Питательная среда для холеры tcbs

Питательная среда для выделения и культивирования возбудителя холеры и других энтеропатогенных вибрионов, сухая

Описание

TCBS-агар Оболенск — Цена за упаковку 0,25 кг

TCBS-агар Оболенск предназначен для выделения и культивирования возбудителя холеры и других энтеропатогенных вибрионов из клинического материала, а также из объектов внешней среды при проведении бактериологических исследований.

1. Характеристика

TCBS-агар представляет собой смесь сухих компонентов в виде мелкодисперсного, гигроскопичного, светочувствительного порошка желтого цвета.

Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.

2.1. Принцип действия

Высокие концентрации натрия цитрата, желчи, а также щелочность среды в значительной степени подавляют рост сопутствующей микрофлоры.

Дифференцирующие свойства среды основаны на изменении рН в кислую сторону при росте сахарозоферментирующих бактерий, которые образуют на среде колонии желтого цвета (комплекс индикаторов — бромтимоловый синий и тимоловый синий).

2.2. Состав

TCBS-агар Оболенск представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

15,0

Пептон мясной и/или панкреатический гидролизат рыбной муки ……………………….……………..……….
Дрожжевой экстракт………………….……………………	5,0
Желчь крупного рогатого скота очищенная сухая ……..	7,0±1,5
Натрий сернистокислый безводный …….………………….	10,0
Натрий лимоннокислый 5,5 водный ……………………	10,0
Сахароза ……………………………………………………	20,0
Натрий хлористый ………………………………………..	10,0
Железо (III) лимоннокислое ………………………………………	1,0
Бромтимоловый синий .…………………………………..	0,04
Тимоловый синий ….…………………………………..…	0,04
Натрий углекислый…………………………………………………….	2,0±0,5
Агар бактериологический ………………………………..	10,0±3,0

1. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Питательная среда обеспечивает через 18-20 ч инкубации при температуре
(37±1) ºС рост холерных вибрионов и их четкую дифференциацию от протеев по морфологии и окраске колоний, а также подавляет рост эшерихий, шигелл и псевдомонад.

1. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

• Термостат, обеспечивающий температуру 37 °С
• Весы лабораторные 2 класса точности
• Чашки Петри
• Пипетки стеклянные, позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
• Пробирки
• Вода дистиллированная
• Колбы
• Воронки стеклянные

1. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Объекты исследований в клинической и санитарной микробиологии.

7.1. Приготовление TCBS-агара.

Перед приготовлением питательной среды содержимое банки тщательно перемешать. После взятия навески необходимо банку со средой закрыть герметично во избежание попадания влаги. Среда не требует автоклавирования!

TCBS-агар в количестве, необходимом для приготовления конкретной серии, размешивают в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения и кипятят при постоянном перемешивании в течение 3-4 мин на медленном огне до полного расплавления агара. Охлаждают до температуры 40-50 °С и разливают в чашки Петри, подсушивают на рабочем столе с открытыми крышками при температуре 18-25 °С.

Готовая среда в чашках прозрачная сине-зеленого цвета.

Готовую среду, разлитую в чашки Петри, можно использовать в течение 7 сут после её приготовления при условии хранения при температуре 2-8 °С.

7.3. Исследуемый материал засевают соответственно на три чашки с проверяемой и контрольной средами, взвесь равномерно распределяют по поверхности питательной среды покачиванием чашки. Инкубируют при температуре (37±1) ° С в течение 18-20 ч.

Учет результатов проводят визуально через 18-20 ч инкубации, отмечая наличие роста холерных вибрионов в виде круглых, гладких колоний желтого цвета диаметром не менее 1,0 мм, в количестве не менее 30 % от расчетной посевной дозы 100 м.к., при наличии единичных колоний на чашках Петри с посевной дозой 10 м.к. Отмечают наличие дифференциации представителей рода вибрионов от протеев по морфологии и окраске колоний (вибрионы — круглые, блестящие, выпуклые, с ровными краями желтого цвета). Отсутствует рост микробов-ассоциантов, или они вырастают отдельными колониями, не мешающими выделению вибрионов.

Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее чем в трех повторностях.

TCBS-агар необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.

Срок годности – 2 года. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит. После вскрытия банки с TCBS-агаром гарантируется соответствие требуемым параметрам при соблюдении условий хранения (влажность, температура, герметичность) до окончания срока годности.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

Питательная среда предназначена для культивирования различных микроорганизмов, неприхотливых по своим питательным потребностям, таких как энтеробактерии, синегнойная палочка, стафилококки и др. Представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный порошок светло-желтого цвета.

Питательная среда предназначена для культивирования различных микроорганизмов, таких как: энтеробактерии, синегнойная палочка, стафилококки и др. Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета

Питательная среда предназначена для выделения сальмонелл и шигелл из исследуемого материала (фекалии, моча и др.) и их дифференциации от других энтеробактерий.

Питательная среда предназначена для выделения шигелл и сальмонелл из исследуемого материала (фекалии, моча и др.) и их дифференциации от других энтеробактерий.

Питательная среда предназначена для выделения и дифференциации патогенных и условно пато-генных энтеробактерий, а также для выделения стафилококков.

Питательная среда предназначена для выделения энтеробактерий из исследуемого материала. Представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный порошок сиреневого цвета.

Питательная среда предназначена для выделения сальмонелл из исследуемого материала. Представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-желтого цвета.

Питательная среда предназначена для обнаружения бактерий группы кишечной палочки при санитарном обследовании объектов внешней среды.

СОРБИТОЛ E. coli O157:H7 АГАР

Сорбитол E.coli O157:H7 агар предназначен для выделения и дифференциации E.coli O157:H7.

Агар МакКонки-ГРМ предназначен для обнаружения и подсчета колиформных бактерий и кишечных патогенов в воде, пищевых продуктах, фекалиях, моче и др. объектах и их дифференциации по признаку ферментации лактозы.

Бульон МакКонки-ГРМ предназначен для обнаружения и первичного выделения E.coli и колиформных бактерий при обследовании воды, пищевых продуктов, фекалий, мочи и др. объектах объектов внешней среды.

ФЛЮОРОГЕННЫЙ СЕЛЕКТИВНЫЙ БУЛЬОН (ФСБ)

Питательная среда предназначена для селективного обогащения Еscherichia coli и других колиформных микроорганизмов, а также для ускоренного одновременного определения общих колиформных бактерий и Е. coli в исследуемой пробе воды, в образцах пищевых продуктов продовольственного сырья, смывов с объектов внешней среды.

Питательная среда предназначена для выделения энтеробактерий и их идентификации по признаку ферментации лактозы.

Питательная среда предназначена для идентификации энтеробактерий по их способности ферментировать лактозу, глюкозу, образовывать газ и сероводород.

Среды Гисса-ГРМ предназначены для идентификации энтеробактерий по тесту ферментации одного из углеводов (лактозы, глюкозы, сахарозы, мальтозы) или многоатомного спирта (маннита).

Среда Ресселя-ГРМ предназначена для первичной идентификации энтеробактерий по признаку ферментации лактозы и глюкозы.

Питательная среда предназначена для идентификации энтеробактерий по признаку утилизации цитрата натрия при санитарном обследовании пищевых продуктов и объектов внешней среды.

ЖЕЛЕЗО–ГЛЮКОЗО–ЛАКТОЗНЫЙ АГАР С МОЧЕВИНОЙ

Железо-глюкозо-лактозный агар с мочевиной предназначен для идентификации микроорганизмов по их способности утилизировать мочевину, ферментировать лактозу, глюкозу, образовывать газ и сероводород.

Питательная среда предназначена для идентификации энтеробактерий по их способности утилизировать ацетат натрия в качестве единственного источника углерода.

СРЕДА ЭЙКМАНА С ЛАКТОЗОЙ

Питательная среда предназначена для обнаружения E. coli и колиформных бактерий по признаку ферментации лактозы при санитарно-бактериологическом исследовании водопроводной воды и воды из других источников.

СРЕДА ЭЙКМАНА С ГЛЮКОЗОЙ

Питательная среда предназначена для обнаружения E. coli и колиформных бактерий по признаку ферментации глюкозы при санитарно-бактериологическом исследовании водопроводной воды и воды из других источников.

Питательная среда предназначена для выделения и культивирования возбудителя кампилобактериоза из инфицированного материала и объектов внешней среды, а также для культивирования музейных штаммов и свежевыделенных культур.

Питательная среда предназначена для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза.

Коринебакагар предназначен для выделения коринебактерий из инфицированного матери¬ала (отделяемого из зева, носа) от больных дифтерией, реконвалесцентов и носителей.

Коринетоксагар предназначен для определения токсигенности дифтерийных микробов. Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета.

Среда Пизу предназначена для идентификации коринебактерий по тесту расщепления цистина. Препарат представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-желтого цвета.

Питательная среда предназначена для выделения и культивирования возбудителя коклюша из инфицированного материала от больных (отделяемое из зева, носа).

Питательная среда предназначена для культивирования менингококков и выделения их из клинического материала.

Питательная среда предназначена для выделения энтерококков из клинического материала (фекальных масс, мочи, мокроты и др.), воды, пищевых продуктов и других объектов.

Стафилококкагар предназначен для выделения стафилококка из исследуемого материала. Представляет собой гигроскопичный мелкодисперсный порошок светло-желтого цвета.

Питательная среда предназначена для выделения и культивирования гонококка при исследовании инфицированного материала от больных с воспалительными заболеваниями мочеполовых и других органов, а также для культивирования музейных штаммов.

Питательная среда предназначена для культивирования музейных штаммов и свежевыделенных чистых культур Legionella pneumophila. Может также использоваться для культивирования других видов легионелл.

FT-агар предназначен для культивирования и выделения туляремийного микроба из объектов внешней среды.

Сибиреязвенная среда предназначена для культивирования возбудителя сибирской язвы из инфицированного материала и объектов внешней среды, а также для культивирования музейных штаммов и свежевыделенных культур.

Питательная среда предназначена для культивирования музейных штаммов и свежевыделенных чистых культур Yersinia pestis.

ПЕПТОН ОСНОВНОЙ СУХОЙ

Пептон основной предназначен для накопления холерного вибриона. Представляет собой мелкодисперсный порошок светло-желтого цвета, гигроскопичный.

Питательная среда предназначена для культивирования холерного вибриона и выделения его из инфицированного материала.

Питательная среда предназначена для выделения холерных и НАГ-вибрионов из клинического материала (испражнения, рвотные массы, содержимое желчного пузыря и др.).

Питательная среда предназначена для культивирования бруцелл и др. высокотребовательных микроорганизмов из инфицированного материала.

Питательная среда предназначена для контроля стерильности лекарственных средств и медицинских иммунобиологических препаратов.

Питательная среда № 1 ГРМ предназначена для культивирования и подсчета общего числа бактерий при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств.

СРЕДА № 2 ГРМ (САБУРО)

Питательная среда № 2 ГРМ (Сабуро) предназначена для выращивания и подсчета общего числа дрожжевых и плесневых грибов при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств.

Питательная среда предназначена для обогащения бактерий семейства Enterobacteriaceae при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств и других объектов.

Питательная среда предназначена для качественного определения ферментации глюкозы энтеробактериями в анаэробных и аэробных условиях при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств.

Питательная среда предназначена для выявления восстановления нитратов в нитриты бактериями семейства Enterobacteriaceae при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств. Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета.

Питательная среда предназначена для выращивания синегнойной палочки и стафилококков при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств и других объектов. Представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный порошок светло-желтого цвета.

Питательная среда предназначена для выявления пигмента пиоцианина синегнойной палочки при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств. Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета.

Питательная среда предназначена для идентификации стафилококков при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств по признаку ферментации маннита. Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета с розовым оттенком.

Питательная среда предназначена для предварительного обогащения бактерий семейства Enterobacteriaceae при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств и для других объектов. Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета с розовым оттенком.

Питательная среда предназначена для дифференциации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae по их способности к образованию сероводорода и ферментации лактозы, глюкозы, сахарозы при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств.

Питательная среда предназначена для определения утилизации цитрата натрия энтеробактериями при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств и других объектов.

Питательная среда предназначена для дифференциации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae по их способности к образованию индола при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств.

Питательная среда предназначена для культивирования бифидобактерий при производстве пробиотических препаратов, а также для бактериологических исследований с целью выделения бифидобактерий из клинического материала.

Питательная среда предназначена для культивирования и выделения лактобацилл из клинического материала, пищевых и молочных продуктов. Представляет собой гигроскопичный порошок кремового цвета.

Питательная среда предназначена для определения чувствительности к антибиотикам микроорганизмов, выделенных из патологического материала больных "методом дисков". Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок желтого цвета

Сульфитный агар предназначен для выявления сульфитредуцирующих клостридий в пищевых продуктах, воде, почве; при микробиологической диагностике дисбактериоза кишечника. Представляет собой мелкодисперсный, гомогенный, гигроскопичный, светочувствительный порошок кремового цвета. Выпускают в трех модификациях, различающихся концентрацией агара: 1,5; 7,0; и 17,5%.

Питательный бульон с добавлением селективной добавки предназначен для выделения возбудителя листериоза из инфицированного материала и объектов внешней среды, а также для культивирования музейных, производственных штаммов и свежевыделенных культур листерий.

Питательный агар с добавлением селективной добавки предназначен для выделения возбудителя листериоза из пищевых продуктов, патологического материала от животных, птиц и объектов внешней среды, а также для культивирования музейных, производственных штаммов и свежевыделенных культур листерий.

САБУРО МАЛЬТОЗА АГАР

Питательная среда предназначена для культивирования дрожжевых и плесневых грибов, для выделения и количественного учета C. albicans при санитарно-микологических исследованиях. Представляет собой мелкодисперсный порошок светло-желтого цвета.

БУЛЬОН САБУРО СУХОЙ

Питательная среда предназначена для выращивания грибов. Представляет собой мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета.

ТБ тест-набор предназначен для ускоренного определения чувствительности к изониазиду, рифампицину, стрептомицину и этамбутолу и первичной идентификации микобактерий туберкулеза. Тест-набор состоит из 9 флаконов (8 из которых содержат готовую к применению питательную среду с лекарственными препаратами и без них, а 1 флакон содержит реактив Грисса для регистрации результатов) и 2-х стерильных шприцев.

Мясо-пептонный агар предназначен для культивирования различных микроорганизмов, включая: энтеробактерии, синегнойную палочку, стафилококки. При необходимости может быть обогащен кровью, сывороткой, углеводами, солями.

Мясо-пептонный бульон предназначен для культивирования различных микроорганизмов, включая: коринеформные бактерии, некоторые виды стрептококков. При необходимости может быть обогащен углеводами, солями.

Агар Хоттингера предназначен для культивирования различных микроорганизмов, таких как энтеробактерии, синегнойная палочка, стафилококки. При необходимости может быть обогащен кровью, сывороткой крови, углеводами, солями.

Бульон Хоттингера предназначен для культивирования различных микроорганизмов, таких как энтеробактерии, си-негнойная палочка, стафилококки, некоторые виды стрептококков. При необходимости может быть обогащен углеводами, солями. Жидкость от светло-желтого до светло-коричневого цвета.

Бульон Сабуро предназначен для выращивания грибов. Представляет собой прозрачную жидкость коричневого цвета.

Питательная среда предназначена для выращивания и подсчета общего числа дрожжевых и плесневых грибов. Представляет собой студнеобразную массу темно-коричневого цвета.

Питательная среда предназначена для культивирования бифидобактерий и выделения их из клинического материала. Представляет собой однородный, гигроскопичный мелкодисперсный, светочувствительный порошок светло-желтого цвета.

Питательная среда предназначена для выращивания кокковой группы бактерий. Представляет собой жидкость желтого цвета.

ПЕРЕВАР ПО ХОТТИНГЕРУ

Перевар по Хоттингеру предназначен для использования в качестве основы при приготовлении бульона и агар Хоттингера. Представляет собой прозрачную жидкость коричневого цвета. При хранении допускается выпадение хлопьевидного осадка.

Пептон Мартена предназначен для использования в качестве основы при приготовлении бульона Мартена.

ЖЕЛЧЬ ОЧИЩЕННАЯ СУХАЯ

Желчь очищенная сухая предназначена для использования в качестве компонента бактериологических питательных сред.

ЖЕЛЧЬ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Желчь крупного рогатого скота предназначена для использования в качестве компонента бактериологических питательных сред.

ПАНКРЕАТИЧЕСКИЙ ГИДРОЛИЗАТ КАЗЕИНА

Панкреатический гидролизат казеина используют в качестве белковой основы бактериологических питательных сред.

СОЛЯНОКИСЛОТНЫЙ ГИДРОЛИЗАТ КАЗЕИНА

Солянокислотный гидролизат казеина используют в качестве белковой основы питательных сред для глубинного и поверхностного культивирования микроорганизмов.

ПАНКРЕАТИЧЕСКИЙ ГИДРОЛИЗАТ РЫБНОЙ МУКИ

Панкреатический гидролизат рыбной муки используют в качестве белковой основы бактериологических питательных сред.

СЕРНОКИСЛОТНЫЙ ГИДРОЛИЗАТ РЫБНОЙ МУКИ

Сернокислотный гидролизат рыбной муки используют в качестве белковой основы бактериологических питательных сред, предназначенных для культивирования микроорганизмов с малой протеолитической активностью.

СТИМУЛЯТОР РОСТА ГЕМОФИЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

Введение стимулятора роста гемофильных микроорганизмов в питательные среды позволяет исключить использование крови и сыворотки при культивировании гемофильных микроорганизмов.

а) Основной раствор пептона. Состав:
Пептон сухой — 100,0
Натрия хлорид (NaCl) — 50,0
Калия нитрат (KNO₃) — 10,0
Натрия карбонат (Na₂CO₃) — 25,0
Дистиллированная вода — 1000,0 мл
pH 8,4±0,1

В холодную дистиллированную воду погружают пептон, хлорид и карбонат натрия. Смесь кипятят при постоянном помешивании до полного растворения пептона, не допуская его пригорания, затем добавляют нитрат калия. Проверяют реакцию среды, если нужно, pH доводят до 8,5±0,1. Раствор фильтруют через миткалевый или бумажный фильтр, разливают в посуду и стерилизуют в автоклаве 20 мин при 121°С. Основной раствор пептона сохраняется до 2 лет.

б) Среды для транспортировки и обогащения материала:

1. Пептонная вода 1%. Для получения 1%-ной пептонной воды основной раствор пептона разводят в 10 раз дистиллированной водой. После установления pH 8,5±0,1 разливают в пробирки или во флаконы и стерилизуют 20 мин при 116°С.

1%-ную пептонную воду можно готовить и непосредственно из отдельных компонентов, взяв навески в 10 раз меньше указанных в рецепте основного пептона. Технология приготовления такая же, как и основного пептона.

2. Пептонная вода с теллуритом калия. В 1%-ную пептонную воду, pH 8,5±0,1, после автоклавирования добавляют тел-лурит калия в конечном разведении 1:100 000 или 1:200 000. Предварительно готовят рабочий 0,1%-ный раствор теллурита калия (1:1000), прокипяченный в водяной бане 30 мин. Срок хранения рабочих растворов — 7 дней.

в) Среды для культивирования, выделения и идентификации холерного вибриона:

1. Щелочной мясопептонный агар. Состав:
Мясная вода — 1000,0 мл
Пептон — 10,0
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0
Агар — 20,0
pH 8,2±0,2

В мясную воду вносят пептон и хлорид натрия. Смесь перемешивают и подщелачивают 20%-ным раствором едкого натра до pH 8,3±0,1. Затем добавляют агар и содержимое помещают в автоклав и обрабатывают вначале текучим паром в течение 30-40 мин, а затем при 121°С 20 мин. Если мясопептонный агар варят на плите, среду кипятят до полного растворения агара при постоянном помешивании.

Для получения прозрачной агаровой среды ее после варки с целью отстоя оставляют на 2-3 ч в автоклаве или помещают в термостатную комнату при температуре 43±2°С. Время отстоя лучше продлить до 18-20 ч. Отстоявшийся агар осторожно, не взбалтывая, сливают с осадка на плотный ватно-марлевый фильтр. В фильтрате уточняют реакцию среды, если требуется, подкисляют ее, но подщелачивать агар на данном этапе не рекомендуется во избежание выпадения осадка при стерилизации готовой среды. Профильтрованный агар разливают в посуду и стерилизуют при 121°С 20 мин.

2. Элективная среда типа TCBS-arapa, сухая (ФГУН ГНЦ прикладной микробиологии, г. Оболенск). TCBS-агар предназначен для выделения холерных и НАГ-вибрионов из клинического материала (испражнений, рвотных масс, содержимого желчного пузыря, а также суспензии, приготовленной из слизистой оболочки кишечника трупов).

Среда TCBS-агар состоит из панкреатического гидролизата рыбной муки, дрожжевого экстракта, сахарозы, железа цитрата, натрия хлорида, желчи крупного рогатого скота, натрия тиосульфита, бромтимолового синего, тимолового синего и агара.

Препарат в количестве, указанном на этикетке для конкретной серии питательной среды, тщательно размешивают в 1000,0 мл дистиллированной воды. Смесь доводят до кипения, кипятят 1 мин при постоянном перемешивании.

Готовую среду охлаждают до температуры 40-50°С, разливают в чашки Петри слоем 5,0-6,0 мм. Подсушивают на столе с открытыми крышками в течение 1 ч при комнатной температуре.

Готовая среда темного сине-зеленого цвета.

Посев материала на среду TCBS производят из пленки, образовавшейся на поверхности жидкой среды накопления, штрихом для получения изолированных колоний.

Результаты роста учитывают через 18-20 ч инкубации при 37°С. Колонии холерного и НАГ-вибрионов, расщепляющие сахарозу с образованием кислоты, — ярко-желтые диаметром 1,5-2 мм. Сопутствующая микрофлора на среде TCBS не растет, за исключением протеев, образующих мелкие колонии бурого цвета.

3. Элективная среда СЭДХ, сухая. Используется как элективная среда для выделения и дифференциации холерного вибриона (производства Ростовского противочумного НИИ).

Сухую среду в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 1000,0 мл дистиллированной воды, ставят на 15-20 мин для набухания агара. Затем на небольшом огне доводят до кипения, кипятят 5 мин при постоянном помешивании до полного расплавления агара. Цвет готовой среды темно-синий.

Среду, не фильтруя и не стерилизуя, разливают в стерильные чашки Петри слоем 4,0-5,0 мм. Чашки со средой можно хранить в течение 5 сут. в холодильнике при температуре 6±2°С.

Учет результатов проводят через 20-24 ч инкубации в термостате при 37°С. Колонии холерного и НАГ-вибриона, окисляющие сахарозу, — ярко-желтого цвета.

4. Маннозо-сахарозная среда. Состав, г/л:
1,5%-ный питательный агар — 1000,0 мл
Манноза — 1,0
Сахароза — 10,0
Сернокислое железо (FeSO₄*7H₂O) — 0,2
Тиосульфит натрия (Na₂S₂O₃*5H₂O) — 0,08
Сульфит натрия (Na₂SO₃*7H₂O) — 0,4
0,2%-ный раствор фенолового красного — 10,0 мл

После расплавления агара вносят в него навески ингредиентов, доводят pH до 8,0, разливают в пробирки по 5-7,0 мл и стерилизуют при 115°С 15 мин. Готовую среду после стерилизации скашивают так, чтобы получить столбик и косяк.

При разложении сахарозы выросшая культура вызывает изменение цвета всей среды; при разложении маннозы цвет изменяется только в глубине столбика.

5. Среда Кодама. В 1%-ную пептонную воду добавляют 0,5% растворимого крахмала. Среду разливают в стерильные пробирки и стерилизуют 20 мин при 112°С. Для оценки результатов расщепления крахмала используют реактив Люголя.

6. Среда для определения декарбоксилаз и дигидролаз лизина, орнитина, аргинина. Состав основы, г/л:
Пептон — 5,0
Дрожжевой экстракт — 25,0 мл или сухой 3,0 г
Глюкоза — 1,0
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0
Натрия карбонат (Na₂CO₃) — 0,1
Бромтимоловый синий (0,1%-ный раствор в 20%-ном спирте) — 45,0 (0,045 г сухого)
Дистиллированная вода — 1 л
pH 6,4±

Все ингредиенты основы, кроме индикатора, растворяют при нагревании, устанавливают pH 6,4+0,1, затем добавляют бромтимоловый синий и делят среду на 4 равные части. В одну часть аминокислоты не добавляют, эта порция служит контролем. В остальные порции вносят соответственно: в первую — 1% лизина, во вторую — 1% орнитина, в третью — 1% аргинина.

Аминокислоты должны быть L-изомерами; если имеются DL-аминокислоты, то их добавляют по 2%, так как микроорганизмы активны только в отношении L-изомеров. После добавления аминокислот перед стабилизацией, в случае необходимости, реакцию среды исправляют 0,1%-ным раствором соляной кислоты. Среду разливают по 1-2,0 мл в химически чистые стерильные пробирки и стерилизуют при 105°С 20 мин. Небольшое количество флокулята в средах не имеет значения. Пептонно-дрожжевая среда имеет травянисто-зеленый цвет, при кислой реакции среда желтеет, при щелочной — синеет.

7. Среда для определения гемолитической активности вибрионов. Готовят мясопептонный бульон: мясная вода с 1% сухого пептона и 0,8% натрия хлорида. Стерилизуют при 115°С в течение 20 мин.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 2.3.2020

Холера — особо опасное, карантинное инфекционное заболевание, вызываемое Vibrio cholerae биоваров cholerae и eltor, проявляющееся в виде острого гастроэнтерита с выраженной интоксикацией и обезвоживанием (эксикозом) в результате нарушения водно-электро­литного обмена, cвязанного с выработкой вибрионами холерного энтеротоксина (холерогена).

Основной метод лабораторной диагностики холеры – бактериологический.

Исследования на холеру проводятся круглосуточно в специальной лаборатории медицинскими работниками, прошедшими подготовку по особо-опасным инфекциям. Методы, применяемые для микробиологической диагностики холеры, представлены в схеме 13.

Бактериологический метод состоит из нескольких этапов.

Первый этап. Исследуемый материал засевают на щелочные (элективные) плотные питательные среды (щелочной агар Монсура – МПА с триптиказой, хлоридом на­трия, таурохолатом натрия, карбонатом натрия; TCBS - тиосульфат-цитрат-бромтимол-сахарозный агар;ще­лочной МПА) и жидкие среды обогащения (1% щелочная пептонная вода).

Третий этап выполняется через 12— 14 ч от начала анализа. Производится пересев из верхней части 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучают и отбирают для исследования типичные для холерного вибриона колонии на плотных средах, засеянных нативным материалом.

Экспресс-методы: прямая и непрямая РИФ, РНГА с иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами, реакция иммобилизации вибрионов с противохолерными сыворотками с целью обнаружения холерного вибриона в исследуемом материале.

Четвертый этап. (через 18-24 ч от начала анализа). Изучают и отбирают с помощью стереомикроскопа типичные для холерного вибриона колонии на всех плотных средах. Хо­лерный вибрион образует прозрачные, круглые, диаметром 1-2 мм, гладкие, пло­ские, го­могенные, с ровными краями колонии, имеющие голубоватый оттенок и маслянистую кон­систенцию. На агаре TCBSколонии холерного вибриона ярко-желтые на зеленом фоне среды, на сре­де Монсура — полупрозрачные бесцветные с темным центром. Колонии проверяют на наличие оксидазы (холерные вибрионы оксидазоположительны), ставят РА на стекле с холерны­ми сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.

Положительная РА или ИФМ в сочета­нии с типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами выделенной культуры позволяет вы­дать предварительный положительный ответ.

Пятый этап проводится через 24 —36 ч от начала исследования. На этом этапе изучают и отбирают характерные для холерного вибриона культуры на среде Ресселя, на которой холерный вибрион расщепляет сахарозу, что сопровождается покраснением среды в столбике без образования газа, но не ферментирует лактозу (отсутствие изменений скошенной части среды). Со среды Ресселя готовят мазки в окраске по Граму с целью обнаружения характерных по морфологическим свойствам вибрионов, проверяют наличие подвижности и оксидазы, ставят РА с холерными сыворотками (О-1, RO,Огава, Инаба, при отрицательном результате - с сывороткой О-139) и при наличии положительных результатов выдают ответ о выделении соответствующего холерного вибриона.

Окончательную идентификацию оксидазопопожительных культур проводят, используя сокращенную или полную схемы (табл. 15).

Таблица 15.Дифференциация холерных вибрионов

Тесты	V.cholerae asiaticae	V.cholerae el-tor	НАГ
Агглютинация О-сывороткой	+	+	-
Агглютинация сыворотками Инаба и Огава	+	+	-
Лизис фагами: Холерный фаг С (фаг IV) Фаг Эль-Тор	+ -	- +	+ +
Агглютинация куриных эритроцитов	-	+	+
Гемолиз эритроцитов барана	-	+	+
Рост на среде с полимиксином	-	+	+
Гексаминовый тест	-	+	+
Реакция Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола)	-	+	+

Сокращенная схема предполагает постановку развернутой РА с сыворотками Инаба и Огава, пробы с диагностическими холерными фагами, определение ферментативной группы по Хейбергу. Полная схема дополнительно включает тесты для дифференциации биоваров холерного вибриона (классического и Эль-Тор), в частности, определение гемагглютинирующих и гемолитических свойств, чувствительности к полимиксину, способности давать положительную реакцию Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола - ацетоина из глюкозы). Ацетоин определяют добавлением в культуру, выращенную на глюкозо-фосфатном бульоне Кларка, 5% α-нафтола и 40%-го гидроксида калия; при встряхивании пробирок среда окрашивается в розовый или рубиново-красный цвет.

Для ускоренной биохимической идентификации холерных вибрионов и их дифференциации от холероподобных и нехолероподобных вибрионов используют систему индикаторных бумажных дисков (СИБ), в состав которой входят тесты на оксидазу, индол, ферментацию лактозы, глюкозы, саха­розы, маннозы, арабинозы, маннита, инозита, аргинина, лизи­на и орнитина.

Шестой этап (выполняется через 36-48 ч от начала анализа) - окончательная идентификация выделенных куль­тур, определение их чувствительности к антибиотикам, формулировка окончательного ответа о выделении холерного вибриона с указанием биовара, серогруппы (серовара) и эпидемической значимости по косвенным биологическим признакам (гемолитической активности, группе Хейберга и др.). Типичные куль­туры Vibrio cholerae представляют собой грамотрицательные изо­гнутые в виде запятой или прямые полиморфные активно подвижные палочки, обладающие оксидазой, разлагающие глюкозу с образованием кислоты без газа, декарбоксилирующие лизин и орнитин, но не ферментирующие аргинин, принадлежа­щие к 1-й (реже 2-й) группе Хейберга, агглютинирующиеся хо­лерными сыворотками и лизирующиеся диагностическими фагами. Если выделенная культура не агглютинируется сыворотками к О1 и О139, ее относят к группе НАГ-вибрионов, а при наличии соответствующих сывороток определяют ее принадлежность к другой серогруппе. Токсигенные штаммы холерных вибрионов серогрупп Ои О139 обычно не лизируют бараньи эритроциты, относятся к 1-й группе Хейберга (ферментируют маннозу и сахарозу, но не арабинозу), лизируются определенными фагами в комплексном методе с применением ХДФ.

Вирулентность холерных вибрионов определяют в специализированных лабораториях путем внутрикишечного заражения кроликов-сосунков, а также методами генодиагностики (ПЦР или ДНК-ДНК-гибридизация с целью определения гена, ответственного за выработку токсина).

Серодиагностикаявляет­ся дополнительным методом лабораторной диагностики холеры. Исследуют пар­ные сыворотки крови больных, взятые с интервалом в 6-8 дней, с целью выявления агг­лютининов с помощью РА (диагностический титр 1:40 и выше), антитоксинов с помощью РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом (диагностический титр - 1: 160) и вибриоцидных антител с помощью реакции иммобилизации вибрионов (диагностический титр1:1000). Учитывается также нарастание титра антител (не менее чем в 4 раза) в процессе инфекции.

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопический метод. Промикроскопировать и зарисовать демонстрационный микропрепарат холерного вибриона V.cholerae, окрашенный по Граму. Холерный вибрион - грамотрицательная изогнутая палочка.

2. Бактериологический метод. Ознакомиться с ос­новными биологическими свойствами классического биовара холерного вибриона и биовара Эль-Тор:

· фаголизабельность. Классический холерный вибрион лизируется фагом С и нечувствителен к действию фага Эль-Тор II. Вибрион Эль-Тор лизируется фагом Эль-Тop и нечувствителен к фагу С (демонстрация);

· чувствительность к полимиксину. Учесть рост классического холерного вибриона и вибриона Зль-Тор на среде с добавле­нием полимиксина. Вибрион Эль-Тор к полимиксину не чувствителен, классический холерный вибрион – чувствителен;

· гемолитические свойства. Вибрион Эль-Тор лизирует эритроциты; классический холерный вибрион, как правило, нет (демонстрация);

· определение серовара холерного вибриона. Учесть разверну­тую реакцию агглютинации c сыворотками Инаба и Огава (демонстрация).

3. Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:

· люминесцирующая хо­лерная сыворотка для постановки реакции иммунофлюоресценции с целью выявления вибрионов;

· агглютинирующие холерные сыворотки Инаба и Огава (для постановки реакции агглютинации при идентифика­ции холерного вибриона);

· холерные фаги: классический (фаг С) и Эль-Тор. Использу­ются для фагодиагностики;

· поливалентный холерный бактериофагдля лечения и профилактики;

· холерная вакцина.Создано 3 вакцины против холеры (убитая Эль-Тор; холероген- анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона для подкожных инъекций; холероген-анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона таблетированный). Используются для специфи­ческой профилактики холеры.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском: