Питательная среда для выращивания синегнойной палочки и стафилококков

Изобретение относится к микробиологии. Среда для выращивания синегнойной палочки содержит лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин и глицерин при соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 0,9-1,0; сернокислый магний 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; аспарагин 0,9-1,0; глюкоза 0,9-1,0; глицерин 2,9-3,0 мл. Среда дешевле и при ее использовании получают вакцинный препарат, не отягощенной балластными белковыми веществами.

Изобретение относится к микробиологии, в частности, к разработке питательной среды для выращивания синегнойной палочки, пригодной для использования в биологической промышленности при получении антигенных и вакцинных препаратов.

В микробиологической практике для культивирования синегнойной палочки используют питательные среды, основой которых являются животные белковые продукты - мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА) (Зудилин В. А. Иммуногенные свойства вакцины против псевдомоноза крупного рогатого скота. - М., 1983. Труды ВИЭВ, т.57, с. 133-135). Вследствие наличия в данных средах большого количества белков мяса, пептона конечный вакцинный продукт, получаемый после выращивания микробов, содержит в своем составе балластные белковые вещества среды, что снижает его специфичность, увеличивает реактогенность и требует применения метода очистки. В этой связи разработка синтетической питательной среды для выращивания синегнойной палочки позволила бы получать вакцинные и антигенные препараты, не отягощенные баластными белковыми веществами и пептоном. Кроме того, в отличие от питательных сред, основой которых являются белковые продукты, синтетические легко стандартизируются по составу и наиболее пригодны для использования в биологической промышленности.

За прототип взята среда для выращивания стафилококков (Евглевский А.А. Патент 2132382, МПК С 12 N 1/20).

Состав вышеуказанной среды содержит ингредиенты в граммах на 1 литр дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислый магний 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; сернокислый цинк 0,08-0,09; аспарагин 0,9-1,0; гликокол 0,9-1,0; глицерин 2,0-3,0 мл.

Однако попытки использовать для выращивания синегнойной палочки данную питательную среду не имели нужного эффективного результата, так как в отдельных пробирках, флаконах, колбах рост биомассы составлял от 7 до 10 млрд. микробных тел в 1 мл. Это требовало проведения поисковых исследований по подбору оптимального соотношения ингредиентов с учетом отличительных особенностей выращивания синегнойной палочки.

Были приготовлены и испытаны многочисленные варианты синтетической среды с разным содержанием хлористого натрия, с включением в состав среды глюкозы и, наоборот, исключением из ее состава гликокола, сернокислого цинка.

Опыты показали, что при добавлении в питательную среду 0,5-0,7-0,9-1,0-1,1 г/литр глюкозы обеспечивалось накопление биомассы синегнойной палочки соответственно до 7-8; 8-9; 9-10; 10-11: 10-11 млрд. микробных тел в 1 мл. Дальнейшее увеличение глюкозы в питательной среде не сопровождалось увеличением накопления биомассы.

Последовательное уменьшение содержания в среде хлористого натрия с 5 г/литр до 4-3-2-1 способствовало еще более обильному и равномерному росту биомассы микробов соответственно до концентрации 11-12; 12-13; 13-14; 14-15 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости. Однако дальнейшее уменьшение содержания в питательной среде хлористого натрия до 0,8 и 0,5 г/л снизило накопление биомасс до 13-14 и 12 млрд. микробных тел/мл. Следовательно, оптимальное содержание хлористого натрия в среде должно составлять 0,9-1,0 г/литр.

Следует отметить, что в ходе поисковых опытов авторами не отмечено влияние на рост синегнойной палочки сернокислого цинка и гликокола, в связи с чем они были исключены из компонентов разработанной среды.

Таким образом, путем устранения вышеперечисленных недостатков предлагается среда для выращивания синегнойной палочки, содержащая в своем составе лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин, глюкозу и глицерин. Новым является то, что среда содержит глюкозу и новое соотношение компонентов в г на 1 литр дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 0,9-1,0; сернокислый магний 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; аспарагин 0,9-1,0; глюкоза 0,9-1,0; глицерин 2,9-3,0 мл.

Способ приготовления среды включает одномоментное или последовательное растворение в дистиллированной воде перечисленных компонентов с последующей нейтрализацией повышенной кислотности аммиаком до рН 7,0-7,1. Расфасовывают питательную среду в пробирки, во флаконы, в биобутыли, в которых объем количества среды должно составлять 1 /₂ часть объема, после чего подвергают стерилизации автоклавированием. При плотности посева 90-100 млн. микробных тел на 1 мл среды конечное накопление биомассы в культуральной жидкости находится на уровне 14-15 млрд. микробных тел в 1 мл.

Преимущество данной среды перед МПА и МПБ состоит в том, что для выращивания синегнойной палочки не требуются дефицитные и дорогостоящие продукты животного происхождения и пептон. Получаемый конечный продукт не отягощен балластными белковыми веществами среды и пептоном.

Среда для выращивания синегнойной палочки, содержащая лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин и глицерин, отличающаяся тем, что дополнительно содержит глюкозу при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: Лимонная кислота - 4,9-5,0 Хлористый натрий - 0,9-1,0 Сернокислый магний - 4,9-5,0 Фосфорнокислый калий двухзамещенный - 4,9-5,0 Сернокислое железо - 0,04-0,05 Аспарагин - 0,9-1,0 Глюкоза - 0,9-1,0 Глицерин, мл - 2,9-3,0

Морфология и биохимические свойства синегнойной палочки. Факторы патогенности, характерные признаки P. аeruginosa. Культивирование микроорганизмов на питательных средах. Среды для выращивания P. аeruginosa. Устойчивость к факторам окружающей среды.

Рубрика	Биология и естествознание
Вид	реферат
Язык	русский
Дата добавления	21.11.2016
Размер файла	18,5 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

ОДЕССКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.И. МЕЧНИКОВА

КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИЯ

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ PSEUDOMONOS AERUGINOSA

Синегнойная палочка - Pseudomonas aeruginosa относится к семейству Pseudomonadoceae, роду Pseudomonas.

Эти бактерии типичные условно-патогенные микроорганизмы. Они широко распространены во внешней среде, постоянно обитают в организме человека и животных.

Род Pseudomonas, кроме синегнойной палочки, включает в себя еще более 20 видов, многие из которых также могут вызывать заболевание у человека.

Мелкие грамотрицательные палочки. Средний размер 1,5-3,0 Ч 0,5-0,8 мкм. Подвижны, лофотрихи. Это прямые или слегка изогнутые палочки средних размеров, подвижные (лофотрихи или монотрихи), грамотрицательные, облигатные аэробы. Спор не образуют, имеют тонкую слизистую капсулу.

Синегнойная палочка нетребовательна к питательным средам, хорошо растет на искусственных питательных средах. На мясопептонном бульоне дает рост в виде помутнения с сероватой пленкой на поверхности. На плотных питательных средах формируются крупные полупрозрачные колонии флюоресцирующего зеленоватого цвета. При этом в толщу среды диффундируют синевато-зеленые водорастворимые пигменты - пиоцианин или флюоресцеин. Способность псевдомонад образовывать пигменты - наиболее характерный дифференциально-диагностический признак. Культура синегнойной палочки при культивировании на питательных средах имеет кисловато-сладкий ароматный запах (специфический запах жасмина). Устойчива во внешней среде. Обладает естественной устойчивостью к антибиотикам.

1) низкая сахаролитическая активность, расщепляет глюкозу до кислоты;

синегнойный культивирование патогенность

2) высокая протеолитическая активность, разлагает некоторые аминокислоты;

3) редуцирует нитриты до газообразного азота;

4) разжижает желатин.

Метаболизм только окислительный.

1) соматический О-антиген, группоспецифический, по его строению делится на серогруппы;

2) жгутиковый Н-антиген;

3) М-антиген внеклеточной слизи.

1) в организме может образовывать капсулоподобное вещество, имеющее защитные свойства;

2) выделяет термолабильный экзотоксин А, обладающий цитотоксическим и дермонекротическим действием;

3) выделяет эндотоксин;

4) некоторые штаммы продуцируют гемолизины и лейкоцидин;

5) имеет ферменты агрессии, такие как плазмокоагулаза, протеазы, антиэластазы. Синегнойная палочка может обитать в кишечнике человека, обнаруживается на коже и слизистых оболочках. Чаще всего синегнойная инфекция является внутрибольничной. Источник - больной (или бактерионоситель). Может вызывать различные заболевания. Особенно часто выделяется при гнойно-воспалительных осложнениях ожоговых ран. Иммунитет после перенесенной инфекции обусловлен гуморальными и клеточными механизмами. Диагностика: бактериологическое исследование; материал определяется клиническими проявлениями заболевания.

1) антибиотики (цефалоспорины, аминогликозиды);

2) синегнойный бактериофаг;

3) синегнойная иммунная плазма;

4) убитая лечебная стафило-протейно-синегнойная вакцина.

Культивирование. Строгие аэробы. Хорошо растут на простых питательных средах. Оптимальная температура роста 37° С, но могут расти и при 5-42° С. На МПА образуют колонии размером 2-5 мм, круглые, полупрозрачные, голубовато-серые с перламутровым оттенком; на МПБ дают помутнение и образуют пленку.

Псевдомонады не прихотливы и отлично растут на многих питательных средах, особенно на таких богатых питательными веществами, как кровяной агар. Поскольку в патологическом материале синегнойная палочка часто находится в ассоциации с другими микроорганизмами, для ее изоляции целесообразно пользоваться селективными средами с иргазаном или цетримидом (цетилтриметиламмонием бромидом).

Синегнойная палочка окрашивает многие питательные среды (например, Мюллера-Хинтона, агар с цетримидом) в зеленый цвет. Такую окраску обеспечивает одновременное образование бактерией желто-зеленого или желто-коричневого пигмента пиовердина и синего пигмента пиоцианина.

Формирует колонии 2 типов: мелкие и большие (диаметром 2-5 мм), полупрозрачные, сероватого цвета, гладкие, с плоскими краями и выпуклым центром. Штаммы, выделенные из органов дыхания и мочеполовой системы, могут образовывать слизистые колонии.

На МПА, средах Эндо и Плоскирева формируют 5 типов колоний: плоские неправильной формы, подобные колониям кишечной палочки, складчатые, слизистые и карликовые. На поверхности бульонных сред и пептонной воды псевдомонады образуют серовато-серебристую пленку. Посевы издают специфический запах (земляники, жасмина и т. п.).

Среда для выращивания синегнойной палочки содержит лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин и глицерин при соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 0,9-1,0; сернокислый магний 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; аспарагин 0,9-1,0; глюкоза 0,9-1,0; глицерин 2,9-3,0 мл. Среда дешевле и при ее использовании получают вакцинный препарат, не отягощенной балластными белковыми веществами.

Изобретение относится к микробиологии, в частности, к разработке питательной среды для выращивания синегнойной палочки, пригодной для использования в биологической промышленности при получении антигенных и вакцинных препаратов.

В микробиологической практике для культивирования синегнойной палочки используют питательные среды, основой которых являются животные белковые продукты - мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА).Вследствие наличия в данных средах большого количества белков мяса, пептона конечный вакцинный продукт, получаемый после выращивания микробов, содержит в своем составе балластные белковые вещества среды, что снижает его специфичность, увеличивает реактогенность и требует применения метода очистки. В этой связи разработка синтетической питательной среды для выращивания синегнойной палочки позволила бы получать вакцинные и антигенные препараты, не отягощенные баластными белковыми веществами и пептоном. Кроме того, в отличие от питательных сред, основой которых являются белковые продукты, синтетические легко стандартизируются по составу и наиболее пригодны для использования в биологической промышленности.

За прототип взята среда для выращивания стафилококков (Евглевский А.А. Патент 2132382, МПК С 12 N 1/20).

Состав вышеуказанной среды содержит ингредиенты в граммах на 1 литр дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислый магний 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; сернокислый цинк 0,08-0,09; аспарагин 0,9-1,0; гликокол 0,9-1,0; глицерин 2,0-3,0 мл.

Однако попытки использовать для выращивания синегнойной палочки данную питательную среду не имели нужного эффективного результата, так как в отдельных пробирках, флаконах, колбах рост биомассы составлял от 7 до 10 млрд. микробных тел в 1 мл. Это требовало проведения поисковых исследований по подбору оптимального соотношения ингредиентов с учетом отличительных особенностей выращивания синегнойной палочки.

Были приготовлены и испытаны многочисленные варианты синтетической среды с разным содержанием хлористого натрия, с включением в состав среды глюкозы и, наоборот, исключением из ее состава гликокола, сернокислого цинка.

Опыты показали, что при добавлении в питательную среду 0,5-0,7-0,9-1,0-1,1 г/литр глюкозы обеспечивалось накопление биомассы синегнойной палочки соответственно до 7-8; 8-9; 9-10; 10-11: 10-11 млрд. микробных тел в 1 мл. Дальнейшее увеличение глюкозы в питательной среде не сопровождалось увеличением накопления биомассы.

Последовательное уменьшение содержания в среде хлористого натрия с 5 г/литр до 4-3-2-1 способствовало еще более обильному и равномерному росту биомассы микробов соответственно до концентрации 11-12; 12-13; 13-14; 14-15 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости. Однако дальнейшее уменьшение содержания в питательной среде хлористого натрия до 0,8 и 0,5 г/л снизило накопление биомасс до 13-14 и 12 млрд. микробных тел/мл. Следовательно, оптимальное содержание хлористого натрия в среде должно составлять 0,9-1,0 г/литр.

Следует отметить, что в ходе поисковых опытов авторами не отмечено влияние на рост синегнойной палочки сернокислого цинка и гликокола, в связи с чем они были исключены из компонентов разработанной среды.

Таким образом, путем устранения вышеперечисленных недостатков предлагается среда для выращивания синегнойной палочки, содержащая в своем составе лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин, глюкозу и глицерин. Новым является то, что среда содержит глюкозу и новое соотношение компонентов в г на 1 литр дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 0,9-1,0; сернокислый магний 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; аспарагин 0,9-1,0; глюкоза 0,9-1,0; глицерин 2,9-3,0 мл.

Способ приготовления среды включает одномоментное или последовательное растворение в дистиллированной воде перечисленных компонентов с последующей нейтрализацией повышенной кислотности аммиаком до рН 7,0-7,1. Расфасовывают питательную среду в пробирки, во флаконы, в биобутыли, в которых объем количества среды должно составлять 1/2 часть объема, после чего подвергают стерилизации автоклавированием. При плотности посева 90-100 млн. микробных тел на 1 мл среды конечное накопление биомассы в культуральной жидкости находится на уровне 14-15 млрд. микробных тел в 1 мл.

Преимущество данной среды перед МПА и МПБ состоит в том, что для выращивания синегнойной палочки не требуются дефицитные и дорогостоящие продукты животного происхождения и пептон. Получаемый конечный продукт не отягощен балластными белковыми веществами среды и пептоном.

Среда для выращивания синегнойной палочки, содержащая лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин и глицерин, отличающаяся тем, что дополнительно содержит глюкозу при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: Лимонная кислота - 4,9-5,0 Хлористый натрий - 0,9-1,0 Сернокислый магний - 4,9-5,0 Фосфорнокислый калий двухзамещенный - 4,9-5,0 Сернокислое железо - 0,04-0,05 Аспарагин - 0,9-1,0 Глюкоза - 0,9-1,0 Глицерин, мл - 2,9-3,0

Характерным признаком P. aeruginosa является пигменто- и ароматообразование. Большинство штаммов образует сине-зеленый пигмент - пиоцианин, окрашивающий питательную среду. Пиоцианин растворим в воде. Он обладает антагонистическими свойствами в отношении многих бактерий, но токсичен и поэтому не используется с лечебной целью. Почти все штаммы P. aeruginosa имеют характерный запах жасмина.

Ферментативные свойства. Ферментирует только один углевод - глюкозу. Протеолитическая активность хорошо выражена: разжижает желатин и свернутую сыворотку, свертывает молоко. Дает положительную реакцию на цитохромоксидазу.

Токсинообразование. Образует токсины, обладающие гемолитическим и цитотоксическим действием и лейкоцидин, лизирующий лейкоциты человека. Имеет эндотоксин.

Устойчивость к факторам окружающей среды. При 60° С погибает в течение 15 мин. Выдерживает УФ-облучение. 2% раствор фенола губит синегнойную палочку. Длительно сохраняется в ожоговых корочках и пыли помещений (до 2 нед). Устойчив к большинству антибиотиков.

Восприимчивость животных. Кролики, белые мыши и морские свинки чувствительны к P. aeruginosa.

Источники инфекции. Человек (больной и носитель).

Пути передачи. В основном непрямой контакт. Имеет значение и воздушно-пылевой путь.

Патогенез. Синегнойная палочка вызывает гнойно-воспалительные процессы, локализация которых зависит от входных ворот инфекции: ожог, рана, дыхательные пути и т. д.

1. Зудилин В. А. Иммуногенные свойства вакцины против псевдомоноза крупного рогатого скота. - М., 1983. Труды ВИЭВ, т.57, с. 133-135).

2. Кисленко В. Н., Колычев Н.М., Госманов Р.Г., Ветеринарная микробиология и иммунология: учебник под редакцией проф. В.Н. Кисленко - 4-е изд. перераб и доп. - М.: ГЕОТАР МЕДИА, 2012. - 752с.

3. Межидов М. М. Справочник по микробиологическим питательным средам. -М. Медицина. -- 2003. -306 с.

5. Дрегваль О. А., Черватюк И.В., Черевач Н. В. //Мікробіологічний журнал. -- 2003. -- Т. 65. -- №?3. -- С. 14?20.

Размещено на Allbest.ru

Питательные среды в микробиологии, их классификация и разновидности, сферы и особенности использования. Культивирование аэробных и анаэробных микроорганизмов. Методы количественного учета микроорганизмов, основные правила и условия хранения их культур.

реферат [24,6 K], добавлен 25.03.2013

Псевдомонады - грамотрицательные неспороносные бактерии, их морфологические, культуральные и физиолого-биохимические признаки. Пигментные формы микроорганизмов. Биологические свойства синегнойной палочки, факторы патогенности, ее опасность для человека.

реферат [94,8 K], добавлен 15.11.2010

Культивирование бактерий на питательных средах, выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация. Состав питательной среды, способ посева исследуемого материала. Мультимикротесты для идентификации энтеробактерий; микроскопическое изучение колоний.

презентация [4,3 M], добавлен 11.01.2014

Значение влажности среды при выращивании ферментов на сыпучих средах. Влияние степени аэрирования культур микроскопических грибов. Воздействие состава среды и длительности культивирования на биосинтез липазы. Способы обработки и выращивания культуры.

презентация [734,7 K], добавлен 19.03.2015

Химические элементы, входящие в состав живой материи. Синтез микроорганизмами различных ферментов. Физиология и принципы культивирования микроорганизмов. Метаболизмы, дыхание микроогранизмов, краткая характеристика питательных сред, рост и размножение.

реферат [26,1 K], добавлен 21.01.2010

Перекрестная адаптация организма к одному фактору среды, ее способствование приспособлению к другим факторам. Молекулярные основы адаптации человека и ее практическое значение. Приспосабливаемость живого организма к повреждающим факторам внешней среды.

реферат [198,3 K], добавлен 20.09.2009

Состав питательных сред для культивирования микроорганизмов. Физиологические функции элементов, используемых для их приготовления. Качественное преимущество промышленных питательных сред. Технология и многостадийный контроль качества их производства.

контрольная работа [27,8 K], добавлен 12.02.2015

Исследование и характеристика особенностей синегнойной палочки (Pseudomonas aeruginosa) – условно-патогенного микроорганизма. Определение токсиннейтрализующей активности моноклональных антител. Рассмотрение и анализ пигментов пиоцианина и флюоресцеина.

дипломная работа [1,8 M], добавлен 01.02.2018

Свойства прокариотных микроорганизмов. Методы определения подвижности у бактерий. Участие микроорганизмов в круговороте азота в природе. Нормальная и анормальная микрофлора молока. Культивирование анаэробных микроорганизмов в условиях лаборатории.

шпаргалка [50,2 K], добавлен 04.05.2009

Приоритетные загрязнители окружающей среды и их влияние на почвенную биоту. Влияние пестицидов на микроорганизмы. Биоиндикация: понятие, методы и особенности. Определение влажности почвы. Учет микроорганизмов на различных средах. Среда Эшби и Гетчинсона.

курсовая работа [7,6 M], добавлен 12.11.2014

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.

КЛАССИФИКАЦИЯ: сем. Pseudomonadaceae,род Pseudomonas,

• вид Pseudomonas aeruginоsa

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Материал для исследования: гной и экссудат из очагов поражения, моча,сперма,молоко,паренхим.органы,трубчатая кость,трупы мелк.ж.

Микроскопия:Мелкая полиморфная, Гр - палочка, располагается одиночно, беспорядочно, споры -, капсула -, очень подвижная.

Культивирование. Аэроб.Растёт при температуре от 20 до 44 о С на простых пита-тельных средах. Очень неприхотлива, растёт даже при пересеве на физраствор NaCl.

Культуральные свойства.При росте выделяет водорастворим. пигменты: сине-зелёный - пиоцианин; флуоресцирующий желтый - пиовердин; красный - пиорубин; чёрно-коричневый - пиомеланин.Выделяет запах жасмина или земляничного мыла.

На МПБ интенсивное помутнение, постепенное окрашивание среды в зеленовытый цвет. На дне слизистый осадок, при встряхивании он поднимается в виде косички. На поверхности может быть пленка.

На МПА средние и крупные, серые, плоские колонии с матовой поверхностью, неровными краями. Колонии и среда прокрашиваются в зелёный цвет,иногда с радужным отблеском.

Биохимические свойства. Синегнойная палочка обладает оксидазной активностью. Имеет протеолитическую активность (вызывает порчу пищевых продуктов). Выделяет аммиак. МПЖ – разжижает воронкой. Молоко – свертывает и пептонизирует. На кровяном агаре часто гемолиз.

ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ТЕСТЫ:

• рост при 44 о С;
• тест с хлороформом (в МПБ хлороформ растворяет пиоцианин и опускается на дно в виде голубой жидкости);
• положительный тест на окисление глюкозы при отсутствии анаэробной ферментации (О/Ф тест) .

БИОПРОБА: заражение белых мышей (п/к, в дозе 0,2 мл) смывом с МПА.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА: РА на стекле с поли- и моновалентными сыворотками и живой культурой.

БИОПРЕПАРАТЫ:Псевдомонозная формолвакцина для норок; Диагностические сыворотки. Псевдомонозный лечебный бактериофаг, пиобактериофаг.

ПРОТЕЙ

КЛАССИФИКАЦИЯ: Сем. Enterobacteriaceae, Род. Proteus, виды:

• Proteus vulgaris(протей обыкновенный)
• Proteus mirabilis(протей удивительный)

Методы диагностики:

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:

Материал для исследования: раневой экссудат, моча, истеч. из влагалища, фекалии, содержимое кишечника, паренхиматозные органы, аборт. плод. Пищевые продукты – при исследовании на свежесть. Корма. Смывы с поверхностей.

Морфология:Полиформные (разной длины) палочки, Гр.-, располагаются в мазке беспорядочно, одиночно, иногда образуют нити. Споры -, капсула -, подвижность ++ ( перитрих)- протей феноменально подвижен!!

Биохимические свойства.Обладает ярко выраженнымипротеолитическими свойствами:Выделяет Н₂S, индол, разжижает желатину; расщепляет мочевину, пептонизирует молоко. Расщепляет аминокислоту фенилаланин, что важно для диагностики. Расщепляет многие сахара на средах Гисса, но не изменяет лактозу и маннит.

Для ограничения ползучего роста протея поверхность питательных сред обрабатывают этиловым спиртом, подсушивают, а также используют элективные среды с желчью и желчными солями (среда Плоскирева).

ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ТЕСТЫ:

· Посев по Щукевичу в конденсационную воду скошенного агара (ползучий рост)

· Рост на трёхсахарном агаре Олькеницкого (скос малиновый, столбик чёрный)

· Расщепление фенилаланина; зелёное окрашивание при нанесении реактива хлорида железа на агар с фенилаланином.

БИОПРОБА:Б.мышам п/кож или в/брюшинно 0,5 мл бульонной культуры–гибель.

СЕРОДИАГНОСТИКА– РСК; РА со специфическими сыворотками

БИОПРЕПАРАТЫДиагностические сыворотки. Аг-диагностикумы для РА. Потейные лечебные бактериофаги. Пиобактериофаг.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Для выделения культур стафилококков обычно используют 5%-ный кровяной агар (кровь овцы, кролика, крупного рогатого скота). При исследовании образцов, содержащих постороннюю микрофлору, целесообразно использовать селективные среды.

Таблица 9. Дифференциальные признаки стафилококков, имеющих основное медицинское значение

Признак	S. aureus	S. epidermidis	S. saprophyticus
Anaerobius	Aureus
Наличие каротиноидного сегмента	–	±	–	+
Способность к росту в анаэробных условиях (тиогликолевая среда)	+	+	+	±
Рост на средах с 10% NaCI	+	+	± (слабо)	+
Рост при:
15°С	?	+	– (слабо)	+
45°С	–	+	+	±
Образование кислоты при ферментации углеводов в аэробных условиях:
ксилоза	–	–	–	–
арабиноза	–	–	–	–
раффиноза	–	–	–	–
сахароза	+	+	+	+
маннит	–	+	–	±
манноза	–	+	±	–
трегалоза	–	+	–	+
лактоза	–	+	±	±
галактоза	–	+	±	–
фруктоза	+	+	+	+
ксилит	–	–	–	±
Восстановление нитратов	–	+	+ (слабо)	–
Щелочная фосфатаза	+	+	+	–
Гиалуронидаза	+	+	+	?
Уреаза	?	±	+	+
Коагулаза (на сыворотке кролика)	+	+	–	–
Фибринолизин	?	±	±	?
Гемолитическая активность	+	+	– (слабо)	–
ДНКаза	+	+	– (слабо)	–
Чувствительность к новобиоцину (МИК >1,6 мкг/мл)	+	+	+	–

С целью дифференциации патогенных стафилококков от сапрофитных, а также от микрококков, используют среды, позволяющие одновременно определить один из признаков, характеризующих патоген­ные стафилококки. Приводим рецепты некоторых питательных сред.

Молочно-солевой агар

В 100 мл МПБ растворяют 6,5 г хлорида натрия, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,4, стерилизуют при 121°С 20 минут. Перед использованием агар расплавляют, охлаждают до 45°С, добавляют 10% стерильного обезжиренного молока и разливают по чашкам Петри. На этой среде определяют пигментообразование и способность к росту при наличии 6,5% хлорида натрия.

Лактозо-солевой бульон с фенолротом

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г мясного экстракта, 1 г дрожжевого экстракта, 5 г хлористого лития, 20 г агара. Устанавливают рН 6,8, разливают по пробиркам и стерилизуют при 121°С 15 минут. При росте коагулазоположигельных стафилококков среда желтеет (тест на коагулазу положительный).

Теллурит-полимиксин-желточный агар Крисли

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г маннита, 20 г хлорида натрия, 2 г хлористого лития, 18 г агара. Устанавливают рН 7,3, стерилизуют 15 минут при 121°С. Перед использова­нием в среду добавляют 100 мл 30%-ной желточной эмульсии (на фи­зиологическом растворе), 0,4 мл стерилизованного фильтрацией 1%-ного водного раствора полимиксина М, 10 мл стерилизованного автоклавированием (121°С 15 мин) 1%-ного водного раствора теллурита натрия.

Среда Джиолиотта и Кантони

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г мясного экстракта, 5 г дрожжевого экст­ракта, 5 г хлористого лития, 20 г маннита, 5 г хлористого натрия, 1,2 г глицина, 3 г пирувата натрия. Устанавливают рН 6,9, стерилизуют при 115°С 20 мин. Перед употреблением к среде добавляют 0,1 мл 1%-ного водного раствора теллурита натрия, стерилизованного фильтра­цией, При росте коагулазоположительных стафилококков наблюдается почернение среды или черный осадок.

Среда Бэрда-Паркера

К 90 мл основной среды с температурой 45°С добавляют 6,3 мл глицинового раствора, 1 мл раствора теллурита натрия, 5 мл эмульсии желтка, перемешивают и разливают в чашки Петри. Среда пригодна к использованию в течение 28 дней (хранение при 4°С). Перед посевом на поверхность среды наносят 0,5 мл 20%-ного водного раствора пирувата натрия, стерилизованного фильтра­цией; распределяют по поверхности, подсушивают. Колонии коагула­зоположительных стафилококков черные, блестящие, с узкой серо-белой полосой и окружены прозрачной зоной.

Желточная эмульсия. Свежее куриное яйцо выдерживают в 0,001%-ном растворе HgCl₂. Соблюдая требования асептики, отделяют желток и эмульгируют его в 200 мл физиологического раствора.

Глициновый раствор. Глицин — 20 г, дистиллированная вода — 100 мл. Стерилизуют при 120°С 15 минут.

Раствор теллурита натрия. Теллурит натрия — 1 г, дистиллированная вода — 100 мл. Стерилизуют фильтрацией.

Желточно-солевой агар Чистовича

В расплавленный МПА с 10% хлорида натрия (рН 7,2), охлажденный до температуры 60°С, добавляют желточную эмульсию. После тщательного перемешивания питательную среду разливают в чашки Петри.

Среда Чаплина-Бернса

К 100 мл МПА добавляют 3,3 мл 0,1%-ного водного раствора кристаллического фиолетового и 5 г лактозы. Устанавливают рН 6,8. Стерилизуют автоклавированием (110°С 30 минут). Колонии патогенных стафилококков растут быстрее, чем непатогенных, и приобретают фиолетовый или оранжевый цвет.

Среда Чемпена (для выделения патогенных стафилококков)

Вариант 1: пептон — 1%, D-маннит — 1%, натрия хлорид — 7,5%, дрожжевой экстракт — 0,25%, двузамещенный фосфорнокислый ка­лий — 0,5%, агар-агар — 1,5%. Среду стерилизуют 90 минут при 110°С, устанавливают рН 7,0 и добавляют 10% стерильного обезжиренного молока (молоко способствует лучшему образованию пигмента).

Вариант 2: пептон — 1%, дрожжевой экстракт — 0, 25%, желатин — 3%, лактоза — 0,2%, D-маннит — 1%, натрия хлорид — 7,5%, двузамещен­ный фосфорнокислый калий — 0,5%, агар-агар — 1,5%. Стерилизуют 90 минут при 110°С, устанавливают рН 7,0.