Яйца гельминтов и цисты простейших почвы

На территории Пензенской области ежегодно регистрируется до 300 случаев геогельминтозов, заражение которыми передаются через объекты внешней среды почву, воду или растительную, плодово-овощную, ягодную продукцию.

Предупреждение обсеменения почвы возбудителями паразитарных болезней обеспечивается: канализованием населенных пунктов; благоустройством неканализованных населенных пунктов (строительство туалетов с водонепроницаемыми выгребами, биотуалетов, люфт-клозетов); своевременной очисткой выгребных ям, вывозом жидких отбросов; оборудованием выгульных площадок для собак и кошек; и обязательным обеззараживанием материала, используемого для удобрения или орошения почвы.

Для обеззараживания от возбудителей паразитарных болезней (яйца и личинки гельминтов, цисты кишечных патогенных простейших) ограниченных участков почвы огородов, ягодников можно использовать:

• тиозон в дозировке 200 г препарата в 5 л воды на 1 м2 при экспозиции 10 суток. Участок покрывают полиэтиленовой пленкой на 7 - 10 суток;
• 5 % раствор феносмолина: доза - 10 л/м2 при экспозиции до 10 суток;
• поликарбоцин и прометрин.

Поликарбацин - фунгицид, выпускается промышленностью в виде 80% смачивающегося порошка. Применяется как почвенный фунгицид. Он разлагается микроорганизмами до простейших веществ в течение 1 - 6 месяцев.

Прометрин - гербицид широкого спектра действия, выпускается промышленностью в виде 50% смачивающегося порошка. Разрушается в почве в течение 1 - 3 месяцев, не представляя опасности для выращиваемых культур. Наиболее эффективно использование во влажных условиях.

Почву огородов, садов, ягодников, у туалетов, мусорных ям, вдоль заборов обрабатывают поликарбацином при норме расхода 30 - 40 г в 5 л воды на 1 м2. Гибель яиц аскарид на глубине пахотного слоя наступает в течение 1 месяца. Обработку производят одноразово - весной, не позднее чем за 20 суток до посева.

При комбинированном воздействии поликарбацина и ризосферы одного из таких растений как горох, ячмень, просо, овес, пшеница, соя, редис, редька, лук, люпин, бархотцы, календула, полынь - пахотный слой почвы обеззараживается от яиц гельминтов за 3 - 4 месяца. Для этого некоторые огородные и дворовые участки, цветочные клумбы засевают одним из вышеперечисленных растений из расчета 15 - 25 экземпляров на 1 кв.м. и одноразово обрабатывают поликарбацином в дозировке 4 - 5 г в 2 л воды.

На огородных участках возможно производить дезинвазию почвы, используя систему севооборота. Например, вначале участок засевают редисом, редькой, чесноком, луком, по снятию урожая - горохом. Эффект достигается и при одновременном посеве культур. Например, чеснок - редька, лук - редис и т.д. Гибель яиц аскарид происходит в течение двух летних периодов.

Наиболее простым и доступным методом обеззараживания нечистот от возбудителей паразитарных болезней является их компостирование с твердыми бытовыми отходами, торфом, опилками, опавшими листьями и другими влагопоглощающими субстратами в буртах размерами: на территории индивидуальных усадеб - 1,0 м х 1,0 м и произвольной длины. Компостные бурты располагают на расстоянии не ближе 20 м от жилых помещений и колодцев.

Сроки обеззараживания нечистот в компостах зависят от интенсивности биотермических процессов, которые наиболее энергично протекают летом при температуре от 50° до 60°С, влажности 60% и хорошей аэрации компостируемой массы. Последняя достигается благодаря перелопачиванию или при помощи вентиляционных труб, заложенных в бурты.

Обеззараживание содержимого туалетов обеспечивается созданием клозет-компоста, для чего ежемесячно к содержимому выгреба добавляют 1 ведро (15 кг) почвы, обработанной суспензией прометрина из расчета 45 г (3 столовые ложки) в 1 л воды. Гибель яиц аскарид наступает в течение 3-х месяцев.

В последние годы в сельских населенных пунктах, индивидуальных домовладениях, дачных участках, вахтовых поселках, местах отдыха людей получают широкое применение биотуалеты. Принцип действия их основан на компостировании фекальных масс.

Биотуалетная установка снабжена двумя камерами. В камере биоразложения происходит минерализация фекалий при температуре 35 - 40°С. В камере пастеризации обработанные фекалии накапливаются в выдвижном ящике. После его заполнения (1 раз в 3 - 4 месяца) компост подвергается обеззараживанию в течение 6 часов при температуре 70°С, что обеспечивает полную гибель яиц.

Возможно смешивание нечистот с хлорной известью в соотношении 1:5 (40 г извести на 200 г нечистот), что приводит к гибели яиц аскарид в течение 1 часа.

Добавление к фекалиям минеральных удобрений (азотно-кислый аммоний, серно-кислый аммоний, хлористый калий) в количестве 5; 3; 1,0; 0,5; 0,25; 0,1 кг на 1 м3 эффективно в отношении яиц и личинок анкилостомид.

Обработка нечистот 8%-ным раствором карбатиона в соотношении 1:1 обеспечивает полное обеззараживание их от яиц аскарид в течение трех недель, жидким аммиаком в 3 % концентрации при температуре 12 - 17°С - в течение 5 суток, а при 18°С -1 суток, аммиачной водой в концентрации 6,3% при соотношении 1:1 - в течение 10 суток, 0,1%-ным раствором сероуглерода, йодистого и бромистого метила в соотношении 1:1 - в течение 7 - 14 суток, тиозоном в дозах 0,2 - 2% к весу нечистот при температуре 20 - 24°С - в течение 3 - 10 суток.

В настоящее время широкое применение для обеззараживания почвы, сточных вод от яиц геогельминтов получает препарат "БИНГСТИ" (биологический ингибитор-стимулятор), получаемый из проростков картофеля, высушенных при температуре 25°С и перемолотых до размера частиц 0,25 мм.

Максимальная эффективность дезинвазии сточных вод (95 - 100%) наблюдается при разведении препарата "БИНГСТИ" до 10(7) - 10(8) (0,001 мл/л) и экспозиции 8 - 10 часов.

Если у Вас есть дачный участок – используйте для удобрения почвы только обеззараженные нечистоты и навоз. А чтобы не сомневаться в чистоте почвы Вашего участка – проведите лабораторные исследования почвы на наличие яиц гельминтов.

Помните, соблюдение вышеперечисленных методов дезинвазии почвы, нечистот –основное в профилактике геогельминтозов.

Номер патента: 12017

Скачать PDF файл.

Текст

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБЫ ОБНАРУЖЕНИЯ ЛИЧИНОК И ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ,ЦИСТ И ООЦИСТ ПРОСТЕЙШИХ И ПРОСТЕЙШИХ В ПОЧВЕ,СТОЧНЫХ ВОДАХ, ОСАДКАХ СТОЧНЫХ ВОД ИЛИ ИЛОВЫХ ПЛОЩАДОК ИЛИ ДОННЫХ ОТЛОЖЕНИЯХ(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Автор Скрипова Лариса Викторовна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(56) Методические указания по гельминтологическому исследованию объектов внешней среды и санитарным мероприятиям по охране от загрязнения яйцами гельминтов и обезвреживанию от них нечистот, почвы, овощей, ягод,предметов обихода. - М., 1976. -С. 6-7, 11. Экспресс-методы санитарно-паразитологического исследования объектов окружающей среды. Инструкция по применению 65-0605. - Минск, 2005. С. 3-7. Санитарно-паразитологические методы исследования объектов внешней среды на яйца гельминтов и цисты простейших. Методические рекомендации. Минск, 1996. -С. 3-15.1162 2, 2002. ГЕНИС Д.Е. Медицинская паразитология. - М. Медицина, 1979. - С. 245-252. РОМАНЕНКО Н.А. Санитарная гельминтология. - М. Медицина, 1982. С. 72-77, 82-83. ВАСИЛЬКОВА З.Г. Методы гельминтологических исследований. - М. Медгиз, 1955. - С. 150-154.1314268 1, 1987.(57) 1. Способ обнаружения личинок и яиц гельминтов, цист и ооцист простейших и простейших в почве, заключающийся в том, что пробу разбавляют 2,5 -ным раствором стирального порошка или 0,5 -ным раствором жидкого моющего средства в соотношении 14, размешивают, отстаивают в течение 15-20 мин, сливают надосадочную жидкость,добавляют к ней такое же количество дистиллированной воды, центрифугируют, из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. 2. Способ обнаружения личинок и яиц гельминтов, цист и ооцист простейших и простейших в сточных водах, осадках сточных вод или иловых площадок или донных отложениях, заключающийся в том, что осадок, полученный обезвоживанием пробы, разбавляют 2,5 -ным раствором стирального порошка или 0,5 -ным раствором жидкого моющего 12017 1 2009.06.30 средства в соотношении 14, размешивают, отстаивают в течение 15-20 мин, сливают надосадочную жидкость, добавляют к ней такое же количество дистиллированной воды,центрифугируют, из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. Изобретение относится к медицине и может быть использовано в лабораториях учреждений, осуществляющих государственный санитарный надзор и ведомственный контроль качества. Способ обнаружения паразитарных агентов ориентирован на осуществление государственного санитарного надзора производственный лабораторный контроль окружающей среды предупредительный и текущий санитарный надзор оценку эффективности оздоровительных мероприятий в очагах и микроочагах паразитозов. Известны методы гельминтологического исследования почвы, сточных вод, осадков сточных вод, иловых площадок и донных отложений 1. Недостатками методов являются продолжительность времени на исследование(до 1,5 ч) применение способа флотации возбудителей на предметное стекло с дальнейшим его переворачиванием и потерей их низкая (13 ) эффективность обнаружения яиц гельминтов из-за того, что при переворачивании стекла флотированные к нему возбудители с каплей поверхностной пленки стекают обратно в пробирку невозможность обнаружения ооцист и цист простейших. Задачей изобретения является разработка способов обнаружения личинок и яиц гельминтов, цист и ооцист простейших и простейших в почве, сточных водах, осадках сточных вод или иловых площадок или донных отложениях с эффективностью не менее 96 . Технический результат достигается в способе обнаружения личинок и яиц гельминтов, цист и ооцист простейших и простейших в почве, заключающийся в том, что пробу разбавляют 2,5 -ным раствором стирального порошка или 0,5 -ным раствором жидкого моющего средства в соотношении 14, размешивают, отстаивают в течение 15-20 мин,сливают надосадочную жидкость, добавляют к ней такое же количество дистиллированной воды, центрифугируют, из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. Технический результат также достигается в способе обнаружения личинок и яиц гельминтов, цист и ооцист простейших и простейших в сточных водах, осадках сточных вод или иловых площадок или донных отложениях, заключающийся в том, что осадок, полученный обезвоживанием пробы, разбавляют 2,5 -ным раствором стирального порошка или 0,5 -ным раствором жидкого моющего средства в соотношении 14, размешивают,отстаивают в течение 15-20 мин, сливают надосадочную жидкость, добавляют к ней такое же количество дистиллированной воды, центрифугируют, из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. Технический результат выражается в том, что при смешении детергентов - моющих средств и почвы, сточных вод, осадков сточных вод, иловых площадок и донных отложений - происходит отделение личинок, яиц гельминтов и ооцист, цист простейших. В дальнейшем отделенные возбудители флотируются в верхние слои и готовы к дальнейшей обработке. Экспериментально показано, что применение детергентов позволяет обнаруживать в почве, сточных водах, осадках сточных вод, иловых площадках и донных отложениях до 96 личинок, яиц гельминтов и ооцист, цист простейших. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. Пример 1. Почву в количестве 20 г помещают в центрифужную пробирку объемом 100, 250 мл и заливают 2,5 раствором стирального порошка или 0,5 раствором жидкого моющего 2 12017 1 2009.06.30 средства из расчета 14, тщательно размешивают и оставляют на 15-20 мин. Надосадочную жидкость с отделившимися возбудителями сливают в чистую пробирку. Для осаждения возбудителей добавляют такое же количество дистиллированной воды (11), размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 3 мин при 1500 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость сливают, из осадка готовят препараты на предметных стеклах и микроскопируют. Пример 2. Почву в количестве 20 г помещают по 2 г в 10 пробирок объемом 10 мл, заливают 0,5 раствором жидкого моющего средства в количестве по 8 мл, тщательно размешивают и оставляют на 15-20 мин. Надосадочную жидкость с отделившимися возбудителями сливают в чистую пробирку. Для осаждения возбудителей добавляют такое же количество дистиллированной воды (11), размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 3 мин при 1500 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость сливают, из осадка готовят препараты на предметных стеклах и микроскопируют. Пример 3. Пробы неочищенных сточных вод и стоков, прошедших сооружения механической очистки, отстаивают. Через 20 мин осветленную жидкость сливают, а осадок со слоем 2-3 см надосадочной воды переносят в центрифужные пробирки объемом 250 мл и центрифугируют в течение 3-5 мин при 1500 об/мин. После этого надосадочную жидкость сливают. Образовавшийся осадок заливают 0,5 раствором жидкого моющего средства из расчета 14, тщательно размешивают и оставляют на 20 мин. Надосадочную жидкость с отделившимися возбудителями сливают в чистую пробирку. Для осаждения возбудителей добавляют такое же количество дистиллированной воды (11), размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 3 мин при 1500 оборотах в минуту. Пример 4. Осадок сточных вод и иловых площадок по 2 г с 10 точек помещают в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение 3 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают. Полученный осадок, а также доставленные твердые осадки (70 влажности и ниже) смешивают и заливают 0,5 раствором жидкого моющего средства из расчета 14,тщательно размешивают и оставляют на 15-20 мин. Надосадочную жидкость с отделившимися возбудителями сливают в чистую пробирку. Для осаждения возбудителей добавляют такое же количество дистиллированной воды (11), размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 3 мин при 1500 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость сливают, из осадка готовят препараты на предметных стеклах и микроскопируют. Пример 5. В нескольких местах каждого пункта со дна реки или другого водоема берут среднюю пробу донных отложений объемом 20 г и исследуют по методике, предложенной для осадков сточных вод. Преимущества предлагаемого способа применение предлагаемого способа дает возможность обнаруживать в почве, сточных водах, осадках сточных вод, иловых площадках и донных отложениях не только яйца гельминтов, но и ооцисты, цисты простейших за 20-30 мин с эффективностью до 98 исключено применение коагулирования, фильтрования, переворачивания стекол с флотируемыми на них возбудителями, которые в любой момент могут обратно, с тяжелой каплей, упасть в пробирку способ превосходит методически по скорости и удобству, концентрирует другие биологические объекты. Проведенные экспериментальные исследования по обнаружению личинок, яиц гельминтов и ооцист, цист простейших в почве, сточных водах, осадках сточных вод, иловых площадках и донных отложениях показали, что при использовании разработанного способа 3 12017 1 2009.06.30 количество обнаруженных патогенов увеличилось в 3,6 раза, т.е. с 26 до 98 экземпляров. Результаты представлены в таблице. Предлагаемый способ испытан лабораторно и одобрен Министерством здравоохранения Республики Беларусь (2005 г.). Количество экземпляров паразитарных агентов в одной пробе Способ-прототип Предлагаемый способ Паразитарные агенты Почва и осадки с иловых площадок Яйца аскариды Цисты лямблий Сточные воды Яйца аскариды Цисты лямблий Осадки сточных вод и донных отложений Яйца аскарид Цисты лямблий Источники информации 1. Методические указания по гельминтологическому исследованию объектов внешней среды и санитарным мероприятиям по охране от загрязнения яйцами гельминтов и обеззараживанию от них нечистот, почвы, овощей, ягод, предметов обихода. - М., 1976. С. 6-7, 11. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4

МПК / Метки

Код ссылки

Номер патента: 11959

. 1 (1-10), центрифугируют, из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. Технический результат выражается в том, что раствор жидкого моющего, жирорастворимого средства действует в качестве растворителя молочного белка любой жирности,при этом выделившиеся личинки и яйца гельминтов, цисты и ооцисты простейших находятся во взвешенном состоянии, а появившиеся молочные хлопья оседают на дно емкости.

Номер патента: 3731

. пара, содержащий аммиак, двуокись углерода и воду, проходит по трубопроводу 9 и полностью конденсирует в конденсаторе 10. Полученный водный раствор аммиака и двуокиси углерода рециркулирует по трубопроводу 11 в установку для повторного его использования. Часть его может рециркулировать в колонну в виде флегмы. Как вариант способа и в зависимости от состава обрабатываемого выходящего потока и характеристик установки по производству мочевины, с.

Номер патента: 357

. закреплены над аэротенком 1 свободно плавающими. так что при подаче воздуха осуществляется перемещение в виде бокового отклонения цепей азраторов. Плаваю щие цепи азраторов приводят донныеаэраторы в возвратив-поступательное двиЖВНИВ. С ПОМОЩЬЮ которого достигается воздействующая на большие зоны подача КИСЛОПОДЭ И обеспечивается, в ЧЗСТНОСТИ. то. что расположенные вблизи дна аэраторыСТИПСЯ И ОСЕЛ на ДНО аэро-тенка.Установленный в.

Номер патента: 1341

. Для очистки нейтрализованная и обогащенная сточная вода поступает последо вательно в анаэробный и в аэробный биореак торы объемом 2 мз.Селекцшо анаэробной ассоциации микроорганизмов-деструкторов проводят непосредственно в анаэробном биореакторе с укрепленными рамками с насадкой из капроновых нитей. В биореактор подают активный ил и накопительную культуру анаэробных микроорганизмов, полученную из почвы, заливаемой формалином, и.

Номер патента: 10197

. мл 7,5 М азотной кислоты, 100 мл 10 М соляной кислоты, 75 мл 7,5 М азотной кислоты и элюированием 30 мл раствора(0,3 М 30,01). Мишень изготавливают путем добавления к элюату микрограммовых количеств соли церия, переведением его в 4-валентное состояние, нейтрализацией элюата раствором аммиака и фильтрованием осадка через мембранный фильтр. При использовании больших навесок необходима доочистка, которая заключается в испарении элюата.

6.1. Исследование почвы

Подготовка к отбору проб. Отбор проб для паразитологических анализов проводят не менее 1 раза в год для оценки качественного состояния почв естественного и нарушенного сложения.

Для аналогичных исследований почв детских, лечебно-профилактических учреждений и зон отдыха отбор проб проводят не менее 2 раз в год - весной и осенью.

При изучении динамики самоочищения от яиц гельминтов, цист кишечных простейших отбор проб проводят в течение первого месяца еженедельно, а затем ежемесячно в течение вегетационного периода до завершения активной фазы самоочищения.

Для оценки качества по паразитологическим показателям почв сельскохозяйственных угодий, в зависимости от характера источника загрязнения, возделываемой культуры и рельефа местности на каждые 0,5 - 20,0 га территории закладывают не менее 1 пробной площадки размером 10 х 10 м; на территории расположения детских и лечебно-профилактических учреждений, игровых площадок, выгребов, мусорных ящиков и других объектов, занимающих небольшие площади, размер пробной площадки должен быть не более 5 х 5 м.

Отбор проб почвы. Точечные пробы отбирают в соответствии с МУ 2.1.7.730-99 на модельной площадке из одного или нескольких слоев или горизонтов методом конверта, по диагонали или любым другим способом с таким расчетом, чтобы каждая проба представляла собой часть почвы, типичной для генетических горизонтов или слоев данного типа.

Точечные пробы отбирают ножом, совком или шпателем из прикопок или почвенным буром Некрасова. Объединенную пробу составляют путем смешивания точечных проб, отобранных на одной пробной площадке.

Для паразитологического анализа с каждой пробной площадки берут одну объединенную пробу массой 200 г, составленную из 10 точечных проб массой 20 г каждая, отобранных послойно с поверхности и глубины 10 - 20 см. При необходимости отбор проб проводят из более глубоких (40 - 60 см) слоев почвы послойно. Пробы помещают в банки с крышками или пакеты из клеенки, пластика, этикетируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т.д.). Все объединенные пробы должны быть зарегистрированы в журнале, пронумерованы. В процессе транспортирования и хранения почвенных проб должны быть приняты меры по предупреждению возможности их загрязнения.

Паразитологический анализ проб почвы проводят в день доставки их в лабораторию. При невозможности немедленного проведения исследований пробы почвы хранят в холодильнике при температуре до 5 °С. Для исследования на цисты кишечных патогенных простейших почву без обработки хранят не более 2 суток; на яйца биогельминтов - до 7 суток, а на яйца геогельминтов - не более 1 месяца.

Для предотвращения высыхания и развития личинок в яйцах геогельминтов почву увлажняют и аэрируют один раз в неделю, для чего пробы вынимают из холодильника и оставляют на 3 часа при комнатной температуре, увлажняют водой по мере потери влаги и снова помещают для хранения в холодильник. При необходимости хранения проб почвы более месяца применяют консервирующие средства: почву пересыпают в кристаллизатор, заливают раствором формалина с массовой долей 3%, приготовленным на изотоническом растворе натрия хлористого с массовой долей 0,85% (жидкость Барбагалло), или раствором соляной кислоты с массовой долей 3%, а затем ставят в холодильник.

Подготовка проб почвы к анализу. Пробы почвы в лаборатории рассыпают на бумаге или кальке и разминают пестиком крупные комки. Затем из нее выбирают корни растений, камни, насекомых, стекло, уголь, кости животных, друзы гипса, известковые журавчики и др.

Затем почву переносят в ступку, растирают пестиком и просеивают через сито с ячейками диаметром 1 мм.

ПОПРАВОЧНЫЕ КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИСТИННОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ПОЧВ ЯЙЦАМИ АСКАРИД И ВЛАСОГЛАВОВ

Тип почвы	Яйца геогельминтов
	аскарид	власоглавов
Дерново-подзолистая (супесь)	1,23	1,43
Дерново-подзолистая (суглинок)	1,45	1,50
Торфяно-глоевые	1,84	2,40
Чернозем обыкновенный	1,60	1,85
Чернозем типичный	1,70	2,30
Чернозем выщелоченный	1,43	2,10
Чернозем каштановый (супесь)	1,28	1,95
Чернозем каштановый (суглинок)	1,64	2,15
Аллювиально-лугово-лесная	1,37	1,65
Сероземы	1,39	1,60
Черноземная лесная коричневая	1,49	1,71
Горная лесная бурая	1,54	1,72
Желтоземы	1,79	1,94

Для обнаружения в почве яиц гельминтов, имеющих более высокую плотность (яйца описторхисов, клонорхисов), чем яйца аскарид и власоглавов, следует использовать насыщенный раствор хлорида цинка (плотность 1,78); яйца токсокар лучше выявляются при обработке почвы насыщенным раствором сульфата цинка или сульфата магния в смеси с 5%-ным раствором йодата калия.

Примечание. При работе по данной методике необходимо строго соблюдать следующие требования:

1. Обязательность применения обезжиренных предметных стекол.

2. Обязательность контроля плотности насыщенного раствора с помощью ареометра (плотность должна быть не ниже 1,38 - 1,40).

В случае нарушения указанных требований в первом случае поверхностная пленка с яйцами гельминтов не прилипнет к стеклу, во втором случае скорость всплывания яиц гельминтов замедлится и в указанные сроки они не достигнут поверхностной пленки.

Для эффективного использования рабочего времени исследователя рекомендуется: во время первого отстаивания смеси "почва с щелочью" проводить подготовку предметных и покровных стекол, запись в журнале; во время второго - "почвы с насыщенным раствором соли" - подготовку рабочего места для микроскопирования, уборку центрифуги и другого лабораторного оборудования.

После окончания проведения анализов использованную посуду (центрифужные пробирки, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки) замачивают в стиральном порошке и кипятят 15 - 20 минут, затем моют в чистой воде.

Пробирки хранят в штативах, предметные и покровные стекла в широкогорлых банках с пробками, заполненных смесью Никифорова или нашатырным спиртом. Перед использованием предметные и покровные стекла не вытирают, а подсушивают.

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 20 г почвы и помещают на металлическую сетку (или ситечко для молока), которую устанавливают в аппарат Бермана. Последний представляет собой стеклянную воронку (диаметром 10 - 15 см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой пробиркой. Систему устанавливают в штатив, наполняют теплой (температура 45 - 50 °С) водой, а затем металлическую сетку с почвой помещают в воронку так, чтобы нижняя часть ее соприкасалась с водой.

Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 °С. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в теплую воду и оседают на дно пробирки. Через 3 - 4 часа осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. Но лучше содержимое пробирки центрифугировать, а после этого исследовать осадок.

В химический стаканчик помещают 10 г почвы, заливают теплым (40 °С) физраствором так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 минут жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под бинокулярным микроскопом МБС. По эффективности метод Супряги не уступает методу Бермана.

Для отличия личинок свободноживущих нематод от паразитических применяют метод Корта. Принцип его заключается в воздействии на личинок нематод формалином. При этом личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки помещают в воду в чашку Петри или на часовое стекло. При добавлении 40%-ного раствора формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1:5 личинки свободноживущих нематод гибнут через 5 - 8 минут, а паразитические - остаются живыми в течение 15 - 20 минут, но подвижность их замедляется; при добавлении формалина в соотношении 1:25 первые гибнут через 12 минут, тогда как вторые в 95% случаев остаются нормально подвижны.

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 25 г почвы, помещают в фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный на 3/4 объема чистой водой. Смесь размешивают стеклянной палочкой и отстаивают в течение 15 минут. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей, а жидкую часть ее отсасывают сифоном в чистый цилиндр. Осадок повторно промывают (не менее 3 раз), собирая промывные воды в одном цилиндре. Промывные воды отстаивают, через 24 часа надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок исследуют в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах. С этой целью осадок тщательно встряхивают и одну каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом. Микроскопируют не менее 1 мл осадка с последующим пересчетом на его общий объем. Анализ осадка проводят в течение первых 2 - 3 суток после его получения.

Для того, чтобы осадок длительное время оставался пригодным к исследованию (до 2 месяцев), к нему добавляют консервант, содержащий мертиолят, 40%-ный раствор формалина, спирт этиловый 96° и физиологический раствор (соотношение компонентов в %: мертиолят - 0,0016 - 0,0018, 40%-ный формалин - 4,1 - 4,4; спирт этиловый 96° - 10,4 - 10,9; физиологический раствор - остальное). Консервант добавляют к осадку в соотношении 1:2 и хранят в холодильнике.

Для приготовления мазков каплю исследованной смеси осадка с консервантом после встряхивания наносят пипеткой на предметное стекло, смешивают ее с каплей акридинового оранжевого, разведенного 1:500, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом, подсчитывают число неокрашенных (живых) и окрашенных (мертвых и дегенерирующих) цист кишечных простейших каждого вида. При изучении исследуемого материала под световым микроскопом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а дегенерирующие и мертвые цисты окрашиваются в желтый цвет. Погибшие цисты под люминесцентным микроскопом красные.