Методы диагностики при листериозе

Цель занятия:изучить методы диагностики и лечения листериоза, систему профилактических и оздоровительных мероприятий.

Материалы и оборудование:таблицы, рисунки, микроскопы, готовые мазки, окрашенные по Романовскому-Гимзе, и биопрепараты, применяемые при пастереллезе животных и птиц.

Место проведения занятия:аудитория кафедры эпизоотологии.

Листериоз - зоонозная болезнь животных и человека, характеризующаяся поражением центральной нервной системы, септическими явлениями, абортами, маститами или протекающая в форме бессимптомного носительства.

Возбудитель - Listeria monocytogenes - подвижная, полиморфная, грамположительная мелкая палочка (длиной 0,5-2,0 нм; шириной 0,3-0,5 нм) с закругленными концами.

Листерии обладают сравнительно высокой устойчивостью, широко распространены во внешней среде, при низких температурах (+4 - +6 °С) длительное время (до нескольких лет) сохраняются в почве, воде, соломе, зерне. Размножаются в почве, воде, молоке, мясе, силосе, а также в органах трупов.

Основным резервуаром возбудителя в природе являются многие виды диких и синантропных грызунов. Листерии обнаружены у лисиц, норок, енотов, песцов, диких копытных, птиц. Листериоз поражает домашних и сельскохозяйственных животных (свиней, мелкий и крупный рогатый скот, лошадей, кроликов, реже кошек и собак), а также домашнюю и декоративную птицу (гусей, кур, уток, индюшек, голубей, попугаев и канареек). Листерии обнаружены также в рыбе и продуктах моря (креветки).

При листериозе имеет место многообразие механизмов передачи возбудителя инфекции (фекально-оральный, контактный, аспирационный, трансплацентарный). Основным из которых является фекально-оральный.

Диагностика и дифференциальная диагностика.Диагноз болезни устанавливают на основании комплекса эпизоотологических, патологоанатомических данных, а также результатов лабораторного исследования в соответствии с методическими указаниями по лабораторной диагностике листериоза.

Для исследования в лабораторию направляют трупы мелких животных или голову (головной мозг), кусочки печени, селезенки, почки, лимфатические узлы, пораженные участки легких, абортированный плод и его оболочки, истечения из половых органов абортировавших самок, молоко из пораженных долей вымени при маститах или при подозрении на скрытый мастит. Материал посылают свежий или консервированный в 30%-ном растворе глицерина. Для прижизненной диагностики для серологического исследования посылают кровь или сыворотку крови от больных и подозрительных по заболеванию животных (желательно парные сыворотки, взятые с интервалом 7-14 дней).

Бактериологическая диагностика включает микроскопию исходного материала, посевы на питательные среды, идентификацию выделенных культур по культурально-биохимическим, тинкториальным и серологическим свойствам, а также постановку биологической пробы на лабораторных животных. Решающее значение принадлежит выделению культуры. Причем, если культура листерии в бактериальной форме не выделена, но есть обоснованные подозрения на листериоз, проводят дополнительное исследование на обнаружение L-форм листерии. Для ускоренной диагностики листериоза можно применять прямую или непрямую реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и ИФА. Для идентификации используют также листериозные бактериофаги. Для выявления скрыто больных животных и листерионосителей проводят серологические исследования (РА и РСК, РНГА). При исследовании парных сывороток нарастание титра в 2-4 раза и более подтверждает диагноз на листериоз.

Листериоз необходимо дифференцировать: у крупного рогатого скота от злокачественной катаральной горячки (ЗКГ), бруцеллеза, кампилобактериоза, трихомоноза; у свиней от болезни Ауески, отечной болезни; у овец от ценуроза; у всех животных от бешенства и кормовых отравлений.

При постановке диагноза на листериоз нужно помнить о возможности смешанной инфекции.

Профилактика листериоза у животных.

1. Необходимо комплектовать фермы животными из благополучных по листериозу хозяйств.

2. Не допускать ввода вновь поступивших животных в общее стадо без предварительного карантинирования их в течение 30 дней.

3. Во время карантина при формировании новых групп в животноводческих комплексах необходимо проводить клиническое обследование животных и при необходимости (при выявлении признаков поражения нервной системы, абортов, повышенной температуры тела) - бактериологические и серологические исследования на листериоз.

4. Систематически проводить уничтожение грызунов, кровососущих насекомых и клещей.

5. Для профилактики инфицирования кормов периодически проводить отлов грызунов в животноводческих помещениях, на прилегающей территории и в хранилищах кормов.

6. Постоянно контролировать качество кормов, особенно силоса и комбикорма, а при наличии показаний подвергать их бактериологическому исследованию.

7. Вести строгий учет случаев абортов, мертворождения и падежа животных и направлять патологический материал на исследование в ветлабораторию.

8. При маститах проводить бактериологическое исследование молока.

9. Забор и направление материалов на бактериологическое обследование проводится в соответствии с инструктивно-методическими документами Минсельхозпрода РФ.

Оздоровление неблагополучных хозяйств.

Хозяйства (фермы), в которых выявили заболевания животных листериозом, объявляют неблагополучными и в них вводят ограничения. При этом проводят поголовный осмотр и термометрию животных. Больных с признаками поражения центральной нервной системы направляют на убой. Подозрительных по заболеванию изолируют и лечат. Остальных животных вакцинируют или с профилактической целью дают им антибиотики. Сыворотку крови животных исследуют с помощью РА и РСК. Положительно реагирующих также изолируют и лечат.

Лечение.Листерии -внутриклеточные паразиты, поэтому болезнь трудно поддается лечению. Наиболее эффективны при листериозе антибиотики тетрациклинового ряда (хлортетрациклин, террамицин, тетрациклин), если применение их начато своевременно. Эффективным считается ампициллин или его сочетание с гентамицином. Одновременно проводят симптоматическое лечение - назначают дезинфицирующие, вяжущие средства. Для лечения поросят применяют стрептомицин внутримышечно 2 раза в день в течение 2-3 дней, а также сульфонтрол, сульфадимезин в соответствующих дозах.

Периодически проводят дератизацию (истребление грызунов) в животноводческих помещениях, в хранилищах кормов и лабораторные исследования отловленных зверьков на листериоз. Помещения, где находились больные животные, очищают и дезинфицируют 3%-ным горячим раствором гидроксида натрия, 5%-ной эмульсией ксилонафта, 20%-ной взвесью свежегашеной извести (гидроксид кальция), осветленным раствором хлорной извести, содержащим не менее 2 % активного хлора. Навоз обеззараживают биотермически.

При ВСЭ туш и внутренних органов голова и пораженные внутренние органы (печень, селезенка, сердце, кишки, имеющие некротические поражения) от больных листериозом животных подлежат технической утилизации. При истощении или дегенеративных изменениях в мускулатуре тушу со всеми внутренними органами утилизируют. При отсутствии патологических изменений в мускулатуре и внутренних органах тушу направляют на проварку. Молоко от больных коров кипятят. Ограничения с хозяйства снимают через 2 мес после последнего случая выделения клинически больных животных и получения отрицательных результатов по РСК (РА, РНГА), а также проведения заключительной дезинфекции помещений и территории ферм. Особое внимание обращают на соблюдение работниками животноводства мер личной профилактики.

Аннотация научной статьи по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Арзымбетова Ж.Х., Ахметова А.Т., Нургалиева К.Ж.

В последние десятилетия повсеместно отмечается рост заболеваемости листериозом , что связано как с истинным подъемом заболеваемости, так и с улучшением лабораторной диагностики . С целью повышения высеваемости бактерий применяется использование селективных сред и метод холодового обогащения. Схема выделения листерий в зависимости от контаминации и количества листерий в исследуемом материале включаетлибо непосредственный высев на селективный агар, либо обогащение материала на селективных бульонах.

LABORATORY DIAGNOSTIC OF LISTERIOSIS

During the last 10 years incidence oflisteriosis is permanentlyincreasing everywhere. There are 2 reasons of this fact real growing of the incidence as well as the improvement of laboratory diagnostic . For increasing the quality of Listeria testing specialists recommend to use selective culture and method of cold inreaching. The scheme of Listerias' allocation depending on contamination and quantities of Listerias in an investigated material includes either direct seeding on a selective agar or enrichment of material on selective broths.

CEREBROVASCULAR PATHOLOGYAS A PERIOPERATIVE FACTOR OF EXTRACARDIAC SURGERY RISK

West Kazakhstan Marat Ospanov State Medical University, Department of Therapy Faculty of Postgraduate Education, Aktobe city

The article is regarded to the questions of the prevalence of cerebrovascular disease, options of its course andfeatures ofthe management of patientswith cerebrovasculardisease inthe perioperative period in notcardio-surgical operations.

Key words; cerebrovascularpathology, ischemic stroke, risk factor, perioperative risk.

Ж.Х. АРЗЫМБЕТОВА А.Т. АХМЕТОВА, К.Ж. НУРГАЛИЕВА

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЛИСТЕРИОЗА

Актюбинская противочумная станция, г.Актобе

В последние десятилетия повсеместно отмечается рост заболеваемости листериозом, что связано как с истинным подъемом заболеваемости, так и с улучшением лабораторной диагностики. С целью повышения высеваемости бактерий применяется использование селективных сред и метод холодового обогащения. Схема выделения листерий в зависимости от контаминации и количества листерий в исследуемом материале включаетлибо непосредственный высев на селективный агар, либо обогащение материала на селективных бульонах.

Ключевые слова: лабораторная диагностика, листериоз.

Структура инфекционной патологии человека за последние десятилетия ХХ века претерпела существенную эволюцию, обусловленную какоткрытием целого ряда неизвестных ранее инфекционных агентов, так и изменением роли удельного веса хорошо известных ранее возбудителей. Ко второй группе в полной мере можно отнести и листериоз. Хотя упомянутые микроорганизмы давно известны эпидемиологам, бактериологам и инфекционистам, в последние годы заметно расширился удельный вес вызываемых ими инфекций, равно как и спектр их клинических проявлений. Этому способствовали, с одной стороны, существенный прогресс в области лабораторной и клинической диагностики, с другой, антропогенная трансформация внешней среды, повлиявшая на условия репродукции возбудителя, пути передачи инфекции и восприимчивость к ним групп риска человеческой популяции, прежде всего, с различными видами иммунодефицитов [1,2,3]. Несмотря на прогресс в лабораторной диагностике инфекционных болезней, проблема диагностики листериоза заслуживает пристального внимания и дальнейшего изучения. Нашей задачей явилось ознакомление широкого круга практических врачей, прежде всего, бактериологов и инфекционистов с современными методамидиагностики этой инфекции.

До начала 80-х годов выделение культур на питательных средах, окраска мазков из клинического материала в сочетании с серологическими методами диагностики являлись основными компонентами лабораторной диагностики листериоза. Однако рост числа спорадических случаев и эпидемиологических вспышекспособствовал выявлениюмногочисленныхуязвимыхместтрадиционнойдиагностики [4,5,6].

12 Батыс Казахстан медицина журналы №2 (30) 2011 ж. / ' '

__/ Медицинский журнал Западного Казахстана №2 (30) 2011 г.

Однако, как справедливо отмечают органы санитарно-эпидемиологического надзора стран СНГ, методы лабораторной диагностики листериоза за последние 30 лет практически не изменились, тогда как эпидемиологическаязначимость инфекции продолжает возрастать[8,9].

Тем не менее, серологические методы полностью сохраняют своё значение для выяснения эпизоотологической и эпидемиологической ситуации, так как результаты серологических исследований несут определённую информацию о контакте различных групп населения или групп риска с возбудителем, но не позволяют с высокой степенью точности диагностировать листериоз даже при применении нескольких серологических методов.

Основным методомдиагностики инфекционного процесса является бактериологическаядиагностика и идентификация возбудителя. За последние годы бактериологическая диагностика листериоза претерпела существенную эволюцию. Значительный прогресс в области методов обогащения исследуемого материала и конструирования питательных сред для выделения листерий позволяет сделать процедуру выделения и идентификации листерий доступной для широкого круга практических микробиологическихлабораторий.

При подозрении на листериоз исследованию подвергают, в первую очередь, кровь и ликвор при септической форме, менингитах и менигоэнцефалитах, меконий при заболеваниях новорожденных, околоплодную жидкость, плаценту, отделяемое родовых путей женщин, разрешившихся мёртвым плодом. При отягощённом акушерском анамнезе, патологическом течении беременности, воспалении яичников, шейки матки обследование на наличие листерий является обязательным компонентом расширенного исследованиягенитальноготракта.

При менее распространённыхклиническихформахлистериоза исследованиюподлежатсодержимое абсцесса, экссудат, отделяемое носоглотки. Биологический материал для микробиологического исследования листериоза следует брать в максимально стерильных условиях, тщательно соблюдая правила асептики и антисептики, по возможности избегая контаминации образцов с микроорганизмами из окружающей среды [10,11].

Для успешного выделения листерий из клинического материала, а также из продуктов питания существенное значение имеет процедура обогащения. За исключением спинномозговой жидкости клинический материал, а тем более продукты питания сильно контаминированы сопутствующей микрофлорой. На общем микробном фоне количество листерий в исследуемом материале может быть невелико, скорость роста листерий уступает многим условно патогенным бактериям, поэтому процедура обогащения, грамотное использование селективных факторов зачастую является необходимым условием выделения культурлистерий из исследуемого материала [11,12].

Еще в 40-е годы ХХ века для выделения листерий стали использовать процедуру холодового обогащения и добавления в средутелурита калия [13,14,15].

Метод холодового обогащения основан на присхрофильной природе листерий, их способности размножаться при низкихтемпературах. Методика предполагает, помимо обычного высева исследуемого образца на питательные среды, хранение части исследуемого материала в холодильнике при температуре + 4°С в течение 2 месяцев. Еженедельный посев хранящегося на холоде материала на стандартные питательные среды зачастую приводил к положительному результату при отрицательном результате первичного высева материала, подозрительного на наличиелистерий. Хотя инкубация при 4°С

„ , _I I „„ _______ ^^ Батыс Казахстан медицина журналы №2 (30) 2011 ж. 13

Медицинский журнал Западного Казахстана №2 (30) 2011 г. \ _____!_

ингибируетбольшуючастьпосторонней микрофлоры, скорость росталистерий в начале процедуры также снижается. Поэтому в настоящее время этот метод не находит широкого практического применения в лабораторнойдиагностике.

Поскольку метод холодового обогащения из-за необходимости длительной экспозиции неприменим в практике лабораторной диагностики, процедура обогащения включает заражение исследуемого материала с селективными агентами и инкубацию при 30°С в течение 24 часов с последующим высевом на селективный агар [4,15].

Телурит калия рекомендовали добавлять в различные питательные среды (мясо-пептонный агар, кровяной агар) для выделения листерий в качестве фактора, подавляющего рост многих грамотрицательных бактерий. В дальнейшем в качестве селективных агентов для выделения использовали широкий спектр химических соединений, солей металлов, антибиотиков и красителей. Наибольшее практическое значение из них получил хлорид лития, акрифлавин, налидиксовая кислота, циклогексимид, входящие в состав наиболее распространенных питательных сред и обогатительных бульонов [7].

В последнее время широкое распространение для диагностики и типирования получили методы, основанные на анализе ДНК. Это связано с их высокой специфичностью, а также относительной технической простотой идоступностью.

Сегодня наиболее распространенным и перспективным методом молекулярно-генетической диагностики является полимеразная цепная реакция (ПЦР). ПЦР основана на искусственном синтезе фрагмента ДНК, в качестве матрицы которого используется ДНК исследуемого микроорганизма. Метод очень чувствительный и специфичный. При исследовании клинического материала налистериоз в нашей лаборатории от 73 человек, при отрицательных серологических реакциях, в 40 % случаев методом ПЦР выявлен положительный результатнаданнуюинфекцию. Списоклитературы:

1. Инструкция по эпидемиологии, эпизоотологии, профилактике, клинике и лечению листериоза человека и животных. Приложение к Приказу МЗ РК №946/326 от 17 октября 2002.

3 . Карликанова Н . Р. , Куваева И . Б . ,Карликанова Н . С . Листериоз в молоке и молочных продуктах - Москва

4. Тартаковский И.С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностики // КМАХ-2000- Том2-№2-С. 1-15.

5. Карпова Т.И., Ермолаева С.А., Лопырев И.В. Новые методы диагностики идентификации Listeria monocytogenes/Жлиническая микробиология-2001 -№3-С. 266-273.

6 . КарповаТ. И . , Шустрова Н. М . , СнегирёваА. Е . Размножениелистерий в молочных продуктах//Журнал микробиологии - 2001 - №1- С. 80-81

10. Литвин В.Ю., Емельяненко Е.Н., Пушкарева В.И. Патогенные бактерии, общие для человека и растений: проблемы и факты //Журнал микробиологии -1996- №2-С. 101-104

11. Тартаковский И.С., Трофимова О.Д. Этиология и микробиологический контроль ВБИ //Справочник госпитальногоэпидемиолога.- М.-1999-19-29.

- Вып. 1 - частьП-М-2001 С. 92-94.

14. Бакулов И.А., Васильев Д.А. Листериоз как пищевая токсикоинфекция.// Вопросы диагностики и профилактики - Ульяновск-1991.-45c.

14 Батыс Казахстан медицина журналы №2 (30) 2011 ж. / ' '

__/ Медицинскии журнал Западного Казахстана №2 (30) 2011 г.

Ж.Х. АРЗЫМБЕТОВА, А.Т. АХМЕТОВА, К.Ж. НУРГАЛИЕВА ЛИСТЕРИОЗДЫН ЛАБОРАТОРИЯЛЬЩ ДИАГНОСТИКАСЫ

Актебе обага карсы станциясы, Актебе каласы

Соцгы он жылда жаппай листериозбен аурушачдылыктыч ecyi байкалады, ол аурушачдылыктыч шынайы кeтерiлуiмен катар, лабораториялыкдиагностиканычжаксаруымен де байланысты бактерияныч eсiмдiлiгiн жаксарту максатында селективтi ортаны жэне салкындатып каныктыру эдiсiн колдану усынылады. Листерияны бeлiп алу сулбесше, листерия санына жэне контаминациясына тэуелдi зерттеу материялында агарга себу немесе материалды селективтi сорпада каныктыру болады.

Нег'зг'! свздер: лабораториялык диагностика, листериоз.

ZH. H. ARZYMBETOVA, A.T. AXMETOVA, K.ZH. NURGALIYEVA LABORATORY DIAGNOSTIC OF LISTERIOSIS

Antipplague station ofAktobe, Aktobe city

During the last 10 years incidence oflisteriosis is permanentlyincreasing everywhere. There are 2 reasons of this fact - real growing of the incidence as well as the improvement of laboratory diagnostic. For increasing the quality of Listeria testing specialists recommend to use selective culture and method of cold inreaching. The scheme of Listerias' allocation depending on contamination and quantities of Listerias in an investigated material includes either direct seeding on a selective agar or enrichment of material on selective broths.

Keywords: laboratory diagnostic, listeriosis.

„ , _I I „„ _______ ^^ Батыс Казахстан медицина журналы №2 (30) 2011

Медицинскии журнал Западного Казахстана №2 (30) 2011 г. \ ___

Листериоз является инфекционным заболеванием, которое вызывает самые вирулентные пищевые инфекции. Листериоз распространен среди животных и людей. Характеризуется множеством источников инфекции, разнообразными путями и факторами ее передачи, множественными формами проявления и высокой летальностью. Листериозом в мире заболевает тысячи человек, от 20 до 30% из которых умирает. Смертность от тяжелых распространенных форм заболевания достигает 90 — 100%. Своевременная диагностика листериоза позволяет назначить адекватное лечение что, обеспечивает больному полное излечение.

Рис. 1. На фото больной с листериозным менингитом.

Полиморфизм клинических проявлений и невозможность выявления в ряде случаев источника инфекции создает исключительные трудности при установлении диагноза по клинико-эпидемиологическим данным. В связи с этим решающее значение приобретает лабораторная диагностика листериоза. Предварительный диагноз устанавливается на основании бактериоскопического исследования, окончательный диагноз требует бактериологического подтверждения или ПЦР.

Для исследования используются:

Образцы крови, носоглоточная слизь, отделяемое из глаз, пунктат из лимфатических узлов, фекалии.
У женщин, родивших мертвого ребенка или с признаками листериоза исследованию подлежат плацента, околоплодные воды, отделяемое родовых путей.
У новорожденных исследуется меконий.
У больных с подозрением на листериозный менингит исследуется спиномозговая жидкость.
От трупов берется разнообразный биологический материал.
Фекалии и мазки из ротоглотки берутся для установления бактерионосительства.

Диагностика листериоза с помощью простой и люминесцентной микроскопии

Рис. 2. Вид листерий под микроскопом. Бактерии располагаются поодиночке или парами, реже — короткими цепочками. При окраске по Граму листерии окрашиваются в розовый цвет.

Рис. 3. Листерии в свете микроскопа, дающего трехмерное увеличение, выглядят как цилиндры.

Рис. 4. Листерии в макрофагах.

Снижение работы клеточного иммунитета приводит к распространению инфекции по всему организму. В органах и тканях образуются специфические гранулемы — листериомы. Их специфический состав определяется при микроскопировании мазка или биопата.

Рис. 5. Гранулемы в печени (фото слева). Гранулема (листериомы) в головном мозге (фото справа).

Лабораторная диагностика листериоза с помощью бактериологического исследования

Листерии растут при комнатной температуре на обычных питательных средах — слабощелочных и нейтральных. Посевы рекомендуется делать в первые 7 — 10 суток заболевания. Инкубация продолжается 3 недели при температуре 37 °С. При посеве на глюкозно-кровяной агар отбирают типичные колонии (прозрачные или роговидные), дающие гемолиз.

Рис. 6. Колонии листерий при посеве на мясопептонном агаре напоминают капельки росы. В проходящем свете колонии приобретают перламутровый оттенок.

Рис. 7. При росте листерий на хромогенном агаре колонии приобретают синюю окраску.

Рис. 8. При росте на оксфордском агаре вокруг колоний образуется черный ореол.

Рис. 9. При росте листерий в мясопептонном бульоне образуется помутнение с легкой опалесценцией.

Диагностика листериоза с помощью биологических проб

Биологические пробы основаны на заражении лабораторных животных биологическим материалом, взятого от больного, с целью обнаружения бактерий. Заражению подвергают белых мышей, кроликов, морских свинок, степных пеструшек.

Рис. 10. На фото зараженные листериозом белые мыши. В центре здоровый мышонок. Справа и слева от него мыши-сосунки с параличом передних лапок.

Рис. 11. На фото слева листериоз у кролика, развившийся после внутривенного заражения. На фото справа воспалительная реакция, развившаяся на месте внутрикожного введения листерий.

Антитела к листериям

Антитела к листериям определяются с помощью серологических реакций: реакции агглютинации (РА), реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) и реакции связывания комплемента (РСК) с листериозным антигеном с постановкой в парных сыворотках. При наличии листериоза у больного нарастание титра регистрируется в 4 раза и более. Реакции проводятся дважды с 2-х недельным перерывом.

В связи с антигенным родством листерий и стафилококков, возможно получение ложноположительных результатов.

Через 2 недели от начала заболевания в крови больного выявляются антитела IgG, которые присутствуют в крови на протяжении всего периода заболевания. Длительное время антитела сохраняются в крови при хроническом течении листериоза.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — экспрессный и высокочувствительный метод диагностики листериоза. Существует прямой и непрямой метод РИФ. При определении антител прямым методом к взвеси микробов, зафиксированной на предметном стекле, добавляется сыворотка, меченная флуорохромом. При образовании комплекса антиген-антитело при освещении сине-фиолетовыми (ультрафиолетовыми) лучами бактерии светятся ярко-зеленым цветом в люминесцентном микроскопе.

Рис. 12. Свечение листерий при проведении реакции иммунофлюоресценции.

Кровь на листерии

Анализ крови на листерии является эффективным способом определения листериозной инфекции. При различных формах листериоза в организме больных, прежде всего, активизируется система мононуклеарных фагоцитов — макрофагов. Они захватывают и уничтожают бактерии и вирусы, живущие внутриклеточно, считывают информацию об их строении и передают ее Т-лимфоцитам. В дальнейшем В-лимфоциты начинают вырабатывать антитела, уничтожающие патоген. При заболевании количество моноцитов в периферической крови возрастает. При септической форме листериоза их количество достигает 70% (при норме 3 — 11%).

Рис. 13. На фото моноциты — самые крупные клетки периферической крови.

Внутрикожная проба на листериоз

Для диагностики листериоза используется внутрикожная (аллергическая) проба. Листериозный антиген вводится внутрикожно. Через 24 часа проводится изучение реакции. В случае наличия листерий в организме исследуемого на месте введения листериозного антигена коже появляется папула (инфильтрат) 10 и более миллиметров.

Внутрикожная проба ставиться на 6 — 9 день от момента заболевания.

В случае появления единичных случаев листериоза диагностика заболевания должна проводиться с использованием бактериологического метода и метода ПЦР.

Дифференциальная диагностика листериоза

Дифференциальная диагностика листериоза проводится с учетом развившейся клинической формы заболевания.

Листериозные ангины следует отличать от стрептококковых ангин.
Острые формы листериоза следует отличать от инфекционной эритемы, инфекционного мононуклеоза, острого токсоплазмоза, заболеваний крови.
Нервные формы листериоза следует отличать от бактериальных менингитов разной этиологии — пневмококковых, менингококковых, стафилококковых.
Листериоз беременных следует отличать от вялотекущих пиелоциститов и пиелонефритов.

Цель занятия; изучить методы диагностики листериоза, систему профилактических и оздоровительных мероприятий.

Материалы и оборудование: таблицы, диапозитивы, биопрепараты (диагности-кумы, вакцины).

Место проведения занятия: аудитория кафедры эпизоотологии.

Листериоз — инфекционная болезнь животных и человека, возбудитель которой Listeria monocytogenes—подвижная полиморфная грамположительная мелкая палочка. Листерии широко распространены во внешней среде, сравнительно высокоустойчивы:

При низких температурах (4…6°С) длительное время (до нескольких лет) сохраняются в почве, воде, соломе, зерне. Размножаются в почве, воде, молоке, мясе, силосе, а также в трупах.

Методы диагностики. Диагноз на листериоз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений, а также результатов лабораторных исследований.

Согласно эпизоотологическим данным листериоз поражает домашних и сельскохозяйственных животных—свиней, мелкий и крупный рогатый скот, лошадей, кроликов, реже — кошек и собак, а также домашнюю и декоративную птицу — гусей, кур, уток, индюшек, голубей, попугаев и канареек. Более восприимчив молодняк и беременные животные. Источник возбудителя инфекции—больные, листерионосители (5…90 %); основной резервуар —дикие и синантропные грызуны. Возбудитель передается фекально-оральным, контактным, аэрогенным, трансплацентарным путем и через поврежденную кожу; выделяется из организма с истечениями из носа, половых органов, с абортированными плодами, молоком, калом и мочой.

Клинические признаки зависят от формы и течения болезни. Наиболее характерные симптомы: угнетение, снижение аппетита, нарушение координации движений, судороги, парез нижней челюсти, конъюнктивит, потеря зрения (кератит), расстройство желудочно-кишечного тракта, повышение температуры тела, аборты, задержание последа, маститы.

Патологоанатомические изменения также зависят от формы и течения болезни. При нервной форме отмечают отек мозга, кровоизлияния в мозговой ткани и отдельных внутренних органах. При септической форме находят изменения, свойственные септическому процессу, — кровоизлияния в паренхиматозных органах, увеличение селезенки и дегенеративные изменения во всех органах, а также отек или гиперемию легких; при генитальной — поражения матки (десквамация эпителия, эрозии, кровоизлияния).

Лабораторная диагностика состоит из бактериологического, серологического и гистологического исследований. Для посмертной диагностики в ветеринарную лабораторию направляют трупы мелких животных или голову (головной мозг), паренхиматозные органы (часть печени, селезенку, почку, пораженные участки легких), абортированный плод и его оболочку. Материал посылают свежим или консервируют 30%-м водным раствором глицерина. Для гистологического исследования используют кусочки головного (все отделы) и спинного мозга, а также паренхиматозных органов, зафиксированные в 10%-м растворе нейтрального формалина.

Для прижизненной диагностики на бактериологическое исследование отправляют истечения из половых органов самок, у которых отмечены аборты; при маститах — молоко из пораженных долей вымени; на серологическое—кровь или сыворотку крови от больных или подозрительных по заболеванию животных (желательно парные сыворотки, взятые с интервалом 7…14 дней).

Бактериологический метод диагностики при листериозе — решающий. Мазки из исходного материала окрашивают по Граму, а также методами флюоресцирующих антител (прямой и непрямой). Для выделения чистой культуры используют обычный или печеночный агар и бульон с добавлением 1 % глюкозы и 2…3 % глицерина, а также кровяной агар и элективные среды (с теллуритом калия, с теллуритом калия и флоримицином или полимиксином). Черный цвет колоний обусловлен восстановлением теллурита калия до металлического теллура. Характерные признаки возбудителя листериоза — помутнение бульона и появление мелких росинчатых колоний на агаре, формирование зоны р-гемолиза на кровяном агаре. Колонии листерий в проходящем свете — голубого цвета с зеленоватым оттенком и мелкозернистые по структуре. Идентификация состоит из нескольких направлений. Определяют подвижность, исследуя 6…12-часовую культуру, ферментативные свойства (пестрый ряд). Листерий идентифицируют серологически — в РА на стекле с поливалентной листериозной агглютинирующей сывороткой, а также конъюнктивальной пробой на морских свинках или внутрикожной пробой на морских свинках или кроликах. На конъюнктиву морской свинке наносят 2 капли исследуемой бульонной культуры и легко массируют веки ватным тампоном. При положительном результате на 2…4-й день развивается гнойный конъюнктивит. При внутрикожной (дермонекротической) пробе в тщательно выстриженный участок на боку морской свинке или кролику вводят 0,3…0,5 мл бульонной культуры. Через 24…48 ч возникает воспаление с последующим некрозом и образованием струпа.

Для биопробы используют 2…3 белых мышей. Суспензию головного мозга, внутренних органов или чистой культуры вводят животным подкожно или внутрибрюшинно в дозе 0,3…0,5 мл. Чтобы повысить эффективность биопробы, мышам за З…4ч до заражения инъецируют внутримышечно кортизон в дозе 5 мг. При положительной биопробе животные погибают через 2…6сут. На вскрытии отмечают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках (иногда они отсутствуют). Срок наблюдения за животными 14 сут.

С помощью гистологического исследования тканей головного и спинного мозга при поражении бактериальными формами листерий обнаруживают хорошо выраженные пролиферативные изменения, отек, дегенерацию нейронов, нейронофагию, а при поражении Z.-формами — энцефалопатию, сопровождающуюся дистрофическими изменениями без пролиферации клеток.

Для серологической диагностики применяют PA, PCK, РНГА и РИФ, с помощью которых устанавливают диагноз, выявляют листерионосительство и хронически больных животных. Кроме того, при исследовании парных сывороток (ретроспективная диагностика) нарастание титра антител в 2…4 раза подтверждает диагноз на листериоз.

Используют также прямой (ПМФА) и непрямой (НМФА) методы флюоресцирующих антител, с помощью которых можно идентифицировать возбудителя в культурах, обнаружить листерии в органах и тканях, а также определить их серогрупповую принадлежность. При люминесцентной микроскопии для листерии характерно ярко выраженное золотисто-зеленоватое свечение, четко заметны морфологические особенности бактерий и темная центральная зона клетки.

Профилактические и оздоровительные мероприятия. В целях профилактики комплектуют фермы животными только из благополучных по листериозу хозяйств. Строго учитывают все случаи абортов, мертворождения и падежа и направляют патологический материал для лабораторного анализа. При маститах исследуют молоко бактериологическим методом.

При выявлении больных листериозом животных в хозяйстве проводят тщательное эпизоотологическое обследование.

При установлении диагноза на листериоз хозяйство объявляют неблагополучным и вводят ограничения.

Осматривают все поголовье и выбраковывают клинически больных животных. Чтобы выявить животных листерионосителей и бессимптомно больных, исследуют сыворотки крови. Положительно реагирующих изолируют, лечат антибиотиками и затем направляют на убой. Остальных вакцинируют сухой живой вакциной из штамма АУФ согласно наставлению по ее применению.

Туши и продукты убоя больных и подозрительных по заболеванию животных запрещается выпускать в сыром виде. Если обнаружены дегенеративные и другие патологические изменения в мышцах (абсцессы и т. д.),тушу и внутренние органы направляют на утилизацию; при отсутствии патологических изменений — исследуют на сальмонеллез бактериологическим методом. В случае обнаружения сальмонелл внутренние органы направляют на утилизацию или уничтожают, а туши проваривают и используют для изготовления консервов. При отсутствии сальмонелл туши, шпик и внутренние органы перерабатывают на вареные, варено-копченые колбасы и консервы или проваривают. При листериозе мясо, кроме того, разрешается использовать на изготовление вареных колбас, варено-копченых грудинок и кореек.

Патологически измененные органы, кишки и кровь, а также головы от животных, больных листериозом, во всех случаях направляют на утилизацию с обработкой при температуре не менее 100 "С или проваривают при той же температуре в течение 1ч.

Молоко, полученное от животных, давших положительный результат в серологической реакции, кипятят в течение 15 мин или перерабатывают на топленое масло.

Для искусственного осеменения используют сперму здоровых производителей.

Непременное условие эффективности оздоровительных мероприятий — регулярная дезинфекция, дезинсекция и дератизация. Навоз обеззараживают биометрическим способом. Для дезинфекции используют осветленный раствор хлорной извести с содержанием 2 % активного хлора, 3%-й горячий раствор гидроксида натрия, 5%-й раствор хлорида йода или ксилонафт.

Пробы силоса, хранящегося в траншеях или буртах, направляют на бактериологическое исследование. В случаях контаминации силосной массы листериями весь силос обеззараживают биотермическим способом.

Хозяйство (ферму, отделение, двор) объявляют благополучным по листериозу через 2 мес со дня последнего случая выявления клинически больных животных и после заключительной дезинфекции помещений и территории фермы.

Допускается вывозить овец для племенных и пользовательных целей в течение 2 лет после оздоровления хозяйств только при условии отрицательного результата серологического исследования. Вывоз животных других видов разрешается при тех же условиях в течение 1 года. Кроме того, разрешается без ограничений сдавать животных на мясокомбинат.

В хозяйствах, ранее неблагополучных по листериозу, животных исследуют серологическим методом 1 раз в год перед постановкой на стойловое содержание до тех пор, пока не будут получены отрицательные результаты у 100 % поголовья. Положительно реагирующих животных изолируют, лечат и направляют на убой. При вывозе животных в ветеринарном свидетельстве указывают результат их исследования на листериоз.

ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

Решить эпизоотологическую задачу.

На мелочно-товарной ферме начали использовать в корм силос, после чего среди коров и телят возникло заболевание со следующими клиническими признаками: повышение температуры тела до 40,5 °С (у некоторых животных — в пределах нормы), угнетение, отказ от корма, потеря зрения (кератит), конъюнктивит, стоматит, приступы буйства, кроме того, у телят — понос. У одной стельной коровы отмечен аборт.

Установить диагноз и разработать схему дифференциальной диагностики листериоза.

Читайте также: