Бифидобактерии бифидум и кишечные палочки

Владелец регистрационного удостоверения:

Коды АТХ

A07FA (Противодиарейные препараты биологического происхождения, регулирующие равновесие кишечной микрофлоры)
G02CC (Противовоспалительные препараты для интравагинального применения)

Лекарственная форма

рег. №: ЛП-002464 от 13.05.14 - Действующее

Форма выпуска, упаковка и состав препарата Бифидумбактерин

Суппозитории ректальные и вагинальные	1 супп.
бифидобактерии бифидум (Bifidobacterium bifidum)	не менее 1×10 7 КОЕ

Вспомогательные вещества: витепсол Н-15 - 45.06-49.8%, витепсол W-35 - 45.06-49.8%, парафин жидкий - 4.75-5.25%, компоненты среды высушивания: сахароза - 0.12-0.13%, желатин - 0.01-0.02%.

5 шт. - упаковки ячейковые контурные (2) - пачки картонные.

Клинико-фармакологические группы

Фармакологическое действие

Живые бифидобактерии (Bifidobacterium bifidum) обладают высокой антагонистической активностью в отношении широкого спектра патогенных и условно патогенных микроорганизмов, включая стафилококки, протей, энтеропатогенную и гемолитическую кишечные палочки, шигеллы, дрожжеподобные грибы, что определяет нормализующее влияние препарата при нарушениях микробиоцеиоза кишечника и влагалища.

Антагонистическое воздействие на патогенную и условно патогенную микрофлору способствует восстановлению нормальной микрофлоры.

Фармакокинетика

Не всасывается в кровоток.

Показания препарата Бифидумбактерин

Лечение и профилактика дисбактериозов и воспалительных процессов дистальных отделов кишечника (взрослые и дети с 3 лет):

хронические колиты различной этиологии с локализацией патологического процесса в дистальных отделах толстой кишки;
дисбактериоз кишечника, в т.ч. восстановление микрофлоры кишечника у пациентов, перенесших острые кишечные инфекции и антибактериальную терапию.

Лечение и профилактика дисбиозов влагалища и воспалительных процессов женских половых органов (взрослые):

неспецифические вагиниты (кольпиты), не гонококковой и трихомонадной этиологии; дисбиозы влагалища, в т.ч. бактериальный вагиноз (гарднереллез); кандидоз влагалища - для восстановления нормальной микрофлоры после окончания специфической антимикробной, противовирусной или противогрибковой терапии, в качестве монопрепарата или в комплексе с иммуномодулирующими препаратами;
подострые и хронические стадии воспалительных процессов женской половой сферы; назначают после окончания курса антибактериальной терапии с целью нормализации микрофлоры;
гормонально-зависимые кольпиты (вагиниты), в т.ч. сенильные; назначают на фоне заместительной гормональной терапии;
подготовка к плановым гинекологическим операциям с целью профилактики послеоперационных инфекционных осложнений;
предродовая подготовка беременных группы риска по развитию воспалительных заболеваний с нарушением чистоты влагалищного секрета III-IV степени с целью профилактики и лечения дисбиозов влагалища;
в комплексном лечении урогенитальных инфекций и иных заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП): гонореи, урогенитального хламидиоза, урогенитального герпеса.

Открыть список кодов МКБ-10

Код МКБ-10	Показание
A54	Гонококковая инфекция
A56.0	Хламидийные инфекции нижних отделов мочеполового тракта
A60	Аногенитальная герпетическая вирусная инфекция [herpes simplex]
B37.3	Кандидоз вульвы и вагины
K51	Язвенный колит
K52	Другие неинфекционные гастроэнтериты и колиты
K63	Другие болезни кишечника
N76	Другие воспалительные болезни влагалища и вульвы
N77.1	Вагинит, вульвит и вульвовагинит при инфекционных и паразитарных болезнях, классифицированных в других рубриках
N89.8	Другие невоспалительные болезни влагалища
N95.2	Постменопаузный атрофический вагинит
Z51.4	Подготовительные процедуры для последующего лечения или обследования, не классифицированные в других рубриках

Режим дозирования

При кишечных заболеваниях (детям старше 3 лет и взрослым)

Суппозитории применяют рсктально 3 раза в день по 1 - 2 суппозитория на прием одновременно с приемом пероральных форм препаратов с группировочным наименованием бифидобактерии бифидум. Продолжительность курса лечения: после острых кишечных инфекций составляет 7-10 дней, при затяжных и хронических формах заболевания, дисбактериозах кишечника 15-30 дней и более.

При обнаружении гемолизирующей кишечной палочки (E.coli entеrohemorrhagic) препарат вводят по 1 суппозиторию 1 - 2 раза в день в течение 10 дней.

При необходимости курсы лечения можно повторить через 3-4 месяца.

Для восстановительной терапии при применении антибактериальных препаратов и профилактики колитов препарат вводят по 1 суппозиторию 1-2 раза в день в течение 10 дней. При необходимости курс лечения можно повторить через 10-20 дней.

В гинекологической практике (взрослым)

Неспецифические кольпиты (вагиниты), в том числе сенильные вагиниты гормональной природы, дисбиозы влагалища и другие: назначают вагинально по 1 суппозиторию 2 раза в день в течение 5 - 10 дней.

При нарушении чистоты вагинального секрета у беременных до III-IV степени препарат применяют по 1 суппозиторию 1 - 2 раза в день в течение 5-10 и более дней под контролем восстановления чистоты вагинального секрета до I-II степени и исчезновения клинических симптомов.

С целью профилактики гнойно-септических осложнений при плановых гинекологических операциях применяют по 1 суппозиторию 1-2 раза в день в течение 5-10 дней до и 10 дней после операции или родоразрешения.

В комплексном лечении урогенитальных инфекций и иных ЗППП препарат применяют по 1 суппозиторию 3 раза в день, курс лечения 15 дней.

Восстановительная терапия после применения антибиотиков: препарат вводят по 1 суппозиторию I - 2 раза в день в течение 10 дней.

Перед применением надрезают ячейковую упаковку.

А. И. Парфенов
Доктор медицинских наук, профессор

В кишечнике человека находится свыше 500 различных видов микробов, общее количество которых достигает 1014, что на порядок выше общей численности клеточного состава человеческого организма. Количество микроорганизмов увеличивается в дистальном направлении, и в толстой кишке в 1 г кала содержится 1011 бактерий, что составляет 30% сухого остатка кишечного содержимого.

В тощей кишке здоровых людей находится до 105 бактерий в 1 мл кишечного содержимого. Основную массу этих бактерий составляют стрептококки, стафилококки, молочнокислые палочки, другие грамположительные аэробные бактерии и грибы. В дистальном отделе подвздошной кишки количество микробов увеличивается до 107–108 , в первую очередь за счет энтерококков, кишечной палочки, бактероидов и анаэробных бактерий. Недавно нами было установлено, что концентрация пристеночной микрофлоры тощей кишки на 6 порядков выше, чем в ее полости, и составляет 1011 кл/мл. Около 50% биомассы пристеночной микрофлоры составляют актиномицеты, примерно 25% — аэробные кокки (стафилококки, стрептококки, энтерококки и коринеформные бактерии), от 20 до 30% приходится на бифидобактерии и лактобациллы.

Количество анаэробов (пептострептококки, бактероиды, клостридии, пропионобактерии) составляет около 10% в тонкой и до 20% в толстой кишке. На долю энтеробактерий приходится 1% от суммарной микрофлоры слизистой оболочки.

До 90-95% микробов в толстой кишке составляют анаэробы (бифидобактерии и бактероиды), и только 5-10% всех бактерий приходится на строгую аэробную и факультативную флору (молочнокислые и кишечные палочки, энтерококки, стафилококки, грибы, протей).

Кишечные палочки, энтерококки, бифидобактерии и ацидофильные палочки обладают выраженными антагонистическими свойствами. В условиях нормально функционирующего кишечника они способны подавлять рост несвойственных нормальной микрофлоре микроорганизмов.

Площадь внутренней поверхности кишечника составляет около 200 м2. Она надежно защищена от проникновения пищевых антигенов, микробов и вирусов. Важную роль в организации этой защиты играет иммунная система организма. Около 85% лимфатической ткани человека сосредоточено в стенке кишечника, где продуцируется секреторный IgA. Кишечная микрофлора стимулирует иммунную защиту. Кишечные антигены и токсины кишечных микробов значительно увеличивают секрецию IgA в просвет кишки.

Расщепление непереваренных пищевых веществ в толстой кишке осуществляется ферментами бактерий, при этом образуются разнообразные амины, фенолы, органические кислоты и другие соединения. Токсические продукты микробного метаболизма (кадаверин, гистамин и другие амины) выводятся с мочой и в норме не оказывают влияния на организм. При утилизации микробами неперевариваемых углеводов (клетчатки) образуются короткоцепочечные жирные кислоты. Они обеспечивают клетки кишки энергоносителями и, следовательно, улучшают трофику слизистой оболочки. При дефиците клетчатки может нарушаться проницаемость кишечного барьера вследствие дефицита короткоцепочечных жирных кислот. В результате кишечные микробы могут проникать в кровь.

Под влиянием микробных ферментов в дистальных отделах подвздошной кишки происходит деконъюгация желчных кислот и преобразование первичных желчных кислот во вторичные. В физиологических условиях от 80 до 95% желчных кислот реабсорбируется, остальные выделяются с фекалиями в виде бактериальных метаболитов. Последние способствуют нормальному формированию каловых масс: тормозят всасывание воды и тем самым препятствуют излишней дегидратации кала.

В понятие дисбактериоза кишечника входит избыточное микробное обсеменение тонкой кишки и изменение микробного состава толстой кишки. Нарушение микробиоценоза происходит в той или иной степени у большинства больных с патологией кишечника и других органов пищеварения. Следовательно, дисбактериоз является бактериологическим понятием. Он может рассматриваться как одно из проявлений или осложнение заболевания, но не самостоятельная нозологическая форма.

Крайней степенью дисбактериоза кишечника является появление бактерий желудочно-кишечного тракта в крови (бактериемия) или даже развитие сепсиса.

Состав микрофлоры кишечника нарушается при болезнях кишечника и других органов пищеварения, лечении антибиотиками и иммунодепрессантами, воздействиях вредных факторов внешней среды.

Клинические проявления дисбактериоза зависят от локализации дисбиотических изменений.

При дисбактериозе тонкой кишки численность одних микробов в слизистой оболочке тонкой кишки увеличена, а других уменьшена. Отмечается увеличение Eubacterium (в 30 раз), α-стрептококков (в 25 раз), энтерококков (в 10 раз), кандид (в 15 раз), появление бактерий рода Acinetobacter и вирусов герпеса. Уменьшается от 2 до 30 раз количество большинства анаэробов, актиномицетов, клебсиелл и других микроорганизмов, являющихся естественными обитателями кишечника.

Причиной дисбактериоза могут быть: а) избыточное поступление микроорганизмов в тонкую кишку при ахилии и нарушении функции илеоцекального клапана; б) благоприятные условия для развития патологических микроорганизмов в случаях нарушения кишечного пищеварения и всасывания, развития иммунодефицита и нарушений проходимости кишечника.

Повышенная пролиферация микробов в тонкой кишке приводит к преждевременной деконъюгации желчных кислот и потере их с калом. Избыток желчных кислот усиливает моторику толстой кишки и вызывает диарею и стеаторею, а дефицит желчных кислот приводит к нарушению всасывания жирорастворимых витаминов и развитию желчнокаменной болезни.

Бактериальные токсины и метаболиты, например фенолы и биогенные амины, могут связывать витамин В12.

Некоторые микроорганизмы обладают цитотоксическим действием и повреждают эпителий тонкой кишки. Это ведет к уменьшению высоты ворсинок и углублению крипт. При электронной микроскопии выявляется дегенерация микроворсинок, митохондрий и эндоплазматической сети.

Состав микрофлоры толстой кишки может меняться под влиянием различных факторов и неблагоприятных воздействий, ослабляющих защитные механизмы организма (экстремальные климатогеографические условия, загрязнение биосферы промышленными отходами и различными химическими веществами, инфекционные заболевания, болезни органов пищеварения, неполноценное питание, ионизирующая радиация).

В развитии дисбактериоза толстой кишки большую роль играют ятрогенные факторы: применение антибиотиков и сульфаниламидов, иммунодепрессантов, стероидных гормонов, рентгенотерапия, хирургические вмешательства. Антибактериальные препараты значительно подавляют не только патогенную микробную флору, но и рост нормальной микрофлоры в толстой кишке. В результате размножаются микробы, попавшие извне, или эндогенные виды, устойчивые к лекарственным препаратам (стафилококки, протей, дрожжевые грибы, энтерококки, синегнойная палочка).

Клинические проявления чрезмерного роста микроорганизмов в тонкой кишке могут полностью отсутствовать, выступать в качестве одного из патогенетических факторов хронической рецидивирующей диареи, а при некоторых болезнях, например, дивертикулезе тонкой кишки, частичной кишечной непроходимости или после хирургических операций на желудке и кишечнике, приводить к тяжелой диарее, стеаторее и В12-дефицитной анемии.

Особенностей клинического течения заболевания у больных с различными вариантами дисбактериоза толстой кишки, по данным бактериологических анализов кала, в большинстве случаев установить не удается. Можно отметить, что больные хроническими заболеваниями кишечника чаще инфицируются острыми кишечными инфекциями по сравнению со здоровыми. Вероятно, это связано со снижением у них антагонистических свойств нормальной микрофлоры кишечника и, прежде всего, частым отсутствием бифидобактерий.

Особенно большую опасность представляет псевдомембранозный колит, развивающийся у некоторых больных, длительно лечившихся антибиотиками широкого спектра действия. Этот тяжелый вариант дисбактериоза вызывается токсинами, выделяемыми синегнойной палочкой Clostridium difficile, которая размножается в кишечнике при угнетении нормальной микробной флоры.

Очень редко наблюдается молниеносное течение псевдомембранозного колита, напоминающее холеру. Обезвоживание развивается в течение нескольких часов и заканчивается летальным исходом.

Таким образом, оценка клинической значимости дисбиотических изменений должна основываться прежде всего на клинических проявлениях, а не только на результатах исследования микрофлоры кала.

Диагностика дисбактериоза представляет собой сложную и трудоемкую задачу. Для диагностики дисбактериоза тонкой кишки применяют посев сока тонкой кишки, полученного с помощью стерильного зонда. Дисбактериоз толстой кишки выявляют с помощью бактериологических исследований кала.

Микробная флора образует большое количество газов, в том числе водорода. Это явление используют для диагностики дисбактериоза. Концентрация водорода в выдыхаемом воздухе натощак находится в прямой зависимости от выраженности бактериального обсеменения тонкой кишки. У больных с заболеваниями кишечника, протекающими с хронической рецидивирующей диареей и бактериальным обсеменением тонкой кишки, концентрация водорода в выдыхаемом воздухе значительно превышает 15 ppm.

Для диагностики дисбактериоза применяют также нагрузку лактулозой. В норме лактулоза не расщепляется в тонкой кишке и метаболизируется микробной флорой толстой кишки. В результате количество водорода в выдыхаемом воздухе повышается (рис. 1).

Рисунок 1. Концентрация водорода в выдыхаемом воздухе

Наиболее частыми бактериологическими признаками дисбактериоза толстой кишки являются отсутствие основных бактериальных симбионтов — бифидобактерий и уменьшение количества молочнокислых палочек. Увеличивается количество кишечных палочек, энтерококков, клостридий, стафилококков, дрожжеподобных грибов и протея. У отдельных бактериальных симбионтов появляются патологические формы. К ним относятся гемолизирующая флора, кишечные палочки со слабо выраженными ферментативными свойствами, энтеропатогенные кишечные палочки и т. д.

Углубленное изучение микробиоценоза показало, что традиционные методы не позволяют получить истинную информацию о состоянии микрофлоры кишечника. Из 500 известных видов микробов в целях диагностики обычно изучаются лишь 10-20 микроорганизмов. Важно, в каком отделе — в тощей, подвздошной или толстой кишках — исследуется микробный состав. Поэтому перспективы разработки клинических проблем дисбактериоза в настоящее время связывают с применением химических методов дифференциации микроорганизмов, позволяющих получить универсальную информацию о состоянии микробиоценоза. Наиболее широко для этих целей используются газовая хроматография (ГХ) и газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией (ГХ-МС). Этот метод позволяет получить уникальную информацию о составе мономерных химических компонентов микробной клетки и метаболитов. Маркеры такого рода могут быть определены и использованы для детектирования микроорганизмов. Главным преимуществом и принципиальным отличием этого метода от бактериологических является возможность количественного определения более 170 таксонов клинически значимых микроорганизмов в различных средах организма. При этом результаты исследования могут быть получены в течение нескольких часов.

