Методика исследования на трихинеллез утвержденная департаментом ветеринарии

1.1. Трихинеллез - опасный антропозоогельминтоз, вызываемый трихинеллами двух видов: Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis, протекает остро и хронически. Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина - половозрелая стадия локализуется в кишечнике, личиночная - в мышечной ткани.

1.2. Трихинеллезом болеют свиньи, кабаны, медведи, другие всеядные и плотоядные (собаки, волки, лисы), морские млекопитающие (киты, тюлени, моржи), насекомоядные, грызуны и другие животные.

1.3. Обязательному исследованию на трихинеллез подлежат: туши, полутуши, четвертины свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), кабанов, барсуков, медведей, всеядных и плотоядных животных, а также нутрий.

1.4. При послеубойной диагностике трихинеллеза используют два метода исследования: микроскопический (компрессорный) и биохимический (метод переваривания), прижизненную диагностику осуществляют методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Мясо и субпродукты животных (имеющие мышечную ткань) исследуют микроскопическим или биохимическим методами.

Шпиг (с наличием мышечных прослоек) исследуют только микроскопическим методом.

Исследование копченостей, импортной свинины в блоках (при выборочном контроле) и других видов продукции проводят только биохимическим методом.

Диагноз на трихинеллез ставят на основании результатов лабораторных исследований.

2.1. Для исследования отбираются пробы из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие), при их отсутствии - части межреберных, шейных, жевательных, поясничных, икроножных мышц, сгибателей и разгибателей пясти, а также мышцы языка, пищевода и гортани; от туш морских млекопитающих - мышцы кончика языка и глаза.

Масса пробы от каждой группы мышц должна быть не менее 5 г, а общая масса пробы от одного животного должна составлять не менее 25 г.

2.2. Пробы шпига соленого, копченого (при наличии прирези или прослоек мышечной ткани) отбирают от каждого куска, масса пробы должна быть не менее 25 г.

2.3. Пробы копченостей отбирают от 3 % упаковочных единиц, делая по 10 - 15 выемок из каждой упаковочной единицы, из которых составляют объединенную пробу.

2.4. Субпродукты свиные (языки, головы, ножки, хвосты) при отсутствии ветеринарного подтверждения об их происхождении от туш, подвергнутых трихинеллоскопии, исследуют следующим образом: от 3 % упаковочных единиц берут по 10 - 15 выемок из каждой и делают объединенную пробу массой не менее 25 г.

2.5. Импортную свинину (в тушах, полутушах) исследуют не менее 10 % от партии мяса, пробы берут из остатков ножек диафрагмы или межреберных мышц. Масса пробы мышц от туши, полутуши должна составлять не менее 1 г, общая масса пробы для исследования - не менее 25 г.

2.6. Импортную свинину в блоках исследуют не менее 1 % от партии мясных блоков, пробы отбирают по 25 выемок (1 г каждая) от блока общей массой не менее 25 г.

2.7. Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора.

3.2. Из кусочков мышц изогнутыми ножницами по ходу мышечных волокон делают 24 среза величиной с овсяное зерно, которые помещают в середину клеточки компрессориума, накрывают вторым стеклом и завинчивают винты, раздавливая срезы так, чтобы они стали прозрачными и удобными для их качественного просмотра.

3.3. Срезы исследуют под малым увеличением (8×10) с помощью соответствующих приборов для трихинеллоскопии (Приложение 1).

3.4. При исследовании шпига из прослоек мышечной ткани (каждого куска) делают 24 среза, помещают в чашку Петри с 0,5 см 3 раствора (1 %-ный раствор фуксина в 5 %-ном растворе едкого натра) на 5 - 8 мин. Затем срезы размещают в компрессориум и просматривают согласно пп. 3.3.

3.5. При просмотре срезов обнаруживают капсулы с личинками трихинелл, которые могут иметь лимоновидную или округлую формы, внутри капсул расположены одна или несколько спирально свернутых личинок.

Личинки бескапсульных трихинелл имеют специфическую конфигурацию расположения в мышечных волокнах, и их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей среды.

Могут встречаться обызвествленные капсулы. Для их просветления срезы мышц помещают в чашку Петри с 5 - 10 %-ным раствором соляной кислоты. Чашку ставят в термостат при температуре 37 ± 1 °С на 20 - 30 мин. Затем срезы переносят на компрессориум и просматривают согласно пп. 3.3.

4.1. При проведении исследования используют искусственный желудочный сок (ИЖС), который готовят по следующей прописи: вода водопроводная температуры 41 - 42 °С - 1000 см 3 ; кислота соляная концентрированная (уд. масса 1,2) - 10 см 3 ; пепсин пищевой свиной (ТУ 10.02.01.111-89) при исследовании свежего мяса и мясопродуктов - 2,0 г, при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов, шпига - 10,0 г.

При использовании пепсина медицинского (Временная фармакопейная статья 42-1000-80) дозу увеличивают до 20,0 г.

Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 ч с момента приготовления.

4.2. При исследовании мяса в тушах, полутушах, четвертинах, блоках, а также копченостей (при выборочном контроле) и других видов продукции количество срезов (массу навески) определяют согласно пп. 3.1.

4.3. Навеску измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3 - 4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают ИЖС в соотношении 1:15. Колбу помещают в термостат при температуре 41 - 42 °С и выдерживают 5 - 7 ч, периодически перемешивая. За 10 мин. до окончания переваривания перемешивание прекращают. После окончания переваривания в осадке остаются хлопья коричневого или темно-коричневого цвета.

4.4. Из колбы сливают (осторожно) 2/3 надосадочной жидкости, осадок выливают на капроновое сито (полусферической формы с диаметром ячеек 400 мкм), установленное в стеклянной воронке диаметром 90 - 120 мм, соединенной резиновой трубкой с пробиркой вместимостью 5 см 3 .

Залитый осадок отстаивают 15 - 20 мин., затем резиновую трубку перекрывают зажимом и пробирку отсоединяют. Содержимое пробирки (осадок) переносят по частям на часовое стекло и исследуют под малым (8×10) увеличением микроскопа или трихинеллоскопа на наличие личинок трихинелл.

4.5. Для выделения личинок трихинелл может быть использован метод группового переваривания в аппаратах типа АВТ (Приложение 1) согласно действующей инструкции.

5.1. Результаты считают положительными, если в образцах исследованной продукции обнаружена хотя бы одна личинка капсульных или бескапсульных трихинелл.

6.1. Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровы мешочки) и микрофинн (приложение 2 - не приводится). Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы:

6.1.1. Трихинеллы имеют капсулу лимоновидной, округлой формы, внутри спирально свернутая личинка (или несколько личинок).

6.1.2. Саркоцисты имеют собственную оболочку цилиндрической или неправильной формы; циста заключена в собственную тонкую оболочку и состоит из камер, внутри которых находятся мерозоиты.

6.1.3. Микрофинны располагаются в отличие от трихинелл между мышечными волокнами, имеют овальную форму и окружены слоистой соединительнотканной оболочкой.

С утверждением настоящих Методических указаний на территории Российской Федерации утрачивают силу "Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных", одобренные Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 29.12.85, и "Методика лабораторной диагностики трихинеллеза", утвержденная Главветупром Госагропрома СССР 16.10.86.

Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных разработаны Всероссийским НИИ гельминтологии имени К.И. Скрябина (А.С. Бессонов, А.В. Успенский, Н.В. Шеховцов), Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (В.А. Седов, В.Д. Певнева), Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станцией (А.Я. Сапунов, О.А. Митникова), Кубанским агроуниверситетом (Б.Л. Гаркави), Управлением ветеринарии г. Краснодара (А.А. Иващенко).

1. Компрессорная трихинеллоскопия

- стационарные и лабораторные проекционные устройства типа ТМП, "Стейк", микроскопы, бинокулярные лупы, устройства для полевой трихинеллоскопии и соответствующее импортное оборудование, прошедшее испытания во Всероссийском НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина;

2. Метод переваривания мышечной ткани

2.1. Автоматизированная диагностика

- аппараты для выделения личинок трихинелл методом переваривания мышечной ткани в искусственном желудочном соке АВТ-Л2, АВТ-Л3 и др.

4 Введение ТРИХИНЕЛЛЕЗ опасный остро или хронически протекающий антропозоогельминтоз ярко выраженного аллергического характера, вызываемый личинками и половозрелыми нематодами двух видов Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis, паразитирующими в кишечнике (имаго) или в поперечнополосатой мышечной ткани (личинки). Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина. Инвазионные личинки внедряются в слизистую оболочку кишечника и через шесть восемь дней после заражения начинают рождать личинки. Последние проникают в лимфу, венозную кровь, в сердце и, затем с артериальной кровью разносятся по всему организму. Оседают только в поперечнополосатой мышечной ткани. Там растут, через три недели после заражения становятся инвазионными, инкапсулируются и сохраняются лет. Половозрелые нематоды паразитируют в кишечнике животных до шести недель, а в кишечнике человека до 80 дней. У животных и человека возможны реинвазии. В России трихинеллѐз свиней более часто регистрируется в Краснодарском крае, Северной Осетии, Рязанской и Брянской областях. Трихинеллѐз собак, кошек, крыс и диких животных (включая морских) распространѐн на всех материках кроме Антарктиды. 4

7 Инкапсулированная личинка трихинеллы спирально изогнута, а форма капсулы похожа на лимон или веретеновидная, но в мышцах диких животных - круглая. Погибшие личинки имеют различную степень обызвествления. Для их просветления срезы мышц обрабатывают 5-10%-ным раствором соляной кислоты в термостате при температуре 37 С минут. Затем срезы переносят в компрессориум и просматривают. Проекционный трихинеллоскоп позволяет видеть на экране одновременно весь срез. Осмотр срезов с использованием трихинеллоскопа проводится в затемненной комнате. Вначале проверяется равномерность освещения экрана. Проекционная трихинеллоскопия в основном применяется для исследования неконсервированного мяса без предварительной специальной обработки мышечных срезов Трихинеллоскопия мышечных срезов с обработкой Обработка мышечных срезов необходима для размягчения мышечных волокон консервированного мяса (мороженного, соленого, вяленого, копченого). Для обработки используют 50% р-р глицерина, 5% р-р молочной кислоты или 0,5% р-р соляной кислоты. Продолжительность обработки срезов - одна минута. Для этого на мышечные срезы, предварительно разложенные на нижнем стекле компрессориума, наносят по 2-3 капли любого из выше названных растворов и выдерживают одну минуту, затем накрывают верхним стеклом и после раздавливания исследуют в обычном порядке. Для дифференциальной диагностики срезы окрашивают 3% р-ром метиленовой сини, приготовленном на уксусной кислоте. ТЕХНИКА ОКРАСКИ: 1.Подготовленные мышечные срезы препаровальной иглой перенести в фарфоровую чашку. 2.Пипеткой на срезы нанести краситель (3% р-р метиленовой сини на уксусной кислоте) на 3 минуты. 3.Срезы промыть горячей водой (t º С) до прекращения отделения красителя (пока стекаемая со срезов вода не будет бесцветной). 4.Препаровальной иглой срезы разложить на нижнем стекле компрессориума (если мясо было консервировано, то размягчить 5% раствором глицерина, 5% раствором молочной или 0,5% соляной кислот в течение 1 минуты), накрыть верхним стеклом и после раздавливания исследовать в обычном порядке. РЕЗУЛЬТАТ ОКРАСКИ: мышечная ткань розовая или серая, капсулы личинок трихинелл голубого цвета, а личинки трихинелл синего цвета. 7

8 3.3. Обработка срезов желудочным соком (по Владимировой) Определение наличия трихинелл обработкой срезов желудочным соком (искусственное переваривание мышц по Владимировой). при проведении исследования используют искусственный желудочный сок (ИЖС), который готовят по следующей прописи: - водопроводная вода (температурой С) куб. см., - кислота соляная концентрированная (уд. масса 1,2)-10 куб. см., - пепсин пищевой свиной (ТУ ) при исследовании свежего мяса и мясопродуктов - 2,0 г, при исследовании соленых, копченых мяса и мясопродуктов и шпика-10,0гр. (при использовании пепсина медицинского фармакопейного (Временная фармакопейная статья ) дозу увеличивают до 20,0 гр.). Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 часов с момента приготовления. навеску мяса измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают ИЖС в соотношении 1:15. Колбу помещают в термостат при температуре С и выдерживают 5-7 часов, периодически встряхивая. Профильтровать через мелкое сито или разлить в центрифужные пробирки и центрифугировать. Пастеровской пипеткой осадок с фильтра (или со дна, пробирок) перенести на предметное стекло. Исследовать в микроскопе или в трихинеллоскопе. РЕЗУЛЬТАТ ОКРАСКИ: Если в мясе имелись конкременты трихинеллезного происхождения, то в осадке обнаруживаются личинки, освобожденные от капсул. Если в мясе были обызвествленные саркоспоридии, то в осадке находят массу спор. 4. Метод группового исследования Этот метод основан на применении аппарата для выделения личинок трихинелл (АВТ). Он представляет собой термостатируемую камеру с 8 реакторами для переваривания мышечной ткани в специальной жидкости, в которых имеется мешалка и отстойник для сбора осадка. Групповая проба массой 100 г берется от 20 туш (по 5 г от каждой). Продолжительность переваривания 45 минут. Затем после 20 минутного отстаивания пробы исследуют в микроскопе на наличие личинок трихинелл. При выявлении в осадке хотя бы одной личинки, составляются пробы от двух-трех туш, которые снова подвергают исследованию. Туши из группы с положительными результатами при повторной трихинеллоскопии исследуют индивидуально в аппарате АВТ, выявляя таким образом инвазированную. 5.Трихинеллоскопия свиного шпика Личинки трихинелл могут локализоваться и в подкожной жировой клетчатке, поэтому сало-шпик при поступлении в лаборатории вет-сан экспертизы 8

10 8. Цистицеркозы Цистицеркоз (финноз) гельминтоз животных и человека, вызываемый личинками (цистицерками) ленточных гельминтов Cysticerkus bovis - бычий цепень (Taeniarinchus saginatus) и Cysticerkus cеllulosae свиной цепень (Taenkpolium). При цистицеркозе бовисном это прозрачные пузырьки круглой или овальной формы, серовато белого цвета, величиной от булавочной головки до горошины. Снаружи они покрыты нежной соединительнотканной капсулой через которую виден паразит. При надавливании капсула лопается и из нее выворачивается головка (сколекс), при рассмотрении под малым увеличением микроскопа на ней видны четыре сильно развитые присоски без крючьев. При цистицеркозе целлюлярном пузырьки полупрозрачные эллипсоидной или круглой формы с размером 0,5-0,8 см. Вогнутый внутрь сколекс просматривается в виде белой точки. При исследовании его под микроскопом обнаруживается ротовая щель, четыре присоски с хитиновыми крючьями расположенными в два ряда. При цистицеркозе тонкошейном (тенуикольном) пузыри крупные (размером с грецкий орех и больше) заполнены жидкостью. Сквозь оболочку виден молочно-белый сколекс. Локализуются на серозных покровах органов брюшной и грудной полостей. При цистицеркозе кроликов прозрачные пузыри размером с горошину обнаруживаются на серозных покровах брюшной и, редко, грудной полости. Имагинальные формы этих паразитов живут в кишечнике человека, являющегося распространителем инвазии выделяя с экскрементами зрелые членики нафаршированные яйцами гельминтов. Промежуточными хозяевами являются крупный рогатый скот и свиньи, а так же овцы, козы, верблюды, олени, кролики и другие животные. У крупного рогатого скота цистицерки обнаруживаются в сердечной мышце, в массетерах, мышцах языка, поясничных, локтевых, шейных и брюшных мышцах. Можно встретить в мышцах затылка, пищевода, диафрагмы и, реже, в головном мозге, легких, печени и в селезенке. У свиней чаще обнаруживаются в массетерах, анконеусах (плечелопаточный мускул), миокарде, в мышцах языка, шеи и в лопаточных. В большей степени поражается передняя часть туши. Иногда цистицерки обнаруживаются и в головном мозге. При осмотре могут встречаться дегенерирующие цистицерки с сильно разросшейся соединительнотканной капсулой, с казеозным перерождением или с обызвествлением. Нередко в мясе обнаруживают включения очень похожие на цистицерков. В таком случае необходимо исследование этих включений при микроскопии или трихинеллоскопии. Цистицерки всегда крупнее инкапсулированных личинок трихинелл и располагаются вне мышечных волокон. 10

Применяют на некоторых мясокомбинатах. Он основан на переваривании в искусственном соке образцов проб мышечной ткани, взятых из ножек диафрагмы нескольких свиных туш, и обнаружении в осадке (переваренной массе) личинок трихинелл. Исследуют пробы с помощью аппарата АВТ, представляющего термостатируемую камеру с вмонтированными в нее восемью реакторами, предназначенными для переваривания мышечной ткани.

Для исследования туш на трихинеллез отбирают пробы из ножек диафрагмы на границе перехода мышечной ткани в сухожилие. От туш животных из зон, где регистрируется трихинеллез, готовят групповую пробу общей массой до 100 г, состоящую из проб от 20 туш или более, по 5 г каждая (по 2,5 г от каждой из двух ножек диафрагмы одной туши). От свиных туш животных из зон, где трихинеллез не регистрируется в течение последних 8-10 лет, готовят групповую пробу общей массой до 100 г, состоящую из проб от 100 туш или менее, по 1 г каждая (по 0,5 г каждой из двух ножек диафрагмы одной туши). Отобранную групповую пробу измельчают на мясорубке, а фарш собирают в стакан с порядковым номером, соответствующим номеру реактора. Для получения специальной жидкости в каждый из реакторов заливают 2,5 л теплой (40-42° С) воды, вносят 6 г пищевого пепсина активностью100 000 ЕД и 30 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь перемешивают. Затем в реактор вносят измельченную групповую пробу и включают мешалку.

По окончании переваривания групповой пробы жидкость отстаивают, а осадок исследуют на наличие трихинелл под микроскопом, лупой или на микропроекторе.

При выявлении в осадке одной или более личинок трихинелл исследованную группу свиных туш переводят на запасной подвесной путь, разделяют ее на 8 групп по 12-13 туш (первоначальная групповая проба от 100 туш) или по 2-3 туши (первоначальная групповая проба от 20 туш), берут снова пробы и исследуют, как указано выше. Туши из группы, давшей положительные результаты при повторной трихинеллоскопии, исследуют индивидуально в аппарате АВТ, выявляя таким образом тушу, пораженную личинками трихинелл.

5. Оценка результатов

6. Дифференциальная диагностика

6.1. Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровы мешочки) и микрофинн (приложение 2). Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы.

6.1.1. Трихинеллы имеют капсулу лимоновидной, округлой формы, внутри спирально свернута личинка (или несколько личинок).

Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных разработаны Всероссийским НИИ гельминтологии имени К.И.Скрябина (А.С.Бессонов, А.В.Успенский, Н.В.Шеховцов), Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (В.А.Седов, В.Д.Певнева), Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станцией (А.Я.Сапунов, О.А.Митникова), Кубанским агроуниверситетом (Б.Л.Гаркави), Управлением ветеринарии г. Краснодара (А.А.Иващенко).

Санитарная оценка. Туши свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), а также кабанов, барсуков, медведей и нутрий подлежат обязательному исследованию на трихинеллез. При обнаружении в 24 срезах хотя бы одной трихинеллы (независимо от ее жизнеспособности) тушу и субпродукты, имеющие мышечную ткань, пищевод, прямую кишку, а также обезличенные мясные продукты направляют на техническую утилизацию.

Наружный жир (шпик) снимают и перетапливают. В вытопленном жире на 20 мин температуру доводят до 100° С. Внутренний жир выпускают без ограничения. Кишки, кроме прямой, после обычной обработки выпускают без ограничений. Шкуры выпускают после удаления с них мышечной ткани. Удаленная со шкур мышечная ткань подлежит утилизации.

Трихинеллез. Антропозоонозная болезнь всеядных и плотоядных животных, протекает остро или хронически с ярко выраженными аллергическими явлениями, вызывается нематодами: Trichinella spiralis (свиная трихинелла), T. nativa (выделена от хищных животных Евразии), T. nelso-ni (выделена от хищных Африки) и T. pseudospiralis (выделена от енота-полоскуна из Дагестана). T. pseudospiralis в мышцах не иноапулируется; она полностью завершает свое развитие в организме птиц (утки и др.).

Взрослые трихинеллы паразитируют в тонком отделе кишечника животных и человека, а личинки - только в поперечно-полосатых мышцах этих же организмов.

Различают две формы паразита: кишечную (половозрелую) и мышечную (личиночную). Личинки трихинелл развиваются только в поперечно-полосатых мышцах, образуя вокруг себя капсулу. В гладких мышцах и в мышце сердца личинки трихинелл не развиваются. Но они могут локализоваться в мышечных прослойках шпика и сохраняться жизнеспособными даже в том случае, если мышечные волокна подверглись атрофии.

Инкапсулированные мышечные трихинеллы - это спиралеобразно свернутые паразиты, заключенные в полости, окруженные капсулой. Формула капсулы лимонообразная, бутылкообразная, овальная или круглая (у диких животных). Полость капсулы наполнена прозрачной жидкостью, и в ней помещается, как правило, один паразит, реже два и более. Трихинеллы хорошо видны, если раздавленные мышечные срезы рассматривать при увеличении в 50-70 раз.

Наиболее часто поражаются ножки диафрагмы, затем мышцы диафрагмы, языка, жевательные, гортани, шейные, межреберные и брюшные. В одной и той же мышце наряду с сильно зараженными встречаются места, свободные от трихинелл. В большей степени бывают поражены мышечные волокна вблизи сухожилий.

Послеубойная диагностика. С целью диагностики проводят послеубойную трихинеллоскопию туш свиней и мяса используемых в пищу диких животных (дикий кабан, медведь и др.).

Исследование свинины под микроскопом. Тушки поросят-сосунов исследуют на трихинеллез с 3-недельного возвраста. Для этого берут два кусочка мышц из ножек диафрагмы общей массой до 120г. Если пробу из ножек диафрагмы взять невозможно, то берут кусочки других мышц (реберной части диафрагмы, межреберных, жевательных, шейных).

Для исследования готовят срезы, вырезая маленькими изогнутыми ножницами небольшие кусочки мышц величиной с овсяное зерно. Ножницы держат вогнутой стороной к мышце, и тогда срез остается на их выпуклой стороне, что удобно для его помещения на стекло компрессориума. Срезы берут из разных мест и раскладывают их в середине клеточек нижнего стекла компрессориума. От каждой исследуемой туши готовят не менее 24 срезов, которые раздавливают стеклами компрессориума и просматривают под трихинеллоскопом при увеличении в 50-70 раз или под микроскопом при малом увеличении.

Проекционная трихинеллоскопия.

Метод имеет ряд преимуществ перед обычным исследованием под микроскопом: на экране виден весь срез, зрение не утомляется, значительно увеличивается пропускная способность. Этот метод наиболее удобен при исследовании свежей неконсервированной свинины.

Метод группового исследования свинины на трихинеллез.

Oснован на переваривании в специальной жидкости образцов проб мышечной ткани, взятых из ножек диафрагмы нескольких свиных туш, и обнаружении в осадке (переваренной массе) личинок трихинелл. Исследуют пробы с помощью аппарата АВТ, представляющего термостатируемую камеру с вмонтированными в нее двумя реакторами, предназначенными для переваривания мышечной ткани.

Для исследования туш на трихинеллез отбирают пробы из ножек диафрагмы на границе перехода мышечной ткани в сухожилие. От туш животных из зон, где регистрируется трихинеллез, готовят групповую пробу общей массой до 100 г, состоящую из проб от 20 туш или более, по 5 г каждая (по 2,5 г от каждой из двух ножек диафрагмы одной туши). От свиных туш животных из зон, где трихинеллез не регистрируется в течение последних 8-10 лет, готовят групповую пробу общей массой до 100 г, состоящую из проб от 100 туш или менее, по 1 г каждая (по 0,5 г от каждой из двух ножек диафрагмы одной туши). Отобранную групповую пробу измельчают на мясорубке, а фарш собирают в стакан с порядковым номером, соответствующим номеру ректора. Для получения специальной жидкости в каждый из реакторов заливают2,5 л теплой (40-42 С) воды, вносят 6 г пищевого пепсина активностью 100 000 ЕД и 30 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь перемешивают. Затем в реактор вносят измельченную групповую пробу и включают мешалку.

Трихинеллоскопия консервированной (мороженой, соленой) свинины. Мороженое мясо оттаивают. Толщина срезов не должна превышать 1,5 мм. После размещения срезов на нижнем стекле компрессориума их слегка раздавливают верхним стеклом. Затем последнее снимают и на каждый срез наносят пипеткой каплю 0,5%-ного раствора соляной кислоты или раствора метиленового голубого (5 мл насыщенного спиртового раствора и 195 мл дистиллированной воды). Продолжительность обработки срезов 1 мин. После этого срезы вновь раздавливают и исследуют под микроскопом.

Обработанные соляной кислотой мышечные срезы становятся прозрачными и приобретают сероватый цвет. Капсула имеет вид серебристого ободка, а жидкость в полости трихинеллы вследствие коагуляции белка просветляется. Срезы, обработанные раствором метиленового голубого, окрашиваются в синеватый цвет, жидкость внутри полости трихинеллы - в нежно-голубой, паразит не окрашивается и становится хорошо видимым. Мышечные срезы из солонины и копченой свинины делают в 2 раза тоньше, чем при трихинеллоскопии неконсервированной свинины. Их также слегка раздавливают верхним стеклом компрессориума, после чего на каждый срез наносят каплю глицерина, разведенного пополам с водой, или 0,5%-ного раствора молочной кислоты (для просветления срезов). Время обработки и порядок исследования такие же, как и мороженой свинины.

Трихинеллоскопия свиного шпика. Трихинеллы могут локализоваться в подкожной жировой ткани, в которой макроскопически не видно мышечных прослоек. Шпик без видимых мышечных прослоек разрезают на всю толщину и срезы берут с внутренней поверхности шпика по линии его расслоения (такие линии образуются в местах атрофированных мышц). Делают не менее пяти срезов толщиной около 0,5 мм и погружают их на 5-8 мин в 1%-ный раствор фуксина на 5%-ном растворе едкого натра. Затем их извлекают из раствора, раскладывают на нижнем стекле компрессориума, закрывают верхним стеклом, притирая несколько слабее, чем срезы из мышечной ткани, и исследуют под трихинеллоскопом.

На фоне неокрашенных жировых клеток резко выделяются трихинеллы в виде светло-красных или желто-красных включений. Оболочка трихинелл бывает ясно выражена.

Для дифференциации обызвествленных трихинелл от обызвествленных саркоцит и конкрементов нетрихинеллезной природы срезы окрашивают по методу Ямщикова с дополнительной обработкой их на предметном стекле 15%-ным раствором соляной кислоты в течение 1-2 мин и промыванием водой. Срезы просматривают под малым и средним увеличением микроскопа.

Переваривание мясного фарша в исскуственном желудочном соке. Наиболее точный метод обнаружения трихинелл при дифференциальной диагностике. Для исследования пробу мышц (20-30 г) измельчают и помещают в большую коническую колбу, в которую приливают искусственный желудочный сок (200-300 мл) в соотношении с фаршем 10:1. Искусственный желудочный сок готовят добавлением к 1%-ному раствору соляной кислоты 3% пепсина. Раствор соляной кислоты готовят заранее, а пепсин добавляют перед постановкой опыта. Колбу закрывают пробкой и содержимое ее тщательно взбалтывают, после чего колбу помещают в термостат при 37 С на 12-24 ч для переваривания мышц. За это время содержимое колбы несколько раз встряхивают, а затем фильтруют через мелкое сито или центрифугируют в пробирках. Осадок переносят пастеровской пипеткой или бактериологической петлей на предметное стекло и просматриват под микроскопом или трихинеллоскопом. Если конкременты образовались в результате обызвествления личинок трихинелл, то последних обнаруживают в осадке в виде белых червячков. При наличии в мышцах обызвествленных саркоцист в осадке находят споры.

Санитарная оценка. Туши свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), а также кабанов, барсуков, медведей и нутрий подлежат обязательному исследованию на трихинеллез. При обнаружении в 24 срезах хотя бы одной трихинеллы (независимо от ее жизнеспособности) тушу и субпродукты, имеющие мышечную ткань, пищевод, прямую кишку, а также обезличенные мясные продукты напрявлят на техническую утилизацию.

Наружный жир (шпик) снимают и перетапливают. В вытопленном жире на 20 мин температуру доводят до 100 С. Внутренний жир выпускают без ограничений. Кишки, кроме прямой, после обычной обработки выпускают без ограничений. Шкуры выпускают после удаления с них мышечной ткани. Удаленная со шкур мышечная ткань подлежит утилизации.

Читайте также: