Определение цист лямблий в питьевой воде

Лямблии относятся к роду Giardia lamblia и являются простейшими одноклеточными организмами. Длина паразитов составляет не более 25 мкм, а для закрепления на носителе они используют присасывательные диски, фиксируясь на ворсинках тонкого кишечника. Для питания микроорганизмы используют переваренную пищу хозяина путем всасывания питательных веществ. Лямблии являются анаэробами, не нуждаясь в кислороде для роста и размножения.

Науке известно два вида таких паразитов – цисты и трофозоиты. Первые существуют в статичной форме, вторые – в свободно живущей. При этом распространяются именно цисты, являясь основным источником угрозы для человека и животных. Учитывая, что они не крепятся к слизистой оболочке, то практически беспрепятственно проникают в толстую кишку, после чего выводятся из организма с калом. Попадая во внешнюю среду, лямблии могут проживать в ней не меньше четырех месяцев. Цисты отличаются устойчивостью к агрессивным воздействиям, а также щелочам и кислотам.

В чем заключается опасность лямблий для человека?

Лямблии – самые распространенные паразиты животных. Имеющие форму овала, они также опасны и для человека. Именно у людей данные паразиты вызывают лямблиоз. Поэтому очень важно регулярно проводить исследования воды на содержание цист лямблий. Убедившись, что в отобранном образце паразиты не обнаружены, можно установить, что жидкость очищена и от других вирусов, в том числе кишечной палочки.

Подробнее о лямблиозе

Лямблиоз – заболевание, вызывающееся простейшими микроорганизмами. Оно выражается в нарушениях работы печени, кишечника и желчного пузыря. Также лямблиоз может привести к расстройствам нервной системы. Фиксируясь на слизистой оболочке кишечника, лямблии таким образом лишают ее умения впитывать жиры и углеводы, а также нарушают пищеварение.

Тяжесть течения заболевания заключается в том, что обнаружить какие-либо симптомы, связанные с носительством данного возбудителя, не всегда бывает легко. Их заметность проявляется преимущественно при массовом заражении. Поэтому принято разделять болезнь на несколько форм:

• бессимптомная;
• с заметными проявлениями;
• кишечная;
• гепатобилиарная;
• в виде сопутствующей патологии.

Продолжительное заболевание лямблиозом может вызывать повышение температуры, общую слабость, головную боль, а также апатию и быструю утомляемость. Часто признаки лямблиоза проявляются у детей – они могут перетечь в гастрит, дуоденит или энтерит. Явность симптомов является показателем, зависящим от общего состояния организма.

Лечение от заболевания лямблиозом производится немедленно, в случае подтверждения диагноза.

• Устанавливается особая диета, которая препятствует развитию микроорганизмов – исключаются молочные продукты.
• Производится периодическая очистка кишечника, гепатобилиарной системы и желчного пузыря.
• Задействуются спазмолитические препараты.
• Устраняется недостаток витаминов, которые относятся к группе B, а также принимается витамин C.

О жизненном цикле лямблий

В водопроводной воде или прудах цисты могут выживать 1-3 месяца, если температура воды не превышает 20 °C. При этом они устойчивы к хлорированию, которое применяется для бактериального обеззараживания.

Определение лямблий в воде

Нормы российского СанПиН, как и государственных организаций других стран, предусматривают полное отсутствие микроорганизмов данного типа в питьевой воде. Факт отсутствия цист косвенно указывает на то, что вода эффективно очищается и от ряда других простейших микроорганизмов, которые обладают высокой устойчивостью к процессам обеззараживания.

Определение лямблий в воде хозяйственного и питьевого назначения производится с задействованием методик, которые направлены на поиск определенной категории. В данном случае это цисты патогенных простейших кишечника – то есть лямблии, дизентерийная амеба и балантидия. Данная проверка подразумевает установление качества воды по паразитологическим характеристикам и затрагивает анализ не только питьевой воды, но и ручьев, водоемов, в том числе рекреационного назначения, и скважин.

Отбор образцов воды

Любые процедуры, связанные с отбором образцов питьевой воды, должны проводиться в соответствии с нормами СанПиН, касающимися воды систем водоснабжения. Если говорить о воде из подземных источников, контроль осуществляется при получении положительных результатов на наличие паразитов несколько раз подряд.

В частности, при отборе образца и его помещении в подготовленную емкость в него нужно добавить коагулянт, перемешать жидкость и отстоят 1-2 часа. Далее нужно удалить надосадочную жидкость, перенести осадок в другой сосуд и только после этого доставить его в лабораторию. Для получения наиболее точных результатов проверка должна проводиться в течение дня с момента отбора материала.

Ход исследования

Используемый в данном случае метод основан на выявлении цист лямблий во время исследования осадка. Он получается путем центрифугирования разведенного раствора флотанта, в который агенты переходят из осадка взятого образца воды. Осадок в свою очередь смывается по завершении фильтрации. Цисты попадают в осадок благодаря заметному падению плотности флотанта.

Для проведения такого анализа используется новейшее оборудование и материалы, включая прибор для вакуумной фильтрации, мембранные фильтры, лабораторную центрифугу, микроскоп, осветитель и термостат. В качестве реактивов могут использоваться как 40% формальдегид, так и семиводный сульфат цинка и йодистый калий. Приготовление растворов должно производиться специалистами во избежание каких-либо ошибок, которые могут повлечь за собой неточности в исследованиях или порчу пробы.

Идентификация паразитов в пробах должна производиться квалифицированным специалистом, который сможет точно определить их тип и отличить от, например, фитопланктона или яиц гидробионтов. Обработка одного образца занимает около 10 часов.

Наш центр устанавливает доступные цены на услуги, гарантируя высокую точность результатов и оперативное выполнение исследований. Лаборатория имеет широкую область компетенции, решая задачи, которые связаны с оценкой и исследованиями объектов, комплексно. Благодаря современному оборудованию и применению проверенных методик достигается низкий предел обнаружения в кратчайшие сроки.

Методы определения фенолов в воде

Загрязнение почв и грунтов фенолами, методы определения

Одним из основных элементов внешней среды, необходимым для жизнедеятельности человека, животных и растений, является вода. В жизни человека вода имеет ряд важных значений.

1. Физиологическое (участвует в переваривании и усвоении пищи, транспорте питательных веществ, удалении шлаков из организма, терморегуляции, является средой для химических реакций, с ней поступают в организм минеральные вещества, необходимые для нормальной жизнедеятельности).

2. Гигиеническое (поддержание чистоты тела, жилищ и общественных зданий, приготовление пищи, удаление нечистот путем канализации, закаливание, уборка улиц и поливка зеленых насаждений).

3. Эпидемиологическое (вода является резервуаром для накопления микроорганизмов, яиц гельминтов, простейших).

Употребление недоброкачественной питьевой воды может явиться причиной:

а) инфекционных заболеваний, гельминтозов и других паразитарных заболеваний, связанных с загрязнением водоемов хозяйственно-фекальными сточными водами или нечистотами из выгребов;

б) заболеваний неинфекционной природы, связанных с необычным природным химическим составом воды (флюороз, водно-нитратная метгемоглобинемия и др.);

в) заболеваний неинфекционной природы, связанных с загрязнением водоемов химическими веществами за счет поступления промышленных сточных вод или питьевой воды – остаточными количествами реагентов, добавляемых в процессе ее обработки;

г) заболеваний связанных с загрязнением радиоактивными отходами атомных реакторов, предприятий радиохимической промышленности, опасностью накопления радиоактивных веществ всеми водными организмами.

Ежегодно от употребления недоброкачественной воды на планете погибают свыше 25 млн. человек.

При организации водоснабжения необходимо решить две задачи: 1) выбрать источник водоснабжения; 2) оценить качество питьевой воды.

В настоящее время в основу гигиенического нормирования воды в РФ положены следующие документы: СанПиН 2.1.4.559-96 “Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества”; ГН 2.6.1.054-96 “Нормы радиационной безопасности”; ГОСТ 2761-84 “Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения. Гигиенические, технические требования и правила выбора”; СанПиН 2.1.4.544-96 “Требования к качеству воды при децентрализованном водоснабжении. Санитарная охрана, водоисточников”; ГОСТР 51232-98 “Вода питьевая”.

В соответствии с СанПиН 2.1.4.559-96 “Питьевая вода …” вода питьевая должна быть безопасна в эпидемиологическом и радиологическом отношении, безвредна по химическому составу и иметь благоприятные органолептические свойства.

Качество питьевой воды должно соответствовать гигиеническим нормативам перед ее поступлением в распределительную сеть, а также в точках водоразбора наружной и внутренней водопроводной сети.

СанПиНом 2.1.4.559-96г. установлен перечень контролируемых показателей качества воды и их гигиенические нормативы:

- микробиологические и паразитологические;

- химические вещества, выбранные для постоянного контроля.

Безопасность питьевой воды в эпидемиологическом отношении представлена в табл. №1.

Таблица №1

Микробиологические и паразитологические показатели качества воды.

Показатели	Единицы измерения	Нормативы
Термотолерантные колиформные бактерии	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие
Общие колиформные бактерии	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие
Общее микробное число	Число образующих колонии бактерий в 1 мл	Не более 50
Колифаги	Число бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 100 мл	Отсутствие
Споры сульфитредуцирующих клостридий	Число спор в 20 мл	Отсутствие
Цисты лямблий	Число цист в 50 л	Отсутствие

При этом определение колиформных бактерий и общего микробного числа производится в точках водоразбора наружной и внутренней водопроводной сети в течение 12 месяцев при количестве исследуемых проб не менее 100 за год.

Определение колифагов и цист лямблий проводится только в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть.

Споры сульфитредуцирующих клостридий определяют при оценке эффективности технологии обработки воды.

При обнаружении в пробе питьевой воды термотолерантных колиформных бактерий и (или) общих колиформных бактерий, и (или) колифагов проводится их определение в повторно взятых в экстренном порядке пробах воды. В таких случаях для выявления причин загрязнения одновременно проводится определение хлоридов, азота аммонийного, нитритов и нитратов.

При обнаружении в повторно взятых пробах воды общих колиформных бактерий в количестве более 2 в 100 мл или термотолерантных колиформных бактерий или колифагов проводят исследование проб воды для определения патогенных бактерий кишечной группы и энтеровирусов.

Органолептические свойства определяются по следующим показателям: запах, привкус, цветность и мутность. Не допускается присутствие в питьевой воде различимых невооруженным глазом водных организмов и поверхностной пленки.

Интенсивность запаха и привкуса определяют по 5-бальной шкале: 0 – не ощущается; 1 – не определяется потребителем, но обнаруживается опытным исследователем; 2 – слабый, обнаруживается потребителем только в том случае, если указать на него; 3 – заметный, обнаруживается потребителем и вызывает неодобрение; 4 – отчетливый, заставляет воздержаться от питья; 5 – очень сильный, делает воду непригодной для питья.

Естественные запахи описывают, придерживаясь следующей терминологии: ароматический (огуречный, цветочный); болотный (илистый, тинистый); гнилостный (фекальный, сточный); древесный (мокрой щепы, древесной коры); землистый (прелый, глинистый, вспаханной земли); плесневый (затхлый, застойный); рыбный (рыбы, рыбьего жира); сероводородистый (тухлых яиц); травянистый (скошенной травы, сена); неопределенный (не подходящий под предыдущие определения).

Гигиеническое значение запахов и привкусов воды заключается в том, что: 1) при их интенсивности выше двух баллов ограничивается водопотребление; 2) искусственные запахи и привкусы могут быть показателями загрязнения воды промышленными сточными водами; 3) естественные запахи и привкусы интенсивностью выше 2-х баллов свидетельствуют о наличии в воде биологически активных веществ, выделяемых сине-зелеными водорослями.

Качество питьевой воды неразрывно связано с качеством воды водоисточников.

При выборе источника для организации централизованного водоснабжения руководствуются ГОСТом 2761-84г.

По ГОСТу в первую очередь предусматривается использование межпластовых напорных вод, затем грунтовых искусственно наполняемых подземных и поверхностных вод (реки, водохранилища, озера, каналы). Пригодные для питьевого водоснабжения подземные воды могут быть использованы и при недостаточных их запасах. Восполнение дефицита потребности воды может быть осуществлено в этом случае по согласованию с органами санэпидслужбы, за счет менее безопасных в санитарном отношении водоисточников при наличии методов обработки, надежность которых подтверждена специальными технологическими и гигиеническими исследованиями.

Согласно ГОСТу 2761-84г. водоисточники делятся на две группы: подземные и поверхностные. Поскольку подземные и поверхностные водоисточники имеют свои природные особенности, а также в разной степени защищены от неблагоприятного воздействия антропогенных факторов, для них дается раздельная классификация. Причем как подземные, так и поверхностные водоисточники разбиты на 3 класса.

При классификации подземных водоисточников к первому классу отнесены такие, вода которых по всем показателям соответствует гигиеническим требованиям. Ко второму классу – вода имеет отклонения от гигиенических нормативов на питьевую воду по химическому составу или бактериологическим показателям. Качество воды в водоисточниках отнесенных к третьему классу, несколько ниже по сравнению со вторым классом.

Аналогичный принцип лежит в основе классификации поверхностных источников водоснабжения.

При санитарном обследовании водоисточника выделяют три последовательных этапа: 1) санитарно-топографическое, 2) санитарно-техническое с отбором проб воды, 3) санитарно-эпидемиологическое исследования.

Санитарно-топографическое обследование – это визуальное, опросное и анамнестическое изучение водоисточника и окружающей его территории. Основные задачи этого обследования: выявление существующих или возможных источников загрязнения, определение объема и программы лабораторных исследований, установление границ ЗСО (зоны санитарной охраны). ЗСО устанавливается “Положением о порядке проектирования и эксплуатации зон санитарной охраны источников водоснабжения и водопроводов хозяйственно-питьевого назначения” №2640-92г. Основной целью ЗСО является охрана от загрязнения источников водоснабжения, всех водопроводных сооружений и окружающей их территории для сохранения постоянства состава воды и санитарно-эпидемической надежности водоисточников.

Санитарно-техническое обследование – включает определение объема воды и дебит источника, т.е. его производительность, предполагаемый объем используемой воды и его соответствие минимальному расходу в источнике. Оценка и соответствие устройства и эксплуатации сооружений централизованного и местного водоснабжения гигиеническим требованиям.

Например, у шахтных колодцев стенки (сруб) колодца должен быть водонепроницаемым и возвышаться над поверхностью земли не менее чем на 0,8 м. Вокруг колодца должен быть устроен глиняный “замок” глубиной 2 м и шириной 0,7 – 1 м. Поверх глиняного “замка” устраивается отмостка в радиусе 2 м с уклоном от колодца для стока поверхностной воды. Вокруг общественных колодцев делают ограду в радиусе 5 м. Колодец должен быть надежно закрыт во избежание загрязнения (иметь навес и крышку).

Для подъема воды лучше использовать насосы, которые наглухо закрыты и не загрязняются извне. При подъеме воды с помощью коловорота или “журавля” обязательно наличие общественного ведра и скамьи для возможности переливания воды из общественного в индивидуальное ведро.

Кроме того проводят отбор проб воды из источника и определяют необходимые показатели качества. Санитарно-эпидемиологическое исследование проводится с целью выявления среди населения заболеваемости и носительства инфекций, передаваемых через воду, а также наличие эпизоотий среди животных в данной местности.

При этом необходимо обратить внимание на наличие в воде показателей, характеризующих фекальное загрязнение, попадание в воду хозяйственно-бытовых стоков. К этим показателям относятся: азотсодержащая триада (аммиак, нитриты, нитраты), сульфаты (не более 500 мг/л), хлориды (не более 350 мг/л). Наличие азотсодержащих веществ кроме того может свидетельствовать и о сроках загрязнения: так, наличие в воде аммиака говорит о свежем загрязнении, нитритов - об определенной давности процесса, а нитратов – о давнем загрязнении. Наличие в воде всех элементов триады указывает на постоянное длительное загрязнение воды. ПДК нитратов составляет 45 мг/л.

К косвенным показателям эпидемиологической безопасности воды относится также и окисляемость воды – количество мг кислорода расходуемое на окисление органических веществ, содержащихся в 1 л воды и не должно превышать 5 мг/л.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

1 . 1 . Методические указания устанавливают методы приготовления модельных жидкостей, содержащих цисты лямблий и (или) ооцист криптоспоридий, и применения их для гигиенической оценки эффективности водоочистки различными технологиями.

3.1. Этапы проведения методики

3 . 1.1. Подготовка модельной жидкости (воды), содержащей определенное (не менее 15 ) число лямблий в 1 дм 3 (л).

3 . 1 . 2 . Обработка не менее 50 дм 3 модельной жидкости ( 1 проба) на испытуемом водоочистном устройстве (фильтрация, адсорбция, разруше н ие и прочие способы инактивации цист) как минимум в 3 -х повторностях.

3 . 1 . 3 . Контроль за содержанием цист лямблий и их жизнеспособностью в конечном продукте, получаемом после обработки модельной жидкости на испытуемом устройстве.

3 . 1 . 4 . Оценка эффективности барьерной функции в отношении цист лямблий и выдачи соответствующего заключения.

3.2. Подготовка модельной жидкости

Лаборатории, осуществляющие сертификационные испытания водоочистных устройств по паразитоло г ическому показателю, должны иметь запас максимально очищенной взвеси цист лямблий ( Giardia lamblia - Lamblia intestinalis ) в объеме не менее 25 мл с содержанием цист не менее 10000 экз. в 1 мл.

При испытании водоочистных устройств, использующих химические и физические (У Ф-лучи, МИ О , озон и др.) факторы воздействия, используются только жизнеспособные тест-объекты. Цисты лямблий, выделенные из фекалий человека, сохраняют свою жизнеспособность в полном объеме в течение 10 суток при условии хранения их при 4 °С.

3 . 2 . 1. Материалом для получения жизнеспособных цист лямблий могут служить фекалии больных лямблиозом лиц и лиц-цистоносителей. Материал может быть получен в инфекционных больницах (особое внимание должно быть обращено на детские отделения), кишечных кабинетах поликлиник, гастроэнтерологических отделениях больниц и клиник, паразитоло г ических лабораториях центров Госсанэпиднадзора.

Специалист, осуществляющий подготовку взвесей тест-объектов, должен руководствоваться СП 1 . 2 . 731-99 (п. 28 ).

Цисты лямблий выделяют из оформленных или полуоформленных фекалий инвазированн ы х лямблиями людей. Для этого используются методы обнаружения цист лямблий, описанные в нормативно-методических документах МУК 4 . 2 . 735-99 (п .п . 2 . 3 ).

Фекалии, в которых обнаруживаются цисты лямблий более 100 экз. в одном поле зрения при 200 -кратном увеличении микроскопа (окуляр × 10 , объектив × 20 ), следует подвергать соответствующей дальнейшей обработке.

3 . 2.1 . 1. Для получения взвеси цист лямблий фекалии, их содержащие, в количестве 3 - 5 г (чайная ложка) отмывают изотоническим раствором ( 0 , 85 % ) хлорида натрия ( NaCl ) путем повторного центрифугирования ( 3 мин× 1500 об./ми н ) до образования прозрачной надосадочной жидкости, которую осторожно удаляют путем пипетирования. В оставшийся осадок фекалий добавляют флотирующий раствор объемом, в 3 - 4 раза превышающим объем фекалий (рис. 1).

3 . 2.1 . 2 . В качестве флотационной жидкости используется насыщенный ( 30 % ) раствор сахарозы (насыщение достигается при условии нерастворения кристаллов сахарозы в воде с температурой около 50 °С при перемешивании или встряхивании).

Раствор следует остудить до 18 - 20 °С. Обработка осадка фекалий флотирующим раствором должна сопровождаться интенсивным перемешиванием с помощью пипетки или стеклянной палочки.

Для ускорения перехода цист лямблий из осадка в поверхностную пленку флотанта и очищения их, пробирки центрифугируют при 1500 об./мин в течение 5 мин.

После 10 - 15 -минутной экспозиции поверхностную пленку флотанта снимают металлической петлей (из медной или алюминиевой проволоки) с внутренним диаметром 5 - 6 мм и переносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия или жидкости Барбага л ло ( 3 % -н ы м раствором формальдегида на физиологическом растворе). Процедуру повторяют не менее 3 -х раз. Вместо петли можно использовать пипеточн ы й дозатор 0 , 1 мл, которым осторожно снимают поверхностную пленку. Для получения концентрированной взвеси цист в работе должно быть задействовано 10 и более пробирок (емкостью 10 - 15 мл) с фекалиями и флотантом.

3 . 2.1 . 3 . Для более высокой очистки взвеси цист от фекального загрязнения ее подвергают дополнительной обработке 8 %-ным раствором сахарозы следующим образом: взвесь цист центрифугируют 3 мин при 1500 об./мин, надосадочную жидкость удаляют, осадок осторожно переносят на поверхность 8 % -ного раствора сахарозы ( 6 мл и более) в центрифужной пробирке. Эту суспензию вновь центрифугируют в течение 2 мин при 2000 об./мин. Надосадочную жидкость удаляют, а взвесь, обогащенную отмытыми цистами, хранят в пробирках с резиновыми пробками при 4 °С .

Жизнеспособность отмытых цист при данном режиме консервации сохраняется в течение 10 суток. Даже если суспензия не подвергалась дополнительно очистке, ее следует освободить от остатков сахарозы путем 2 - 3 -кратного промывания, что резко снизит возможность развития в суспензии плесени и бактериальной флоры.

При получении взвеси форма л инизирован ны х цист лямблий в качестве начального этапа обработки фекалий может быть использована методика формалин-эфирного осаждения (см. МУК 4 . 2 . 735-99 , стр. 13 , 14 , 25 , 26 ). При этом могут быть использованы и фекалии, законсервированные в фиксирующих жидкостях (Барбага л ло, Турд ы ева и др.).

Полученный после такой процедуры осадок, содержащий цисты лямблий, подвергается затем флотации выше описанным способом. П ри этом в качестве флотанта можно использовать 33 % -н ый водны й раствор семиводного сернокислого цинка ( ZnSO ₄ H ₂ O ).

3 . 2 . 2 . Количественное определение цист лямблий в полученной взвеси. Взвесь интенсивно встряхивают путем постукивания пальцем по пробирке или размешивания стеклянной палочкой. Пипеточн ы м дозатором отбирают 0 , 1 мл и переносят на предметно е стекло. Образовавшуюся на стекле каплю накрывают покровным стеклом и микроскопируют при 200 -кратном увеличении микроскопа (окуляр × 10 , объектив × 20 ). При таком увеличении микроскопа покровное стекло размером 24×24 мм накрывает площадь, соответствующую 2935 полям зрения. Просматривают не менее 20 полей зрения и подсчитывают число цист лямблий в каждом из них. Числа суммируют и делят на число просмотренных полей; получается среднее число цист в одном п оле зрения. Это число умножают на 2935 и получают усредненное число цист, содержащихся в 0 , 1 мл взвеси. При умножении на 10 получают содержание в 1 мл взвеси с поправкой ± 5 % . Это - маточная взвесь, которая должна содержать около 200000 цист лямблий в 1 мл.

3 . 2 . 2 . 2 . Взвесь тест-объектов (цисты лямблий) вносят в воду объемом не менее 50 л (дм 3 ), предназначенную для приготовления модельной жидкости с таким расчетом, чтобы содержание их в 1 л (дм 3 ) модельной жидкости составляло, как минимум, 15 ± 2 единицы. Оптимальный вариант 20 ± 2 единицы. Это достигается в н есе н ием 0 , 01 мл рабочей взвеси на каждый литр модельной жидкости или 0 , 5 мл на 50 л. Таким образом, общее число цист в пробе модельной жидкости должно находиться в пределах 750 - 1 000 единиц. Модельную жидкость затем тщательно (1 - 1,5 мин) размешивают.

3.3. Проведение обработки модельной жидкости на испытуемом устройстве

Обработка модельной жидкости на водоочистном устройстве проводится в соответствии с инструкцией по эксплуатации данного устройства. Обрабатывается не мене е 3 -х проб (по 50 л) модельной жидкости.

3.4. Контроль за содержанием цист лямблий и их жизнеспособностью в конечном продукте после технологической обработки

Модельная жидкость после обработки на водоочистном устройстве исследуется на наличие цист лямблий в соответствии с действующими нормативными документами и оценочными показателями паразитарной безопасности (п. 2.4).

3.5. Оценка эффективности барьерной функции водоочистного устройства

При отсутствии цист лямблий в 3 -х пробах конечного продукта эффективность противопаразитарной барьерной функции испытуемого водоочистного устройства фильтрационного или абсорбционного действия оценивается как 100 %- ная.

При обнаружении в конечном продукте одной цисты эффективность устройства оценивается в 99 , 96 % .

При обнаружении большего числа цист лямблий в 3 -х пробах конечного продукта эффективность барьерной функции водоочистного устройства рассчитывается по формуле:

А - эффективность барьерной функции, % ;

в - число цист лямблий, внесенное в 3 пробы модельной жидкости (в среднем около 3 000 единиц);

с - число цист лямблий, обнаруженное в 3 -х пробах конечного продукта.

При оценке барьерной функции водоочистного устройства реагентного действия формула расчета эффективности выглядит так:

А - эффективность барьерной функции устройства, % ;

Д - число жизнеспособных цист, внесенное в модельную жидкость (в 3 пробы);

д - число жизнеспособных цист, обнаруженное в конечном продукте.

3.6. Оборудование и материалы

3 . 6 . 1. Оборудование, перечень материалов (реактивов) - см. МУК 4.2.964-00, стр. 6 - 8 ; дополнение: акридиновый оранжевый Ч Д А.

3 . 6 . 2 . Приготовление рабочих растворов. 33 %-ны й водный раствор семиводного сульфата цинка: 331 г семиводно г о сульфата цинка растворяют в 1 л кипящей дистиллированной воды; 30 % - ный водный раствор сахарозы: 300 г сахарозы чда растворяют в 1 л горячей ( 70 - 80 °С) дистиллированной воды. После приготовления флотанта и снижения его температуры до 18 °С контролируют его удельную плотность ареометром. Она должна составлять 1 , 2 .

Приготовление рабочего раствора акридинового оранжевого - 0 , 2 г красителя растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

Этапы методики те же, что и для цист лямблий (см. п. 3.1).

Материалом для получения ооцист криптоспоридий могут быть фекалии молодняка домашних животных (телят, поросят и др.). Материал может быть получен на животноводческих комплексах и фермах.

4.1.1. Получение очищенной взвеси ооцист криптоспоридий. Фекалии, их содержащие, в количестве 3 - 5 г (чайная ложка) помещают в центрифужные пробирки емкостью 30 - 50 мл и отмыва ют изотоническим раствором хлорида натрия ( 0 , 85 % ) путем повторного центрифугирования ( 3 мин при 1500 о б ./м ин ) до образования прозрачной надосадочной жидкости, которую осторожно удаляют путем п и п етирования (прилож. 2, рис. 1 и 2).

4 . 1 . 2 . Осадок заливают 30 % -н ы м раствором сахарозы при t = 30 - 35 °С в количестве, равном трем объемам осадка, и маркером отмечают верхний уровень жидкости.

4.1 . 3 . Проводят тщательное размешивание стеклянной палочкой или пипеткой и центрифугируют в режиме 2 000 об./мин в течение 5 мин. После центрифугирования смеси дают отстояться 15 мин. Затем на поверхность флотанта осторожно наслаивают 10 - 15 мл дистиллированной воды и очень осторожно с помощью стеклянной палочки эту воду над раствором сахарозы (граница между сахарозой и водой отмечена маркером) слегка помешивают, чтобы ооцист ы , находящиеся в верхнем слое флотанта, переместились из верхнего слоя сахарозы в находящуюся над ней воду. Эту воду затем с помощью пипеточного дозатора отсасывают до отмеченного маркером уровня и переносят в чистую пробирку емкостью 50 мл, размешивают и центрифугируют в прежнем режиме до образования прозрачной жидкости. Промывку ооцист с помощью центрифугирования повторяют не менее 4 раз.

4 . 1 . 4 . После последнего промывания и осторожного удаления надосадочной жидкости (пи п етирова н ием) оставшийся осадок переносят в центрифужные пробирки емкостью 10 мл и центрифугируют при 3 000 об./мин в течение 5 мин. Надосадочну ю жидкость удаляют путем пипетирования, а образовавшуюся после всех манипуляций взвесь ооцист используют в дальнейшей работе.

4 . 1 . 5 . Количественное определение содержания ооцист в полученной взвеси проводят аналогичным для цист лямблий путем либо подсчетом в камере Горяева. Ооцист ы подсчитывают в 20 прямоугольниках (полученное число соответствует их содержанию в 2 мм 3 ), сумму умножают на 50 000 и получают содержание оо ци ст в 1 мл взвеси.

Дальнейшую работу проводят в соответствии с пунктами 3.2.2.1 - 3.3.

4.2. Контроль за содержанием ооцист криптоспоридий в конечном продукте после технологической обработки

После этого мазки быстро проводят над пламенем горелки и окрашивают карболовым фуксином (см. раздел 4.3) в течение не менее 20 мин. Мазки промывают дистиллированной водой, обесцвечивают (дифференцируют) 5 - 10 % -ной серной кислотой в течение 10 - 20 с и снова промывают. Затем дополнительно окрашивают 0 , 2 % -н ы м водным раствором метиленового синего или 5 % малахитовой зелени в 10 % -ном этиловом спирте в течение 3 - 5 мин. Промывают дистиллированной водой, тщательно высушивают на воздухе и исследуют с масляной иммерсионной системой микроскопа с увеличением не менее 1 000×.

Ооцист ы криптоспоридий окрашиваются в разные оттенки ярко красного (малинового, вишневого) цвета и имеют вид округлых образований диаметром 5 - 6 микрон с отчетливо видимой оболочкой и структурированным содержимым (можно наблюдать наличие 4 -х веретенообразных темноокра ш енн ы х спорозоитов) на синем или зеленом основном фоне.

4.3. Оценка эффективности барьерной функции водоочистного устройства

Оценку эффективности проводят так же, как и в отноше н ии цист лямблий (см. 3.5).

4.4. Оборудование и материалы

Оборудование и материалы аналогичны тем, которые применяются для анализа цист лямблий (см. раздел 3.6).

4 . 4.1 . Камера Горяева.

4 . 4 . 2 . Дополнение 1 : фуксин основной чда, фенол чда, малахитовая зелень чда, мет и ленов ы й синий чда, серная кислота ( 10 % ), масло иммерсионное пихтовое.

4 . 4 . 3 . Дополнение 2 : приготовление карболового фуксина (по Цилю-Н и льсе н у): 2 , 0 основного фуксина разводят в 12 мл 96° -ного этилового спирта, а 5 , 0 мл фенола разводят в 100 мл дистиллированной воды при 30 - 35 ° С , затем оба этих раствора соединяют вместе. Срок хранения смеси - 2 месяца.

Приготовление раствора малахитовой зелени: 5 , 0 малахитовой зелени растворяют в 100 мл 10 % -ного этилового спирта. Срок хранения - 2 месяца .

1 . Бейер Т.В. и соавт. Лабораторная диагностика криптоспор и диоза у детей. Л ., 1987 . 21 с.

2 . Бейер Т.В. и соавт. Диагностика, клиника, лечение и профилактика кри п тоспоридиоза: Методические рекомендации. Л ., 1987 . 22 с .

5 . Шарапов М.Д. Совершенствование и применение метода культивирования лямблий для изучения некоторых вопросов эпидемиологии лямблиоз а // Д исс. канд. мед. наук. М ., 1977 .

6 . Ford Т . Е . Microbiology Safety of drinking water : United States and Global Perspectives // Environm . Health Perspectives . 1999 . V.107 , S . I.

7 . Pavlasek I . Kryptosporidie : biologie , diagnostica , hostitelske spektrum , specifita a vztah k zivotinu prostredi . Remedia - Klinicka mikrobiologie 1999 : 3 ( 9 ) S . 290 - 300 .

1 . Лямблии ( Lamblia intestinalis , синоним Giardia lamblia ). Одноклеточные паразитические животные организмы из класса жгутиконосцев ( Flagellata ). Возбудители лямблиоза (жиардиазиса) - заболевания, могущего проявиться в различных формах. Кишечная форма характеризуется диарейн ы м синдромом, может симулировать аппендицит или язвенную болезнь желудка и 12 -перст н ой кишки. Почечная форма дает картину холецистита, желчнокаменной болезни. Нервная форма проявляется в виде головных болей, раздражительности, слабости, крапивницы.

Лямблии могут существовать в двух формах: 1 - т рофозоита (вегетативной, активной формы в организме хозяина, размер 8 - 10×14 - 16 микрон) и 2 - ци ст ной - во внешней, в т.ч. и водной среде.

Удельный вес цист - 1 , 06 - 1 , 09 . Цисты устойчивы к воздействию многих дезинфектантов (свободного хлора, диоксина хлора, озона и др.). Кипячение воды убивает цисты в течение 5 мин. Заражающая (инвазионная) доза = 10 цистам лямблий.

3 . К риптоспор ид ии ( Cryptosporidium parvurn ). Одноклеточные паразитические животные организмы из класса споровиков ( Sporozoa ) со сложным жизненным циклом, протекающим в организме одного хозяина и включающим в себя мерогони ю и с п оруляци ю . Они являются возбудителями криптоспоридиоза человека и животных, заболевания, характеризующегося очень частой (до 20 раз в сутки) водянистой диареей, рвотой, лихорадкой, головной болью, спастическими болями в животе, миалгией.

В водную среду криптоспоридии попадают с фекалиями зараженного хозяина и представлены спорулированн ы ми ооц и стами.

5 . Водоочистное устройство. Техническое приспособление или сооружение с полной заводской готовностью, предназначенное для освобождения (задержания или инактивации) от жизнеспособных возбудителей кишечных паразитарных заболеваний (цист и ооцист патогенных кишечных простейших, яиц и личинок гельминтов) воды, обрабатываемой на данном тех н ическом устройстве и предназначенной в дальнейшем для хозяйственного и питьевого использования.

Целью обработки исходной воды на водоочистном устройстве является ее полное или на 99 , 99 % освобождение от жизнеспособных и инвазионных возбудителей кишечных паразитозов при сохранении всех необходимых ингредиентов, обеспечивающих полную физиологическую ценность воды.

6 . Конечный продукт. Вода, получаемая на выходе после обработки на водоочистном устройстве природной воды или из систем централизованного и децентрализованного питьевого водоснабжения, прошедшая неудовлетворительную подготовку и предназначенная для питьевого и хозяйственно-бытового использования.

Рис. 1 . Схема получения очищенной взвеси цист лямбий.

1 - предварительно отмытые фекалии, 2 - внесение флотанта, 3 - интенсивное размешивание, 4 - центрифугирование и отстаивание, 5 - снятие цист лямблий с поверхностной пленки флотанта (пипеточн ы м дозатором ил и металлической петлей), 6 - перенесение цист лямблий в физиологический раствор или 3 % -н ы й р-р формалина на физрастворе.

Рис. 2 . Схема получения очищенной взвеси ооцист криптоспор и дий.

1 - флотация, 2 - наслаивание дистиллированной воды, 3 - размешивание , 4 - отсасывание ооцист.

Рис. 3 . Lamblia intestinalis

1 - наружная оболочка , 2 - ядра, 3 - аксостиль, 4 - цитоплазма, 5 - жгутиковый аппарат, 6 - медиальные тела.

Рис. 4 . Ооциста Cryptosporidium parvum