Проведенные нами исследования микробиоценоза в крови и биоптатов слизистой оболочки тонкой и толстой кишок у больных с синдромом раздраженного кишечника позволили обнаружить отклонения от нормы до 30-кратного увеличения или уменьшения многих компонентов. Существует возможность оценки изменений микрофлоры кишечника на основании данных анализа крови методом ГХ-МС-микробных маркеров.

Лечение дисбактериоза должно быть комплексным (схема) и включать в себя следующие мероприятия:

устранение избыточного бактериального обсеменения тонкой кишки;
восстановление нормальной микробной флоры толстой кишки;
улучшение кишечного пищеварения и всасывания;
восстановление нарушенной моторики кишечника;
стимулирование реактивности организма.

Антибактериальные препараты необходимы в первую очередь для подавления избыточного роста микробной флоры в тонкой кишке. Наиболее широко применяются антибиотики из группы тетрациклинов, пенициллинов, цефалоспорины, хинолоны (таривид, нитроксолин) и метронидазол.

Однако антибиотики широкого спектра действия в значительной степени нарушают эубиоз в толстой кишке. Поэтому они должны применяться только при заболеваниях, сопровождающихся нарушениями всасывания и моторики кишечника, при которых, как правило, отмечается выраженный рост микробной флоры в просвете тонкой кишки.

Антибиотики назначают внутрь в обычных дозах в течение 7–10 дней.

При заболеваниях, сопровождающихся дисбактериозом толстой кишки, лечение лучше проводить препаратами, которые оказывают минимальное влияние на симбионтную микробную флору и подавляют рост протея, стафилококков, дрожжевых грибов и других агрессивных штаммов микробов. К ним относятся антисептики: интетрикс, эрсефурил, нитроксолин, фуразолидон и др.

При тяжелых формах стафилококкового дисбактериоза применяют антибиотики: таривид, палин, метронидазол (трихопол), а также бисептол-480, невиграмон.

Антибактериальные препараты назначают в течение 10–14 дней. В случае появления в кале или кишечном соке грибов показано применение нистатина или леворина.

У всех больных с диареей, ассоциированной с антибиотиками, протекающей с интоксикацией и лейкоцитозом, возникновение острой диареи следует связывать с Cl. difficile.

В этом случае срочно делают посев кала на Cl. difficile и назначают ванкомицин по 125 мг внутрь 4 раза в сутки; при необходимости доза может быть увеличена до 500 мг 4 раза в день. Лечение продолжают в течение 7-10 суток. Эффективен также метронидазол в дозе 500 мг внутрь 2 раза в сутки, бацитрацин по 25 000 МЕ внутрь 4 раза в сутки. Бацитрацин почти не всасывается, в связи с чем в толстой кишке можно создать более высокую концентрацию препарата. При обезвоживании применяют адекватную инфузионную терапию для коррекции водно-электролитного баланса. Для связывания токсина Cl. difficile используют холестирамин (квестран).

Живые культуры нормальной микробной флоры выживают в кишечнике человека от 1 до 10% от общей дозы и способны в какой-то мере выполнять физиологическую функцию нормальной микробной флоры. Бактериальные препараты можно назначать без предварительной антибактериальной терапии или после нее. Применяют бифидумбактерин, бификол, лактобактерин, бактисубтил, линекс, энтерол и др. Курс лечения длится 1-2 месяца.

Возможен еще один способ устранения дисбактериоза — воздействие на патогенную микробную флору продуктами метаболизма нормальных микроорганизмов. К таким препаратам относится хилак форте. Он создан 50 лет назад и до настоящего времени применяется для лечения больных с патологией кишечника. Хилак форте представляет собой стерильный концентрат продуктов обмена веществ нормальной микрофлоры кишечника: молочной кислоты, лактозы, аминокислот и жирных кислот. Эти вещества способствуют восстановлению в кишечнике биологической среды, необходимой для существования нормальной микрофлоры, и подавляют рост патогенных бактерий. Возможно, продукты метаболизма улучшают трофику и функцию эпителиоцитов и колоноцитов. 1 мл препарата соответствует биосинтетическим активным веществам 100 млрд. нормальных микроорганизмов. Хилак форте назначают по 40–60 капель 3 раза в день на срок до 4 недель в сочетании с препаратами антибактериального действия или после их применения.

Совсем недавно появились сообщения о возможности лечения острой диареи, ассоциированной с антибактериальной терапией и Cl. difficile, большими дозами пре- и пробиотиков.

У больных с нарушением полостного пищеварения применяют креон, панцитрат и другие панкреатические ферменты. С целью улучшения функции всасывания назначают эссенциале, легалон или карсил, т. к. они стабилизируют мембраны кишечного эпителия. Пропульсивную функцию кишечника улучшают имодиум (лоперамид) и тримебутин (дебридат).

Стимуляторы реактивности организма

Для повышения реактивности организма ослабленным больным целесообразно применять тактивин, тималин, тимоген, иммунал, иммунофан и другие иммуностимулирующие средства. Курс лечения должен составлять в среднем 4 недели. Одновременно назначаются витамины.

Первичная профилактика дисбактериоза представляет очень сложную задачу. Ее решение связано с общими профилактическими проблемами: улучшением экологии, рациональным питанием, улучшением благосостояния и прочими многочисленными факторами внешней и внутренней среды.

Вторичная профилактика предполагает рациональное применение антибиотиков и других медикаментов, нарушающих эубиоз, своевременное и оптимальное лечение болезней органов пищеварения, сопровождающихся нарушением микробиоценоза.

Препараты Бифидум Баг, Трилакт, Экофлор - помогут Вам справиться с дисбактериозом.

Аннотация научной статьи по промышленным биотехнологиям, автор научной работы — Ладыгина А. В.

На модели биосовместимости выявлен сложный механизм взаимодействия культур B. bifidum 1 и E. coli М-17 в смешанной популяции при совместном их культивировании: бифидобактерии и продукты их метаболизма ингибируют рост кишечной палочки, а кишечная палочка и продукты ее метаболизма стимулируют рост бифидобактерий.

Investigation of the interaction of Bifidobacterium bifidum 1 and Escherichia coli M-17 in the bificol praparation during their simultaneous cultivation

Using the model of biocompatibility the complicated mechanism of interaction between the B. bifidum 1 and E. coli М-17 was revealed during the simultaneous cultivation of these strains. Bifidobacteria and the products of their metabolism were shown to inhibit the growth of E. coli, at the same time the products of metabolism of E. coli stimulate the growth of Bifidobacteria.

ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM 1, ESCHERICHIA COLI М-17 В БИФИКОЛЕ ПРИ СОВМЕСТНОМ ИХ ВЫРАЩИВАНИИ

Лаборатория бактерийных вакцин и препаратов из нормофлоры Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л.А. Тарасевича Пер. Сивцев Вражек, 41, Москва, Россия, 119002 8(903)2448567

Ключевые слова: бификол, взаимодействие культур B. bifidum 1 и E. coli М-17, метаболиты, ингибирующее и стимулирующее влияние.

Лечебное действие монопрепарата ограничено индивидуальным спектром биологической активности штамма, на основе которого изготовлен пробиотик. Для повышения и расширения лечебного действия пробиотиков в практику здравоохранения внедрены комплексные препараты, изготовленные на основе двух и более штаммов одного вида или разных видов представителей нормофлоры: бификол, ацилакт, аципол, флорин форте.

Отечественный комплексный препарат бификол разработан на основе двух видов микроорганизмов: Bifidobacterium bifidum 1 и Escherichia coli М-17 [1]. Несмотря на длительный срок производства препарата, серии бификола отличаются друг от друга по показателям количественного содержания живых бифидобакте-рий и кишечной палочки в дозе. Это может быть обусловлено несовершенством технологии изготовления бификола, использованием различных по составу питательных сред, изменением свойств микроорганизмов при совместном их культивировании, несовместимостью используемых штаммов и другими факторами. Механизм взаимодействия культур в смешанной популяции бификола недостаточно изучен. В этой связи, целью настоящего исследования явилось изучение взаимовлияния культур B. bifidum 1 и Е. coli М-17 и продуктов их жизнедеятельности друг на друга при совместном их культивировании.

Ладыгина А.В. Особенности взаимодействия Bifidobacterium bifidum 1, Escherichia coli М-17.

Материалы и методы исследования. Для исследования использовали коммерческие серии бифидумбактерина и колибактерина.

Питательные среды: Блаурокка, Блаурокка с натрия азидом, казеиново-дрож-жевую — КД-5а, МПБ, приготовленные в соответствии с утвержденными нормативными документами.

Взаимодействие бифидобактерий и кишечной палочки в бификоле изучали в смоделированных опытах: 1) при одномоментном посеве в среды Блаурокка или КД-5а по 1 дозе бифидумбактерина и колибактерина (смоделированный бификол (СБ) — первый вариант (1В)) или культуры 1-го пассажа бифидобактерий и кишечной палочки засевали одновременно по 1 мл в пробирки с 18 мл среды Блаурокка и КД-5а — (СБ-2В); 2) при посеве 1 дозы колибактерина в центрифугат и фильтрат культуральной жидкости, полученной от суточной, двух- и трехсуточной культуры В. bifidum 1; 3) при посеве 1 дозы бифидумбактерина в центрифугат и фильтрат культуральной жидкости суточной культуры E. coli M-17. Количество выросших колоний в каждом опыте подтверждали путем высева десятикратных разведений выросшей культуры на питательные среды Блаурокка, Блаурокка с азидом натрия, МПБ. Центрифугаты и фильтраты культуральной жидкости (КЖ) би-фидобактерий и кишечной палочки получали путем центрифугирования бактериальной взвеси при 3500 об/мин. в течение 10 мин. с последующей фильтрацией через фильтр миллипор (размер пор 0,2 мкм). В исследованиях использовали цент-рифугаты и фильтраты суточной, двух- и трехсуточной культуральной жидкости бифидобактерий (ЦБ1, ЦБ2, ЦБ3) и суточной культуральной жидкости кишечной палочки (ЦК).

Результаты исследования и их обсуждение. Технология изготовления би-фикола предусматривает совместное культивирование B. bifidum 1 и E. coli М-17 на последнем этапе получения производственной биомассы. В специальных опытах по изучению биосовместимости штаммов использованы два варианта смоделированного бификола (СБ-1В и СБ-2В). Установлено, что при совместном культивировании обе культуры в смешанной популяции вели себя по-разному. Так, культура 1-го пассажа бифидобактерий в смоделированном бификоле 2В ингиби-ровала рост кишечной палочки: через 24 ч совместного культивирования содержание коликомпонента в бификоле 2В было на два порядка меньше по сравнению с суточной культурой (СК) (рис. 1-2В). В то же время кишечная палочка стимулировала рост бифидобактерий: через 24 ч (вместо 48—72 ч) содержание бифидобактерий достигало 108 живых микробных клеток в 1 мл (микр. кл/мл) (рис. 1-1В, 2В). Особенно четко эта закономерность наблюдалась при оценке взаимовлияния их продуктов метаболизма на рост при использовании центрифу-гатов и фильтратов культуральных жидкостей.

При посеве в центрифугаты ЦБ1, ЦБ2, ЦБ3 по 1 мл колибактерина с содержанием 109 микр. кл/мл обнаружен рост кишечной палочки в количестве 104— 103 микр. кл/мл. На фоне слабого роста кишечной палочки содержание бифидо-бактерий существенно увеличилось (до 107, 105, 103 микр. кл/мл соответственно вместо исходного — 101 микр. кл/мл в ЦБ). Посев в МПБ колибактерина подтвердил содержание живых бактерий кишечной палочки в количестве 109 микр. кл/мл (контроль) (рис. 2).

Количество жизнеспособных бактерий, logmKOE/доза

1 2 1 2 П П СК СК ОСО

Н Коликомпонент смоделированного бификола Н Бифидумбактерин

И Колибактерин □ ОСО бифидумбактерина

Щ Бифидокомпонент смоделированного бификола

Рис. 1. Содержание живых бифидобактерий и кишечной палочки через 24 ч при совместном культивировании двух штаммов:

1 — КД-5; 2 — Блаурокка; 1В — одномоментный посев по 1 дозе коли- и бифидумбактерина; 2В — одномоментный посев 24-часовых культур коли- и бифидобактерий; П — монопрепарат, СК — 24-часовая культура

Рис. 2. Содержание выросших бактерий E. coli М-17 и В. bifidum 1 в мл при посеве в центрифугаты культуральной среды бифидобактерий через 24 ч культивирования

Ладыгина А.В. Особенности взаимодействия Bifidobacterium bifidum 1, Escherichia coli М-17.

При коррекции рН с 4,5 до 7,0 содержание кишечной палочки возрастало в ЦБ2 до 106 микр. кл/мл (на два порядка выше) по сравнению с ее содержанием при росте в ЦБ2 с кислой реакцией, но было на три порядка ниже, чем в контроле (109 микр. кл/мл).

Аналогичные результаты были получены при использовании фильтратов культуральной жидкости бифидобактерий. При отсутствии в фильтратах бифидо-бактерий содержание кишечной палочки увеличилось на два порядка (до 106 микр. кл/мл), однако было значительно ниже их содержания в контроле (1010 микр. кл/мл).

Противоположные результаты были получены при изучении влияния метаболитов кишечной палочки на рост бифидобактерий. В центрифугат и фильтрат суточной культуральной жидкости кишечной палочки засевали по 1 мл бифидум-бактерина (рис. 3-а, 1) или суточной культуры бифидобактерий 1-го пассажа (рис. 3-а, 2) и выращивали в течение 24 ч.

Рис. 3. Содержание живых бифидобактерий и кишечной палочки в 1 мл при посеве в центрифугаты и фильтраты суточной культуральной жидкости кишечной палочки: а) центрифугат кишечной палочки; б) фильтрат кишечной палочки; 1 — посев 1 мл препарата бифидумбактерина; 2 — посев 1 мл суточной культуры бифидобактерий

Культура в центрифугатах и продукты метаболизма кишечной палочки оказывали стимулирующее действие на рост бифидобактерий: через 24 ч количество их достигало 109 микр. кл/мл вместо 108 микр. кл/мл; в контроле рост бифидобактерий учитывали через 72 ч (рис. 3-а). Эта же закономерность отмечена при использовании фильтрата КЖ кишечной палочки (рис. 3-б).

Из данных литературы известно, что метаболиты E. coli M17 могут стимулировать рост различных штаммов эшерихий, бифидобактерий и лактобацилл [2]. Наибольший эффект они оказывали на штамм продуцент. Аномально высокие ин-

Проведенные нами исследования выявили сложный механизм взаимодействия бифидобактерий и кишечной палочки при их совместном выращивании. Накопление биомассы E. ^li M17 и B. bifidum 1 при совместном культивировании зависит от посевной дозы, физиологического состояния культур в посевном материале и образования различного типа метаболитов, что может отразиться на соотношении живых бактерий E. coli M17 и B. bifidum 1 и создавать условия получения нестандартного препарата. Стимуляция роста бифидобактерий метаболитами E. coli M17 в данном случае связана, по-видимому, с автостимуляторами роста: сукцинатом, глутаматом, ацетатом, метионином и лизином.

[1] Бондаренко В.М., Чупринина Р.П., Аладышева Ж.И. и др. Пробиотики и механизмы их лечебного действия // Эксперим. и клин. гастроэнтерол. — 2004. — 3. — С. 83—87.

[2] Вахитов Т.Я., Петров Л.Н., Бондаренко В.М. Концепция пробиотического препарата, содержащего оригинальные микробные метаболиты // Журн. микробиол. — 2005. — 5. — С. 108—114.

INVESTIGATION OF THE INTERACTION

OF BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM 1 AND ESCHERICHIA COLI M-17 IN THE BIFICOL PRAPARATION DURING THEIR SIMULTANEOUS CULTIVATION

L.A. Tarassevich Institute Sivtsev Vraghek, 41, Moscow, Russia, 119002

Using the model of biocompatibility the complicated mechanism of interaction between the B. bi-fidum 1 and E. coli M-17 was revealed during the simultaneous cultivation of these strains. Bifidobacteria and the products of their metabolism were shown to inhibit the growth of E. coli, at the same time the products of metabolism of E. coli stimulate the growth of Bifidobacteria.

Key words: Bificol, cooperation B. bifidum and E. coli M-17 cultures, metabolites, inhibiting and stimulating effects.

Читайте также: