Эритроцитарный диагностикум сыпного тифа

РНГА с сыпнотифным диагностикумом (anti-Ricketsia prowazeki)

Исследование предназначено для определения наличия в крови пациента специфических антител к Ricketsia prowazeki - возбудителю сыпного тифа. Анализ является серологическим маркером болезни Брилла-Цинссера (спорадического сыпного тифа).

Серологический анализ проводится методом РНГА (реакцией непрямой гемагглютинации). В лунках лабораторной планшетки серолог разводит исследуемую сыворотку с поэтапным удвоением. Затем добавляет в образцы стандартные эритроциты, сенсибилизированные риккетсиями. При наличии в пробах иммунных антител к антигену возбудителя инфекции, эритроциты слипаются и равномерно покрывают все дно лунки – реакция считается положительной, при отрицательной реакции эритроциты располагаются на дне в виде маленькой пуговки.

Подготовка к исследованию:

• Анализ проводится утром, натощак.
• С последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов.
• Исключить прием алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия биоматериала.
• Не рекомендуется сдавать кровь на серологию после флюорографии, рентгена, физиотерапевтических процедур.

Тип биоматериала: венозная кровь

Синонимы (rus): Серодиагностика с эритроцитарным сыпнотифозным (риккетсиозным Провачека) диагностикумом

Синонимы (eng): Detection of anti-typhus Рrowazeki antibodies in patient serum

Методы: Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Сроки выполнения: 7-8 дней

Сыпным или вшивым тифом называют острую инфекцию, вызываемую внутриклеточными паразитами - риккетсиями провачека (Ricketsia prowazeki). Это название мелкая грамотрицательная бактерия, унесшая миллионы жизней, получила по фамилиям двух ученых, разгадавших тайну смертельного заболевания - американского биолога Говарда Тейлора Риккетса и чешского естествоиспытателя Станислава Провачека.

Источник инфекционного процесса - больной человек, от которого заражение передается здоровому человеку платяными и головными вшами. Расчесывая укусы этих специфических паразитов, человек втирает их экскременты, содержащие риккетсии, в клетки кожных покровов. Сыпной тиф распространяется из-за плохих социальных условий, скученности, тесноты. Именно поэтому наиболее страшные эпидемии инфекции возникали в военное время и при стихийных катастрофах.

После выздоровления у человека вырабатывается иммунный барьер к возбудителю, однако он способен сохраняться в организме длительный период и спустя много лет рецидивировать. Повторный сыпной тиф имеет те же клинические проявления, но в более легкой форме. При заражении риккетсиями в организме продуцируются специфические антитела, концентрация которых нарастает с каждой неделей заболевания и остается повышенной длительный период. Для эндогенной рецидивирующей инфекции (болезни Брилла) также характерно выраженное повышение уровня иммунных антител.

Опытные инфекционисты проводят серологическое исследование при наличии у пациента:

• сильной головной боли;
• высокой температуры (до 40°С);
• бессонницы, раздражительности;
• потери аппетита;
• характерных высыпаний на коже - на боках туловища и сгибах конечностей;
• симптомов поражения сердечной, нервной и сосудистой систем - учащенное сердцебиение, снижение кровяного давления, нарушение сознания.

Негативная РНГА считается отрицательным результатом - заражения риккетсиями нет. Положительным результатом считается диагностический титр 1:640 - текущий или перенесенный в прошлом риккетсиоз (сыпной или спорадический тиф).

Рекомендовано проводить РНГА - исследование в парных образцах биоматериала: первое - на седьмой день инфекционного процесса, второе - спустя две недели.

РСК с целью раздельного определения IgM и IgG

Реакции Вассермана (серодиагностика сифилиса)

РСК с целью серодиагностики сыпного тифа

Реакция агглютинации по Видалю с целью серодиагностики брюшного тифа

Для постановки реакции берут:

1) сыворотку исследуемого больного для определения в ней
антител;

2) О - и Н-диагноста кумы бактерий брюшного тифа, паратифа А и паратифа В;

3) физиологический раствор.

Кровь для получения сыворотки берут в количестве—15—20 капель путем укола мякоти пальца или 2 —3 мл при помощи венепункции.

Дают крови свернуться в термостате в течение 30—60 минут, затем простерилизованной петлей обводят сгусток, отделяя его от стенки пробирки, и дают отстояться сыворотке на холоду до образования над сгустком прозрачного слоя. Сыворотку помещают пипеткой в отдельную пробирку. Первое разведение (1:50) делают при помощи пипетки—0,1 мл сыворотки + 4,9 мл физио­логического раствора. Дальнейшие разведения (1:100— 1:200 — 1 : 400—1:800) готовят по обычной схеме.

Берут 6 рядов пробирок по 6 пробирок в каждом. По 1 мл сыворотки разведения 1: 100 наливают в первую пробирку каждого ряда, 1: 200 — во вторую, 1 : 400 — в третью и т. д.; в шестую, контрольную, пробирку наливают 1 мл физиологического раствора.

Во все пробирки первого ряда добавляют по 1—2 капли брюшнотифозного Н-диагностикума; в пробирки второго ряда — брюшнотифозный 0-диагностикум; в пробирки третьего я четвертого ряда добавляют А-паратифозный, Н - и 0-диагностикумы, а в 5-й и 6-й ряд— В-паратифозный H - и 0-диагностикум. Пробирки ставят в термостат на 2 часа, отмечают результат реакции, затем оставляют при комнатной температуре на сутки; после этого срока дают заключение об окончательном результате реакции.

Возбудителем заболевания считается тот микроб, который агглютинируется сывороткой больного. Реакция считается положителыной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1: 100; обычно она наступает в больших разведениях. Если происходит групповая агглютинация с двумя или с тремя антигенами, то за возбудителя болезни принимается тот микроб, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.

Тип реакции - реакция связывания комплемента.

Исследуемый материал - парные сыворотки крови больного (сыворотки одного и того же больного, взятые у него с временным промежутком не менее 5-7 дней).

Диагностический препарат - сыпнотифозный антиген для РСК.

Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).

Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.

Диагностическим критерием является нарастание титра антител не менее, чем в 4 раза (во второй сыворотке по сравнению с первой).

Обычно реакцию применяют для ретроспективной диагностике.

В данном случае. (результат и вывод).

Тип реакции: РСК.

Исследуемый материал: сыворотка обследуемого.

1. Неспецифический кардиолипиновый АГ (антиген) для реакции Вассермана - спиртовая липидная вытяжка из миокарда быка, обогащенная холестерином.

2. Специфический ультраозвученный трепонемный АГ – содержит АГ культуральных трепонем, разрушенных ультразвуком.

Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).

Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.

Качественный метод - сыворотку обследуемого вносят в 2 лунки, добавляют соответственно АГ 1 и АГ 2, а затем в обе лунки - дополнительные ингредиенты реакции. Применение: отбор лиц для постановки количественной реакции Вассермана.

В данном случае обследованы пациенты . (результат, вывод).

Количественный метод - диагностика сифилиса, контроль эффективности терапии. Готовят разведения положительной сыворотки (по качественной реакции). К каждому разведению добавляют трепонемный ультраозвученный АГ (АГ2) и дополнительные ингредиенты реакции. Положительный результат - ЗГ (задержка гемолиза), отрицательный - Г (гемолиз).

Результат интерпретируют, основываясь на количестве антител.

В данном случае. (результат и вывод).

Тип реакции - реакция связывания комплемента.

Исследуемый материал - сыворотка крови больного (нативная и обработанная меркаптоэтанолом).

Диагностический препарат - известный антиген для РСК.

Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).

Положительная реакция - задержка гемолиза; отрицательная - гемолиз.

Принцип метода: при обработке сыворотки меркаптоэтанолом разрушаются IgM.

Следовательно, с обработаной сывороткой реакция идет только за счет IgG.

Постановка реакции: готовят разведения нативной и обработанной сывороток, добавляют диагностический препарат и дополнительные ингредиенты реакции.

Трактовка результатов: если с обработанной сывороткой реакция идет практически таком же титре, как с необработанной, значит она содержит преимущественно IgG Если в обработанной сыворотке титр антител резко снизился по сравнению с необработанной, значит она содержит преимущественно IgM.

В данном случае. (результат и вывод).

Тип реакции - реакция непрямой гемагглютинации.

Исследуемый материал - сыворотка крови обследуемого.

Диагностический препарат - Vi-эритроцитарный диагностикум (взвесь в физиологическом растворе эритроцитов барана с нагруженными на них Vi - антигенами S.typhi ).

Принцип реакции: к разведениям сыворотки обследуемого добавляют Vi-эритроцитарный диагностикум.

Положительный результат – гемагглютинат ("зонтик"); отрицательный результат - плотный осадок эритроцитов на дне лунки ("пуговка").

Диагностический тигр реакции 1/ 40.

Применение: отбор лиц, имеющих титр антител к Vi – антигенам S.typhi выше диагностического.

Трактовка результатов: лица с положительной реакцией в титре выше, чем 1/40 считаются подозрительными на бактерионосительство S.typhi и подлежат бактериологическому обследованию на наличие S.typhi в кале, моче и желчи.

В данном случае. (результат и вывод).

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

В настоящее время в лабораториях используются следу­ющие диагностикумы.

1 .Бактериальный диагностикум сальмонелл брюшного тифа (или сальмонелл паратифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне и др. бактерий семейства Enterobacteriaceae) является взвесью убитых бактерий соответствующего вида и приме­няется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных, т.е для серодиагностики.

2. Сальмонеллезные 0-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл. Получают из взвеси убитых нагреванием сальмонелл. Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглю­тинации с сывороткой больных (серодиагностика).

3. Сальмонеллезные Н-диагностикумы представляют собой жгутиковые антигены формалинизированных буль­онных культур сальмонелл соответствующих видов и исполь­зуются в реакции агглютинации для серодиагностики заболевания, т.е. для определения Н- антител в сываротке.

4. Vi — брюшнотифозный диагностикум — препарат, полу­ченный из S. typhi, содержащей Vi-антиген, воздействием формалина Применяется в реакции агглютинации для обнаружения Vi-антител в сыворотке для серодиагностики брюшноти­фозного бактерионосительства.

5. Диагностикум бруцеллезный единый – взвесь убитых бруцелл, подкрашенная метиленовым синим. Единый бруцеллезный диагностикум применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Хеддльсона и Райта (серодиагностика бруцеллеза).

6. Диагностикум риккетсиозный Провачека - взвесь убитых риккетсий Провачека. Применяется для определения антител в сыворотке больных эпидемическим сыпным тифом в реакции агглютинации риккетсий (РАР) – серодиагностика эпидемического сыпного тифа.

7. Кардиолипиновый антиген готовят из мышечной ткани сердца быка в виде спиртового экстракта с добавлением холестерина. Применяют в качестве неспецифического антигена для постановки реакции Вассермана с целью серодиагностики сифилиса.

8. Антиген Вассермана – специфический антиген из тканевых трепонем, обработанных ультразвуком. Применяется для постановки реакции Вассермана с целью серодиагностики сифилиса.

9. Эритроцитарный сальмонеллезный 0-диагностикум – взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного для серодиагностики сальмонеллезной инфекции.

10. Эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум - эритроциты, сенси­билизированные очищенным Vi-антигеном S. typhi. Применяет­ся в РПГА для определения Vi-антител в сыворотке для серодиагностики брюшноти­фозного бактерионосительства.

11. Эритроцитарный дифтерийный диагностикум – эритроциты, сенсибилизированные дифтерийным анатоксином. Применяется в РПГА для определения антитоксических противодифтерийных антител в исследуемой сыворотке с целью оценки напряженности антитоксического иммунитета для выявления контингента лиц, подлежащих ревакцинации против дифтерии.

12. Эритроцитарный микоплазменный диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные микоплазменным антигеном. Применяется для определения нарастания титра антимикоплазменных антител в парных сыворотках больного в РПГА с целью серодиагностики микоплазменных инфекций.

13. Эритроцитарный сыпнотифозный (риккетсиозный Провачека) диагностикум – эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Провачека антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Провачека антител в сыворотке больного (серодиагностика эпидемического сыпного тифа).

14. Эритроцитарный риккетсиозный Музера диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Музера антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Музера антител в сыворотке больного (серодиагностика эндемического сыпного тифа).

15. Эритроцитарный риккетсиозный Бернета диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Бернета антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Бернета антител в сыворотке больного (серодиагностика Ку-лихорадки).

16. Эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими антибутулиническими антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления экзотоксина в сыворотке больного (экспресс-метод диагностики ботулизма).

17.Эритроцитарный антительный противостолбнячный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими антистолбнячными антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления экзотоксина в сыворотке больного (экспресс- метод диагностики столбняка).

18. Эритроцитарный антительный противогангренозный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими противогангренозными антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления противогангренозного экзотоксина в сыворотке больного (экспресс-метод диагностики газовой гангрены).

19. Эритроцитарный антительный менингококковый диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антименингококковыми антителами. Применяется в РПГА для выявления менингококкового антигена в ликворе больного.

20. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную. Диагностикум применяется при постановке РТГА или РСК с парными сыворотками больных для определения нарастания титра антител (серодиагностика гриппа)

21. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом кле­щевого энцефалита с последующей инактивацией вируса.

Диагностикум используется в РТГА или РСК для определения нарастания титра антител в парных сыворотках больного (серодиагностика клещевого энцефалита).

Использование: повышение специфичности целевого продукта. Задача: единый диагностикум риккетсий Провачека. Сущность изобретения: корпускулярный сухой обрабатывают тритоном Х-100, выделяют мембранные белки путем центрифугирования и сенсибилизируют ими формалинизированные танизированные эритроциты. Новым в способе является то, что сенсибилизацию эритроцитов проводят при Т 49-51 o C, а в качестве сенситина используют мембранные белки риккетсий Провачека, выделенные из единого антигена риккетсий Провачека при Т от 0 до 4 o C.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических препаратов с использованием нерастворимых носителей.

В медицинской промышленности для изготовления эритроцитарных риккетсиозных антигенных диагностикумов в качестве нерастворимых носителей используют эритроциты человека и различные сенситины, полученные из очищенных эфиром риккетсий Провачека, культивируемых в желточных оболочках куриных эмбрионов или в кишечнике вшей. (Пшеничнов Р.А, Колотов В.М, Касатова О.А. Жидкий эритроцитарный сыпнотифозный диагностикум для непрямой гемагглютинации. Ж. микробиол. эпидемиол. иммунобиол. 1967, N 9, с. 62-64).

Известные способы приготовления эритроцитарных антигенных диагностикумов не позволяют получать стабильные при хранении препараты, обладающие высокой специфичностью и позволяющие проводить внутригрупповую дифференциацию риккетсиозов группы сыпного тифа.

Известен способ приготовления сухого эритроцитарного сыпнотифозного антигенного диагностикума (СЭСД) на основе формалинизированных и танизированных эритроцитов барана, нагруженных (сенсибилизированных) антигеном риккетсий Провачека, выделенным из корпускулярного антигена риккетсий Провачека с помощью обработки 2%-ным раствором детергента тритона Х-100 (экспериментально-производственный регламент N 400-92 "Диагностикум эритроцитарный сыпнотифозный сухой для РНГА").

Однако существующий способ позволяет получать диагностикум с активностью, не превышающей активность коммерческих жидких препаратов. Кроме того, с его помощью невозможно проводить внутригрупповую дифференциацию риккетсиозов группы сыпного тифа, что важно для эпидемиологов, т.к. комплекс противоэпидемических мероприятий, проводимых при эпидемическом сыпном тифе, отличается от комплекса противоэпидемических мероприятий, проводимых при эндемическом сыпном тифе.

Преимуществом этого диагностикума перед жидким является то, что в качестве нерастворимого носителя используют эритроциты барана, с его помощью выявляются сыпнотифозные антитела у лиц, вакцинированных сыпнотифозной вакциной, он стабилен при хранении и выпускается в ампулах в сухом виде. Однако решить вопрос о повышении специфичности и внутригрупповой дифференциации путем увеличения нагруженности эритроцитов сенситином невозможно, т. к. для приготовления сенситина используют риккетсии Провачека, подвергнутые эфирной обработке, в процессе которой наряду с неспецифическими примесями удаляются и специфические антигены, отвечающие за внутригрупповую дифференциацию.

Изобретение направлено на решение задачи: повышение специфичности целевого продукта.

Для этого единый диагностикум риккетсий Провачека корпускулярный сухой обрабатывают тритоном Х-100, выделяют мембранные белки путем центрифугирования и сенсибилизируют ими формалинизированные танизированные эритроциты.

Существенные признаки заявляемого способа: ограничительные - сенсибилизация формалинизированных и танизированных эритроцитов барана тритоновым антигеном риккетсий Провачека и центрифугирование; отличительные - сенсибилизацию эритроцитов проводят при температуре 49 51 o C, в качестве сенситина используют мембранные белки риккетсий Провачека, выделенные из единого антигена риккетсий Провачека при температуре 0 4 o C.

Способ осуществляют следующим образом. 50 мл единого диагностикума (диагностикума риккетсиозного Провачека корпускулярного сухого для реакции связывания комплемента РСК, реакции нейтрализации антигена РНАг, метода флуоресцирующих антител МФА) регидратируют в 50 мл дистиллированной воды, осаждают риккетсии путем центрифугирования при 10000 мин -1 в течение 30 минут, а осадок ресуспендируют в 50 мл 10 mM трисHCl буферного раствора, содержащего 2% тритона Х-100. Инкубация суспензии в течение 1 часа при Т от 0 до 4 o C. Затем смесь центрифугируют при 10000 мин -1 в течение 30 минут, осадок, представляющий собой мембранные белки риккетсий Провачека, ресуспендируют в 50 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Полученные мембранные белки риккетсий Провачека (сенситин) используют для сенсибилизации формалинизированных танизированных эритроцитов барана. Для определения рабочей дозы проводят пробную сенсибилизацию. С этой целью в 5-ти пробирках готовят последовательные двукратные разведения сенситина (с 1:4 1:64) в объеме 1 мл на фосфатном буферном растворе pH 6,4. В каждую пробирку добавляют по 1 мл 6% -ной взвеси формалинизированных танизированных эритроцитов барана. Пробирки помещают в термостат и выдерживают в течение 1 часа при Т 49 51 o C. Затем эритроциты в пробирках осаждают центрифугированием при 1500 мин -1 в течение 5 минут, осадок 2 раза отмывают в 0,9%-ном растворе хлорида натрия с добавлением инактивированной и истощенной нормальной лошадиной сыворотки до концентрации 1% Затем осадок ресуспендируют в 4 мл такого же раствора, т.е. получают 2 мл 3% сенсибилизированных эритроцитов (СЭ).

В лунках полистиролового 96-луночного планшета готовят последовательные двукратные разведения (с 1:125 до 1:64000) стандартной сыворотки к риккетсиям Провачека. Затем в лунки первого ряда вносят по 0,025 мл СЭ из пробирки с разведением 1: 4, в лунки второго ряда из пробирки 1:8 и т.д. Проводят постановку контроля каждой пробы на спонтанную агглютинацию. Реакцию проводят при Т 20 22 o C в течение 1 часа. Учет результатов проводят по четырехкрестовой шкале. За рабочее разведение принимают максимальное разведение сенситина, обеспечивающее четкую агглютинацию сенсибилизированных эритроцитов стандартной сывороткой до диагностического титра.

Специфическую чувствительность сенсибилизированных эритроцитов оценивают в РНГА с гетерологичной сывороткой. Выбранное рабочее разведение используют для приготовления 100 мл эритроцитарного антигенного диагностикума. Отконтролированный диагностикум стабилизируют в наполнителе, содержащем полиглюкин до конечной концентрации 50% затем разливают в ампулы по 1 мл и подвергают лиофильному высушиванию.

Пример 1. Получение диагностикума по способу прототипу. Содержимое 50 ампул с диагностикумом риккетсиозным Провачека для реакции агглютинации регидратируют в 0,9%-ном растворе хлорида натрия, осаждают риккетсии путем центрифугирования при 10000 мин -1 в течение 30 минут. Осадок гомогенизируют в 50 мл 2%-ного раствора тритона Х-100. Инкубацию смеси проводят при Т 20 22 o C в течение 30 минут, затем центрифугируют при 10000 мин -1 в течение 30 минут и отбирают надосадочную жидкость, представляющую собой поверхностный антиген риккетсий Провачека. Получено 48 мл поверхностного антигена риккетсий Провачека, который используют для сенсибилизации формалинизированных танизированных эритроцитов барана. Для определения дозы сенситина проводят пробную сенсибилизацию при Т 42 - 44 o C по регламенту N 400-92. Рабочее разведение сенситина равно 1:4. Выбранное рабочее разведение сенситина используют для приготовления 100 мл эритроцитарного риккетсиозного антигенного диагностикума. Целевой продукт, полученный по способу-прототипу имеет активность в РНГА с сывороткой к риккетсиям Провачека 1:1600, с сывороткой к риккетсиям тифи 1:1600, т.е. не наблюдается разницы в титрах.

Пример 2. Получение диагностикума по предлагаемому способу. Содержимое 50 ампул сухого единого диагностикума регидратируют в 50 мл дистиллированной воды, буксируют и отделяют риккетсии путем центрифугирования при 10000 мин -1 в течение 30 минут. К осадку добавляют 50 мл охлажденного до 2 o C, 10mM триHCl буферного раствора pH 7,4, содержащего тритон Х-100 в конечной концентрации 2% Взвесь риккетсий инкубируют при 0 4 o C в течение 1 часа. Заданный режим температуры обусловлен тем, что при температуре выше 4 o C снижается специфическая активность диагностикума, а при температуре ниже 0 o C происходит замерзание смеси. Затем взвесь центрифугируют при 10000 мин -1 в течение 30 минут, надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспендируют в 50 мл 0,9% -ного раствора хлорида натрия и гомогенизируют. Полученную смесь, состоящую из мембранных белков, используют в качестве сенситина для приготовления специфического эритроцитарного диагностикума. Предварительно проводят пробную сенсибилизацию по методике, описанной выше. Рабочее разведение сенситина равно 1:16. Для приготовления 100 мл эритроцитарного диагностикума используют 3,2 мл сенситина в исходном разведении. К 50 мл сенситина в разведении 01: 16 на фосфатном буферном растворе pH 6,4 приливают 50 мл 6% танизированных формалинизированных эритроцитов и смесь выдерживают на водяной бане при температуре 49 - 51 o C в течение 1 часа, периодически, каждые 15 минут, встряхивая. При температуре менее 49 o C происходит снижение нагруженности эритроцитов сенситином, а при температуре выше 51 o C наступает инактивация препарата. Затем нагруженные сенситином (сенсибилизированные) ФТЭ осаждают центрифугированием при 1500 мин -1 в течение 5 минут. К осадку добавляют 200 мл 1%-ного раствора нормальной лошадиной сыворотки и вновь осаждают эритроциты центрифугированием. Осадок сенсибилизированных и отмытых ФТЭ ресуспендируют в 97 мл 1%-ного раствора нормальной лошадиной сыворотки. Целевой продукт, полученный по способу, указанному в заявке, имеет активность в РНГА с сывороткой к риккетсиям Провачека 1:50000, с сывороткой к риккетсиям тифи 1: 1600. С гетерологичной сывороткой к риккетсиям сибирика диагностикум не взаимодействует.

Таким образом, полученный по предлагаемому способу диагностикум в 30 раз активнее препарата, приготовленного по способу-протитопу. Кроме того, он позволяет проводить в РНГА внутригрупповую дифференциацию риккетсиозов группы сыпного тифа по разнице в титрах сывороток (в 31 раз) к риккетсиям Провачека и риккетсиям тифи.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения диагностикума эритроцитарного сыпнотифозного антигенного сухого путем сенсибилизации формализированных танизированных эритроцитов барана тритоновым антигеном риккетсий Провачека и центрифугирования, отличающийся тем, что сенсибилизацию эритроцитов проводят при 49-51 o С, а в качестве антигена используют мембранные белки риккетсий Провачека, выделенные из единого антигена риккетсий Провачека при 0-4 o С.

Классы МПК:	A61K39/02 бактериальные антигены
Автор(ы):	Пантюхина А.Н. , Петров В.Ф. , Александрова Л.В.
Патентообладатель(и):	Научно-производственное объединение "Биомед"
Приоритеты:
Поделиться Закон закупки 223-ФЗ Закон 223-ФЗ обозначает заказчика по тендеру, как организацию, уставной капитал которой на 50 и выше % является долей государства. Что изменилось в закупках в конце мая: обзор Постановлений Правительства Переторжка по 44-ФЗ и 223-ФЗ: особенности, процедура проведения Исключения из правил: что нельзя закупить по 44-ФЗ или 223-ФЗ Ответственность за нарушение 223-ФЗ о закупках Как проверяют закупки по 223-ФЗ на соответствие законодательству Положение о закупках по 223-ФЗ: содержание, структура, примеры Разбираемся в особенностях закупок по 223-ФЗ Сравниваем 44-ФЗ и 223-ФЗ: таблица для чайников Как работать со сведениями о цене по 223-ФЗ Как проходят закупки у СМП по 223-ФЗ и 44-ФЗ Новый 223-ФЗ: к чему готовиться Способы закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ Информационная лента При прокрутке вниз Вы можете получить очень полезную информацию, подобранную специально для Вас нашей программой. А также самые интересные и актуальные статьи о тендерах и закупках, которые мы подобрали для Вас на просторах интернета. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 Портал отображает информацию о закупках, публикуемых в сети интернет и находящихся в открытом доступе, и предназначен для юрлиц и индивидуальных предпринимателей, являющихся участниками размещения государственного и коммерческого заказа. Сайт использует Cookie, которые нужны для авторизации пользователя. На сайте стоят счетчики Яндекс.Метрика, Google Analytics и LiveInternet, которые нужны для статистики посещения ресурса. Читайте также: Чем отличается дизентерия от диареи Чем лечить трихомониаз у женщин препараты свечи Возбудители столбняка и ботулизма обитают У тифа и лебедей один создатель Болезненное мочеиспускание при трихомонадах