебной сывороткой 1:50,

Схема лабораторной диагностики рожи свиней

Листериоз

Листериоз – инфекционная болезнь, характеризующаяся у животных поражением нервной системы, септическими явлениями, абортами и маститами.

Классификация возбудителя:

Род: Listeria
Вид: L. mоnоcytogenes

Восприимчивые животные:

все виды сельскохозяйственных животных, включая птиц; болеет человек.

Патогенез и факторы вирулентности:

заражение происходит алиментарным путем;
возбудитель распространяется гематогенным и лимфогенным путями, вызывая дегенеративные изменения в паренхиматозных органах, поражает нервную и половую системы.

Методы диагностики

A. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:
трупы мелких животных, паренхиматозные органы, головной мозг, абортированные плоды.

2.
Микроскопия:

a. методы окраски:
простой метод, по Граму

b. микрокартина:
полиморфные палочки до 3 мкм, располагаются одиночно, попарно, часто располагаются в виде римской цифры V

d. спор не образуют;

e. капсулу не образуют;

f. подвижны в молодых культурах, выращенных при комнатной температуре.

3.
Культивирование:

a. посев на питательные среды, обогащенные МПА и МПБ;

b. особенности выделения возбудителя:

· оптимальная температура 37 o С;

· срок культивирования (ежедневный
просмотр) до 3-4 сут.

c. культуральные свойства:

· на МПБ помутнение среды с образование осадка;

· на МПА – мелкие, круглые, прозрачные колонии.

d. биохимические свойства:

· обладают сахаролитическими свойствами – расщепляют салицин;

· не разжижают желатин, не образуют индола и сероводорода;

· обладают гемолитическими свойствами.

e. Биопроба:
заражают внутрибрюшинно или внутривенно белых мышей или кроликов, кератоконъюнктивальная проба.

B. Серологический метод:

o РА и РСК с сывороткой крови исследуемых животных;

o РА – для дифференциации выделенных листерий (микробная культура и поливалентная листериозная сыворотка).

Схема исследования при листериозе

Патогенные стафилококки

Патогенные стафилококки - вызывает гнойно-воспалительные процессы различной локализации: местные – фу-рункулы, абсцессы и др.; в отдельных органах – маститы, эндометриты и др.; общее поражение – пиемия и септицемия.
пищевые токсикозы (токсикоинфекции)

Классификация:

род: Staphylococcus
виды:
S.aureus - наиболее патогенный
S.epidermidis – наименее патогенный
S.saprophyticus – очень редко вызывает болезни.

Восприимчивы все виды животных, включая человека и птиц.

Патогенез и факторы вирулентности:

проникает в организм через поврежденную кожу и слизистые оболочки;
энтеротоксины – с пищевыми продуктами (мясо, молоко и др.);
образуют и выделяют экзотоксины: гематоксин, лейкоцидин, энтеротоксин, некротоксин;
образуют и выделяют ферменты: коагулазу, фибринолизин, гиалуронидазу, ДНК-азу.

Методы диагностики

A. Бактериологический метод:

1. материал для исследования:

раневой экссудат, гной абсцессов, ран, молоко при маститах, выделение из половых органов при эндометритах, кровь при септицемии;

a. методы окраски:
простой метод и по Граму;

b.
микрокартина:
шаровидные клетки располагаются беспорядочно, диаметр 0,5-1,5 мкм;

d. спор не образуют;

e. капсулу не образуют.

a. посев на питательные среды:
МПА, МПБ, МПА с 15% хлорида натрия, кровяной МПА.

b.
особенности выделения чистой культуры:

· оптимальная температура 37 0 C;

· срок культивирования 18-20 часов.

c. культуральные свойства:

· на МПА – колонии округлые, диаметром 2-5 мм, с ровным краем, могут быть окрашены в золотистый цвет (S.aureus), белый (S. epidermidis), лимонно-желтый (S.saprophyticus).

· на жидких средах: на МПБ – равномерное помутнение с выпадением рыхлого хлопьевидного осадка.

d. биохимические свойства (ферментативная активность):

· ферментация маннита без газа (в анаэробных условиях);

· гемолиз на кровяных средах;

· ДНК – азная активность;

· Рост на элективных средах;

4. Биопроба для определения свойств:
летальных – на кроликах;
дерматонекротических – на кроликах;
токсических – на котятах

B. Серологическая и аллергическая диагностика:
в ветеринарии не используется.

Главная
Агропромышленность
Лабораторная диагностика и специфическая профилактика рожи свиней

Дифференциальная диагностика

Рожу свиней дифференцируют от классической чумы, пастереллёза, листериоза, сибирской язвы, солнечного и теплового удара, а также веррукозных эндокардитов.

Классическая чума более контагиозна, чем рожа, регистрируется в любое время года и поражает свиней всех возрастов. Клинические симптомы при чуме, в отличие от рожи, развиваются медленнее. Для острого течения болезни характерны кровоизлияния в кожу, чего не бывает при роже, лейкопения и лимфоцитоз при нормальном количестве эозинофилов. При вскрытии павших свиней наблюдают многочисленные кровоизлияния в лимфатических узлах, на серозных, слизистых покровах и в паренхиматозных органах, а при осложненнных формах чумы - крупозно-дифтеретические поражения в толстом отделе кишечника и различные формы пневмоний. При бактериологическом исследовании трупов свиней, павших от чумы, выделяют бактерии, осложнившие течение.

С целью исключения чумы и других вирусных инфекций больным свиньям вводят противорожистую сыворотку в лечебной дозе в сочетании с пенициллином и последующим четырехкратным в течение дня измерением температуры тела. У свиней, больных рожей, температура тела снижается, и общее состояние улучшается. При чуме и других вирусных заболеваниях лечение эффекта не дает.

Пастереллез у свиней наблюдается самостоятельно или как секундарная инфекция. Протекает остро, подостро и хронически. Подострое и хроническое течение сопровождается симптомами крупозной пневмонии. Диагноз на пастереллез ставят с учетом эпизоотологических особенностей, клинических симптомов, данных вскрытия и бактериологического исследования.

Листериоз наблюдается в форме ограниченных вспышек среди поросят-сосунов и отъемышей. Протекает остро, характер из характеризуясь общими тяжелыми явлениями (лихорадочное состояние, слабость, учащенное дыхание и т.п.), или в форме менингоэнцефалита. У взрослых свиней листериоз протекает при слабо выраженных клинических симптомах или бессимптомно. Бактериологические исследования являются решающим методом дифференциальной диагностики листериоза и клинически сходных с ним форм рожи.

Сибирскую язву в отличие от рожи, регистрируют у свиней редко. Чаще всего она проявляется в виде тяжелой ангины с сильным воспалительным отеком в области глотки. Решающим в диагнозе является посмертное бактериологическое исследование.

Солнечный и тепловой удары могут наблюдаться в жаркое летнее время при перегонах или перевозках, при содержании свиней в открытых лагерях, душных помещениях. У больных животных наблюдается учащенное дыхание, слабость, расстройство сердечной деятельности, повышение температуры тела до 42-43 0 С, судорожное сокращение мускулатуры. Смерть наступает через несколько часов после проявления первых клинических симптомов, что сходно с молниеносным течением рожи. Окончательный диагноз может быть установлен только посмертно, после бактериологического исследования.

Веррукозный эндокардит, вызванный стрептококками и диплококками, протекает с такими же признаками, как и эндокардит, вызванный бактериями рожи. Поэтому для дифференциации эндокардитов проводят бактериологическое исследование. Таким образом, в спорных случаях решающее значение при постановке окончательного диагноза имеют результаты бактериологического исследования [3,7,9].

При хроническом течении необходимо исключать хроническое течение чумы, микоплазмозный полисерозит, полиартрит, стрептококковую и коринебактериальную инфекции, рахит и остеомаляцию [8].

Серологическая диагностика

Из серологических методов диагностики применяют реакцию агглютинации (РА) в двух модификациях: пластинчатую и пробирочную, пробу роста. Некоторые исследователи рекомендуют использовать РНГА и РТГА. Однако не все перечисленные серологические реакции дают четкую зависимость между титром противорожистых антител и иммунной защитой. По мнению Р.В. Петрова, Р.М. Хаитова (1988), четкой коррекции между титром агглютининов и устойчивостью к заражению свиней не найдено, а вот более чувствительными и достоверно отражающими иммунный статус организма, по их мнению, являются проба роста и реакция агглютинации. Срок лабораторного исследования, с целью постановки диагноза на рожу свиней, составляет 7 дней.

Обнаружение и идентификация возбудителя рожи свиней в чистых, смешанных культурах и патологическом материале определяют и с помощью люминесцирующей рожистой сыворотки.

Биопроба

Биопробу проводят на голубях и белых мышах. Заражают их в день поступления патологического материала суспензией в разведении 1:5, а затем суточной бульонной культурой. Заражение мышей производят подкожно в дозе 0,1-0,2 см 3 , голубей - внутримышечно в дозе 0,2-0,3 см 3 .В случае положительного диагноза на рожу свиней мыши должны погибнуть через 3-4 суток, а голуби - через 2-5 суток. Наблюдение за зараженными животными и птицей проводят в течение 6 суток. Из органов павших мышей и голубей делают высевы на питательные среды с целью выделения чистой культуры возбудителя рожи свиней [1,2].

Подвижен при +20 о С

Рост на МП Желатине

Тест на каталазу

Конъюнкт. проба на м.свинке

РА с листер. сывороткой

Сальмонеллёз

Сальмонеллёзы– группа инфекционных болезней преимущественно молодняка с.х. животных, мелких домашних, промысловых животных, грызунов, птиц, характеризующихся при остром течениилихорадкой и профузным поносом, при хроническом –воспалением легких, плевритами, артритами. Восприимчив человек. У взрослых животных и птиц болезнь может протекать бессимптомно (сальмонеллоносительство), у беременных самок возможныаборты.У людей при употреблении продуктов, содержащих сальмонеллы, могут возникатьпищевые инфекции. При оценке пищевых продуктов, в кот. обнаружены сальмонеллы, важно знать, что эти микроорганизмы довольно устойчивы к нагреванию, при 60 о С погибают в течение часа, при 80 о С – за 5-10 мин (то есть могут сохраняться, например, при изготовлении варёной колбасы)

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ: Сем. Enterobacteriaceae, Род:Salmonella; видSalmonella enterica, включает более 2 500 серовариантов:

S. enteritidis, S.dublin – у телят (+ возбудитель пищев. инфекции у людей)

S. choleraesuis, S. typhisuis - у свиней.

S. typhimurium – у водоплавающ. птицы (+ возб. пищ.инфекции у людей)

S
. abortus equi– у лошадей (аборт у кобыл).

ПАТОГЕНЕЗ И ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ: основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, возможно внутриутробное и трансовариальное. Возбудители размножаются в тонком кишечнике и гематогенным и лимфогенными путями разносятся в паренхиматозные органы, где вновь размножаются. При распаде их высвобождаются эндотоксины, которые вызывают патологические процессы. Сальмонеллы образуют два вида токсинов: экзо- и эндотоксины.

Методы диагностики:

Материал для исследования:при жизни – кал, сыворотка крови; посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентериальные лимфатические узлы, отрезок кишечника, аборт. плод.

Микроскопия: мелкие короткие палочки с закругленными концами, располагаются одиночно или попарно, беспорядочно; Гр - , спор не образуют; капсулу не образуют; подвижны (за исключением S.pullorum).

