Шуляк б ф нематодозы собак

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Солдатов И.С., Кармалиев Р.С.

Собаководство отрасль животноводства, которая предусматривает разведение собак культурных пород для использования в различных отраслях народного хозяйства, спорте и армии. Вместе с тем, нельзя не учитывать, что собаки , страдают от болезней паразитарной этиологии. Гельминтозы наносят экономический ущерб собаководству , который складывается от гибели животных и потери племенной ценности. [1,3]

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Солдатов И.С., Кармалиев Р.С.

Epizootology and prophilaxis of helminthes of dogs

Dogs to Uralsk are infected helminths T.leonina, T.canis, A.caninum, U.stenocephala, D.caninum, D.repens. The greatest contamination of dogs is noted by T.canis of 59,9% and D.caninum of 44,9%. A number of preparations is tested at parasitic diseases of dogs.

ЭПИЗООТОЛОГИЯ И ПРОФИЛАКТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ СОБАК

Солдатов И.С., Кармалиев Р.С.

Западно-Казахстанский аграрно-технический университет

Введение. Собаководство - отрасль животноводства, которая предусматривает разведение собак культурных пород для использования в различных отраслях народного хозяйства, спорте и армии. Вместе с тем, нельзя не учитывать, что собаки страдают от болезней паразитарной этиологии.

Гельминтозы наносят экономический ущерб собаководству, который складывается из гибели животных и потери им племенной ценности [1, 3].

Немало гельминтов обладает зооантропонозным потенциалом, и собака играет далеко не последнюю роль в поддержании циклов развития целого ряда таких опасных паразитозов, таких как токсаскаридоз, токсокароз, анкилостомоз, унцинариоз, телязиоз, дипилидиоз и дирофиляриоз [2, 4].

Для профилактики и лечения паразитозов собак используют различные противопаразитарные препараты.

При гельминтозах пищеварительного тракта собак применяют бензимидазолы, имидазотиазолы, пиперазины, ивермектины и препараты других групп.

Поэтому в настоящее время диагностика, профилактика и лечение паразитозов собак очень актуальна.

Цель наших исследований - изучить эпизоотическую ситуацию по основным гельминтозам собак в г. Уральске, уточнить их видовой состав и предложить эффективные методы лечения и профилактики заболеваний, вызываемых этими паразитами.

Материалы и методы. Исследования проводили в 2015 году в ветеринарных клиниках города Уральска.

Инвазированность собак гельминтами пищеварительного тракта определяли по методу Фюллеборна. В фарфоровую ступку помещали 5-8 г фекалий. Заливали пробу небольшим количеством насыщенного раствора хлорида натрия. Тщательно размешивали палочкой или пестиком (индивидуальным для каждого образца). Постепенно добавляли к взвеси солевой раствор до конечного объема 150-200 мл. Процеживали взвесь через сито в сухой и чистый стакан, размешивая стеклянной палочкой. Отстаивали взвесь в течение 10-15 мин. Раскладывали на листе предметные стекла (по 3 для каждой исследуемой пробы). На каждое предметное стекло наносили по 2 капли 50%-го водного раствора глицерина. Снимали проволочной петлей 3-4 капли с поверхности взвеси (из разных мест) и переносили их на предметные стекла, смешивая с каплями глицерина, накрывали покровным стеклом. Всего из каждой пробы готовили по 6 препаратов на трех стеклах. Исследовали смеси на наличие яиц гельминтов под световым микроскопом.

Определение эффективности против гельминтов пищеварительного тракта плотоядных каниквантела в дозе 50 мг/кг по фенбендазолу, пиперазина

Результаты и обсуждение. В результате гельминтоовоскопических исследований фекалий определили, что собаки в г. Уральске инвазированы 5 видами гельминтов пищеварительного тракта: Toxascaris leonina, Toxocara canis, Ancylostoma canis, Uncinaria stenocephala и Dipylidium caninum. Экстенсивность инвазии собак составила, соответственно 29,9%, 59,9%, 25,0%, 39,9%, 44,9% (табл.).

Зараженность собак гельминтами пищеварительного тракта

№ п/п Вид гельминта Исследовано, гол. Заражено, гол. ЭИ, %

1 T.leonina 756 226 29,89

2 T.canis 756 453 59,9

3 A.caninum 756 189 25,0

4 U.stenocephala 756 302 39,9

5 D.caninum 756 340 44,9

В результате испытаний препаратов при дипилидиозе и токсокарозе собак определили, что экстенсэффективность каниквантела при обоих гельминтозах составила 100%. Дирофен показал эффективность 60% при дипилидиозе и 80% при токсокарозе. При дипилидиозе эффективность досалида составила 100, а дронтала - 80%. При токсокарозе пиперазин показал 60, а ивомек 100% экстенсэффективности. В контрольной группе животные были инвазированными D. caninum и T.canis. После введения препаратов никаких клинических симптомов не отмечали. Выводы:

1. Собаки в г. Уральске инвазированы T.leonina, T.canis, A.caninum, U.stenocephala, D.caninum, D.repens.

2. Наибольшая зараженность собак отмечена T.canis 59,9% и D.caninum 44,9%.

3. Наибольшую эффективность - 100% при токсокарозе и дипилидиозе собак показали препараты каниквантел, ивомек и досалид.

Литература: 1. Абуладзе К.И. Паразитология и инвазионные болезни.-М.: Агропромиздат. - 1990.- С. 243 - 251. 2.Петров A.M. Глистные инвазии собак и их санитарное и экономическое значение. Сельхозгиз. - М.- Л., 1931.-

325с. 3.Скрябин К.И., Р.С. Шульц Ветеринарная паразитология и инвазионные болезни домашних животных. - М.: Сельхозгиз, 1937.- 568 с. 4.Шуляк, Б.Ф., Архипов И.А..- Нематодозы собак. - М.: КонсоМед, 2010. -496с.

Презентация была опубликована 6 лет назад пользователемВадим Федянин

Презентация на тему: " ИНФЕКЦИИ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ СОБАК Материалы XIX Международного ветеринарного конгресса, Москва, 16ю04.2011 г. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ к.в.н. Шуляк Б.Ф." — Транскрипт:

1 ИНФЕКЦИИ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ СОБАК Материалы XIX Международного ветеринарного конгресса, Москва, 16ю г. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ к.в.н. Шуляк Б.Ф.

2 У здоровых животных мочевая система (МС), за исключением дистального отдела уретры, свободна от бактериальных агентов. Бактерии попадают в МС через наружные половые органы, реже гематогенным путем (лептоспиры, сальмонеллы и др.). Инцидентность инфекций у собак составляет % ? МОЧЕВАЯ СИСТЕМА И БАКТЕРИИ

3 Клинические последствия бактериальных инфекций МС зависят от ряда факторов: патогенности возбудителя, локализации инфекции, состояния иммунной системы животного, наличия у него болезней другой этиологии, своевременности и рациональности лечения, рациона и т.д. Комплексное влияние этих факторов определяет многообразие форм течения инфекций МС (от бессимптомной бактериурии до острого пиелонефрита и септицемии). КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ МС

4 ТИПЫ ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ Абортивная = элиминация бактерий Острая = заболевание летальный исход Хроническая = рецидивы заболевания Латентная

5 Данные анамнеза, результаты клинического обследования и общего анализа мочи позволяют лишь предполагать наличие у животного инфекции МС. Окончательный диагноз можно поставить только после: 1. изоляции возбудителя 2. определения уропатогенности изолята 3. оценки степени бактериурии ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ

6 Для получения достоверных результатов необходимо стандартизировать все этапы бактериологического анализа мочи: *Преаналитический **Аналитический ***Учет и анализ результатов

7 ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП Сбор проб мочи ± Хранение проб мочи Доставка в лабораторию

8 СБОР ПРОБ МОЧИ При естественном мочеиспускании (высок риск контаминации проб) Через катетер (высок риск травмирования уретры и мочевого пузыря, а механической диссеминации патогенных бактерий) Пункцией мочевого пузыря (не позволяет судить о наличие инфекций в уретре)

9 Взятие проб мочи с помощью катетера Катетеризация кобеля Катетеризация суки

11 Пробы мочи следует собирать в чистые стерильные, надежно закрывающиеся контейнеры. Использование контейнеров специального назначения облегчает отбор из них проб для анализов без риска случайной контаминации посторонней микрофлорой и попадания мочи (потенциально инфекционный материал!) на объекты внешней среды, одежду и руки специалистов. Контейнеры для проб мочи

12 Моча прекрасная питательная среда для бактерий, титр которых в ней прогрессирующе возрастает с течением времени. Оптимально, когда пробу мочи высевают на питательную среду сразу же после взятия. Максимальная продолжительность этого срока при нахождении мочи в условиях комнатной температуры 2 ч. В холодильнике ее можно хранить не более 12 ч. Если использовать в качестве консерванта борную кислоту, то срок хранения проб мочи в холодильнике можно увеличить до 24 ч. Борная кислота снижает жизнеспособность некоторых бактерий, в т.ч. псевдомонад. Хранение и доставка проб мочи в лабораторию

13 ПОСЕВ НА ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЯЖЕСТИ БАКТЕРИУРИИ ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ БАК.АНАЛИЗА ХИМИЧЕСКИЕ ЭКСПРЕСС- МЕТОДЫ (±) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВ-ТИ К АНТИБИОТИКАМ НЕПОСРЕДСТВЕННАЯ ДЕТЕКЦИЯ БАКТЕРИЙ, ЛЕЙКОЦИТОВ И МВР (визуальные и автоматические методы) 13 АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП

14 БАКТЕРИОСКОПИЯ 1. Нативных проб 2. Седимента 3. Концентрата (получ.фильтрацией) ХИМ. МЕТОДЫ 1. Нитритный 2. Аденозин триптофазный 3. Каталазный 4. Глюкозо- оксидазный и др. 5. Выявление метаболитов бактерий. 6. Обнаружение маркеров воспалительной реакции АВТОМАТИЗИРОВАННЫЕ МЕТОДЫ Проточная цитометрия и др. методы детекции частиц (в т.ч. бактерий) 14 ОБНАРУЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ В МОЧЕ

15 15 Успех бактериологического анализа мочи в значительной степени зависит от качества и спектра используемых в лаборатории питательных сред. УНИВЕРСАЛЬНЫЕ СЕЛЕКТИВНЫЕ ХРОМОГЕННЫЕ ПОЛИФАЗНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

16 16 МПА Кровяной агар CLED Универсальные среды (кровяной агар, CLED и др.)

17 17 Колумбийский CNA агар с кровью без крови Агар МакКонкиМ Селективные среды (МакКонки, Колумбийский CNA

18 18 Хромогенные среды (Uriselect ¾ и др.) БактерииКолонииХарактеристики Диаметр, ммЦветβ-глюкуронидазаβ-глюкозидазаИндолТриптофан-дезаминаза E.coli2-3Фиолетовый++ P.mirabilis2Оранжево- коричневый + E.faecalis0,5-1Светло-голубой+ P.stuartii2Оранж-коричн.+± S.aureus1-2Белый

19 Алгоритм идентификации бактерий на среде Uriselect 3

20 20 Полифазные среды Среда Энтеро ПЛЮС (Новамед) (для дифференциации энтеробактерий)

21 Культуральные свойства Морфология бактерий Тинкториальные свойства Биохимические свойства ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ

25 25 Дифференциация энтеробактерий

26 БИОХИМИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ УСКОРЕННОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ УРОПАТОГЕНОВ Результаты учитывают визуально (цвету содержимого лунок) или с помощью компьютерных программ ( LaChema)

27 Первичные (самостоятельно вызывают поражения органов мочевой системы): E. coli, Staph. intermedius, лептоспиры. Вторичные (проявляют патогенные свойства реже - преимущественно на фоне других инфекций, при ослаблении иммунитета, после инвазивных диагностических и лечебных процедур): стафилококки, стрептококки, протеи, энтеробактеры, энтерококки. Сомнительные: псевдомонады, клебсиеллы, коринебактерии КЛАССИФИКАЦИЯ УРОПАТОГЕНОВ СОБАК Большинство остальных бактерий, обнаруживаемых в моче следует считать компонентами нормальной микрофлоры или контаминантами, а не уропатогенами.

28 КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ БАК. АНАЛИЗ МОЧИ Критерии Е.Х. Касса 10 3 = отсутствии воспалительного процесса, контаминация мочи 10 4 = сомнительный результат (исследование следует повторить) 10 5 = на наличие воспалительного процесса 28 Если в посевах обнаруживают 3 или большее количества микроорганизмов, то считают, что исследованная проба контаминирована банальной микрофлорой, и проводят исследование мочи повторно. Изоляция из мочи даже первичных уропатогенов не может служить основанием для постановки окончательного диагноза без подтверждений того, что это не случайная контаминация. Основным критерием этого остается установление диагностического титра уропатогенов в моче (степени бактериурии).

29 РЕКОМЕНДАЦИИ ЕВРОПЕЙСКОЙ КОНФЕДЕРАЦИИ ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ (ECLM) Способ взятия мочи Наличие симптомов БМП Обнаруженные уропатогенов Диагностически значимый титр (КОЕ/мл) типчисло При мочеиспускании (средняя порция) + Первичные Вторичные Сомнительные ( ) ( ) 10 5 Любые уропатогены Надлобковая пункция± При цистоскопии или 1-кр. катетеризации ± Из введенного на длительное время катетера Ветеринарным специалистам еще предстоит определить диагностические уровни бактериурии при инфекционных процессах в мочевой системе собак

30 ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕННЫЕ Капельный Погружной Дипстрика/Дипслайда ТОЧНЫЕ КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ Серийных разведений Штриховой несекторный Четырехсекторный МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИТРА БАКТЕРИЙ В МОЧЕ

31 Штриховой несекторный в ЧП V инокулума, мкл N колоний / чашку Петри Титр (КОЕ/мл)

32 4-секторный в ЧП Количество колоний в секторах Титр (КОЕ/мл) IIIIIIIV 1-6

33 Капельный Lorrier J.C., Valkenburg H.A. Quantitative Urine Culture by Surface Drop Method. Applied Microbiol, 1969, 5763

35 Штриховая технология дипстрика N колоний 50 КОЕ/мл

39 ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ БАК. АНАЛИЗА МОЧИ Повторная изоляция того же вида, типа, варианта бактерий = наличие инфекционного процесса. Необходимо определять степень бактериурии при различных патологиях мочевой системы, чтобы дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи нормальной микрофлорой и сапрофитами. Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических процессах и коррелируют с низкой степенью бактериурии. Изоляция 3 и большего числа бактерий свидетельствует о контаминации пробы. Изменение степени бактериурии в процессе заболевания или лечения = прогностический признак. Для окончательной трактовки результатов микробиологического исследования следует учитывать данные анамнеза, результаты клинического обследования пациента и другие лабораторные анализы. 39

40 ЭТАП III. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИЗОЛЯТОВ К АНТИБИОТИКАМ Кульминацией бактериологического анализа должно быть определение чувствительности изолятов бактерий к антибиотикам. Для этого пользуются несколькими методами: Cерийных разведений Стандартных дисков Диффузионный (Е-тест) 40

41 Метод серийных разведений

42 Метод стандартных дисков Диско-диффузионный метод Окто=диск Диспенсор дисков

44 Интерпретация антибиотикограмм Категория чувствительности микроорганизма Характеристика чувствительности изолята к антибиотику Прогноз применения антибиотика в терапевтических целях Чувствительность Не обладает механизмами резистентности Лечение будет эффективным при использовании обычных доз антибиотика Умеренная чувствительность Субпопуляция, находящаяся между чувствительной и резистентной Лечение будет эффективным при использовании максимальных доз антибиотика или при локализации инфекции в местах аккумуляции антибиотика Резистентность Обладает механизмами резистентности Лечение антибиотиком будет неэффективным

47 Схема диагностики лептоспироза Комплексная диагностика лептоспироза Эпизоотологические и анамнестические данные Результаты клинического исследования Обнаружение возбудителя Бактериоскопия Изоляция на Иммунол. тесты Молек. диагн. (кровь, моча, п/м) питат. средах (РИФ, ИФА, РЛА, РСК) (ПЦР, ДНК-зонд) Результатов серологических исследований Результатов биопробы на лаб. ж-х Изоляты лептоспир серотипируют в реакции агглютинации-лизиса

48 Питательные среды для лептоспир Для изоляции лептоспир применяют среды с 5-10% сыворотки крови кролика или барана (либо сывороточного альбумина) : жидкие (Ногуши-Веньона, Уленгута, Ферворта-Вольфа в модификации Тарасова и др.) = 5-10 дн., культуры бесцветные, опалесцирующие полужидкие (Флетчера и др.) = кольцо помутнения на глубине 1,5-2,0 см; с 1% агара заглубленные колонии с расплывчатыми контурами С 2% агара поверхностные колонии вариабельной прозрачности В качестве селективных факторов в среды добавляют: Фосфомицин + 5-флуорацил Мочевину Соли кобальта Антибиотики (неомицин, рифампицин, фурацилин, фурагин, налидиксовую кту, комбинации рифампицина, полимиксина В, бацитрацина и актидиона)

49 На фоне заболеваний, сопровождающихся снижением иммунитета и повреждениями мочевой системы другими факторами (химическими, уролитами, небактериальными паразитами), инфекции первичных и вторичных уропатогенов могут протекать тяжелее, и даже сомнительные уропатогены могут вызвать значимые поражения мочевыводящих путей. К числу наиболее опасных небактериальных паразитов, локализующихся в мочевой системе относятся нематоды D.renale и C.plica. Секундарные инфекции МС

50 Свайник-великан (D.renale) Свайник-великан в почке Яйца D.renale (овальные с крышечкой на полюсах

51 P EARSONEMA (C APILARIA ) PLICA

52 Широкий спектр уропатогенов, многообразие и неспецифический характер симптоматики, вызываемых ими болезней МС, а также возможность длительного бессимптомного течения этих бактериозов, диктует необходимость подходить творчески к их диагностике. Опыт и знания ветеринарного врача Ключ успеха на этом пути = + Эффективная лаб. диагностика БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ ! Ключ к успеху

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации
ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

от 6 сентября 1994 года N 13-7-2/150

Методические указания по лабораторным исследованиям на трипаносомозы лошадей, верблюдов, ослов, мулов и собак

(с изменениями на 27 января 1997 года)

____________________________________________________________________
Документ с изменениями, внесенными:
письмом Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России от 27 января 1997 года N 13-7-2/838.
____________________________________________________________________

УТВЕРЖДАЮ
Заместитель начальника
Департамента ветеринарии
В.М.Авилов

1.1 Трипаносомозы (су-ауру, случная болезнь) - протозойные болезни животных, протекающие преимущественно хронически.

Су-ауру вызываются Trypanosoma evansi поражает верблюдов, лошадей, ослов, мулов и собак. Заболевание сопровождается анемией, увеличением лимфатических узлов, особенно шейных, отеком головы и нервными явлениями.

Случная болезнь вызывается Trypasoma equiperdum и характеризуется появлением отеков половых органов, язв на коже, парезом и параличом лицевых и крестцовых нервов. Болеют лошади, ослы, мулы.

1.2. Диагноз на трипаносомозы ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований (на случную болезнь - микроскопического, серологического; на су-ауру -микроскопического, биологического, серологического и формалиновой реакции).

1.4. Патологический материал доставляют в лабораторию в термосе со льдом не позднее 4 ч, кровь и сыворотку - не позднее 2 дней с момента взятия.

2.1. При исследовании на месте каплю крови периферических сосудов наносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют в раздавленной капле под средним увеличением микроскопа в затемненном поле зрения.

Пробирки с соскобами, экссудатом и спермой помещают в термостат при 37°С на 15-20 мин. Затем берут 3-4 капли из разных слоев содержимого пробирки и готовят препараты, как указано выше.
(Абзац в редакции, введенной в действие письмом Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России от 27 января 1997 года N 13-7-2/838.

При микроскопии обнаруживают живых трипаносом по колебанию ундулирующей мембраны.

2.2. Из доставленных соскобов, экссудата, спермы, каждого органа делают по 2 тонких мазка и высушивают на воздухе.
(Абзац в редакции, введенной в действие письмом Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России от 27 января 1997 года N 13-7-2/838.

Мазки крови периферических сосудов, из внутренних органов, соскобов экссудата и спермы фиксируют этиловым ректификованным спиртом массовой долей 96% в течение 20-25 мин, окрашивают по Романовскому 30-50 мин (краску Гимза используют в разведении 1:20), промывают дистиллированной или водопроводной водой рН 7,0-7,2 до исчезновения следов краски на фильтровальной бумаге, высушивают и исследуют под иммерсионной системой микроскопа.
(Абзац в редакции, введенной в действие письмом Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России от 27 января 1997 года N 13-7-2/838.

При микроскопии необходимо учитывать, что трипаносомы вызывающие су-ауру и случную болезнь, морфологически не дифференцируются, имеют веретенообразную форму, заостренную с переднего и слегка округленную с заднего конца. Цитоплазма трипаносом окрашивается в синевато-фиолетовый цвет, ядро - в красный, кинетопласт и жгутик - в розовый (интенсивность окрашивания зависит от времени окраски, качества краски).

3.1. Заражение лабораторных животных проводят в случае получения отрицательных результатов микроскопического исследования на су-ауру и наличии клинических признаков у больного животного, а также при необходимости дифференциации су-ауру от случной болезни.

З.2. Для заражения используют нативную, консервированную кровь или суспензию из паренхиматозных органов.

Кусочки органов массой 1,0-1,5 г измельчают и тщательно растирают в стерильной ступке с 1-2 куб.см физиологического раствора. Для заражения суспензию разводят стерильным физиологическим раствором рН 7,0-7,2 в соотношении 1:10.

3.3. Консервированную или нативную кровь вводят подкожно в области спины или внутриутробно в нижней трети живота, суспензию из паренхиматозных органов - подкожно в дозе 0,4 куб.см 3 белым мышам массой 12-15 г.

З.4. Наблюдение за зараженными белыми мышами ведут в течение 10 дней.

3.5. Гибель белых мышей наступает через 3-4 дня. Из паренхиматозных органов павших животных делают тонкие мазки, окрашивают как указано в п.2.2 и исследуют на наличие возбудителя су-ауру, так как возбудитель случной болезни в организме белой мыши не размножается.

При отсутствии гибели зараженных животных в указанные сроки, от них, начиная с 5 дней после заражения, ежедневно исследует кровь, взятую из хвостовой вены, на наличие возбудителя су-ауру в раздавленной капле или окрашенном препарате.

4.1. Исследование сывороток крови лошадей, ослов, мулов и собак проводят в реакции связывания комплемента (РСК), верблюдов - в формалиновой реакции (ФР).

4.2. Постановка реакции связывания комплемента (РСК).

4.2.1. Компоненты реакции и подготовка их к работе.

Компоненты реакции:

- антиген трипаносомный жидкий или лиофилизированный, используют в рабочем разведении, указанном на этикетке;

- комплемент - нативная, консервированная или сухая (изготовленная на биофабрике) сыворотка крови морской свинки. При использовании сухого комплемента содержимое необходимого количества ампул растворяют в физиологическом растворе и сливают в одну пробирку. Полученный раствор комплемента используют для титрования (в разведении 1:20) и главного опыта;

- гемолитическая сыворотка (гемолизин) с титром не ниже 1:1000, которую используют в реакцию в удвоенном титре. Например, при титре гемолизина 1:1000 его берут в реакцию в разведении 1:500. Гемолизин титруют 1 раз в 3 мес по общепринятой схеме:

испытуемая, трипаносомная и нормальная сыворотки, разведенные для главного опыта и титрования комплемента, инактивируют при 60-62 гр.С (сыворотки ослов, мулов - при 64-65 гр.С) - 30 мин;

- 2,5%-ная взвесь эритроцитов барана, отмытых физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500-3000 об/мин в течение 10-15 мин до полной прозрачности надосадочной жидкости.

Перед постановкой реакции готовят разведение каждого компонента в соответствии с указаниями на этикетках и в количестве, необходимом для всего опыта, включая титрование.

В процессе работы не допускается дополнительно разводить компоненты, смешивать их с ранее разведенными и использовать в реакции без титрования.

Физиологический раствор - 0,85%-ный раствор химически чистого хлорида натрия на дистиллированной воде рН 7,0-7,2 готовят в день постановки реакции и кипятят в течение 5 мин.

Гемолитическую систему готовят путем смешивания равных объемов 2,5%-ной взвеси эритроцитов и гемолизина в удвоенном титре, выдерживают ее при комнатной температуре в течение 20-30 мин.

4.2.2. Титрование комплемента в гемолитической системе проводят при получении каждой новой серии сухого комплемента или при использовании нативной сыворотки крови морской свинки.

4.2.3. Титрование комплемента в бактериолитической системе проводят перед каждой постановкой реакции на 3 сыворотках: позитивной (трипаносомной), негативной и одной из опыта. Сыворотки, разведенных физиологическим раствором 1:5, инактивируют, как указано в п.4.2.1, и разливают каждую 2 ряда пробирок штатива Флоринского по 0,2 куб.см. Комплемент титруют в разведении 1:20, начиная о дозы 0,02 куб.см и до 0,2 куб.см с интервалом 0,02 куб.см.

Для более точной дозировки рекомендуется приготовить в дополиительном ряду пробирок необходимые разведения комплемента в 10-кратных объемах и аппаратом Флоринского с пипетками объемом 0,2 куб.см перенести разведения комплимента в ряды с сыворотками для титрования.

Порядок внесения компонентов и режим титрования указаны в таблице 1 на примере негативной сыворотки.

Титром комплемента в бактериолитической системе считают минимальное количество его, вызывающего полный гемолиз эритроцитов в пробирках с негативной и испытуемой сыворотками с антигеном и без антигена, а также с трипаносомной сывороткой без антигена, при полной задержке гемолиза в пробирках с трипаносомной сывороткой и антигеном (в таблице 1 титр равен 0,12).

Для главного опыта берут дозу комплемента, полученную при титровании.

4.2.4. Общее количество комплемента для главного опыта определяют по формуле:

где Х - количество комплемента для главного опыта;

Т - титр комплемента в бактериологической системе;

П - количество пробирок в опыте;

20 - разведение комплемента при титровании.

Например, в опыте 100 пробирок, титр комплемента 0,12, расчет его на опыт:

Необходимое количество разведенного комплемента для реакции равно 20 куб.см (0,2 х 100), следовательно, к 0,6 куб.см основного разведения комплемента нужно добавить 19,4 куб.см физиологического раствора.

4.2.5. Постановка главного опыта.

Реакцию ставят в объеме 1,0 куб.см по 0,2 куб.см каждого компонента.

Испытуемые сыворотки исследуют в разведении 1:5 и 1:10 с антигеном и 1:5 без антигена (контроль). Для этого в первую пробирку вносят 0,1 куб.см сыворотки и добавляют 0,4 куб.см физиологического раствора (разведение 1:5). Из первой пробирки переносят 0,2 куб.см во вторую и 0,1 куб.см - в третью, куда добавляют 0,1 куб.см физиологического раствора (разведение 1:10) и инактивируют как указано в п.4.2.1.

(на примере негативной сыворотки)

Затем в пробирки второго и третьего рядов вносят по 0,2 куб.см трипаносомного антигена в рабочем разведении, в пробирки первого ряда - по 0,2 куб.см физиологического раствора, во все пробирки - по 0,2 куб.см комплемента в установленном титре.

Реакцию помещают в водяную баню на 20 мин при 37-38 гр.С, затем, в каждую пробирку вносят по 0,4 куб.см гемолитической системы и вновь выдерживают в бане при том же режиме.

При массовых исследованиях допускается постановка реакции в одной пробирке с разведением сыворотки 1:5, для чего с 0,05 куб.см сыворотки аппаратом Флоринского вносят 0,2 куб.см физиологического раствора. Все сыворотки, давшие положительный или сомнительный результат, подлежат переисследованию в 3 пробирках, как указано выше.

4.2.6. Контроли главного опыта:

позитивная сыворотка в разведениях от 1:5 до ее предельного титра с антигеном и в разведении 1:5 без антигена, негативная - в тех же разведениях, что и испытуемые;

антиген в двойной дозе без сыворотки (на антикомплементарность);

антиген в двойной дозе без сыворотки и комплемента (на гемотоксичность).

4.2.7. Учет и оценка результатов реакции.

Результаты реакции учитывают дважды, сразу после выдержки в водяной бане и на следующий день при хранения реакции в холодильнике.

Сначала учитывают результаты контролей:

в пробирках с положительной сывороткой и антигеном в контроле на гемотоксичность должна быть полная задержка гемолиза;

в пробирках с негативной сывороткой с антигеном и без антигена, с позитивной сывороткой без антигена и в контроле на антикомплементарность - полный гемолиз.

Степень гемолиза выражают в крестах:

студент, факультет ветеринарной медицины Омский ГАУ имени П.А. Столыпина,

аспирант кафедра диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологи, хирургии и акушерства, Омский ГАУ имени П.А. Столыпина,

В крупных городах нашей страны отмечается непрерывный рост численности собак, которые все более широко используются в различных отраслях и службах. Одновременно нарастает количество бродячих и бездомных животных. Вместе с тем распространяются различного рода заболевания, в том числе инвазионные, которые приводят к снижению полезных качеств и даже гибели собак, имеющих нередко высокую стоимость [1, с. 12].

По местам локализации паразитов, можно выделить следующие группы:

• Наружные паразиты, которые обитают на наружных покровах и коже, а также внутри кожи (насекомые, пиявки, власоеды, блохи, клещи и др.).
• Внутренние паразиты, обитающие во внутренних органах и крови (трематоды, цестоды, нематоды, простейшие и др.). [3, с. 453]

Заражение может происходить несколькими способами: алиментарно, контактно, внутриутробно и через укусы насекомых. Одним из тяжелых заболеваний собак является бабезиоз. [4, с. 40]

Бабезиоз – это сезонное паразитарное заболевание собак, переносимое клещами рода Ixodes. Болеют собаки всех пород не зависимо от возраста и пола. Заражение происходит во время укуса клеща. Пик заболевания приходится на весенне-осенний период – это время максимальной активности клещей [2, с. 20].

Возбудителей бабезиоза у собак много, которых во всем мире принято разделять на 2 группы:

Чаще всего в мазке крови обнаруживают Babesia canis canis (рис. 1), она как и все бабезии размножаются и паразитируют в эритроцитах, имеют парную грушевидную форму [4, с 42].

Рисунок 1. Babesia canis canis в мазке крови собаки

Цикл развития. Промежуточным хозяином являются псовые, а окончательным – клещи. Сам клещ проходит четыре стадии развития: яйцо-личинка-нимфа-имаго. Развитие бабезий происходит в организме клеща путем шизогонии. Шизонты проникают в эпителий кишечника и полость тела. Там они делятся и внедряются в различные органы (слюнные железы, гонады). Далее взрослая особь клеща питается кровью промежуточного хозяина (в данном случае это собака) и в это время происходит половое размножение бабезий в слюнных железах клеща с образованием инвазионной стадии – спорозоита и со слюной попадают в кровь животного. В итоге, заражение промежуточного хозяина происходит не сразу после укуса клеща, а в течение 48-72ч по мере питания кровью [1, с. 18; 2, с 22].

Патогенез данного заболевания имеет 3 этапа: 1. Внутрисосудистый гемолиз, который происходит в результате распада эритроцитов в кровеносном русле по двум причинам: разрушение эритроцитов бабезиями и развитие аутоиммунной гемолитической анемии (как часть процесса уничтожения поврежденных эритроцитов).

2. Внутриклеточный гемолиз характеризуется тем, что эритроциты изымаются из кровотока иммунными клетками, расположенными в селезенке и печени для утилизации. В результате пропадают эритроциты и развивается гипоксия. Встречается у животных, переболевших бабезиозом несколько раз и гериатрических животных.

3. Гипоксия развивается на фоне аутоиммунной гемолитической анемии [4, с. 50; 3, с. 455].

Инкубационный период от двух дней до нескольких недель. Течение заболевания может быть острым и хроническим. При остром течении первыми клиническими признаками является повышение температуры тела до 42°C, собака отказывается от корма, много лежит. Моча приобретает красный оттенок, а по мере прогрессирования заболевания становится темно-бурой. В результате развития аутоиммунной гемолитической анемии, видимые слизистые оболочки анемичны, у животного развивается отдышка. Иногда наблюдается желтушность слизистых оболочек. Это связано с тем, что эритроциты разрушаются и содержащийся в них гемоглобин попадает в сосудистое русло, окрашивая ткани (надпеченочная желтуха). Так как молекула гемоглобина крупная и с током крови проходит через почки, тем самым, забивая проход почечных канальцев, происходит нарушение перфузии почек и у собак развивается острая почечная недостаточность. При нарастании клинических признаков смерть наступает на 3-5 день болезни [2, с 32].

Диагностируют данную патологию в комплексе. В первую очередь необходимо учитывать эпизоотическую ситуацию, собранный анамнез, клиническую картину. Важным этапом диагностики являются лабораторные исследования, так как на их основании устанавливается окончательный диагноз. В лабораторию направляют венозную кровь животного, чтобы провести мазок крови для обнаружения наличия бабезий в эритроцитах, общего анализа крови для выявления анемии и общего биохимического анализа крови для диагностирования почечной недостаточности [2, с. 48].

После того, как в лаборатории подтвердили диагноз нужно приступить к лечебным мероприятиям, которые заключаются в ведении специфических препаратов с параллельным симптоматическим лечением. К таким препаратам относятся 2 группы пироплазмицидов: имидокарб ("Бабезан", "Пиростоп") и диминазен ("Неозидин"). Данные средства воздействуют на бабезий, путем подавления поступления витамин-подобного вещества инозитола, необходимого для жизнедеятельности кровепаразита [1, с 68; 3, с. 457].

При диагностировании анемии у животного применяют синтетический глюкокортикостероидный препарат "Дексаметазон" так как он способен подавлять иммунную систему. При тяжелом течении анемии прибегают к гемотрансфузии. Применения препаратов железа и цианкобаламина в данном случае не оправдано, так как у животного не развивается железодефицитная или пернициозная анемия. Из симптоматической терапии используют противорвотные препараты, также оправдано применение жаропонижающих средств.

Если у животного по биохимическому анализу крови диагностировали острую почечную недостаточность, то назначаются курсом внутривенные инфузии коллоидных растворов, а также парентеральное питание и перевод животного на низкобелковую диету.

Профилактика бабезиоза заключается в регулярной обработке животных специальными акарицидными препаратами в период активности клещей. На сегодняшний день существует три основных метода. Первый – это применение инсектоакарицидных средств. Их ассортимент очень обширен, и включает:

• Капли на холку. Они содержат действующее вещество, которое при нанесении на кожу всасывается и, распределяясь по всей ее площади, отпугивает клещей. Срок действия в среднем 2-3 недели.
• Спреи. Принцип работы такой же, как и у капель, но для хорошей эффективности нужно обрабатывать всю поверхность кожи, а также лежанку питомца. Время действия до 5-ти недель.
• Ошейники. Требуют постоянного ношения, срок защиты 3-5 месяцев.
• Таблетки. Действующее вещество всасывается из желудочно-кишечного тракта и с током крови попадает в кожу. Данный способ является более надежным и обеспечивает защиту животных до 12 недель [4, с. 68].

Ни одно средство не дает 100% защиты. Для повышения эффективности препараты с разным действующее веществом нужно комбинировать.

Второй метод – это вакцинация собак от бабезиоза. Метод основан на введении в организм антигена бабезий, что приводит к формированию иммунитета, и если животное заражается, то болезнь протекает в легкой форме. Данный способ лишь облегчает течение болезни [2].

Третий метод профилактики – введение антипротозойных препаратов на основе имидокарба или диминазина ацетурата. Такой способ профилактики не применяется из-за высокой токсичности препарата и короткого срока защиты – 10-14 дней [4, с. 70].

Список литературы: