Яйца гельминтов и колифаги

Вода – необходимая составляющая для функционирования всех живых систем. Известно, что ежедневно человек в среднем потребляет до 2,5 литров воды. Однако помимо наличия в ней полезных элементов, таких как кальций, магний и калий, в ее составе могут содержаться и вредные для человека вещества – в их числе нитраты, нитриты и кадмий. Нередко в воде также встречаются различные бактерии и микроорганизмы, которые могут оказывать негативное влияние на работу органов.

Характеристики жидкости напрямую влияют на качество и продолжительность жизни. В связи с этим столь важно регулярно тестировать воду на наличие вредоносных паразитов, устанавливая жесткий контроль водоисточников. Далеко не все источники на данный момент соответствуют установленным санитарными службами требованиям и нормам. Для обеспечения надлежащей обработки и достижения соответствующего качества воды проводится комплекс санитарно-микробиологических исследований, в число которых входит проверка на паразитологические показатели.

Паразитологические показатели в воде

Для определения и последующей идентификации микроорганизмов, относящихся к патогенным, используется особая методика, которая позволяет обнаружить искомые бактерии, снизив затраты на использование сложного оборудования и большого количества реагентов. С практической точки зрения более эффективным будет тест, направленный на поиск индикаторных организмов. Дальнейшее наблюдение за ними позволит установить уровень микробиологического загрязнения воды.

Индикаторами могут выступать несколько видов бактерий и микроорганизмов:

1. ОМЧ (общее микробное число). В данном случае в виде критерия используются бактерии, образующие колонии в 1 мл воды. Демонстрация высокого числа указывает на общую бактериологическую загрязненность воды и высокую вероятность наличия патогенных организмов. Согласно СанПиН, данное значение устанавливается на уровне 50 CFU.
2. Колиформные бактерии. Это популярные индикаторы качества питьевой воды – в случае, если при исследованиях они не обнаруживаются, повода для беспокойства в большинстве случаев нет. Иначе могут появиться вопросы к недостаточно качественной очистке воды или вторичном загрязнении.
3. Термотолерантные колиформные микроорганизмы. Данная группа колиформов способна ферментировать лактозу при температуре 44-45 C. Они легче поддаются обнаружению и играют важную роль при оценке работы очистных систем, которые предназначены для борьбы с фекальными бактериями. При этом E.Coli служит более точным индикатором, поскольку источником появления ряда других колиформ могут быть не только фекальные воды.
4. Фекальные стрептококки. Учитывая, что данные микроорганизмы размножаются в загрязненной воде нечасто, их можно использовать при анализе качества воды с точки зрения оценки эффективности систем очистки.
5. Колифаги. Данная разновидность батериофагов, которые являются вирусами бактерий и вызывают их гибель, живет в колиформных бактериях. Они являются индикаторами качества воды, так как схожи с кишечными вирусами и без труда обнаруживаются.
6. Сульфитредуцирующие клостридии. Споры данных микроорганизмов могут существовать в воде намного дольше, чем колиформы, а также отличаются большей устойчивостью к обеззараживанию. По этой причине наличие данных бактерий может напрямую указать на недостаточное качество воды.
7. Лямблии. Данные простейшие микроорганизмы могут существовать в двух формах, не зависящих друг от других – это цисты и трофозоиты. Если первые статичны, то вторые свободно живут и перемещаются. Лямблии отличаются устойчивостью к воздействию кислот, щелочей, хлорсодержащих веществ. Отсутствие в воде цист указывает на то, что вода очищена от целого ряда простейших, среди которых покоящиеся стадии, амебы и энтеровирусы.

Санитарно-паразитологические исследования

Любые процедуры, связанные с определением паразитологических и микробиологических показателей, производятся в строгом соответствии с действующими требованиями и нормами СанПиН. По этой причине, в зависимости от источника, методика исследований может иметь свою специфику. Если отбор образцов производится из поверхностных водоемов, применяются решения, которые ориентированы на выявление цист простейших кишечных патогенов и яиц гельминтов, угрожающих не только здоровью, но и жизни человека.

Используемое оборудование при тестировании проб воды

Для выполнения паразитологического анализа чаще всего применяются аппараты напорного и вакуумного фильтрования. С их помощью осуществляется накопление осадка и выделение патогенных микроорганизмов в продукте. После этого тестируемая проба отправляется на фильтрацию через мембранный фильтр. После завершения данной процедуры из прибора убирается фильтр, с которого смывается собравшийся осадок. В некоторых случаях можно сразу приступать к микроскопированию.

Паразитологические показатели почвы

Процедура проведения анализа на паразитологические показатели почвы отличается от процедур, выполняемых в случае с водой. Чтобы оценить состояние почв естественного и нарушенного сложения, проведение анализов нужно осуществлять не реже одного раза в год. В случае с почвами, расположенными на территории дошкольных, образовательных учреждений, лечебных организаций, а также зон отдыха, исследования проводятся чаще – два раза в год.

Отбор проб производится точечно, то есть образец берется с каждого слоя. Процедура осуществляется с помощью ножа, совка, шпателя из прикопок или почвенного бура Некрасова. Проба составляется объединением точечных проб, которые были отобраны с одной площадки. В ряде случаев забор образцов может проводиться из более глубоких слоев. Во время транспортировки образца в лабораторию важно обеспечивать защиту от загрязнения.

Для обеспечения точного результата, паразитологический анализ рекомендуется осуществлять в день доставки. Если это по каким-то причинам невозможно, образец можно поместить в холодильник и держать при температуре не больше 5 °C. Длительность хранения зависит от типа искомых микроорганизмов. Так, для выявления цист нельзя хранить почву без дополнительной обработки дольше 48 часов.

Радиологические исследования почв и грунтов

Определение тяжелых металлов в почвах и грунтах

Лаборатория НОРТЕСТ получила Лицензию Федеральной службы по гидромеотерологии и мониторингу окружающей среды

Исследование, направленное на выявление паразитов, обитающих в нижних отделах желудочно-кишечного тракта, с помощью системы Parasep, предназначенной для концентрирования яиц и личинок гельминтов, цист и ооцист простейших.

Анализ кала методом Parasep, анализ кала на простейшие, исследование кала на простейшие и яйца гельминтов, парасеп

Амебиаз, амебиаз кишечника, кишечная амеба, энтамеба коли

Балантидий, кишечный балантидиаз, инфузорная дизентерия, балантидиоз

Бластоцисты, бластоциста хомини, бластоцитоз

Карликовая амеба, эндолимакс нана, непатогенная амеба, амебиаз

Карликовый цепень, крысиный цепень, гименолепидоз, гименолепис нана

Ланцетовидная двуустка, ланцетовидный сосальщик

Лямблии интестиналис, лямблии, кишечные лямблии, ляблиоз

Описторхис фелинеус, кошачья двуустка

Печёночная двуустка, печёночная фасциола, обыкновенная фасциола

Тениаты, тениид, тениидоз, тениоз, цепень свиной

Томинксоз (эуколеоз), томинкс, нитевидные нематоды

Трихуроз (трихоцефалез), власоглав

Шистосома гематобиум, бильгарциоз, урогенитальный (мочеполовой) шистосомоз

Шистосома мансони, кишечный шистосомоз

Шистосома японикум, японский шистосомоз, японский сосальщик, кровяной сосальщик

Энтамеба хистолитика, дизентерийная амеба, амебиаз, амебная дизентерия, амебный колит

Parasep - сендиментационный эфир-формалиновый метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Кишечные паразитические инфекции распространены по всему миру и являются частой причиной нарушений функций пищеварительного тракта, аллергических заболеваний, а также общесоматических расстройств. Существует несколько сотен видов паразитов, которые могут быть причиной болезни у человека. Наиболее часто кишечные паразитические инфекции вызывают такие гельминты, как аскариды, анкилостомы, острицы, бычьи и свиные цепни, трихинеллы, а также простейшие – лямблии, амебы. Заражение возможно при несоблюдении санитарно-гигиеничных норм, плохой очистке питьевой воды, употреблении немытых овощей и фруктов, недостаточной термической обработке мяса и рыбы. Клинические проявления кишечного паразитоза варьируются от бессимптомного носительства до тяжелой диареи, интенсивных болей в животе, признаков нарушения питания и всасывания питательных веществ, тяжелой анемии.

Основным диагностическим методом, который позволяет выявить яйца гельминтов и цист простейших и подтвердить клинический диагноз, является световая микроскопия кала. Однако чувствительность метода прямой микроскопии в диагностике гельминтозов недостаточно высока в связи с возможной невысокой концентрацией паразитов в материале, непостоянным их выделением из организма. Для увеличения чувствительности исследования применяются концентрационные методы. Ранее применяемые открытые методы обогащения фекального материала являлись достаточно трудоемкими и небезопасными для лабораторного персонала. Исследования с помощью современных закрытых концентрационных систем, среди которых Parasep, – быстрые и надежные способы обнаружения кишечных паразитов в кале.

Концентрационная тест-система Parasep представляет собой более новую модификацию замкнутой системы обогащения, которая может быть легко принята и исследована в любой обычной микробиологической лаборатории. При использовании данного метода материал помещается в трубку тест-системы Parasep с добавлением специальных растворов, центрифугируется, что позволяет за счет разницы в удельном весе различных частиц, в том числе яиц и цист, выделить из субстрата и накопить их в одном слое, а затем исследовать с помощью микроскопии.

Однако в связи с непостоянным выделением яиц гельминтов и цист простейших при отрицательном результате любого микроскопического анализа кала и сохраняющихся клинических симптомах могут потребоваться повторные исследования кала с интервалом в несколько дней.

Для чего используется исследование?

• Диагностика кишечных паразитарных инфекций, а также бессимптомного носительства;
• оценка эффективности проведенного противопаразитарного лечения.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на наличие кишечной паразитарной инфекции;
• при диарее, наличии слизи и крови в стуле, боли в животе, тошноте, зуде и высыпаниях на коже по типу крапивницы, повышении температуры, снижении веса, анемии, общей слабости;
• при обследовании людей, прибывших из эндемичной зоны по некоторым гельминтозам;
• при плановом диспансерном обследовании, при прохождении медицинской комиссии (например, для работы, поступления в детский сад, перед плановой госпитализацией).
• после проведенного курса противопаразитарной терапии.

Гельминтозам, то есть заболеваниям, вызванным паразитами, подвержено более половины населения планеты. Многие люди годами не знают о том, что их тело пожирает изнутри один из четырехсот видов червей. В процессе своей жизнедеятельности глисты способны повреждать жизненно важные органы хозяина, лишая его трудоспособности и даже приводя к летальному исходу. Мы поговорим о том, как распознать наличие паразитов в организме, где и как сдать анализы на глисты, а также расскажем о том, какие исследования наиболее эффективны для выявления распространенных видов гельминтов.

Показания к назначению анализов на глисты

Чаще всего заражение гельминтами происходит во время приема пищи. Немытые овощи и фрукты, прикосновение к еде грязными руками, плохо очищенная вода, недостаточная тепловая обработка рыбы и мяса — все это становится причиной появления в организме паразитов. Яйца гельминтов также передаются через постельное и нижнее белье. Наличие в доме домашних животных требует строгого соблюдения правил гигиены: кошки и собаки часто являются переносчиками гельминтов, и, погладив питомца, подошедшего к вам во время ужина, можно стать носителем паразитов.

Для своевременного выявления и уничтожения гельминтов необходимо проходить исследования, обнаруживающие наличие паразитов в организме. Обычно для этого достаточно несложного и безболезненного анализа.

Анализы на глисты, в зависимости от причин назначения, условно разделяют на следующие виды:

• Профилактические — проводимые с целью своевременно обнаружить наличие паразитов, даже при отсутствии симптомов. Процедуру проходят как по собственной инициативе, так и в рамках диспансеризации. Рекомендуемая частота — не менее одного раза в год.
• Барьерные — предупреждают распространение болезни среди групп населения. Так, при поступлении ребенка в детсад или бассейн, ему понадобится справка, включающая сведения об отсутствии гельминтов. Работникам в сфере продажи и производства продуктов питания необходимо сдавать анализы на глисты ежегодно при оформлении медкнижки. Как и в случае профилактических анализов, обследование обычно заключается в лабораторном исследовании кала.
• По назначению врача — при обращении в клинику с такими симптомами, как потеря веса, зуд в области анального отверстия, боли в животе, тошнота, рвота, повышенная утомляемость, или при появлении заболеваний, часто вызываемых паразитами, больному назначают анализ кала на яйца гельминтов, а также исследование крови на антитела. В этих случаях обследование проводят более тщательно, при сомнениях в достоверности результатов анализы назначают повторно.

Регулярная проверка всех членов семьи на наличие глистов является важной частью сохранения здоровья. Особенно это важно, если присутствуют факторы риска: наличие в доме детей и животных, занятие садоводством, купание в природных водоемах, питье воды из родников, скважин и колодцев, употребление в пищу продуктов без надлежащей термической обработки (стейки с кровью, сало, суши, строганина и т. п.). Последствия несвоевременного обнаружения наличия гельминтов в организме могут быть очень тяжелыми: некоторые виды этих паразитов повреждают стенки кишечника, вызывая сепсис, становятся причиной нарушения работы ЦНС и разрушают внутренние органы.

Существует несколько видов анализов, которые позволяют достоверно выявить наличие или отсутствие паразитов в организме: анализ кала на яйца гельминтов, соскоб, анализ крови на антитела. Также свидетельствовать о наличии гельминтов могут показатели общего исследования крови — у больного повышен гемоглобин и СОЭ.

Этот вид анализа является самым популярным способом определить наличие глистов (паразитов всех видов) в организме. При исследовании фекалий специалист видит не самих паразитов, а лишь яйца гельминтов.

В целом сдача анализа кала на яйца глистов не требует особой предварительной подготовки. Единственное ограничение: перед ним не рекомендуется принимать противопаразитарные препараты, антибиотики, лекарства от диареи. Специальную стерильную емкость для биоматериала можно взять заранее в лаборатории, поликлинике или обычной аптеке. Сразу после дефекации кал собирают в баночку, которую необходимо немедленно передать на обследование либо сохранять в холодильнике не более 8-ми часов.

При хорошем результате анализа (в норме яйца глистов не должны быть обнаружены в кале) лучше сдать пробу еще дважды в другие дни. Точность первого исследования для многих паразитов составляет всего 50%, в то время как трижды полученный одинаковый результат свидетельствует о 99% отсутствии гельминтов.

Несмотря на свою простоту и популярность, анализ кала уступает в своей информативности более современному методу — исследованию крови на антитела. Ниже мы рассмотрим, какими способами эффективнее распознать наличие самых распространенных видов паразитов.

Энтеробиоз занимает лидирующее по распространенности положение среди гельминтозов. Его вызывают острицы — небольшие белые черви. Заболевание особенно часто встречается у детей дошкольного и младшего школьного возраста. Основным симптомом является сильный зуд в области анального отверстия, особенно в вечернее и ночное время.

Наиболее эффективен для выявления аскарид в организме анализ крови на антитела. Он не требует особой подготовки, однако желательно воздерживаться от приема пищи в течение четырех часов до анализа.

Описторхоз вызывают плоские черви — кошачья двуустка. Болезнь имеет выраженное местное распространение: основная масса пациентов проживает в России и странах СНГ. Заболеть описторхозом можно при употреблении в пищу зараженной рыбы, которая является промежуточным хозяином паразита. Черви развиваются в желчных путях и протоках поджелудочной железы, вызывая инфекции, аллергические реакции, заболевания печени, боли в боку и повышение температуры. Отсутствие своевременного лечения может привести к поражению центральной нервной системы, хроническому гастриту, язве желудка и двенадцатиперстной кишки.

Наиболее эффективным для выявления кошачьей двуустки является анализ крови на специфические IgG-антитела. Достоверный результат можно получить при проведении исследования в период с шестой–восьмой недели после инфицирования. При переходе в хроническую стадию показатели могут прийти в норму, в этом случае определить описторхоз данным методом не получится.

Трихинеллез вызывают трихинеллы — гельминты, попадающие в организм человека с зараженным мясом и салом. Продукты в крупных магазинах обязательно проходят проверку на наличие паразита, поэтому жертвой трихинелл обычно становятся частные фермеры, охотники и люди, покупающие мясо в непроверенных местах. Яйца этого паразита не способна уничтожить обычная тепловая обработка, не помогает и соление, копчение. Для заражения достаточно одного небольшого кусочка.

Симптомами заболевания в первые две–три недели являются аллергические реакции организма, тошнота, понос, рвота. Затем возникает заболевание органа, в котором развились глисты: паразиты могут выбрать любой участок тела и разрушать его в течение долгих лет. В конечном итоге трихинеллез может привести к смерти больного или к необратимым нарушениям в работе организма.

При подозрении на наличие трихинелл больного направляют на анализ крови на специфические антитела. При отрицательном результате и продолжающихся симптомах рекомендуют пройти повторное обследование через пару недель: на ранних стадиях заболевание может не выявляться, высокую точность дает исследование крови со второй–четвертой недели после инфицирования.

Стронгилоидоз вызывают белые черви под названием угрица кишечная. Обитает этот паразит преимущественно в местах с тропическим климатом, очень часто от поражения им страдают садоводы и фермеры. Гельминт может проникнуть в тело человека при любом контакте открытой кожи с землей, например, при ходьбе босиком или при прополке грядки.

Попадая в организм, угрица оставляет на коже красный след, сохраняющийся до нескольких дней и вызывающий сильный зуд. Последующие симптомы могут быть как классическими (зуд в районе ануса, понос, рвота, боли в животе), так и совершенно невыраженными. Паразит может жить в теле хозяина долгие годы, не причиняя сильных неудобств. Однако при ослабленном иммунитете стронгилоидоз приводит к смерти больного более чем в половине случаев.

Для выявления стронгилоидоза эффективен анализ кала: при исследовании фекалий заметны не яйца глистов, а личинки. Анализ крови на антитела, впрочем, дает более точные результаты — до 85%.

Гельминтозы — опасные для здоровья и жизни паразитарные заболевания, способные привести к инвалидности или даже смерти. Своевременное обращение к врачу и последующее лечение являются залогом того, что пациент избежит возможных осложнений. Анализы на глисты необходимо сдавать не менее раза в год и только в современной лаборатории, где применяются наиболее эффективные методы исследований.

Бесплатная горячая линия юридической помощи

• Главная
• "САНИТАРНО - МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.1018-01." (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 08.02.2001)

8.5. Определение колифагов

8.5.1. Определение понятия показателя

Колифаги - бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при температуре 37 +/- 1 °С через 18 +/- 2 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питательном агаре.

8.5.2. Титрационный метод определения колифагов

8.5.2.1. Принцип метода

Определение колифагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении колифагов в среде обогащения на культуре E.coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E.coli на питательном агаре.

8.5.2.2. Область применения

Метод предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды.

8.5.2.3. Подготовка тест-культуры E.coli К12 Str.R.

На всех этапах исследования используют бактериальную взвесь, приготовленную следующим образом: культуру E.coli засевают в пробирку со скошенным питательным агаром со стрептомицином (п. 5.3.5). Через 18 +/- 2 ч инкубации при температуре 37 +/- 1 °C произвести смыв бактерий с косяка 5 мл стерильного физиологического раствора (0,85%-ный раствор NaCl) и по стандарту мутности готовят взвесь E.coli в концентрации 10 в ст.9 бактериальных клеток в 1 мл.

Допускается использование 4-часовой бульонной культуры E.coli, полученной путем подращивания в термостате при температуре 37 °C. Концентрация 10 в ст.9 бактериальных клеток E.coli содержится в 2 мл.

8.5.2.4. Проведение качественного анализа

В исследуемую пробу воды объемом 100 мл вносят 10 мл 10-кратного питательного бульона (приготовленного по п. 5.2.2) и 1 мл подготовленного смыва тест-культуры или 2 мл 4-часовой бульонной культуры (п. 8.5.2.3).

Для контроля культуры 0,1 мл смыва бактерий E.coli (или 0,2 мл 4-часовой бульонной культуры) помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

Исследуемую пробу воды (100 мл) и чашку Петри с контролем E.coli помещают в термостат и инкубируют при температуре 37 +/- 1 °C в течение 18 +/- 2 ч.

После инкубации из исследуемой пробы воды отливают в пробирку 10 мл и добавляют 1 мл хлороформа.

Пробирку закрывают стерильной резиновой или силиконовой пробкой, энергично встряхивают для равномерного распределения хлороформа по объему пробы и оставляют при комнатной температуре не менее 15 мин. до полного осаждения хлороформа.

В предварительно расплавленный и остуженный до 45 - 49 °C питательный агар добавляют приготовленный смыв бактерий E.coli (п. 8.5.2.3) из расчета 1,0 мл смыва (или 2 мл 4-часовой бульонной культуры) на 100 мл агара.

В стерильную чашку Петри пипеткой из пробирки переносят 1 мл обработанной хлороформом пробы (не касаясь хлороформа) и заливают смесью расплавленного и остуженного до 45 - 49 °C питательного агара объемом 12 - 15 мл, а также одну дополнительную чашку Петри для контроля культуры E.coli и осторожно покачивают для равномерного перемешивания пробы воды и агара. Для полного застывания чашки оставляют на столе при комнатной температуре на 10 мин. После застывания чашки переворачивают и помещают в термостат на 18 +/- 2 ч при 37 °C.

При выполнении серии проб ставится общий контроль для всей серии.

Просмотр посевов осуществляют в проходящем свете.

Проба считается положительной при наличии полного лизиса, просветления нескольких бляшек, одной бляшки на чашке с пробой воды при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке.

В протоколе анализа отмечается: колифаги обнаружены или не обнаружены в 100 мл воды (результат качественный).

При наличии зон лизиса в контроле культуры результат считается недействительным.

8.5.2.5. Проведение количественного анализа

Исследуемую пробу воды в количестве 100 мл разлить на 6 объемов: 1 флакон 50 мл и 5 пробирок по 10 мл. В 50 мл пробы добавить 5 мл десятикратного питательного бульона (по п. 5.2.2) и 0,5 мл смыва (или 1 мл 4-часовой бульонной культуры) бактерий E.coli (п. 8.5.2.3). В каждые 10 мл пробы внести по 1 мл десятикратного питательного бульона и 0,1 мл смыва (или 0,2 мл 4-часовой бульонной культуры) бактерий E.coli.

Для контроля культуры 0,1 мл смыва бактерий (или 0,2 мл 4-часовой бульонной культуры) E.coli помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

Посевы инкубируют при температуре 37 +/- 1 °C в течение 18 +/2 ч.

После инкубации из объема 50 мл отлить в пробирку 10 мл. Во все исследуемые 6 объемов добавить по 1 мл хлороформа. Пробирки закрыть стерильными резиновыми или силиконовыми пробками, энергично встряхнуть для равномерного распределения хлороформа по объему пробы и оставить при комнатной температуре не менее 15 мин. для осаждения хлороформа.

В предварительно расплавленный и остуженный до 45 - 49 °C питательный агар добавить приготовленный смыв бактерий E.coli (п. 8.5.2.3) из расчета 1,0 мл смыва (или 2 мл 4-часовой бульонной культуры) на 100 мл агара. Приготовленную смесь разлить в чашки Петри: 1 чашку для контроля культуры E.coli на лизогенность и по одной чашке на каждую исследуемую пробу воды. При одновременном анализе нескольких проб воды ставится один контроль культуры E.coli.

После застывания агара чашки, предназначенные для посева проб, разделить на 6 секторов, промаркировать их в соответствии с исследуемыми объемами. На каждый сектор из соответствующей пробирки нанести пастеровской пипеткой (микропипеткой или бактериологической петлей продольным штрихом) по 1 капле надосадочной жидкости (без хлороформа).

После подсыхания капель чашки с исследуемыми пробами и контрольную чашку поместить в термостат при 37 +/- 1 °C на 18 +/2 ч.

Просмотр результатов осуществляется в проходящем свете.

Учет проводится по наличию зон просветления (лизиса) на секторах газона E.coli.

При применении капельного способа посева пипеткой образуется зона лизиса в виде округлого пятна или отдельных бляшек. При посеве продольным штрихом бактериологической петлей отмечается лизис по ходу штриха.

Проба считается положительной при наличии зоны лизиса хотя бы на одном секторе при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке.

Оценка проводится по таблице наиболее вероятного числа (НВЧ) бляшкообразующих единиц (БОЕ) (табл. 1.2). В протоколе анализа указывается наиболее вероятное количество колифагов в 100 мл воды и диапазон возможных колебаний: НВЧ БОЕ (нижний предел - верхний предел) колифагов в 100 мл. Результат полуколичественный.

При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат считать недействительным.

8.5.3. Прямой метод определения колифагов

8.5.3.1. Принцип метода

Определение колифагов в питьевой воде заключается в исследовании нормируемого объема воды (100 мл) путем его прямого посева и последующего учета зон лизиса (бляшек) на газоне E.coli в чашках Петри с питательным агаром.

8.5.3.2. Область определения

Прямой метод выделения колифагов из воды проводят параллельно с титрационным при исследованиях по эпидемическим показаниям.

8.5.3.3. Проведение анализа

В питательный агар двойной концентрации (п. 5.3.2), расплавленный и остуженный до 45 - 49 °C, добавить смыв E.coli (п. 8.5.2.3) из расчета 2,0 мл смыва (или 4 мл 4-часовой бульонной культуры) на каждые 100 мл агара, перемешать. Исследуемые 100 мл воды разлить по 20 мл в большие пробирки, нагреть до 35 - 44 °C и немедленно (не более чем через 5 мин. по достижении требуемой температуры) разлить в 5 чашек Петри и сразу же внести в каждую чашку по 20 мл смеси агара с культурой E.coli.

Для контроля культуры E.coli в одну чашку Петри внести 20 мл стерильной водопроводной воды, предварительно прогретой до 35 - 44 °C, залить 20 мл приготовленного агара с E.coli и осторожно перемешать.

Содержимое чашек осторожно перемешать и оставить при комнатной температуре до застывания. Чашки с застывшим агаром поместить дном вверх в термостат и инкубировать при температуре 37 +/- 1 °C в течение 18 +/- 2 ч.

Просмотр посевов осуществляется в проходящем свете.

Учет результатов проводят путем подсчета и суммирования бляшек, выросших на 5 чашках Петри. Результаты выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 мл пробы воды. В контрольной чашке бляшки должны отсутствовать.

Наиболее часто зоны лизиса выглядят прозрачными пятнами на фоне газона тест-культуры питательного агара в виде круглых изолированных бляшек (от 1 до 5 - 7) мм в диаметре с четко выраженными либо стертыми границами.

При высоких концентрациях фага наблюдается разная картина лизиса.

Слияние негативных колоний дает "ажурный" газон E.coli, рост единичных колоний E.coli на фоне сплошного лизиса либо полное отсутствие роста на чашке.

При прямом посеве возможен лизис, маскируемый негомогенно застывшим агаром, а также закрытый сопутствующей микрофлорой. Капли конденсата и негомогенно застывший при прямом посеве агар могут приводить к образованию артефактов на газоне E.coli, визуально напоминающих лизис.

Предварительный учет результатов можно проводить через 5 - 6 ч инкубации. На этом этапе при наличии четких зон лизиса может быть выдан предварительный ответ о присутствии колифагов в воде.

Окончательный количественный учет прямого посева проводится через 18 +/- 2 ч. Результаты выражают количеством бляшкообразующих единиц (БОЕ) на 100 мл пробы воды.

Если отмечен сливной рост бляшек и счет затруднителен, то по данным прямого посева может быть выдан качественный результат: "обнаружено в 100 мл воды".

При получении отрицательного результата при работе прямым методом окончательный ответ выдается по результатам титрационного метода.

При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат исследования считается недействительным.

8.5.4. Постановка контролей

8.5.4.1. Отрицательный контроль

Отрицательный контроль подтверждает отсутствие контаминации фагом питательных сред, лабораторной посуды, оборудования на этапах подготовки и проведения анализа, а также позволяет оценить способность тест-культуры E.coli давать равномерный газон.

Отрицательным контролем служит исследование стерильной водопроводной воды, проводимое аналогично анализируемой пробе воды. Так, при анализе воды титрационным методом 10 мл стерильной водопроводной воды вносят в дополнительную пробирку. При анализе воды прямым посевом в дополнительную шестую чашку Петри вносят 20 мл стерильной водопроводной воды.

Дополнительные посевы исследуются на колифаги аналогично основным пробам.

При анализе серии проб отрицательный контроль может быть один на каждый вид анализа: титрационный и прямой. В этом случае постановка отрицательного контроля поэтапно осуществляется после обработки всех проб данной серии.

В случае обнаружения бляшек колифагов в чашках с отрицательным контролем результаты исследования всей серии проб воды недействительны.

Следует проверить стерильность лабораторного оборудования, посуды, питательных сред, а также повторить контрольный посев на чистоту тест-штамма E.coli K12 F+ StrR .

Кратность проведения отрицательного контроля - 1 раз в день.

8.5.4.2. Методика подтверждения фаговой природы лизиса

В сомнительных случаях при работе как титрационным, так и прямым методом необходимо провести контрольный посев на подтверждение фаговой природы лизиса.