Культивирование:сальмонеллы - факультативные анаэробы; оптимальная температура 37 o С; срок культивирования 18-20 часов. Культивирование проводят в 3 этапа:1-й этап- посев исследуемого материала в накопительные среды (Килиана, Мюллера, селенитовый бульон);2-й этап- Пересев на элективные, дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина, Плоскирева, Висмут-сульфит агар и др.);

Культуральные свойства: Все энтеробактерии, в т.ч.сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки: на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка, на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии.

на среде Эндо(среда розового цвета с лактозой и фуксином) – мелкие и средние, нежные. прозрачные бледно-розовые колонии,

на среде Плоскирева(высокоселектив. среде коньячного цвета с лактозой нейтральным красным и бриллиант. зелёным) – серо-желтые колонии;

на среде висмут-сульфит-агар (высокоселективная среда молочно-зеленоватого цвета) –блестящие антрацитово-чёрные колонии.

Биохимические свойства: Сальмонеллы обладают пониженной сахаролитической активностью: ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа,Важным дифференцирующим биохимическим свойством сальмонелл является отсутствие способности ферментировать лактозу. Не разжижают желатин,Н₂S+, индол -; реакция с метиловым красным+: (среда окрашивается в розово-красный цвет), реакция Фогеса-Проскауэра отрицательная–(желтое окрашивание среды). Растет на среде Симмонса с цитратом, изменяя её цвет с зелёного на синий.

Биопроба: в необходим. случаях заражают п/кожно белых мышей (гибель).

1.Экспресс-метод диагностики –постановка РИФ (МФА) с флюоресцирующей диагностической сывороткой.

2.РА с исследуемой сывороткой крови(иликровекапельная) при диагностике паратифозного аборта кобыл, пуллороза у кур (т.е. ищутАтв исследуемой сыворотке крови животных с помощью антигена-диагностикума).

3.РА с исследуемой живой культурой с агаровой средыс целью определения вида и серовариантаSalm(т.е. определяютАгполученной культуры бактерий с помощью диагност. сывороток).

Антигенное строение сальмонелл очень сложно. На основе общего для нескольких серовариантов сальмонелл антигена они подразделяются на серологич. группы по схеме Кауфмана-Уайта, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита (серогруппыA, B, C, D и т.д.). Кроме того, разные сероварианты сальмонелл различаются по набору соматических О-антигенов и жгутиковых Н-антигенов Поэтому идентификацию исследуемых культур проводят в 3 этапа. Сначала культуру проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле для подтвержденияпринадлежности к роду Salmonella. При положительном результате с групповой сывороткой проводят испытания той же куль-туры с отдельными монорецепторными сыворотками, входящими в смесь поливален-тной сыворотки и определяют серологич. группу по Кауфману. Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами и устанавливают серовариант, то есть идентифицируютmi.

ФАГОДИАГНОСТИКА – с набором сальмонеллёзных бактериофагов

Диагностические– наборы агглютинирующих сывороток для постановки РА; флюоресцирующая сыворотка для РИФ; бактериофаги.

лечебные– сыворотки и гамма-глобулины.

Разнообразные вакцины, такие как:

Концентрированная формолвакцина для стельных коров;

Живая или инактивированная в-на для телят от вакцинированных коров;

Формолвакцина против паратифа поросят – для супоросных свиноматок за 1,5 мес. до опороса.

Сухая живая вакцина против паратифа свиней из аттенуированного штамма S.choleraesuisТС-177 – для поросят с 2-х недельного возраста

Поливалентная формолтиомерсаловая вакцина против сальмонеллёза овец.

Ассоциированная вакцина против паратифа, пастереллёза и диплококковой септицемии поросят – в неблагополучных хозяйствах.

Эндо Левина Плоскирева ВСА

3-х сахарный агар Олькеницкого Цитратный агар Симмонса

Цель – формирование практических умений проводить лабораторную диагностику рожи свиней и листериоза, формирование знаний о сущности и технике проведения бактериологических и серологических методов исследований, умений выделять биологические особенности возбудителя, работая с лабораторным оборудованием, делать заключение по изученному материалу, навыков работы с источниками информации, сопоставление биологических особенностей листерий и рожистой палочки.

План

1. Патологический материал для лабораторного исследования.

2. Бактериологические методы диагностики сибирской язвы.

3. Серологические методы диагностики сибирской язвы.

Теоретический материал

1. Бактериологическая диагностика листериоза включает микроскопическое исследование исходного материала, посевы на питательные среды, идентификацию выделенных культур по культурально-биохимическим, тинкториальным и серологическим свойствам, а также постановку биологической пробы на лабораторных животных.

Микроскопическое исследование. Микроскопическому исследованию подвергают мазки-отпечатки из головного мозга, внутренних органов и тканей. При приготовлении мазков-отпечатков чистым предметным стеклом 3-4 раза прикасаются к поверхности среза органа. Мазки готовят непосредственно из патматериала, а также после подращивания его проб при 37 °C в течение 4-6 часов. Мазки окрашивают по Граму, а также методами флюоресцирующих антител.

Возбудитель листериоза - Listeria monocytogenes - грамположительная подвижная неспорообразующая полиморфная, чаще палочковидная бактерия длиной 0,5 - 2,0 мкм.

Бактериологическое исследование. Из органов и обязательно головного мозга проводят обильные множественные посевы или предварительно готовят суспензию из головного мозга и паренхиматозных органов на физрастворе в соотношении 1:5 и из нее делают посевы. Для культивирования листерий используют обычные среды с добавлением 1% глюкозы и 2 - 3% глицерина или печеночный агар и бульон (pH среды 7,2 - 7,4), а также кровяной агар и элективные среды (Приложение 10.2).

В качестве дополнительного метода при отрицательном результате первичного посева рекомендуется часть исследуемого материала поместить в холодильник и хранить в течение 30 дней для проведения повторных исследований через каждые 10 дней.

При исследовании абортированных плодов посевы делают из содержимого желудка и внутренних органов.

При исследовании истечений из половых органов, молока и силоса посевы проводят на печеночный агар в чашках и МПБ с 10% хлорида натрия, из которого потом делают пересевы на твердые среды.

Посевы инкубируют в термостате при 37° с ежедневным просмотром в первые 3 - 4 дня. При отсутствии роста наблюдение за посевами проводят в течение двух недель.

Характерным для возбудителя листериоза является легкое помутнение бульона и появление мелких росинчатых колоний на агаре, наличие бета-гемолиза на кровяном агаре. Колонии листерий в проходящем свете имеют голубую окраску с зеленоватым оттенком и мелкозернистую структуру.

Из выделенной культуры делают мазки, окрашивая их по Граму, а также для люминесцентной микроскопии с применением прямого и непрямого метода флюоресцирующих антител.

Биологическое исследование проводят на 2 - 3 белых мышах (масса 14 - 16 г). Животных заражают под кожу или внутрибрюшинно суспензией из головного мозга и внутренних органов или культурой в дозе 0,3 - 0,5 мл. При положительной биопробе животные погибают через 2-6 суток после заражения. При вскрытии отмечают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках. В отдельных случаях этих поражений может не быть. При наблюдении более 10 дней рекомендуется дополнительно делать посев из головного мозга. Очень чувствительны к подкожному заражению 5- 6-дневные мыши-сосуны, которые гибнут через 18 - 36 часов.

К заражению листериями восприимчивы и кролики. Показательно внутривенное заражение кроликов культурой листерий в дозе 0,5 - 1 млрд. микробных тел (по стандарту мутности), при этом количество моноцитов в крови зараженных животных увеличивается в несколько раз. Это является дополнительной характеристикой возбудителя болезни.

Из внутренних органов (печень, селезенка, почки, сердце) павших животных делают мазки-отпечатки и высевы на питательные среды.

Срок наблюдения за подопытными животными - 14 суток.

Идентификация микробной культуры

Определение подвижности проводят методом висячей или раздавленной капли, а также посевом методом укола в полужидкий МПА. На подвижность исследуют 6-18-часовую бульонную культуру, выращенную при комнатной температуре (22 °C). Листерии, выращенные при данной температуре, обладают активной подвижностью.

Для определения ферментативных свойств чистую бульонную культуру пересевают на пестрый ряд (глюкоза, мальтоза, маннит, салицин, трегалоза, дульцит, инулин, раффиноза), который выдерживают при 37 °C в течение 10 дней. Листерии разлагают с образованием кислоты (без газа) глюкозу, мальтозу, трегалозу, салицин и не разлагают дульцит, инулин, раффинозу, маннит.

Проба на каталазу. К суточной бульонной культуре добавляют равный объем свежеприготовленной 5-процентной перекиси водорода, при исследовании агаровой культуры в пробирку вносят несколько капель перекиси водорода. При наличии фермента каталазы перекись водорода разлагается с образованием пузырьков газа (пена).

Способность выделять фермент каталазу является характерным признаком листерий при дифференциации от возбудителя рожи свиней.

Определяют чувствительности листерий к бактериофагам.

Культуру признают листериями, если в месте нанесения одного из бактериофагов образуется прозрачная зона лизиса или полусливной лизис (в виде губки). Допускается наличие единичных колоний или сплошного нежного роста вторичной культуры в зоне лизиса при интенсивном бактериальном росте на остальной поверхности агара. В месте нанесения капли стерильного бульона зона лизиса отсутствует.

Люминесцентно-серологическое исследование проводят с использованием прямого (ПМФА) и непрямого методов флюоресцирующих антител (НМФА). С помощью этих методов можно идентифицировать возбудителя в культурах, обнаружить листерии в органах и тканях, а также определить их серогрупповую принадлежность.

Для дифференциации листерий от возбудителя рожи свиней можно использовать индикаторные среды; метод основан на редукции и оксидации красок в средах при выращивании листерий.

Возбудитель рожи свиней не обесцвечивает ни одну из вышеуказанных сред.

Серологическая идентификация листерий.

Реакцию агглютинации ставят на чистых обезжиренных предметных стеклах. На предметное стекло наносят две капли: каплю поливалентной сыворотки и каплю физраствора. К обеим каплям на стекле добавляют по одной капле смыва культуры, смесь тщательно и быстро перемешивают бактериологической петлей или запаянным концом пастеровской пипетки, после чего стекла плавно покачивают круговыми движениями. Одновременно для контроля один раз в день исследуют на стекле каплю сыворотки с добавлением капли физраствора.

Учет результатов РА проводят в течение 3-х минут. Реакция считается положительной при появлении четкой агглютинации (образование хлопьев) в капле с сывороткой при ее отсутствии в контроле. Запоздалые реакции не учитывают.

Исследуемую культуру признают листериями при получении положительной реакции с поливалентной сывороткой и отсутствии агглютинации в контроле с физраствором, а также наличии характерных морфологических, культуральных и биохимических свойств.

Специфические свойства листерий проверяют также конъюнктивальной пробой на морских свинках или дермонекротической пробой на морских свинках или кроликах.

Конъюнктивальная проба. На конъюнктиву глаза морской свинки наносят 2 капли испытуемой бульонной культуры с последующим легким массажем век ватным тампоном. Вирулентные штаммы листерий на 2-4 день вызывают у морской свинки гнойный кератоконъюнктивит. Пробу с каждым штаммом желательно ставить не менее чем на двух морских свинках.

Дермонекротическая проба. В тщательно выстриженный участок кожи бока морской свинки или кролика внутрикожно вводят 0,3 - 0,5 мл бульонной культуры. Через 24 - 48 часов возникает воспаление с последующим некрозом и образованием струпа.

На одной морской свинке можно ставить конъюнктивальную и дермонекротическую пробу при изучении свойств одного штамма. При необходимости испытания нескольких культур в выстриженный участок кожи на правом и левом боку кролика можно инъецировать по 3 культуры с каждой стороны.

Диагноз на листериоз считается установленным при получении положительного результата РНФ; обнаружении листерий в патматериале иммунофлюоресцентным методом, а также при выделении грамположительной полиморфной подвижной палочки, образующей каталазу и разлагающей с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, трегалозу и салицин; вызывающей (вирулентные штаммы) положительные конъюнктивальную и дермонекротическую пробы у морских свинок и кроликов; дающей положительную РА с листериозной сывороткой; лизирующейся листериозным бактериофагом; обладающей патогенностью для лабораторных животных (вирулентные штаммы).

Диагноз на рожу свиней устанавливают на основании эпизоотологических данных (заболевание молодых свиней и поросят отъемного возраста, возникающее обычно в жаркое время года), клинических признаков (красные пятна на коже, имеющие форму различных геометрических фигур, высокая температура), данных вскрытия (катаральное и катарально-геморрагическое воспаление желудка и тонкого отдела кишечника, серозный перикардит, бородавчатый эндокардит, неравномерная окраска миокарда, венозный застой и кровоизлияния в почках), а также результатов бактериологических исследований патологического материала от больных и павших животных. Диагностика рожи свиней представлена в схеме 1 [3,7].

Диагноз на рожу свиней считают установленным окончательно в одном из следующих случаев:

- при обнаружении возбудителя рожи свиней в исходном патологическом материале методом люминесцентной микроскопии (без выделения чистой культуры);

- при выделении из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя болезни;

- при гибели зараженных животных и выделении из их органов культуры возбудителя, даже если в посевах из исходного материала культуры возбудителя не выделено.

При вскрытии не всегда удается определить причину смерти животного. На бактериологическое исследование посылают отдельные органы, части органов, кости или целые трупы мелких животных с нарочным. Во избежание распространения инфекции посылаемый материал должен быть завернут в мешковину, смоченную дезинфицирующим раствором, хорошо упакован в плотный деревянный или металлический ящик, выстланный полиэтиленом.

Целые трупы или органы отправляются для исследования в стеклянных банках, металлических ведрах или банках с крышками. В случаях, когда из-за дальности расстояния в свежем виде материал доставить невозможно, его консервируют в 30-%ном водном растворе глицерина.

Материал можно замораживать и в термосе со льдом доставлять в лабораторию. При этом следует учитывать, что материал должен быть доставлен в лабораторию не позднее 4-6 часов после гибели животного и от животных, которые при жизни не подвергались лечению. В противном случаи возможны диагностические ошибки.

При роже свиней для исследования берут целый труп или селезенку, измененные части органов (почки) и трубчатую кость, очищенную от мяса. Летом кусочки почек, селезенки и целиком лимфатические узлы, в 30-40 %м глицерине или в насыщенном растворе поваренной соли. Кровь посылают в запаянной пипетке. Пораженные участки кожи, трубчатую кость пересыпают сухой поваренной солью.

Для микроскопии готовят мазки-отпечатки из почек, селезенки, печени, пораженных участков кожи, сердца или из выделенной культуры возбудителя.

Для получения чистой культуры возбудителя рожи высевы из патологического материала проводят на обычные и элективные питательные среды. Обычно посевы делают на хорошо просветленных мясопептонных бульоне и агаре или бульоне Хоттингера при рН 7,4-7,8. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 ° С в течение 24-48 часов. Полученную культуру микроскопируют, изучают ее культуральные, биохимические свойства. Чистую культуру пересевают на полужидкий 0,2%-ный агар (для определения подвижности макрометодом), мясопептонную желатину, пептонную воду с полоской реактивной бумаги (для изучения возможности возбудителя выделять сероводород), на среды Гисса с углеводами, на индикаторные среды, в две пробирки с мясопептонным бульоном для проб на образование каталазы.

Биопробу проводят на голубях и белых мышах. Заражают их в день поступления патологического материала суспензией в разведении 1:5, а затем суточной бульонной культурой. Заражение мышей производят подкожно в дозе 0,1-0,2 см 3 , голубей - внутримышечно в дозе 0,2-0,3 см 3 . В случае положительного диагноза на рожу свиней мыши должны погибнуть через 3-4 суток, а голуби - через 2-5 суток. Наблюдение за зараженными животными и птицей проводят в течение 6 суток. Из органов павших мышей и голубей делают высевы на питательные среды с целью выделения чистой культуры возбудителя рожи свиней.

Теоретический материал по теме занятия студенты конспектируют в тетрадь и выполняют практические задания.

Практическое задание 1: Составьте схемы проведения лабораторного исследования на листериоз и рожу свиней.

Этапы выполнения задания:

1 Отберите патологический материал для бактериологического и серологического исследований.

2 Определите последовательность и технику выполнения бактериологических методов диагностики болезней.

3 Определите необходимость и порядок выполнения серологического исследования биоматериалов.

4 Схему исследования зарисуйте в тетрадь.

Практическое задание 2: Определите морфологические и тинкториальные свойства микробной культуры.

Этапы выполнения задания:

1 Приготовьте мазки-препараты из музейных культур, зафиксируйте их.

2 Окрасьте мазки-препараты по методу Грама.

3 Микроскопируйте окрашенные препараты, зарисуйте и опишите морфологические особенности возбудителей в тетрадь, отчитайтесь преподавателю.

Практическое задание 3: Определите культуральные свойства микробной культуры.

Этапы выполнения задания:

1 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПБ.

2 Опишите характер роста микробной культуры на среде МПА.

3 Проанализируйте культуральные свойства изученной микробных культур и сделайте заключение о соответствии ее листериям или рожистой палочке.

Практическое задание 4: Дифференцировать возбудитель рожи свиней от листерий.

Этапы выполнения задания:

1 Выяснить морфологические отличия возбудителей листериоза и рожи свиней.

2 Определить отличительные особенности ферментативной активности возбудителей болезни.

3 Установить восприимчивость лабораторных животных к возбудителям рожи свиней и листериоза.

4 Провести серологическую типизацию возбудителей.

5 Анализировать полученные результаты, сделать заключение и отчитаться преподавателю.

Практическое задание 5: Проведите контроль биологических препаратов, применяемых при сибирской язве.

Этапы выполнения задания:

1 Определите назначение биологического препарата (диагностические, профилактические, лечебные), способ применения.

2 Определите пригодность препарата к использованию, обратите внимание на срок годности препарата, целостность упаковки, соответствие содержимого ампулы (флакона и др.) описанию в наставлении к препарату.

3 Полученные результаты внесите в таблицу рабочей тетради, проанализируйте и сделайте заключение по каждому препарату.

Вопросы и задания для контроля знаний. 1 Какой материал направляют для исследования в лабораторию на рожу свиней? 2 Поясните порядок исследования биоматериала на рожу свиней. 3 Какими биологическими особенностями обладает возбудитель рожи свиней? 4 Назовите и охарактеризуйте биопрепараты, применяемые при роже свиней. 5 Какой материал направляют для исследования в лабораторию на листериоз? 6 Поясните порядок исследования биоматериала на листериоз. 7 Назовите отличительные особенности биологических свойств возбудителя листериоза от рожистой палочки. 8 Какие патогенные микроорганизмы необходимо дифференцировать от листерий и рожистой палочки? 9 Дайте характеристику биопрепаратам, применяемым при листериозе. 10 Поясните культуральные свойства возбудителя рожи свиней и листерий.

Читайте также: