Тест-система для идентификации дрожжеподобных грибов и криптококка
Прецизионная диагностика инвазивных микозов нелегка. Это объясняется не только трудностями в получении культуры грибов, но и в интерпретации результатов исследований, поскольку грибами, как дрожжевыми, так и мицелиальными, возможны колонизация слизистых оболочек, контаминация исследуемых образцов. В связи с этим диагностика инвазивных микозов базируется на комплексном подходе, включающем не только результаты микологических (культуральных) и серологических (определение антигена грибов) исследований, но и клинические симптомы грибковой инфекции, данные вспомогательных методов исследований (компьютерная или магнитно-резонансная томография, ультразвуковое исследование).
Европейско-американской кооперированной группой по изучению инвазивных микозов у иммунокомпрометированных больных разработаны критерии диагностики инвазивных микозов. Они представлены в 2001 г. на Международной конференции по антимикробным препаратам и химиотерапии (ICAAC, Chicago), а в 2002 г. в печати. Определены критерии доказанного, вероятного и возможного инвазивного микоза, которые рекомендуется использовать при клинических и эпидемиологических исследованиях
Доказанный инвазивный микоз, вызванный мицелиальными грибами: обнаружение мицелия грибов в биоптатах либо аспиратах при гистологическом или цитологическом исследовании или выделение культуры из образцов, полученных в асептических условиях из стерильного в норме очага, который по результатам клинического и радиологического исследований связан с инфекцией, за исключением исследований мочи и со слизистых оболочек.
Доказанный инвазивный микоз, вызванный дрожжевыми грибами: обнаружение дрожжевых клеток (грибы рода Candida могут формировать псевдомицелий или истинный мицелий) в биоптатах или аспиратах, за исключением образцов со слизистых оболочек, или выделение культуры из образцов, полученных в асептических условиях из стерильного в норме очага, который по результатам клинического и радиологического исследований связан с инфекцией, за исключением исследований мочи, образцов из пазух носа и со слизистых оболочек, или обнаружение при микроскопии и специфическом окрашивании (в капле туши, окраска муцикармином) дрожжевых клеток либо положительного антигена Cryptococcus spp. в цереброспинальной жидкости.
Фунгемия, обусловленная мицелиальными грибами: выделение гемокультуры грибов, за исключением Aspergillus spp. и Penicillium spp., включая Penicillium marneffei, в сочетании с клиническими симптомами инфекционного процесса, совместимыми с выделенным возбудителем.
Фунгемия, обусловленная дрожжевыми грибами: выделение гемокультуры грибов рода Candida или иных дрожжевых грибов у пациентов с клиническими признаками инфекции, связанными с данным возбудителем.
Диагностическая значимость: выделение дрожжевых грибов, осторожная интерпретация при выделении мицелиальных грибов, за исключением Fusarium spp.
выделение дрожжевых грибов из крови
Центральный или периферический венозный катетер удаляют во всех случаях выделения дрожжевых грибов из крови
Для микологического исследования используют асептически удаленный дис-тальный отрезок катетера длиной 5— 6 см. Исследование проводят полуколичественным (Maki method) или количественным методом на среде Сабуро
Диагностическая значимость:
выделение дрожжевых грибов при полуколичественном исследовании 15 КОЕ или более, при количественном — 103КОЕ/мл или более для подтверждения диагноза катетерассоциированной инфекции или инфицирования катетера
подозрение на микозы, вызванные мицелиальными грибами или Cryptococcus neoformans;
длительная лихорадка на фоне терапии антибиотиками широкого спектра действия и нейтропении
Микроскопия образцов с калькофлуором белым (обнаружение мицелия или псевдомицелия);
посев на среду Сабуро;
определение антигена Aspergillus в жидкости бронхоальвеолярного лаважа при наличии очагов в легких, характерных для инвазивного аспергиллеза
Диагностическая значимость:
обнаружение грибов как дрожжевых, так и мицелиальных; положительный антиген
клинические и/или радиологические признаки инвазивного микоза;
лихорадка на фоне терапии антибиотиками широкого спектра действия.
Микроскопия с калькофлуором белым, посев на среду Сабуро
Диагностическая значимость:
обнаружение грибов как дрожжевых, так и мицелиальных
При микологическом исследовании стерильных аспиратов или биоптатов принимают во внимание выделение не только культуры грибов, но и обнаружение при микроскопии мицелия или псевдомицелия. В гистологических препаратах аспергиллы трудно дифференцировать от Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum и некоторых других мицелиальных грибов. Для дифференциальной диагностики следует проводить иммуногистохимическое исследование с антителами к аспергиллам.
Иная интерпретация результатов в случае обнаружения мицелиальных грибов в крови. Высокая частота выделения мицелиальных грибов характерна для Fusarium spp. и составляет 40—60 %. Aspergillus обнаруживают крайне редко, в большинстве случаев это рассматривается как контаминация, за исключением Aspergillus terreus.
Выделение Aspergillus terreus из крови больных с гемобластозами может свидетельствовать об истинной аспергиллемии, а при наличии клинических симптомов инфекции является основанием для назначения антимикотиков.
| Показатель | Критерии |
| Факторы, индуцирующие возникновение инвазивного микоза (макроорганизм) | Нейтропения ( *При отсутствии инфекции, обусловленной микроорганизмами, способными вызвать аналогичную радиологическую картину, включая образование полостей (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.). |
При выявлении в крови или иных стерильных биосубстратов дрожжевых грибов обязательно следует проводить идентификацию до вида и определять чувствительность к противогрибковым препаратам, при выделении мицелиальных (плесневых) грибов — только идентификацию до вида, чувствительность не определяют.
В клинической практике чувствительность мицелиальных грибов не исследуют по причине несовершенства стандартов по определению чувствительности таких грибов к антимикотикам. Более того, только в одном исследовании продемонстрирована корреляция между чувствительностью Aspergillus spp. и результатами лечения инвазивного аспергиллеза у больных с гемобластозами. Ни в одном из исследований, проведенных в последующем, не получено подобных результатов.
В последнее время стали появляться единичные сообщения о формировании приобретенной резистентности грибов A. fumigatus к итраконазолу, вориконазолу.
Идентификация грибов до вида, особенно полученных из стерильных локусов, необходима прежде всего для выбора антимикотика и проведения адекватной противогрибковой терапии. Так, Candida krusei устойчивы к флуконазолу и менее чувствительны, чем дрожжевые грибы другого вида, к амфотерицину В; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. резистентны к амфотерицину В; Mucorales резистентны к итраконазолу, вориконазолу, Candida glabrata проявляет дозозависимую чувствительность к флуконазолу, и при выделении этого вида гриба, даже чувствительных штаммов, дозу флуконазола следует увеличить (взрослым назначают 800 мг вместо 400 мг); Candida lusitaniae устойчивы к амфотерицину В.
Идентификация грибов до вида также важна для проведения эпидемиологического анализа в стационаре — определения возбудителей вспышек инфекции и по возможности источника инфекции. Описаны вспышки инфекции, вызванные такими редкими грибами, как С. lusitaniae, С. krusei, С. lipolytica.
На основании видовой идентификации грибов можно предположить инвазивный микоз или колонизацию грибами слизистых оболочек. Например, Aspergillus niger существенно реже, чем Aspergillus fumigatus, являются причиной инвазивного аспергиллеза у больных острыми лейкозами. Выделение из жидкости бронхоальвеолярного лаважа Aspergillus niger чаще всего расценивается как колонизация дыхательных путей, а из мокроты — как контаминация из воздуха и требует дополнительных исследований при подтверждении диагноза инвазивного аспергиллеза.
Выделение Cryptococcus neoformans у иммунокомпрометированных больных из респираторного тракта (смывы, лаваж) является диагностически значимым. Если идентификация дрожжевых грибов из жидкостей, полученных из дыхательных путей (смывы из трахеи, бронхов, бронхоальвеолярный лаваж) иммунокомпрометированных больных, не относится к обязательным исследованиям, то проведение скрининга по выявлению Cryptococcus neoformans из этих образцов является необходимым.
Обнаружение кандид в моче у больных с нейтропенией и лихорадкой, как правило, считается проявлением диссеминированной кандидозной инфекции.
В своевременной диагностике инвазивного аспергиллеза успешно пользуются коммерческим тестом по выявлению циркуляции специфического антигена грибов Aspergillus spp. галактоманна (полисахаридный водорастворимый компонент клеточной стенки гриба).
Галактоманн может быть определен двумя методами: методом латекс-агглютинации (Pastorex Aspergillus, фирмы BioRAD) и методом иммуноферментного анализа (Platelia Aspergillus, фирмы BioRAD).
Преимуществом иммуноферментного метода является более низкий порог чувствительности определения уровня галактоманна в крови — 1 нг/мл и менее, а с помощью латекс-агглютинации — 15 нг/мл. Диагностическое значение имеет определение галактоманна в крови (не менее чем в 2 образцах), цереброспинальной жидкости, бронхоальвеолярном лаваже. Чувствительность метода иммуноферментного анализа составляет около 90 %, специфичность 90—99 %, у реципиентов аллогенного костного мозга данные показатели ниже и равны соответственно 60—70 % и 80—90 % вследствие профилактического применения противогрибковых препаратов (антимикотики снижают пороговый уровень галактоманна).
В 40 % случаев выявление галактоманна в крови опережает проявления инвазивного аспергиллеза, определяемые при компьютерном исследовании легких, а в 70 % опережает клинические симптомы инфекции.
Диагностическую значимость тест по выявлению антигена Aspergillus имеет в том случае, если исследование проводят неоднократно. Определение антигена Aspergillus в крови следует проводить при лихорадке на фоне лечения антибиотиками широкого спектра действия у больных с нейтропенией 2 раза в неделю; при пневмониях, которые возникают или сохраняются на фоне антибактериальной терапии; при обнаружении очагов в легочной ткани (компьютерная томография).
Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Муравьева В.В., Припутневич Т.В., Завьялова М.Г., Анкирская А.С., Ильина Е.Н.
Цель исследования. Сравнить результаты видовой идентификации дрожжевых грибов , выделенных из вагинального отделяемого женщин с вульвовагинальным кандидозом , традиционными микробиологическими методами и MALDI-TOF MS . Материалы и методы. Методом MALDI-TOF MS проанализировано 2304 изолята дрожжевых грибов . Результаты. В соответствии со значением score, свидетельствующем о точности идентификации, наилучшие результаты (score 2-2,3) отмечены у 55,5% культур C. albicans и 67,9% не-albicans видов Candida. Один штамм (0,2%) среди не-аlbicans видов Candida, впоследствии идентифицированный методом секвенирования как Pichia fabianii, не был определен (score дрожжевых грибов методом MALDI-TOF MS и традиционными методами.
Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Муравьева В.В., Припутневич Т.В., Завьялова М.Г., Анкирская А.С., Ильина Е.Н.
Comparative Assessment of Species Identification of Vaginal Yeast Isolates Using MALDI-TOF MS and Conventional (Biochemical and Phenotypic) Methods
Objective. To compare results of species identification of yeast isolated from vaginal discharge in women with vulvovaginal candidiasis using conventional microbiological methods and MALDI-TOF MS . Materials and Methods. A total of 2304 isolates of yeast were tested by MALDI-TOF MS method. Species identification of 1294 isolates was also performed using conventional methods. Results. According to score values (indicates accuracy of identification), the best results (score 2-2.3) were yielded in 55.5% of C. albicans and 67.9% of non-albicans Candida spp. One isolate (0.2%) of non-albicans Candida spp. subsequently identified by sequencing method as Pichia fabianii was not determined (score yeast isolates. Coincident results were received in 1287 isolates: all isolates of Candida albicans and 278 (97.5%) of non-albicans Candida spp. Exceptions were 7 isolates belonging to 4 species: C. nivariensis, C. lambica, C. famata, and Pichia fabianii. Conclusions. This study demonstrated a high coincidence rate for identification of yeast by MALDI-TOF MS versus conventional methods.
Сравнительная оценка видовой идентификации вагинальных изолятов дрожжевых грибов методом MALDI-TOF MS и традиционными (биохимическим и фенотипическим) методами
В. В. Муравьева \ Т. В. Припутневич \ М. Г. Завьялова \ А. С. Анкирская1, Е. Н. Ильина2
Цель исследования. Сравнить результаты видовой идентификации дрожжевых грибов, выделенных из вагинального отделяемого женщин с вульвовагинальным кандидозом, традиционными микробиологическими методами и MALDI-TOF MS.
Материалы и методы. Методом MALDI-TOF MS проанализировано 2304 изолята дрожжевых грибов.
Результаты. В соответствии со значением score, свидетельствующем о точности идентификации, наилучшие результаты (score — 2-2,3) отмечены у 55,5% культур C. albicans и 67,9% не-albicans видов Candida. Один штамм (0,2%) среди не-albicans видов Candida, впоследствии идентифицированный методом секве-нирования как Pichia fabianii, не был опреде-
лен (score 1,7 результат соответствует высокой степени достоверности идентификации до рода, а при значениях score >2,0 — надежной идентификации до вида. В то же время значение score >1,7 оценивается как минимальное значение оценочного коэффициента, требуемое для видовой идентификации [17]. При значении score Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
В случае отрицательного результата идентификации проводилось исследование последовательности гена 18S рРНК методом секвенирования.
За двухлетний период (с октября 2010 г. по октябрь 2012 г.) нами исследовано 2304 изолята дрожжевых грибов, выделенных из вагинального отделяемого женщин с ВВК. Из них 2235 штаммов относились к роду Candida (97%) и 69 (3%) принадлежали к 4 другим родам (Saccharomyces, Rhodotorula,
времени пробоподготовки, дорогостоящих реагентов и высокой квалификации персонала.
Цель настоящего исследования: сравнить результаты видовой идентификации дрожжевых грибов, выделенных из вагинального отделяемого женщин с ВВК, при использовании традиционных микробиологических методов и MALDI-TOF масс-спектрометрии.
Материал и методы_
Дрожжевые грибы культивировали на среде Сабуро в течение 24-48 часов при температуре 37 °C. При классической фенотипической видовой идентификации для дифференциации C. albicans от Candida не-albicans видов использовали посев на хромогенный агар Candida ID 2 (Bio Merieux, Франция) или HiCrome Candida agar (Himedia, Индия) (см. рисунок), проростковый тест и тест на способность формировать хламидоспоры
Пример фенотипической характеристики клинических изолятов дрожжевых грибов с использованием хромоген-ного агара (HiCrome Candida agar, Himedia).
Таблица 1. Результаты идентификации дрожжевых грибов методом MALDI-TOF MS
Виды идентифицированных грибов Число штаммов Не идентифицировано (score 2) абс. % абс. %
Candida (всего) 2235 0 936 41,9 1299 58,1
C. albicans 1762 0 785 44,5 977 55,5
C. не-albicans: 542 1 (0,2%) 173 31,9 368 67,9
C. glabrata 229 0 65 28,4 164 71,6
C. parapsilosis 74 0 30 40,5 44 59,5
C. krusei 59 0 20 33,9 39 66,1
С. kefyr 39 0 2 5,1 37 94,9
C. tropicalis 20 0 7 35,0 13 65,0
C. lusitaniae 19 0 6 31,6 13 68,4
С. dubliniensis 11 0 11 100,0 0 0
C. norvegensis 10 0 7 70,0 3 30,0
C. guilliermondii 5 0 1 4
C. utilis 3 0 1 2
C. lambica 2 0 1 1
C. nivariensis 1 0 0 1
C. pelliculosa 1 0 0 1
Saccharomyces cerevisiae 64 0 19 45 70,3
Trichosporon asahii 3 0 3 0 0
Rhodotorula mucilaginosa 1 0 0 1
Pichia fabianii 1 1* 0 0 0
Итого . 2304 1 (0,04%) 958 41,56 1345 58,4
Примечание. * — указанный вид гриба отсутствует в базе данных.
Trichosporon, Pichia). Идентифицировано 19 видов дрожжевых грибов.
Лидирующее место в этиологической структуре ВВК занимает вид C. albicans — 1762 штамма (76,5%), доля Candidas не-albicans видов (542 штамма) составила 23,5%. Наиболее часто среди не-albicans видов встречались C. glabrata (42,3%), C. parapsilosis (13,7%), Saccharomyces cerevisiae (11,8%), C. krusei (10,9%) и C. kefyr (7,2%). Прочие виды (C. tropicalis, C. lusitaniae, C. norvegensis, C. guilliermondii, С. dubliniensis, C. nivariensis, C. utilis, Trichosporon asahii, C. pelliculosa, C. lambica, C. fama-ta, Rhodotorula rubra, Pichia fabianii) идентифицировали значительно реже (от 0,2 до 3,7%).
Методом MALDI-TOF MS было определено 2303 изолята дрожжевых грибов (99,9%). В соответствии со значением score, свидетельствующем о точности идентификации, наилучшие результаты (score 2-2,3) отмечены у 55,5% культур C. albicans и 67,9% не-albicans видов Candida (табл. 1). С меньшей степенью достоверности (score1,7- 2) иденти-фициро- отличная, хорошая приемлемая
(score Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
Pichia fabianii 1 1* 0 0 0 0 1* 0 0 C.utilis
Всего . 285 4 (1,4%) 88 30,9 193 67,7 4 (1,4%) 281 98,6
Примечание. * — указанные виды грибов отсутствуют в базе данных.
С помощью MALDI-TOF MS правильно идентифицирован 281 штамм (98,6%), в том числе 67,7% с высокой степенью достоверности (score 2-2,3), а у 4 штаммов (1,4%) не получено правильной идентификации; из них 3 штамма — C. famata — вида, отсутствующего в базе MALDI Biotyper на момент исследования, идентифицированы как C. parapsi-losis (score 1,7- 2,0), несколько ниже, чем в исследованиях, в которых использовался стандартный метод пробоподготовки с предварительной экстракцией белков. Так, N. Dhiman и соавт. [15] в проспективном исследовании 138 штаммов дрожжей и 103 архивных штаммов идентифицировали на уровне вида (score >2,0) в 92,0% и 81,6% случаев, соответственно. По данным van Veen S. Q. и соавт. [16], точная видовая идентификация 80 изолятов дрожжей 14 видов 7 родов получена в 87,5% случаев. G. Marklein и соавт. [13] оценивали 267 клинических изолятов 28 видов 7 родов. Из них 92,5% были определены правильно с высокой степенью достоверности. L. G. Stevenson и соавт. [14] при исследовании 194 клинических изолятов дрожжевых грибов у 192 определили видовую принадлежность к 23 видам 6 родов, причем у 169 (88%) штаммов — с большой точностью (score >2) и у 23 (12%) — с меньшей (score 1,7- 1,7) нам, так же как и L. G. Stevenson и соавт. [14], удалось повысить идентификацию на видовом уровне до 99,9%.
X. Iriart и соавт. [19] сравнили результаты идентификации дрожжевых грибов, выполненной тремя методами: рутинными лабораторными тестами, биохимическим типированием с помощью Vitek2 и методом масс-спектрометрии по короткому протоколу (Vitek MS). Показано, что 184 из 192 штаммов (95,8%) дрожжевых грибов были правильно идентифицированы с помощью Vitek MS при использовании модифицированной методики экстракции белков.
Метод биохимической видовой идентификации в нашем исследовании показал высокую достоверность (98,6%). В то же время у него есть свои ограничения и недостатки: длительность исследования (до 48 часов), затратность и самое главное — ограниченность рамками базы данных, в которую не включены редкие виды. Так, в нашем исследовании не были идентифицированы такие виды, как C. nivariensis, C. lambica, Pichia fabianii. Как и в исследовании G. Marklein и соавт. [13], Pichia fabianii по биохимическим параметрам ошибочно была идентифицирована как C. utilis, и только 18S rRNA секвенирование позволило нам уточнить видовую принадлежность гриба. Существенные преимущества у MALDI-TOF MS: быстрота выполнения, малая затратность на реагенты и гибкая система пополнения базы данных.
Что касается этиологической структуры ВВК, то за последние два года мониторинга видового спектра возбудителей она не претерпела существенных изменений, в сравнении с предшествующими годами [20]. В последнее время в литературе появилась информация о новых видах возбудителей грибковых инфекций: C. nivariensis, C. ortho-psilosis, С. metapsilosis, C. dubliniensis, C. ciferri, C. palmioleophila, С. bracarensis, C. fermentati и некоторых других [12, 18, 21]. Использование моле-кулярно-генетических методов (секвенирование) позволило разделить некоторые близкородственные виды. Так, из группы C. parapsilosis были вычленены C. orthopsilosis и C. metapsilosis, вид C. gla-brata оказался гетерогенным и из него выделен вид C. bracarensis [22]. Аналогичная ситуация оказалась с близкородственными видами C. dubliniensis и C. albicans. С. palmioleophila также является новым возбудителем и его часто по биохимическим параметрам ошибочно идентифицируют как C. guillier-mondii или C. famata [23].
В нашем исследовании новых видов из числа перечисленных выше, кроме C. dubliniensis и C. niva-riensis, выявлено не было, в то время как на момент исследования использованная в работе база данных MALDI Biotyper включала все эти виды, за исключением C. bracarensis. Учитывая весомую долю штаммов C. glabrata (229), нельзя исключить возможность присутствия среди них этого вида. Что
касается C. palmioleophila, то появились единичные сообщения о недооцененной роли этого возбудителя в этиологии ВВК. По данным Н. В. Фоменко и М. К. Иванова [24], на долю этого вида приходится 18,6% среди грибов рода Candida (по результатам молекулярно-генетического исследования ДНК грибов, экстрагированных из образцов вагинального отделяемого). В нашем исследовании за двухлетний период наблюдения не было идентифицировано ни одного штамма этого вида, хотя он присутствует в базе данных MALDI Biotyper. Можно полагать, что пополнение базы данных новыми видами расширит наши представления об этиологической структуре ВВК.
Таким образом, проведенное нами исследование показало высокую степень совпадения результатов идентификации дрожжевых грибов методом MALDI-TOF MS и традиционными методами. Полученные нами результаты при использовании метода прямого нанесения изолята на MALDI-мишень без предварительной экстракции продемонстрировали высокий процент корректной идентификации до вида c учетом значения score >1,7, минимально необходимого для определения вида гриба. Быстрота идентификации дрожжевых грибов, экономичность и возможность пополнения базы данных позволят со временем широко внедрять MALDI-TOF MS в рутинную практику микробиологических лабораторий.
1. Chen S. C., Marriott D., Playford E. G., et al. Candidaemia with uncommon Candida species: predisposing factors, outcome, antifungal susceptibility, and implications for management. Clin Microbiol Infect 2009; 15:662-9.
2. Walsh T.J., Groll A., Hiemenz J., Fleming R., Roilides E., Anaissie E. Infections due to emerging and uncommon medically important fungal pathogens. Clin Microbiol Infect 2004; 10 (Suppl. 1):48-66.
3. Miceli M.H., Díaz J.A., Lee S.A. Emerging opportunistic yeast infections. Lancet Infect Dis 2011; 11 (2):142-51.
4. Мирзабалаева А. К. Инфекционные вульвовагиниты: клиническая проблема и пути ее решения. Акушерство и гинекология 2005; 6:51-5.
5. Прилепская В. Н, Байрамова Г. Р. Вульвовагинальный кандидоз. Клиника, диагностика, принципы терапии. ГЭОТАР-Медиа, 2010; 80 с.
6. Pfaller M. A., Diekema D. J., Gibbs D. L., et al. Results from the artemis disk global antifungal surveillance study, 1997 to 2007: 10.5-year analysis of susceptibilities of noncandidal yeast species to fluconazole and voriconazole determined by CLSI standardized disk diffusion testing. J Clin Microbiol 2009; 47:117-23.
7. Sivasubramanian G., Sobel J. D. Refractory urinary tract and vulvovaginal infection caused by Candida krusei. Int Urogynecol J Pelvic Floor Dysfunct 2009; 20 (11):1379-81.
8. Sanguinetti M., Porta R., Sali M., et al. Evaluation of VITEK 2 and RapID Yeast Plus systems for yeast species identification: experience at a large clinical microbiology laboratory. J Clin Microbiol 2007; 45:1343-6.
9. Massonet C., Eldere J. V., Vaneechoutte M., DeBaere T., Verhaegen J., and Lagrou K. Comparison of VITEK 2 with ITS2-fragment length polymorphism analysis for identification of yeast species. J Clin Microbiol 2004; 42(5):2209-11.
10. Lau A., Chen S., Sorrell T., et al. Development and clinical application of a panfungal PCR assay to detect and identify fungal DNA in tissue specimens. J Clin Microbiol 2007; 45:380-5.
11. Montero C. I., Shea Y. R., Jones P. A., et al. Evaluation of pyrosequencing technology for the identification of clinically relevant non-dematiaceous yeasts and related species. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2008; 27:821-30.
12. Alcoba-Florez J., delPilarArevalo M., Gonzalez-Paredes F.J., et al. PCR protocol for specific identification of Candida nivariensis, a recently described pathogenic yeast. J Clin Microbiol 2005; 43(12):6194-6.
19. Iriart X., Lavergne R. A., Fillaux J., et al. Routine identification of medical fungi by the new Vitek MS matrixassisted laser desorption ionization-time of flight system with a new time-effective strategy. J Clin Microbiol 2012; 50 (6):2107-10.
20. Анкирская А. С., Муравьева В. В., Миронова Т. Г. и соавт. Генитальный кандидоз в структуре оппортунистических инфекций влагалища. Принципы лабораторной диагностики и значение мониторинга чувствительности грибов к антимикотикам. Акушерство и гинекология 2009; 5:31-7.
21. Cuenca-Estrella M., Gomez-Lopez A., Isla G., et al. Prevalence of Candida bracarensis and Candida nivarien-sis in a Spanish collection of yeasts: comparison of results from a reference centre and from a population-based surveillance study of candidemia. Med Mycol 2011; 49(5):525-9.
22. Santos C. R., Lima N., Sampaio P., Pais C. Matrixassisted laser desorption/ionization time-of-flight intact cell mass spectrometry to detect emerging pathogenic Candida species. Diagn Microbiol Infect Dis 2011; 71(3):304-5.
23. Jensen R. H., Arendrup M. C. Candida palmioleophila: characterization of a previously overlooked pathogen and its unique susceptibility profile in comparison with five related species. J Clin Microbiol 2011; 49:549-56.
24. Фоменко Н. В., Иванов М. К. Разнообразие видов микроскопических грибов, выявленных в урогени-тальном тракте женщин. Справочник заведующего КДЛ 2012; 11:45-53.
13. Marklein M., Josten U., Klanke E., et al. Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry for fast and reliable identification of clinical yeast isolates. J Clin Microbiol 2009; 47(9):2912-7.
14. Stevenson L. G., Drake S. K., Shea Y. R., Zelazny A. M., and Murray P. R. Evaluation of matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF) for the identification of clinically important yeast species. J Clin Microbiol 2010; 48:3482-6.
15. Dhiman N., Hall L., Wohlfiel S. L., Buckwalter S. P., and. Wengenack N. L. Performance and cost analysis of matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry for routine identification of yeast. J ClinMicrobiol 2011; 49(4):1614-6.
16. van Veen S. Q., Claas E. C., and Kuijper E.J. High-throughput identification of bacteria and yeast by matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry in conventional medical microbiology laboratories. J Clin. Microbiol 2010; 48:900-7.
17. Van Herendael B. H., Bruynseels P., Bensaid M., et al. Validation of a modified algorithm for the identification of yeast isolates using matrix-assisted laser desorption/ionisation time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2012; 31(5):841-8.
18. Pinto A., Halliday C., Zahra M., et al. Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrom-etry identification of yeasts is contingent on robust reference spectra. PLoS One 2011; 6(10):e25712.
Читайте также: