Лабораторная диагностика сальмонеллезов обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды

Лабораторная диагностика брюшного тифа и паратифов. проводится с учетом патогенеза заболевания. Основными методами лабораторной диагностики являютсябактериологический и серологический.

При сальмонеллезах иммунитет нестойкий непродолжительный.

С первого для заболевания исследуют кровь на гемокультуру (бактериологический метод). Для этого 5-10 мл крови больного засевают в колбы с 50-100 мл питательной элективной среды с желчью – среды Раппопорта. Желчь нейтрализует бактерицидные свойства сыворотки крови. После инкубирования в термостате производят пересев на среды Эндо, Левина, Плоскирева (для получения изолированных колоний и чистых культур из них). Прозрачные бесцветные колонии отсевают на среду Ресселя (Олькеницкого), на которой учитывают ферментацию сальмонеллами глюкозы и отсутствие ферментации лактозы.

Чистую культуру идентифицируют по биохимическим свойствам(сахаролитическим - по результатам посева на среды Гисса и протеолитическим - тестами на индол, Н2S, NH3 в посевах на МПБ) и антигенной структуре. Для сероидентификации ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой к сальмонеллам групп А, В, С, Д, Е. Положительный результат свидетельствует о принадлежности выделенной культуры к роду Salmonella. Затем определяется О-серогруппа в реакциях агглютинации с отдельными О-сыворотками (входящими в поливалентную сыворотку). Для определения серовара (вида возбудителя) устанавливают Н-антигены с монорецепторными Н-сыворотками первой, а затем второй фазы. Для полноты идентификации выделенную культуру проверяют на лизабельность поливалентным брюшнотифозным фагом.

S. typhi, кроме того, фаготипируют (определяют фаговар) Vi-фагами для установления эпидемиологической цепочки.

Для ранней ускоренной диагностики перспективным является иммунофлюоресцентный метод, позволяющий выявить специфический антиген в исследуемом материале ( крови, костном мозге).

Со второй недели заболевания проводятбактериологические исследования с испражнениями(получение копрокультуры), мочой(получение уринокультуры), желчью.

Испражнения (мочу, желчь) непосредственно, а также после проведения их через среды обогащения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина, Плоскирева) так, чтобы выросли изолированные колонии. Из бесцветных колоний получают чистые культуры, которые идентифицируют так же, как и гемокультуру.

Серодиагностика(выявление антител в сыворотке больного) осуществляется с конца первой - начала второй недели заболевания путем постановки реакции агглютинации Видаля с О-, Н-брюшнотифозными и А- и В-паратифозными диагностикумами.

Более чувствительной является РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с О-, Н-, Vi-эритроцитарными диагностикумами.

Положительная реакция агглютинации с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а положительная реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших, и у привитых, так как О-антитела накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления, а Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших длительное время. Диагностический титр реакции Видаля 1:200. По нарастанию титра агглютининов в динамике можно отличить имеющуюся инфекцию от реакции на прививку. В последнем случае нарастания титра антител не будет.

Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации. Vi-антитела после полного выздоровления исчезают, но при наличии брюшнотифозного носительства они присутствуют постоянно. Выявление Vi-антител в титре 1:40 и выше имеет диагностическое значение: такие лица подлежат многократному бактериологическому обследованию.

Основным методомлабораторной диагностики является бактериологический. Исследуют рвотные массы, промывные воды желудка, дуоденальное содержимое, (желчь) кровь, мочу, фекалии, гной или экссудат из воспалительных очагов, пищевые продукты. Засевают на среды обогащения (селенитовый или 20% желчный бульон), а затем на висмут-сульфит агар (высокоселективная среда), Плоскирева (среднеселективная) Эндо, Левина.

Схема микробиологических исследований аналогична таковым при выделении и идентификации гемо-и копрокультуры при брюшном тифе.

Из серологических методов применяют реакцию агглютинации с О- и Н-диагностикумами, иногда с аутоштаммами бактерий, выделенными от больных; более чувствительна РНГА с эритроцитарными диагностикумами.

Возможно использование биологического метода путем вскармливания белых мышей зараженными пищевыми продуктами. S. enteritidis и S. typhimurium вызывают гибель мышей через 1-2 суток. Посевы крови из сердца и материала из внутренних органов дает рост сальмонелл.

Для экспресс-диагностики применяют иммунофлюоресцентный метод исследования (обнаружение антигенов возбудителя с помощью иммунных сывороток, обработанных флюорохромами).

|	следующая лекция ==>
Патогенез, клиника сальмонеллезов	|	Лечение сальмонеллезов

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Понятие и клиническая картина, симптоматика и признаки сальмонеллеза, морфология и физиология его возбудителя. Особенности сальмонелл-возбудителей брюшного тифа и паратифов, гастроэнтероколитов, внутрибольничных инфекций. Подходы к диагностике и лечению.

Рубрика	Медицина
Вид	реферат
Язык	русский
Дата добавления	20.12.2015
Размер файла	24,1 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Сальмонеллез: лабораторная диагностика

Сальмонеллез - острая инфекционная болезнь животных и человека, вызываемая бактериями рода Salmonellae, передающаяся в большинстве случаев через пищевые продукты и характеризующаяся преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта.

Род получил название по имени Сальмоне, который в 1885 г. описал микроб, выделенный из свиньи.

Сальмонеллы представляют собой мелкие палочки, окруженные микрокапсулой, подвижны за счет перитрихиально расположенных жгутиков. являются лактозоот - рицательными бактериями (диагностический признак), некоторые серовары ферментируют сахара только до кислоты (S. typhi), что так же является диагностическим признаком. Протеолитические свойства менее выражены, чем у Е. coli

Семейство - Enterobacteriacea, род - Salmonella.

Морфологические свойства: палочки, перетрихи.

Тинкториальные свойства: Грамотрицательный тип дыхания.

Элективные питательные среды: Эндо, Плоскирева, желчный бульон.

Культуральные свойства: температурный оптимум роста 35-37 о С, через 24 часа роста образуют мелкие прозрачные колонии S, иногда R формы.

Биохимические свойства: не способны ферментировать адонит, лактозу, сахарозу, салицин, не расщепляют мочевину и не продуцируют индал, но образуют сероводород.

Антигенная структура: O-Ar - термостабильный, Н-Ar - термостабильный.

По О антигену сальмонеллы делятся на серологические группы, а по Н - на серовары.

Один из компонентов антигенной структуры - Vi антиген, или антиген вирулентности.

Биохимические свойства. Обладают выраженной биохимической активностью. Основные биохимические свойства, необходимые для идентификации:

ферментация глюкозы до кислоты и газа (S. Typhi не продуцируют газ);

отсутствие ферментации лактозы;

продукция сероводорода (за исключением S. Paratyphi A);

декарбоксилирование лизина (за исключением S. Paratyphi A);

отсутствие расщепления мочевины;

отрицательный тест Фогеса-Проскауэра

Антигенная структура и классификация. Сальмонеллы обладают соматическим О-антигеном, жгутиковым Н-антигеном. Некоторые сальмонеллы обладают К-антигеном. В связи с тем, что по основным биохимическим свойствам представители рода Salmonella однотипны, дифференциация внутри рода проводится по антигенной структуре.

Средами обогащения при посеве крови являются:

- бульон с сердечно-мозговой вытяжкой;

На лактозосодержащих дифференциальных средах образуют бесцветные колонии, на висмут-сульфитном агаре - колонии черного цвета, на среде BGA - розовые колонии.

В настоящее время род Salmonella состоит из двух видов: S. епterica и S. bongori.

S. enterica состоит из 6 подвидов: enterica, palamae, arizonae, diarizonae, hoitanae, indica. В него включены все сальмонеллы, являющиеся возбудителями человека и теплокровных животных. Имена сероваров подвида enterica пишутся с прописной буквы, они соответствуют прежним видовым названиям, например S. typhi - S. Typhi. Вид S. bongori подразделяется на 21 серовар и включает в себя сальмонеллы, изолированные из холоднокровных животных.

Некоторые серовары сальмонелл, в частности S. Typhi, имеют полисахаридный Vi-антиген, являющийся разновидностью К-антигена. Vi-антиген по химической структуре является полимером.

Факторы патогенности сальмонелл. Вид S. enterica является факультативным внутриклеточным паразитом, способным инвазировать нефагоцитируюшие клетки эпителия слизистой оболочки кишечника и размножаться в макрофагах. Это связано с тем, что в отличие от вида S. bongori, вид S. enterica имеет в геноме 6 так называемых островков патогенности (pathogenicity island) SPI, детерминирующих синтез факторов патогенности.

Все сальмонеллы обладают эндотоксином, который вызывает в случае бактериемии развитие лихорадки. При достижении критической концентрации в тканях кишечника эндотоксин активирует каскад арахидоновой кислоты, в результате чего увеличивается синтез простагландинов, и как следствие повышается уровень цАМФ, приводящий к нарушению водно-солевого баланса кишечника и развитию диареи.

Вызываемые заболевания. В зависимости от источника инфекции, путей передачи, особенностей патогенеза и форм проявления инфекционного процесса среди заболеваний, вызываемых сальмонеллами, различают системные инфекции (брюшной тиф и паратифы), сальмонеллезные гастроэнтериты и госпитальный (нозокомиальный) сальмонеллез.

Сальмонеллы - возбудители брюшного тифа и паратифов

Брюшной тиф - острое антропонозное инфекционное заболевание с фекально-оральным механизмом передачи. Протекает в генерализованной форме с поражением лимфатического аппарата кишечника, мезентериальных лимфоузлов, паренхиматозных органов, с бактериемией. Характеризуется циклическим течением. Клинически проявляется выраженной интоксикацией с лихорадкой, развитием гепатолиенального синдрома, в ряде случаев розео-лезной сыпью и энтеритом.

Название болезни введено Гиппократом, оно происходит от греческого слова typhos (туман, спутанное сознание).

Этиология. Возбудителем брюшного тифа является S. Typhi. Впервые возбудитель заболевания обнаружили в органах умерших полей Т. Брович (1874), Н.И. Соколов (1876) в России и К. Эберт (1880) в Германии. В 1884 г. Т. Гаффки выделил возбудитель в чистой культуре. Возбудителями паратифов являются S. Paratyphi А.

Биохимические свойства в основном типичны для рода Salmonella. Отличительными особенностями являются: отсутствие газообразования при ферментации S. Typhi, неспособность S. Paratyphi A продуцировать сероводород и декарбоксилировать лизин.

Возбудители брюшного тифа и паратифов являются сероварами подвида enteric, обладающими следующей антигенной структурой: S. Typhi О: 9, 12 Vi, H: d, S. Paratyphi А О: 1, 2, 12, Н: а (1,5); S. Paratyphi В О: 1,4 (5) 12, Н: b, 1, 2, S. Paratyphi С:О: 6, 7 (Vi) H: с, 1,5. S. Typhi, S. Paratyphi С имеют полисахаридный Vi-антиген.

Эпидемиология, патогенез заболеваний

Источник инфекции - человек, больной, бактерионоситель, реконвалесцент.

Путь передачи - алиментарный, контактный и водный.

1. Пищеварительная (дигестивная) стадия - микробы в кишечнике.

2. Стадия инвазии - размножение микробов в лимфатических узлах стенки тонкой кишки и брыжейки - это инкубационный и продромальный периоды.

3. Стадия бактериемии - микробы попадают из лимфоузлов в кровь, но не размножаются - совпадает с началом болезни и соответствует 1 неделе (высокая температура, головная боль, боли в животе снизу справа, сыпь, увеличение печени и селезенки).

4. Стадия паренхиматозной диффузии - захват микробов из крови фагоцитами.

5. Аллергически-выделительная стадия - сопровождается рецидивом болезни и образованием язв на месте некротизированных лимфатических образований, т.е. пейеровых бляшек.

6. Исход (выздоровление, бактерионосительство, смерть).

Диагностика брюшного тифа и паратифов

Учитывая развитие инфекционного процесса при брюшном тифе и паратифах, возбудитель выделяют:

· на I неделе - из крови (гемокультура)

· с конца 2, 3 недели - из испражнений (копрокультура)

· с конца 2 недели - из мочи (уринокультура)

· из желчи - начиная со 2-ой недели заболевания, в течение всего периода заболевания.

Начиная со 2-ой недели заболевания параллельно проводится серологическое исследование сыворотки крови.

Забор крови для получения гемокультуры

1. Кровь для посева подвергают исследованию при подъеме температуры у больного в начале озноба.

2. Объем крови составляет 5-10 мл, берут из локтевой вены.

3. Посев рекомендуется производить непосредственно после взятия в 50-100 мл среды обогащения в колбу объемом 250 мл.

4. При невозможности проведения посева, сразу после забора крови, помещают в стерильную пробирку, содержащую антикоагулянт и транспонируют в лабораторию. Хранить материал можно не более 2 часов в холодильнике при +4°С.

Для получения копрокультуры у больных забирают испражнения:

1. Посев для выделения сальмонелл производят из жидкой части испражнений.

2. Посев фекалий можно производить прямым способом - на среды обогащения и плотные; при этом небольшое количество испражнений размешивают в физиологическом растворе. Оставляют на 30 минут для оседания крупных частиц. С поверхности берут одну каплю материала, которую засевают на дифференциально-диагностические среды для выделения сальмонелл (агар Плоскирева, висмут-сульфитный агар).

Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов

Для этиотропного лечения используют антибиотики или другие химиотерапевтические препараты.

Специфическая профилактика тифо-паратифозного заболевания проводится убитыми и химическими вакцинами по эпидемическим показаниям, контактным лицам - экстренная фагопрофилактика сальмонеллезными поливалентными бактериофагами.

Сальмонеллы - возбудители гастроэнтероколитов. К данной группе относятся возбудители сальмонеллезов, кли нически проявляющиеся у людей в виде гастроэнтероколитов, возни кающих в результате пищевых токсикоинфекций. К ним относятся разнообразные серовары сальмонелл: S. typhimurium, S. enterididis, S. anatum Патогенность и патогенез. К факторам вирулентности относятся микрокапсула, белки наружной мембраны клеточной стенки, которые способствуют адгезии на энтероцитах тонкой кишки. Затем они проникают в энтероциты и в составе фагосомоподобных вакуолей, где фагоцитируются макрофагами. Вместе с тем сальмонеллы мед ленно размножаются в организме из-за того, что они нуждаются в F++. Многие из них, например, S. typhimurium, имеют плазмиду ColB, которая способна отбирать Fe-н - от гемоглобина. Этот признак также можно рассматривать как проявление вирулентных свойств патоген ных бактерий. Существенное значение в возникновении и развитии сальмонеллезов имеет количество бактерий, поступивших в кишечник. При разрушении сальмонелл освобождается эндотоксин (ЛПС), оказывающий неспецифическое полифункциональное действие (на рушение функций нервной, сердечно-сосудистой и пищеварительной систем). Кроме того, сальмонеллы продуцируют энтеротоксин (типа термолабильного токсина Е. coli), механизм действия которого заключается в нарушении водно-солевого обмена, что приводит к диа рее и обезвоживанию организма. Заболевание обычно протекает в течение 3-5 дней и заканчивается выздоровлением. При генерализации процесса болезнь затягивается.

Иммунитет. При сальмонеллезах имеет место гуморальный и частично клеточный иммунный ответ, которые не приводят к развитию напряженного иммунитета, в отличие от брюшного тифа и паратифов.

Экология и эпидемиология. Как указывалось выше, сальмонеллезы являются зоонозно-антропонозными инфекциями. Заражение происходит при употреблении в пищу мяса крупного рогатого скота, свиней, кур, а также яиц. Инфицирование мяса может быть прижизненным, а также происходить в процессе убоя, разделки туш, при хранении, транспортировке и кулинарной обработке. Кроме мяса источником инфекции могут быть кондитерские изделия, при изготовлении которых используют зараженные яйца. К сальмонеллезам одинаково восприимчивы взрослые и дети, у которых заболевание про текает тяжелее. В отличие от многих других бактерий сальмонеллы могут размножаться при 4-6°С и длительно сохраняться в замороженных мясных изделиях. Лабораторная диагностика. Окончательный диагноз пищевой токсикоинфекции устанавливают только после выделения возбудите ля из организма больных людей и пищевых продуктов. Для этого проводят бактериологические исследования, которые обязательно за вершаются определением серовара выделенной чистой культуры саль монеллы, что необходимо для выявления источника инфекции. При пищевых токсикоинфекциях, вызванных другими бактериями (Е. coli, Proteus и др.), также необходима их идентификация с установлением вида и серовара или биовара. Определение серовара проводят с по мощью монорецепторных сывороток.

Профилактика и лечение. Основное значение в профилактике сальмонеллезов придается проведению ветеринарно-санитарных и других противоэпидемических мероприятий. Антибиотики применя ют только для лечения генерализованных форм сальмонеллеза

Сальмонеллы - возбудители внутрибольничных инфекций

Общая характеристика. Возбудителем внутрибольнично го сальмонеллеза чаще всего является S. typhimurium. Однако неред ки заболевания, вызываемые другими сероварами S. derby, S. heidelberg, S. wien, S. haifa и др., которые относятся к группе В. Эти сальмонеллы по своим морфологическим, физиологичес ким, биохимическим и антигенным признакам не отличаются от бак терий - возбудителей пищевых токсикоинфекций. Идентифицирова ны биовары некоторых из перечисленных выше сальмонелл, которые, как правило, выделяются только при внутрибольничной инфекции. Так, среди S. typhimurium идентифицировано три биовара, одинако вых по своей антигенной структуре, но отличающихся друг от другапо патогенности для белых мышей при энтеральном заражении и по чувствительности к антибиотикам. Как правило, сальмонеллы, выде ляемые при внутрибольничной инфекции, резистентны к 15-20 анти биотикам. Это связано с наличием у них конъюгативных R-плазмид, несущих множественную устойчивость к антибиотикам.

Патогенность и патогенез. Распространение внутрибольничных сальмонеллезов происходит тремя путями: контактно-бытовым, воздушно-пылевым и пищевым. Наиболее распространен контактно бытовой путь передачи инфекции. Проявления болезни разнообразны и варьируют от бессимптомного бактерионосительства и легчайших субклинических форм до выраженных интестинальных расстройств с тяжелой интоксикацией, бактериемией, иногда с генерализацией про цесса и развитием осложнений. Внутрибольничные сальмонеллезы у детей раннего возраста протекают более тяжело и длительно. Они со провождаются значительной интоксикацией и более глубокими пора жениями желудочно-кишечного тракта, а также бактериемией и разви тием токсико-септических и даже септико-дистрофических состояний. У детей старше 3 лет часто отмечаются легко протекающие кишечные формы и бессимптомное бактерионосительство. Сальмонеллезная ин токсикация нарушает функции гипоталамуса и обменные процессы. При этом дети грудного возраста теряют большое количество солей и воды, что приводит к возникновению токсикоза и обезвоживанию орга низма. У детей старше 1 года может наступить синдром нейротокси коза. Особенно опасно для детей раннего возраста присоединение саль монеллезов к стафилококковой инфекции, респираторной вирусной инфекции, пневмонии, эшерихиозу. Часто у таких больных развивает ся сепсис смешанной этиологии или менингит.

Лабораторная диагностика. Основное значение имеет выделе ние чистой культуры и определение ее серовара при инфекции S. typhimurium.

Профилактика. С целью специфической профилактики исполь зуют поливалентный сальмонеллезный фаг. Его вводят детям в ста ционарах, контактировавшим с больными сальмонеллезами и носи телями. Получают фаг также матери, находящиеся в тесном контакте с больными детьми

Список используемой литературы

сальмонеллез тиф гастроэнтероколит внутрибольничный

1) Медицинская микробиология, вирусология, иммунология - Борисов Л.Б.

2) Год выпуска: 2005

Кишечные инфекции являются одними из распространенных заболеваний по критерию смертности среди населения планеты. По международным оценкам во всем мире ежегодно выявляют более 3 млн. случаев заражения со смертельным исходом, связанных с грамотрицательными кишечными патогенами из-за диареи и кишечной лихорадки.

Производство мясной продукции в РФ за 17 лет выросло в 6 раз. По данным МСХ РФ в 2017 г производство скота и птицы на убой (в живом весе) в хозяйствах всех категорий составило 14,6 млн. т, т.е. по сравнению с 2016 г увеличилось на 4,7 %, что благоприятно сказалось на работе перерабатывающих предприятий [3].

В счет увеличения потребления и производства мяса птицы повышается потенциальный риск загрязнения продовольственных товаров сальмонеллами. По статистическим данным Роспотребнадзора, за январь-апрель 2016 г в РФ было зарегистрировано 10347 случаев сальмонеллезных инфекций, 2246 случаев в шигеллеза, 180534 случая острых кишечных инфекций, вызванных неопределенными инфекционными возбудителями.

Сальмонеллёз – это пищевая токсикоинфекция, которая ассоциируется с потребление контаминированных пищевых продуктов, свежего или обработанного мяса и птицы, а также яиц. По итогам 2017 г душевое потребление мяса птицы в РФ составило 34,3 кг. Для сравнения, в 2012 г ― 29,0 кг, в 2007 г ― 22,5 кг, 2002 г ― 16,1 кг, т.е. потребление мяса за 15 лет увеличилось более чем в 2 раза. Чтобы недопустить контаминацию и распространение возбудителя необходимо проводить контроль качества выпускаемой продукции [5, с. 13 - 14].

Род Salmonella входит в семейство Enterobacteriaceae и включает в себя вид S. enteritica и серовары: S. typhimurium, S. choleraesuis и S. enteritidis. Современная серологическая классификация сальмонелл насчитывает свыше 2500 сероваров и бактерий видов S. enterica и S. bongori. Вид S. bongori включает в себя только 22 серовара,. а вид S. enterica 2557 сероваров, которые подразделяются на 6 основных подвидов: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae, indica. В состав клеток сальмонелл входят O-, H-, Vi-, M- и K- антигены, на основе общности соматических антигенов обозначают – 1, 2, 3…15. Дифференциацию внутри группы осуществляют по H-антигенам (a, b, c, d) [6, с. 60 - 63].

За последние 25 лет были приняты попытки разработать усовершенствованные методы обнаружения и идентификации сальмонелл в продуктах животного происхождения. В данной работе рассмотрим методы, используемые для идентификации сальмонелл.

На сегодняшний день выявление в пищевых продуктах сальмонелл проводят с использованием ПЦР-диагностики. ПЦР используется в качестве основного метода идентификации для ускоренного обнаружения сальмонелл в сфере молекулярной биологии. Мишенью для амплификации ДНК бактерий служат части нуклеиновых кислот патогена. Важной особенностью метода ПЦР-Real time является возможность распознавания и идентификации продуктов амплификации ДНК бактерии при непосредственном проведении реакции. Процедура ПЦР анализа продуктов питания по выявлению сальмонелл регламентируется ГОСТ Р ИСО/МЭК-17025.

На первом этапе постановки реакции ПЦР необходимо увеличить численность сальмонелл, с этой целью проводят обогащение образцов. Однако в ходе обогащения клетки сальмонелл могут вытесняться другими микроорганизмами или ингибироваться специализированными метаболитами, например антибиотиками. Кроме того необходимо исключить и ложноположительные результаты при распознавании ДНК нежизнеспособных клеток. Для этого существуют специальные методы отделения популяции сальмонелл от фона других микроорганизмов. Например, иммуномагнитная сепарация клеток (ИСК) которая основывается на взаимодействии очищенных антител, ковалентно связанных на поверхности парамагнитных частиц, с колониями сальмонелл. Однако чувствительность данного метода ограничена связывающей специфичностью антител к клеткам бактерий, что имеет решающее значение для предотвращения ложноотрицательных результатов. Очевидными преимуществами ПЦР диагностики являются быстрота выполнения анализа, чувствительность и специфичность обнаружения, но высокая стоимость оборудования и другие затраты останавливают производителей в пользу более простых и классических методов [2].

Кроме ПЦР существует ИФА-тест, разработанный для идентификации бактерий рода Salmonella. Этот тест содержит ряд специальных компонентов, позволяющих быстро подтвердить наличие или отсутствие в пищевых продуктах патогенных микроорганизмов. Патогены обнаруживаются через уникальную комбинацию ELISA метода иммунохроматографии и появления окрашенного сигнала. Используются тесты Singlepath или Duopath, в состав которых входят коллоидные, меченные золотом антитела к патогенным антигенам. Комплекс антиген-антитело перемещается на мембрану к реакционной зоне, где образуется красная полоса. Тест содержит зону контроля, и если его работа верна, образуется вторая красная линия. Преимуществами данного метода является значительное сокращение времени исследований (на 48 ч), высокая специфичность и надежность определения. Метод не предусматривает сложных процедур пробоподготовки и использования каких-либо дополнительных приборов или устройств [4].

К ускоренным методам выявления бактерий рода Salmonella относится использование специализированной среды Salmosyst, где изначально микроорганизмы проходят стадию неселективного обогащения. Обогащение проводят на среде Salmosyst® Broth Base, с добавлением таблетки Salmosyst® Selective Supplement, которая увеличивает рост сальмонелл и подавляет сопутствующую микрофлору. Для идентификации сальмонелл культуру высевают на одну из дифференциально-диагностических сред. Преимуществом данного метода является сокращение времени исследования на 24-48 ч, а также высокая чувствительность (выявляются поврежденные клетки сальмонелл), простота выполнения анализа и экономичность. Этот метод одобрен Центром Гигиены и Эпидемиологии Роспотребнадзора (МР №24ФЦ/976) и разрешен к применению в лабораториях санитарно-эпидемиологической службы, осуществляющих государственный и ведомственный контроль, а также в производственных лабораториях.

Кроме вышеперечисленных методик существует еще метод выявления бактерий рода Salmonella с использованием специализированной полужидкой среды Раппопорта-Вассилиадиса (среда MSRV) с новобиоцином. На этой среде сальмонеллы образуют светлую непрозрачную зону роста. Рост сопутствующих бактерий ингибируется введением новобиоцина, наличием хлорида магния, малахитового зеленого и культивированием при повышенной температуре – 41,5 °С. Преимуществом метода является время исследования, которое составляет 24-48 ч (за счет совмещения этапа селективного обогащения с этапом высева на агаризованную среду) и высокая чувствительность, обеспечивающая выявление даже единичных клеток сальмонелл, а также экономичность метода [1].

На российском рынке широко представлена экспресс-система для определения сальмонелл Petrifilm ® SALX. Данный тест предназначен для быстрого выявления и биохимического подтверждения сальмонелл в обогащенных образцах пищевых продуктов и производственных объектов. Учет результатов проводят через 44-52 ч. Дополнительный анализ на наличие сальмонелл и других патогенных микроорганизмов проводят по системе молекулярного анализа 3М ™ . В основе разработанной системы лежит комплекс изотермической амплификации ДНК и биолюминесцентной детекции. Использование данного сочетания обеспечивает высокую чувствительность и точность результатов, которые учитывают через 24-27 ч [4].

Метод идентификации сальмонелл с помощью масс-спектрометрии обеспечивает прямое обнаружение присутствия выраженных бактериальных рибосомальных белков, где каждый воспроизводимый результат видоспецифичен. Преимуществом масс-спектрометрии является отсутствие необходимости в пробирном отборе материала. Масс-спектральные отпечатки содержат достаточно наблюдаемых белков, что делает его достаточно мультиплексным анализом [2].

Альтернативой MALDI-ToF MS является обнаружение бактериальных белков с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии ― метод разделения и анализа сложных смесей веществ, в котором подвижной фазой является жидкость. Данный метод показал большие перспективы для дифференциации близкородственных видов с пределах семейства Enterobacteriaceae и выявления белков-биомаркеров для разработки зондов ПЦР [2].

Заключение

Таким образом, методов применяемых для индикации и идентификации бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах достаточно много. Однако не все методы будут рекомендоваться или даже использоваться для определенного случая диагностики при исследовании сырья и продуктов животного и растительного происхождения. Производительность самого метода будет зависеть от общей чувствительности, его специфики, а также технической сложности. Влияют также и внешние факторы, включая набор навыков специалиста и техническое мастерство, стоимость оборудования и материалов. Но в итоге, при систематической проверке методов установится их полезность и эффективность.

Главной целью новых разработок является сокращение времени и автоматизация лабораторной диагностики. Важно отметить, что результаты применения одного метода будут способствовать улучшению характеристик другого, даже если они непосредственно не будут связаны между собой.

Список литературы:

1. ГОСТ Р 53665-2009. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл.
2. МУ 4.2.2723-10 Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды.
3. Абдуллаева А.М., Серегин И.Г., Удавлиев Д.И., Соколова Н.А., Лощинин М.Н., Мамедбердыева М.Д. Микробиологическая безопасность полуфабрикатов из мяса птицы /// Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. – 2017. – № 2 (22). – С.11-15.
4. Абдуллаева А.М., Смирнова И.Р., Трохимец Е.В., Губанкова А.А. Микробиологический контроль полуфабрикатов из мяса индеек при холодильном хранении // Ветеринария. – 2017. – № 8. – С. 49-53.
5. Серегин И.Г., Дюльгер Г.П., Кульмакова Н.И., Абдуллаева А.М. Ветеринарно-санитарная экспертиза при переработке птицы. Учебное пособие. – Санкт-Петербург: Квадро. – 2017. – 200 с.
6. Соколова Н.А., Абдуллаева А.М., Лощинин М.Н. Возбудители зооантропонозов, пищевых отравлений, порчи сырья и продуктов животного происхождения. Учебное пособие. – М.: ДеЛи плюс, – 2015. – 170 с.