Определение титра комплемента. Характеристика специфической иммунологической реактивности

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 14.12.2024

Специфическая резистентность - это невосприимчивость организма (популяции) к возбудителям инфекционных и паразитарных болезней или токсинов. Устойчивость животных к неблагоприятным факторам внешней среды, в том числе и к возбудителям инфекционных болезней, обусловлена комплексом неспецифических и специфических факторов. В основе специфической резистентности лежит иммунная реактивность, т.е. ответная реакция организма на действие специфических агентов. Иммунная реактивность обеспечивается функцией иммунной системы.

Оценка иммунного статуса

Оценка иммунного статуса организма включает в себя а) — сбор и анализ информации о частоте и характере течения инфекционных заболеваний, наличии хронической инфекции, признаках аллергизации, б) — выявление бактерио- или вирусоносительства с помощью бактериологических, вирусологических и серологических исследований; в) — проведение лабораторных исследований крови с использованием иммунологических тестов 1-го и 2-го уровней. При этом исследуют не менее 10% особей от численности стада (популяции).

К тестам 1-го уровня относится определение количества лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов, процентного содержания и абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов, уровня иммуноглобулинов крови, оценка показателей неспецифической защиты организма (фагоцитарная активность нейтрофилов, система комплемента, лизоцим). Тесты 1-го уровня позволяют выявить грубые нарушения со стороны иммунной системы.

Тесты 2-го уровня позволяют провести более тщательный анализ для уточнения характера дефекта, выявленного на предыдущем этапе с помощью ориентировочных тестов. К ним относится определение субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4 + и CD8 + ), их соотношений, оценка их функциональной активности, супрессорного потенциала, анализ цитокинов и их рецепторов. Функциональная активность лимфоцитов может быть оценена по количеству бластных форм, нарастающих после активации клеток. Потенциальную способность лимфоцитов к активации оценивают после стимуляции митогенами (фитогемагглютином и др.) культивируемых вне организма клеток. Количество бластных форм может быть определено при микроскопии. Более точен и чувствителен радиометрический метод, оценивающий интенсивность включения радиоактивных предшественников (тимидина) в ДНК культивируемых клеток. Для оценки иммунной защиты слизистых используется определение секреторных иммуноглобулинов IgA.

Определение количества лейкоцитов

Количество лейкоцитов подсчитывают при помощи автоматического счетчика или в камере Горяева. Для подсчета лейкоцитов в камере готовят жидкость Тюрка — раствор уксусной кислоты, подкрашенный водным раствором метиленового синего (на 9 мл 10% уксусной кислоты добавляют 0,1 мл 0,1% раствора метиленового синего). В пробирку наливают 0,4 мл жидкости Тюрка. Набирают точно 0,02 мл крови, осторожно добавляют к разводящей жидкости. Разведение крови составляет 1:20. Смесь хорошо перемешивают и оставляют на 4 мин. Заполняют камеру Горяева, предварительно тщательно встряхнув пробирку с разведенной кровью. Камеру оставляют на 1 мин на ровной поверхности для оседания лейкоцитов. Затем подсчитывают лейкоциты при малом увеличении микроскопа (объектив 8, окуляр 10 или 15) при затемненном поле зрения (при опущенном конденсоре или суженной диафрагме). Лейкоциты считают в 100 неразграфленных больших квадратах, что соответствует 1600 малым. Результаты подсчета клеток в больших квадратах суммируют и производят вычисление их количества в 1 мкл крови по формуле:

г де X — количество лейкоцитов в 1 мкл крови; А — количество клеток, сосчитанных в 100 больших квадратах;1600 — количество малых квадратов; 20 — разведение крови; 4000 — множитель,приводящий результат к объему 1 мкл крови, исходя из объема малого квадрата (1/4000 мкл).

Подсчет лейкоцитарной формулы. Исследуют окрашенные мазки периферической крови. Необходимым условием для правильного учета морфологических особенностей кровяных клеток является правильно сделанный и хорошо окрашенный мазок крови. Мазок крови готовят на сухих, чистых, хорошо обезжиренных предметных стеклах, выдержанных в смеси Никифорова (этиловый спирт 96º и диэтиловый эфир 1:1). Взяв предметное стекло за длинные края, прикасаются его поверхностью к капле крови (но не к коже), выпущенной из прокола, либо наносят каплю крови микропипеткой или капилляром. Предметное стекло держат на столе или в левой руке за узкие края. Правой рукой приставляют шлифованное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45° и продвигают его вправо до соприкосновения с кровью. Выжидают, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением ведут его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерена так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1-1,5 см до его края. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой». Высохшие на воздухе мазки крови, опускают в специальную посуду для фиксации или в обыкновенные стеклянные стаканы, наполненные фиксирующей жидкостью (метиловый спирт, время фиксации 3-5 мин; этиловый спирт, 30 мин; смесь Никифорова, 20-30 мин). Зафиксированные препараты сушат на воздухе, после чего окрашивают красителем Романовского-Гимзы. Готовый раствор краски Романовского-Гимза (азурэозин) разводят 1:10 в необходимом для окрашивания объеме. Фиксированные мазки заливают разведенной краской, которую наливают на мазок возможно более высоким слоем. Окрашивание длится в зависимости от температуры воздуха в помещении от 25 до 45 мин. После окончания окраски краску смывают дистиллированной водой и ставят мазки вертикально в деревянный штатив для просушивания. Микроскопию мазков крови проводят с иммерсией при увеличении 100×10. Подсчет лейкоцитов ведут по зигзагообразной линии («линии Меандра»), Подсчитывают 100-200 клеток, учитывая количество отдельных форм лейкоцитов: палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты, лимфоциты. Вычисляют процент каждого типа клеток.

Подсчет абсолютного числа фагоцитов и лимфоцитов. Абсолютное число фагоцитов (нейтрофилов и моноцитов) и лимфоцитов высших позвоночных вычисляют на основании данных о количестве лейкоцитов в периферической крови и лейкоцитарной формулы.

Иммунологическая реактивность: определение понятия, формы проявления

Иммунологическая реактивность - способность организма проявлять защитно-иммунологические функции в отношении возбудителей инфекционных болезней и обеспечивать специфический ответ на антигенное воздействие.

Учение об иммунологической реактивности животного организма сложилось на основе многочисленных работ об отдельных факторах иммунитета. Особое значение имеет открытый И.П. Павловым (1938 г.) закон уравновешивания (приспособления) организма с внешней средой. В 1942 г. Селье развил этот закон - генерализованный общий синдром адаптации.

Различают общую и специфическую иммунологическую реактивность.

Общая - потенциальная способность организма отвечать иммунологической реакцией на любой антигенный раздражитель.

Специфическая - способность организма отвечать иммунологической реакцией на конкретный возбудитель болезни или антиген. Как правило, она развивается после встречи с соответствующим возбудителем болезни или антигеном. Специфическая реактивность является частью общей иммунореактивности.

Для формирования иммунитета существенное значение имеют обе категории, т.е. общая и специфическая иммунореактивность. Эти понятия отвечают терминам «неспецифическая и специфическая резистентноть».

Реактивность - это реакция организма на чужеродный агент, а резистентность - состояние устойчивости организма, обусловленное реактивностью организма.

По современным представлениям возбудители инфекционных болезней или антигены любой природы вызывают в организме животного два вида реакций: неспецифические - которые связаны с общей иммунореактивностью (неспецифическая-естественная) и специфические - которые связаны с качественным своеобразием данного микроорганизма и определяются специфической иммунореактивностью организма (специфическая резистентность или иммунитет).

Специфическая реактивность — это способность организма отвечать на действие антигена выработкой антител или комплексом клеточных реакций, специфичных по отношению к этому антигену, т. е. это реактивность иммунной системы (Иммунологическая реактивность).

Ее виды: активный специфический иммунитет, аллергия, аутоиммунные заболевания, иммунодефицитные и иммунодепрессивные состояния, иммунопролиферативные заболевания.

Неспецифическая реактивность. Все изменения в организме, возникающие в ответ на действие внешних факторов и не связанные с иммунным ответом, являются признаком неспецифической реактивности.

Иммунодефициты: определение понятия, принципы классификации. Первичные и вторичные иммунодефицитные состояния, особенности патогенеза. Иммунологическая толерантность, понятие, патогенетическое заболевание.

Иммунодефицит - это нарушение структуры и функции какого-либо звена целостной иммунной системы, потеря организмом способности сопротивляться любым инфекциям и восстанавливать нарушения своих органов. Кроме того, при иммунодефиците замедляется или вообще останавливается процесс обновления организма.

При иммунодефиците человек становится беззащитным не только перед обычными инфекциями, как грипп или дизентерия, но также перед бактериями и вирусами, которые ранее не могли вызвать заболевания, так как иммунная система не позволяла им размножаться в большом количестве.

Кроме того, иммунодефицит приводит к обострению тех хронических заболеваний, которые были у человека, но не имели ярко выраженных симптомов и, может быть, никогда бы не привели к серьезным проблемам со здоровьем.

Иммунодефицит - врожденный или приобретенный дефект иммунной системы, проявляющийся резким снижением количества отдельных популяций иммунокомпетентных клеток или нарушением синтеза иммуноглобулинов (агаммаглобулинемия).

Повреждение или недостаточность функции одного или нескольких звеньев в иммунной системе приводит к нарушению иммунного ответа, к той форме иммунопатологии, которая получила название иммунодефицитных состояний.

Все иммунодефицитные состояния делятся на две большие группы:

- врожденный (наследственно обусловленный) иммунодефицит и

В основе наследственно обусловленного иммунодефицитного состояния (первичной иммунологической недостаточности) лежат генетически детерминированные дефекты клеток иммунной системы.

В то же время приобретенный иммунодефицит (вторичная иммунологическая недостаточность) является результатом воздействия факторов внешней среды на клетки иммунной системы. К наиболее полно изученным факторам приобретенного иммунодефицита относятся облучение, фармакологические средства и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) человека, вызванный вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).

Врожденный (наследственно обусловленный) иммунодефицит (первичная иммунологическая недостаточность) определяется как специфической иммунной недостаточностью, так и неспецифической иммунной недостаточностью.

Причинами заболеваний, обусловленных специфической иммунной недостаточностью, служат нарушения функций T-лимфоцитов или B-лимфоцитов - основы приобретенного иммунитета. Неспецифические иммунодефициты связаны с нарушениями в таких элементах иммунной системы, как комплемент и фагоциты, действующих при иммунном ответе неспецифично.

Нарушения в работе иммунной системы могут быть связаны и с комплексными нарушениями, затрагивающими многие звенья иммунитета.

При иммунодефицитном состоянии наблюдается повышенная чувствительность к инфекциям. Наиболее часто возникающие у таких больных инфекции можно разделить на две категории.

При нарушениях, связанных с иммуноглобулинами, компонентами комплемента и фагоцитарной активностью, резко возрастает восприимчивость к повторным инфекциям, вызываемыми бактериями, которые обладают капсулой (пиогенными, или гноеродными бактериями).

В случаях нарушений в системе T-клеточного иммунитета повышается чувствительность к микроорганизмам (от дрожжей до вирусов), широко распространенных и в норме безвредных: у здоровых людей к ним быстро развивается резистентность, но у больных с недостаточностью T-клеточной функции они способны вызвать летальные инфекции. Это так называемые оппортунистические инфекции.

Иммунологи?ческая толера?нтность — состояние организма, при котором иммунная система устойчиво воспринимает чужеродный антиген, как собственный и не отвечает на него. Толерантность — то есть неотвечаемость, терпимость

Механизмы толерантности (ареактивности) необходимы, поскольку иммунная система продуцирует огромное число разнообразных антигенспецифичных рецепторов, и некоторые из них оказываются специфичными к собственным антигенам организма; толерантность предотвращает нежелательные реакции против собственных органов и тканей.

C4 компонент комплемента

Практикующие терапевты, иммунологи, ревматологи рекомендуют проведение иммунологического исследования C4 компонент комплемента для диагностирования иммуно-комплексных заболеваний и выявления у пациента предрасположенности к тяжелой патологии соединительной ткани, поражающей многие органы - системной красной волчанке.

рецидивирующих бактериальных инфекций;
тяжелых инфекционно-воспалительных процессов;
злокачественных новообразований;
аутоиммунных нарушений.

Методика проведения анализа

Биологическим материалом для проведения анализа на C4 компонент комплемента является венозная кровь. Отбор производят в лабораторном центре в утреннее время.

Исключить употребление спиртного и медикаментов.
Воздержаться от физического и психоэмоционального перенапряжения.
Ограничить курение и пищевую нагрузку.
Сдавать кровь натощак.

иммунная - обнаружение и связывание патогенных микроорганизмов, их биологических молекул и клеточных элементов;
ферментативная - визуализация и измерение результатов иммунной реакции.

Расшифровка анализа

лимфоме;
саркоме;
хронической крапивнице;
болезни Вагнера (диффузного воспаления соединительной ткани).

врожденном дефиците С4; ;
иммуно-комплексных нарушениях; ;
аутоиммунном тиреоидите; .

Диагностическая значимость анализа системы комплемента - С4

Данная система представляет собой каскадный механизм, включающий 20 плазменных белков, которые обеспечивают формирование иммунного ответа при внедрении в организм человека чужеродного антигена, заключающегося в захвате патогенных микроорганизмов, их разрушении и развитии воспалительной реакции. Активация комплемента осуществляется несколькими путями:

классическим, стимуляция которого обусловлена традиционной иммунной реакцией «антиген-антитело»;
альтернативным, ассоциированным с воздействием специфических белков-иммуноглобулинов, внешних токсических веществ, полисахаридов.

Вне зависимости от провоцирующих факторов, конечным продуктом каскадной реакции выступает сложный гликопротеин, способный лизировать (растворять) чужеродные антигены. В систему комплемента входят 9 главных регуляторных ферментов, обозначенных как С1 - С9. Нарушение ее функциональной деятельности характеризуют 2 из них - С3 и С4.

С4 имеет молекулярную массу в 205000 Да, синтезируется в костной ткани, печеночной и легочной паренхиме. Его активация происходит по классическому пути, обеспечивая увеличение проницаемости стенок сосудов, нейтрализацию вирусов и фагоцитоз (процесс захватывания и переваривания твердых частиц клетками). Активное потребление человеческим организмом данного белка сопровождается его дефицитом, что приводит к снижению устойчивости к возбудителям инфекционных заболеваний и повышает вероятность возникновения иммуно-комплексных патологий. Практикующие клиницисты используют исследование крови, позволяющее определить уровень содержания С4, в следующих ситуациях:

1. При диагностировании и клиническом разграничении аутоиммунных и инфекционных заболеваний:

2. Для контроля успешности проводимых терапевтических мероприятий.

3. При оценивании иммунного статуса пациента.

4. Выявлении предрасположенности к развитию системной красной волчанки, характерным признаком которой является хронический воспалительный процесс, протекающий во многих органах и системах - кожных покровах, сердечной мышце, костных сочленениях, головном мозге, легких, почках, в ответ на атаку тканей собственного организма иммунными клетками.

Снижение уровня содержания в крови С4 считается маркером нарушения системы комплемента, обусловленного увеличением потребления ее компонентов либо недостаточным их производством, синтезом функционально-дефектных гликопротеинов, наличием у пациента экссудативной энтеропатии (хронической диареи, при которой происходит потеря сывороточных белков), гемолитической анемии (заболевания кроветворной системы, характеризующегося патологическим повреждением и распадом эритроцитов), респираторного дистресс-синдрома (одного из видов дыхательной недостаточности, вызванного широким воспалительным поражением легких), лимфоматозного тиреоидита (воспалительного заболевания щитовидной железы, возникшего на фоне Т-лимфоцитарной агрессии).

Важно знать, что уменьшение количества С4 также наблюдается при длительном голодании, отеке Квинке (атипичной реакции организма, при которой быстро нарастает отечность слизистых и кожных покровов), применении иммунодепрессантов и цитостатических препаратов, злокачественных опухолевидных образованиях, трансплантации почек и поражении печени.

Комплемент С3

Анализ на C3 компонент комплемента проводится для обнаружения нарушений в системе комплемента и определения степени ее функциональной целостности.

C3 (бета-1-C-глобулин) относится к классу белков острой фазы воспаления и считается центральной составляющей комплемента. Это важная часть иммунной системы, которая обеспечивает неспецифическую устойчивость к воздействию бактериальных и вирусных агентов. Образуется белок в клетках печени, лимфоидной ткани и кожи, макрофагах и фибробластах. Ввиду этого любые патологии, их затрагивающие, влияют и на комплемент.

Понятие компонента С3 системы комплемента

С3 представляет собой комплексную структуру постоянно циркулирующих в крови белков плазмы, входящей в состав видового иммунитета, а также принимает участие в возможности организма распознавать «родное» и «чужеродное». У здоровых людей составляющие комплемента присутствуют в виде иерархически пассивных молекул. Проникая в организм, или образовывая в нём активаторы (микроорганизмы, иммунные структуры), возникает активация комплекса защитных белков - каскадная реакция белков комплемента с формированием интервальных продуктов, способствующих деформации эластических молекулярных структур клеток-мишеней и обезвреживанию вирусов.

Когда делают анализ

Анализ С3 компонента комплемента позволяет обнаружить изменения в активации с помощью типичной, альтернативной методик. Диагностика комплемента С3 показана при подозрении патологий, связанных с генетическим дефицитом, приобретённым комплексом защитных белков. Для первичной симптоматики подобного рода отклонений характерны неоднократные продолжительные инфекции, аутоиммунные заболевания.

Выявление С3 рекомендуется пациентам с подтверждёнными диагнозами «васкулит», «грамотрицательный сепсис», «болезнь Либмана-Сакса», «мембранопролиферативный гломерулонефрит», «инфекционный эндокардит». В случае необходимости использования анализа при аутоиммунных патологиях, он является не только диагностическим методом, но и прогнозно-контрольным тестом оценки степени тяжести заболевания, поскольку концентрация в крови комплемента С3 соизмерима динамичности патологического процесса.

Также тест необходим при подтверждении / опровержении состояний, вызванных врождённым дефицитом комплемента (повторяющихся бактериальных заболеваний, аутоиммунных патологий, пр.), необходимости наблюдения в динамике пациентов, имеющих аутоиммунные заболевания, выявлении болезней иммунопатологической основы (подострого бактериального эндокардита, грамнегативного сепсиса, системной красной волчанки и т. п.).

Так как С3 задействован не только в альтернативном, но и в стандартном методе активации комплемента, только лишь по данным лабораторного исследования нельзя установить, в которой из разновидностей каскадной реакции произошёл сбой. Потому условиями общей медицинской практики предусмотрено одновременное осуществление анализа С3 компонента комплемента с диагностикой комплемента С4, участвующего лишь в стандартном порядке активации системы.

Изучаемым образцом для анализа C3 компонент комплемента является сыворотка крови, полученная путем венепункции. Процедуру проводит медработник. Кровь отбирают в вакуумный пробирочный контейнер, содержащий разделительный гель. По окончании забора крови содержимое пробирки перемешивается посредством механических переворачиваний. На ёмкость с биоматериалом наносится маркировка: обозначаются данные пациента, код лабораторного центра, номер образца. Указанная на пробирке информация должна соответствовать данным направительного бланка. В дальнейшем, чтобы получить сыворотку, ёмкость с гелем, в которой содержится проба крови, в течение получаса выдерживается в комнатных условиях на лабораторном столе, и после чего кровь разделяется на фракции методом центрифугирования.

Исследование проводится иммунонефелометрическим методом. Венозную кровь помещают в пробирку, стенки которой предварительно обрабатывают разделительным гелем, чтобы стимулировать процесс отделения сыворотки. Титр бета-1-C-глобулина определяется путем интенсивности света, рассеянного исходным раствором.

Нормальной C3 компонент комплемента является концентрация в пределах 0,90 - 1,80 г/л.

Превышение нормы возможно при развитии острых инфекций бактериальной, грибковой, паразитарной, вирусной этиологии, нарушений оттока желчи, желчнокаменной болезни, нефротического синдрома, амилоидоза в фазе ремиссии, ревматической лихорадки, онкопатологий с метастазами, во время терапии глюкокортикоидами.

Понижение титра C3 часто наблюдается при врожденном дефиците комплемента, некоторых аутоиммунных патологиях, рецидивирующей пиогенной инфекции, болезни Рейно, рассеянном склерозе, анемии, хронической форме гепатита, уремии, сепсисе, терапии иммунодепрессантами и/или цитостатиками, ДВС-синдроме.

Детальную расшифровку полученных результатов анализа C3 компонент комплемента должен проводить исключительно специалист, который назначит соответствующую терапию.

Преимущества исследования

C3 является основным элементом комплекса защитных белков острого воспалительного процесса, значимым для диагностики неспецифического гепатита (цитолиза), тяжелой аллергической реакции (анафилаксии). Его количество в организме занимает 70 % общего белка комплементной системы. Вырабатывается он в коже, печени, лимфоидной ткани, макрофагах, дермальных фибробластах; принимает участие в активации комплекса защитных белков типичным (комплексами с задействованием антител класса IgM, IgG), альтернативным (соучастием комплексов иммуноглобулинов классов IgE, IgA, полисахаридных антител грамотрицательных бактерий, Fab-фрагментов класса Ig) способами.

Накопление компонента комплемента обеспечивает высвобождение гистамина из тромбоцитов и огромных клеток, что благотворно сказывается на фагоцитозном процессе (С3 улучшает пропускную способность стенок кровеносных сосудов, повышает сократительную способность гладких мышц, двигательную реакцию лейкоцитов в направлении химических раздражителей, взаимодействие антигена с антителами; оказывает значительную роль в эволюции аутоиммунных заболеваний).

Активизация комплекса защитных белков происходит двумя путями:

стандартным (при взаимодействии блоков «антиген-антитело»);
альтернативным (без вовлечения антител путём влияния сложных липополисахаридов вирусов, грамотрицательных микроорганизмов, вирус-зараженных клеток).

Генетические аномалии С3 относят к редким патологиям, распространяющимся аутосомно-рецессивным способом, которым свойственны хронические инфекционные проявления на фоне активного размножения грамположительных, грамотрицательных микроорганизмов. Анализ позволяет определить биологически неактивную и активную фракции компонента комплемента С3.

Определение титра комплемента. Характеристика специфической иммунологической реактивности

Определение общей гемолитической способности комплемента (CH-50) - оценка функциональной активности одного из важнейших компонентов иммунной системы, основанная на определении содержания в сыворотке крови конечных продуктов его активации.

Синонимы русские

Общая гемолитическая активность комплемента, общая гемолитическая способность сыворотки, общая функциональная активность комплемента.

Синонимы английские

Total Hemolytic Complement (CH50), Complement CH50, Total Hemolytic Complement Activity.

Единицы измерения

у.е./мл (условных единиц в миллилитре).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Комплемент представляет собой систему сывороточных белков, постоянно присутствующих в крови в неактивном состоянии. Белки системы комплемента обозначаются латинской буквой С и цифрой, а субъединицы белков или их активированные формы дополнительно маленькой латинской буквой (например С1q). Для активации системы комплемента требуется наличие в крови связанных с антигеном иммуноглобулинов классов G или М либо присутствие компонентов поверхностных структур клеток микроорганизмов. Взаимодействие определенных белков системы комплемента с этими веществами приводит к запуску каскада последовательных реакций между белками системы комплемента, в результате которых формируется так называемый мембраноатакующий комплекс. Он представляет собой полимерную белковую структуру из белков комплемента, которая по форме напоминает воронку или цилиндр. Мембраноатакующий комплекс встраивается в оболочку клетки-мишени и формирует в ней трансмембранные каналы, через которые внутрь клетки неконтролируемо поступает вода, вызывая её разрушение.

Система комплемента играет важную роль в уничтожении клеток патогенных микроорганизмов: бактерий, грибов, простейших, а также зараженных вирусами собственных клеток организма. Она способствует удалению образующихся в организме иммунных комплексов (связанных друг с другом антигенов и антител) и принимает участие в регуляции иммунного ответа. Благодаря наличию нескольких путей активации комплемента, эта система способна защищать организм не только от патогенов, к которым уже есть антитела, но и от тех, к которым еще не успел выработаться специфический иммунитет. Наследственные и приобретенные дефициты отдельных компонентов комплемента приводят к повышению частоты инфекционных заболеваний, прежде всего бактериальной этиологии. Повышенная склонность к развитию некоторых аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка и сходные синдромы, васкулиты, гломерулонефриты) при дефектах системы комплемента основана на недостаточном удалении из организма циркулирующих иммунных комплексов.

Вследствие того что итогом активации системы комплемента является образование мембраноатакующего комплекса, определение его содержания в сыворотке крови после запуска каскада системы комплемента позволяет оценить функциональную активность системы в целом. Долгое время активность комплемента определяли с помощью эритроцитов барана с фиксированными на них антителами. При добавлении исследуемой сыворотки в связи с наличием комплекса антиген-антитело запускался классический путь активации системы комплемента, который приводил к разрушению эритроцитов. Активность комплемента оценивали по количеству сыворотки, которое необходимо было добавить в смесь, чтобы вызвать разрушение 50% эритроцитов. Отсюда метод исследования получил название СН-50.

Однако описанный выше метод является косвенной оценкой образования мембраноатакующих комплексов, разрушающих эритроциты. Гораздо более точным и чувствительным является метод определения структур мембраноатакующего комплекса с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Для исследования используется раствор с содержащимися готовыми иммунными комплексами, который играет роль активатора. При добавлении исследуемой сыворотки он запускает каскад активации комплемента по классическому пути, в результате которого образуются молекулы мембраноатакующего комплекса. Полученным раствором заполняют планшет, в лунках которого сорбированы антитела к МАК. При формировании комплекса МАК-антитело специальный фермент, добавленный в реакционную смесь, изменяет её окраску. При этом интенсивность цвета пропорциональна концентрации образовавшихся мембраноатакующих комплексов в исследуемой сыворотке. Интенсивность окраски измеряется специальным прибором, который переводит параметры световой волны в цифры, соответствующие концентрации МАК. Используя стандартизованные шкалы перевода, полученные результаты записывают в единицах эквивалента СН50 в миллилитре, что делает интерпретацию результатов более понятной.

Для чего используется исследование?

Для диагностики иммунодефицитных состояний, обусловленных наследственными дефектами системы комплемента;
для определения активности некоторых аутоиммунных заболеваний, сопровождающихся повышенным потреблением компонентов комплемента.

Когда назначается исследование?

При диагностике врождённых иммунодефицитов в качестве скрининга на дефицит отдельных белков системы комплемента, при рецидивирующих бактериальных инфекциях;

при мониторинге некоторых аутоиммунных заболеваний, обусловленных избытком и отложением в тканях иммунных комплексов.

Что означают результаты?

Референсные значения: 42 - 129 у.е./мл.

Снижение СН50 наблюдается обычно при дефиците или повышенном потреблении отдельных компонентов классического пути активации комплемента.

Важные замечания

Данный тест является скрининговым, он позволяет исключить или подтвердить функциональные нарушения системы комплемента. При сниженных значениях СН50 целесообразно провести более углубленное обследование - специальные иммунохимические и функциональные тесты для выявления каждого компонента комплемента. Объем дообследования и его необходимость согласовывается с доктором.
Данный тест оценивает активность исключительно классического пути активации комплемента. Для оценки альтернативного или лектинового пути необходимо проводить другие лабораторные тесты.

Также рекомендуется

Определение функциональной активности основных путей системы комплемента

С4 компонент комплемента

С3 компонент комплемента

Определение активности маннан-связывающего лектина

Определение уровня MASP-2

Предрасположенность к инфекционным заболеваниям. Недостаточность маннан-связывающего лектина (комплексное генетическое исследование, направленное на поиск частых мутаций гена MBL2, который кодирует маннан-связывающий лектин)

Кто назначает исследование?

Иммунолог, ревматолог, терапевт, педиатр, врач общей практики.

Литература

Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 941-942.

A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 9th Edition, by Frances Fischbach, Marshall B. Dunning III. Wolters Kluwer Health, 2015. Pages 600-602.

Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. - T. II / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 21-25.

Аллергология и иммунология: национальное руководство / под ред. Р. М. Хаитова, Н. И. Ильиной. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 374-378.

Читайте также: