Чувствительность и специфичность диагностики туберкулеза

Трансбронхиальная пункционная биопсия внутригрудных лимфатических узлов или патологических образований средостения производится во время бронхоскопии, выполняемой как под местной анестезией, так и в условиях наркоза. Для исследования применяют иглы из нержавеющей стали длиной 55—60 см с мандреном (наружный диаметр рабочей части 1—2 мм).
Показаниями к пункции лимфатических узлов средостения служат аденопатии внутригрудных узлов неясной природы при дифференциальной диагностике туберкулеза. Способ эффективен при трудно диагностируемом туберкулезе в 47%.
Метод трансбронхиальной внутрилегочной биопсии позволяет получать для цитологического, бактериологического и гистохимического исследования непосредственно легочную ткань.

Гистологическая верификация
Наличие специфических туберкулезных изменений в материале, полученном при эндобронхиальной, трансторакальной биопсиях, биопсии плевры, торакоскопии, медиастиноскопии(томии), открытой биопсии легкого также является основанием для верификации диагноза туберкулеза.

5. Полимеразная цепная реакция.

Присутствие ДНК МБТ можно установить в исследуемом материале с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), которая в последние годы стала доступной и используется все шире. Метод обладает высокой чувствительностью – он позволяет обнаруживать возбудитель при содержании всего нескольких сотен микроорганизмов в 1 мл исследуемого материала (мокроты, крови, плеврального выпота и т.д.). Результат исследования можно получить в течение 5–6 ч. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

ПЦР - диагностика туберкулеза, как правило, строится на использовании последовательностей ДНК специфичных для всех 4 видов группы туберкулеза. Часто для этих целей используют праймеры для выявления последовательностей IS-элементов, например, IS-986 или IS-6110, поскольку данные мигрирующие элементы характерны только для видов микобактерий группы туберкулеза и присутствуют в геноме микобактерий в числе нескольких копий. Выделение ДНК из чистых культур и клинических образцов (мокроты больных) возможно осуществлять любым приемлемым методом, например, методом Boom с использованием лизирующего буфера на основе гуанидина тиоционата и двуокиси кремния в качестве носителя ДНК.

Однако существует ряд причин, препятствующих широкому использованию ПЦР для достоверной верификации диагноза туберкулеза. Предлагаемые отечественные и зарубежные модификации тест-систем для постановки ПЦР значительно различаются по чувствительности и специфичности, что не позволяет получать стандартизированный результат. Этот высокочувствительный метод в ряде случаев может давать ложноположительные результаты, что ограничивает достоверность исследования. ПЦР целесообразно применять в комплексе с традиционными методами лабораторной диагностики туберкулеза. При получении положительного ответа ПЦР, противоречащего результатам других исследований, желательно повторить постановку реакции.

6. Определение антител к МБТ (иммуноферментный анализ).

Определение противотуберкулезных антител с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) не имеет самостоятельного диагностического значения, что обусловлено недостаточной чувствительностью и специфичностью метода. В то же время значительное повышение уровня антител к МБТ в крови, определяемое количественным методом, является аргументом в пользу туберкулезной этиологии процесса при анализе результатов комплексного обследования.

Иммуноферментный анализ получил широкое распространение в диагностике в связи с высокой чувствительностью и специфичностью анализа, высокой производительностью, простотой проведения анализа и регистрации результатов, возможностью использования микроколичества диагностического материала и автоматизации процесса. ИФА используют для определения как антител, так и антигенов в биологических жидкостях.
В 1976 году E.Nassau с соавт. первыми применили его для серодиагностики туберкулеза, использовав в качестве антигена фильтрат M. tuberculosis H37Rv.
При использовании ИФА специфические антитела выявляются у 80% больных активным туберкулезом, в том числе и костно-суставным. Однако образование антител меняется в зависимости от активности туберкулезного процесса, распространенности и давности заболевания, и в процессе противотуберкулезного лечения.
Несмотря на значительное число публикаций, посвященных применению методов ИФА для серодиагностики туберкулеза, проблема диагностики не является решенной, поскольку чувствительность анализа колеблется от 68 до 92%, а специфичность - от 86 до 97%, то есть число ложноположительных реакций среди здоровых или лиц с нетуберкулезными заболеваниями колеблется от 3 до 14%. Недостаточная специфичность анализа связана с наличием общих антигенов между МБТ и другими непатогенными микобактериями.

7. Дифференциальная диагностика

Разнообразие возможных клинических и рентгенологических проявлений туберкулеза органов дыхания часто обусловливает установление неверного первоначального диагноза.
Необходимость дифференциальной диагностики обычно возникает, когда:
• имеет место атипичное проявление заболевания;
• полученные результаты обследования характерны для нескольких альтернативных заболеваний;
• имеется сочетание нескольких заболеваний бронхолегочной системы туберкулезной и нетуберкулезной природы (туберкулез и пневмония, туберкулез и рак и др.);
• допущена неправильная трактовка результатов обследования;
• отсутствует адекватный ответ на лечение.

Проведение дифференциальной диагностики подразумевает получение дополнительной информации, которая используется не только для подтверждения или исключения туберкулезной этиологии процесса, но и для диагностики альтернативного заболевания.
Перечень заболеваний, с которыми приходится дифференцировать туберкулез органов дыхания, велик. При формировании дифференциальнодиагностического ряда в каждом конкретном случае целесообразно учитывать характер рентгенологических изменений в легких.
Проведение всех дополнительных исследований должно быть строго обосновано, при этом не следует откладывать любые инвазивные исследования вплоть до открытой биопсии легкого, если их ожидаемая диагностическая ценность велика. Наряду с оценкой бронхолегочной симптоматики и изменений в легких необходимо обращать внимание на экстрапульмональные проявления заболевания, которые могут играть ключевую роль в установлении диагноза.

Пробная терапия.
В некоторых случаях, когда после проведения всех доступных дополнительных исследований не удается верифицировать диагноз, назначают терапию ex juvantibus. Иногда потребность в срочном начале лечения до получения результатов обследования бывает обусловлена тяжестью состояния больного. Алгоритм назначения обследования и тест-терапии во многом определяется характеристикой процесса, тем не менее можно говорить о некоторых общих правилах проведения пробного лечения при подозрении на туберкулез .
При неустановленной этиологии инфекционного поражения легких первоначально назначают антибактериальные препараты широкого спектра действия, не оказывающие влияния на МБТ. Если после 1–2 нед лечения сохраняется необходимость противотуберкулезной терапии ex juvantibus, целесообразно назначать селективные противотуберкулезные препараты, исключив аминогликозиды, фторхинолоны и производные рифампицина. Пробное противотуберкулезное лечение подразумевает одновременное назначение не менее 2–3 препаратов на 1 мес с последующей оценкой динамики процесса. Монотерапия недопустима.

Пробную терапию нельзя рассматривать как альтернативу дополнительным инвазивным методам диагностики, особенно при малейшем подозрении на новообразование. В крайнем случае дообследование можно проводить одновременно с тест-терапией. Своевременная диагностика туберкулеза органов дыхания является важной совместной задачей фтизиатров и врачей многих других специальностей, от успешного выполнения которой во многом зависят здоровье и благополучие нашего общества. Грамотное использование современных диагностических возможностей в условиях всеобщей вполне оправданной фтизиатрической настороженности будет способствовать сокращению частоты гипердиагностики туберкулеза и возможных ятрогенных последствий неоправданной противотуберкулезной терапии. Лечение больных туберкулезом должно проводиться в специализированных противотуберкулезных учреждениях в соответствии с принятыми международными стандартами.

Пирамидоновая, амидопириновая, Голо проба.
Один из способов дифференциального диагноза субфебрильных состояний в течение легочного туберкулеза.
В течение трех дней с 6 часов утра до 9 часов вечера каждый час больному измеряют температуру тела. Первый и третий дни — контрольные. Во второй день с 3 до 21 часа каждый час больной принимает по 20 мл 0,5%
раствора пирамидона и только в 6 часов вечера он сразу принимает 60 мл (0,3 г). Если температура не инфекционного происхождения, то в дни приема пирамидона она не изменяется. Если температура инфекционного происхождения, то она снижается до нормальной на все время приема пирамидона.
Проба противопоказана при общих отеках, нефритах и при непереносимости к препарату.

При проведении дифференциальной диагностики у больного с рентгенологической картиной, подобной туберкулёзу, можно прибегнуть к хирургическим методам диагностики.
Если бактериовыделение отсутствует, а клинически исключить туберкулёз не удаётся, могут быть использованы цитогистологические методы верификации заболеваний лёгких, такие как щёточная, щипковая биопсия слизистой оболочки бронхов; трансбронхиальная биопсия внутригрудных лимфатических узлов; трансбронхиальная биопсия лёгких; трансторакальная биопсия лёгких; торакоскопическая биопсия плевры; диагностическая торакотомия с биопсией лёгких, плевры, внутригрудных лимфатических узлов. Чаще эти методы применяют для исключения онкологических заболеваний.

КВАНТИФЕРОНОВЫЙ ТЕСТ (QuantiFERON®-ТВ Gold) – современный лабораторный тест для выявления туберкулезной инфекции, альтернатива классическому кожному тесту с туберкулином. В настоящий момент в различных странах разработано и выпущено большое число национальных рекомендаций по применению данного теста.

Квантифероновый тест основан на определении INF-γ (гамма-интерферона), высвобождаемого сенсибилизированными Т-клетками, стимулированными in vitro специфическими протеинами (ESAT-6, CFP-10, TB7.7 (p4)) микобактерий туберкулеза, входящих в комплекс Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi, M. microti, M. africanum и др.). Эти протеины отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. marinum.

В исследуемой крови пациента (из пробирки с ТВ-антигеном) определяется содержание INFγ, результат анализируется в совокупности с данными, полученными из 2-х других пробирок (выполняющих роль контрольных).

Примерно 1/3 часть населения мира инфицирована МБТ, и только у 5-10% инфицированных лиц развивается заболевание. При наличии неблагоприятных факторов латентная туберкулезаня инфекция (ЛТИ – состояние, когда микобактерии туберкулеза (МБТ) присутствуют в организме человека, но при этом отсутствуют клинические и рентгенологические признаки туберкулеза) может перейти в активную форму с развитием внелегочного туберкулеза (например, туберкулез почек).

К группе высокого риска инфицирования МБТ относятся лица, имевшие контакт с больным туберкулезом, или имеющие высокую вероятность контакта (работники противотуберкулезных диспансеров, приютов, исправительных учреждений и др.), а также лица с сопутствующими заболеваниями (ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом и др.).

Используемые для диагностики ЛТИ кожные тесты – проба Манту и Диаскинтест®, имеют ряд противопоказаний и ограничений к применению.

Противопоказания к проведению пробы Манту и Диаскинтеста:

Индивидуальная непереносимость туберкулина;
Острые и хронические инфекционные заболевания и соматические заболевания в период обострения;
Кожные заболевания и аллергические состояния в период обострения;
Период карантина в детских коллективах.

У пациентов с индивидуальной гиперчувствительностью к туберкулину может наблюдаться ложноположительная реакция.

Сравнение тестов для диагностики туберкулезной инфекции

Параметр	Проба Манту	Диаскинтест®	Квантифероновый тест
Метод исследования	Кожный тест	Кожный тест	Исследование крови
Побочные реакции	Возможны	Возможны	Нет
Противопоказания	Есть	Есть	Нет
Специфичность	Низкая	Высокая	Высокая
Ложноположительные результаты после вакцинации БЦЖ	Да	Нет	Нет
Зависимость от сроков проведения профилактических прививок	Да (не ранее чем через месяц)	Да (не ранее чем через месяц)	Нет
Интерпретация результатов	Субъективна	Субъективна	Объективна

Преимущества КВАНТИФЕРОНОВОГО ТЕСТА:

отсутствие противопоказаний и ограничений по времени проведения;
отсутствие ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;
безопасность процедуры и отсутствие побочных реакций;
интерпретация результатов этого теста менее субъективна, чем интерпретация результатов кожных туберкулиновых тестов;
высокая специфичность (99,1%) и высокая чувствительность (89,0%).

Показания к назначению КВАНТИФЕРОНОВОГО ТЕСТА:

Выявление ЛТИ в группах высокого риска: работники специализированных противотуберкулезных и других учреждений, где есть высокий риск контакта с возбудителем или больным туберкулезом, пациенты с сопутствующими заболеваниями и др.;
Наличие известных контактов с больным туберкулезом (бактериовыделителем);
Наличие положительной реакции пробы Манту для исключения поствакцинальной реакции;
Наличие противопоказаний к проведению кожных туберкулиновых проб (пробы Манту и Диаскинтеста®);
Дифференциальная диагностика инфекций, вызванных МБТ;
Обследование иммигрантов.

Пример результата исследования и интерпретация:

Параметр	Результат	Критерии оценки результатов
Содержание гамма-интерферона в контрольной пробирке (NIL)	0,05	До 8,00
Содержание гамма-интерферона в пробирке с ТВ-антигеном (ТВ Ag)	0,09	Менее 0,35 (или свыше 0,35, но до 25% контрольного значения NIL)
Содержание гамма-интерферона в пробирке с митогеном (Mitogen)	9,56	От 0,50
Квантифероновый тест (диагностика туберкулеза)	Отрицательный	Отрицательный

Интерпретация результата исследования

Положительный результат	Сомнительный результат	Отрицательный результат
Инфицирование МБТ; Инфицирование нетуберкулезными микобактериями (M. kansasii, M. szulgai, M. marinum).	Индивидуальные особенности иммунитета; Нарушение преаналитических требований.	Не исключает инфицирования МБТ или туберкулеза. В ранние сроки инфицирования; При иммунодефицитных состояниях; У детей Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт. Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 - 2020 ! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт. Туберкулез — хроническое инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis). Микобактерия была открыта в 1882 году немецким бактериологом Р. Кохом, поэтому ее часто называют палочкой Коха. Механизм заражения туберкулезом Микобактерии туберкулеза широко распространены в окружающей среде. Носителями и источником инфекции являются больные люди и крупный рогатый скот. Заражение чаще происходит через дыхательные пути и реже — алиментарным путем. После проникновения в организм человека микобактерии инфицируют макрофагов, образуя в дальнейшем микобактериальные фагосомы. Микобактерии противодействуют дальнейшему превращению фагосомы, нарушая процессы лизиса бактериальной клетки. Такой механизм защиты позволяет микобактериям выживать в клетках хозяина. Находясь в макрофаге, микобактерии размножаются. После гибели макрофага, бактерии попадают во внеклеточную среду. Дальнейшее существование бактерий зависит от иммунных свойств организма — активности макрофагов и Т-лимфоцитов. Виды микобактерий и здоровье человека К роду микобактерий относится несколько десятков видов. Основную угрозу для здоровья людей несут микобактерии человека (Mycobacterium tuberculosis) и микобактерии бычьего типа (Mycobacterium bovis). Кроме них, патогенными свойствами обладают микобактерии Mycobacterium africanum, М. microti, М. canetti, М. caprae, М. pinnipedii. Эти виды проводят к развитию туберкулеза человека с его типичными клиническими и морфологическими признаками. Перечисленные микобактерии составляют, так называемый, комплекс туберкулезных микобактерий (МТВС). Выделяют также Мycobacterium avium complex (M.avium, М. avium paratuberculosis и др.). В него входят бактерии, вызывающие диссеминированные процессы внелегочной локализации у человека. К нетуберкулезным видам микобактерий, приводящих к развитию микобактериозов, относятся такие виды, как Mycobacterium chelonae, M. kansassi, M. xenopi и другие. Эти микобактерии вызывают заболевания легких, похожие на туберкулезный процесс, однако они более эффективно поддаются лечению противотуберкулезными средствами. Один из видов микобактерий вызывает другое серьезное заболевание — лепру. Возбудителем в этом случае является Mycobacterium leprae. Устойчивость микобактерий Микобактерии чрезвычайно устойчивы во внешней среде. В высохшей мокроте и в пыли они могут находиться до 1 года, в почве до полугода. Их высокая устойчивость создает значительные трудности в борьбе с этой инфекцией. Важной особенностью микобактерий является их свойство долгое время находиться в организме человека в латентном состоянии. При определенных ситуациях латентная фаза, протекающая без клинических проявлений, может перейти в активную форму. Скрытое протекание инфекции и стертость клинических проявлений существенно затрудняют раннюю выявляемость заболевания. Именно поэтому диагностика латентного туберкулеза является крайне важной. Лабораторные тесты для выявления микобактерий Разработано большое количество лабораторных тестов для идентификации микобактерий туберкулеза в различных биологических жидкостях и тканях. Основными являются микроскопия биологических жидкостей с окраской мазков по Цилю-Нильсену, бактериологический посев, серологические методы исследования, применение метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Микроскопический способ выявления микобактерий основан на их способности окрашиваться в красный цвет при использовании специальных красителей, тогда как другая микрофлора приобретает при этом синий цвет. Недостатком метода является его низкая чувствительность, поскольку для выявления микобактерий требуется их достаточное содержание в исследуемом образце. Повышение чувствительности микроскопического метода можно увеличить, применяя люминисцентную микроскопию. Высокочувствительными методами диагностики туберкулеза являются серологические методы диагностики. После встречи человека с бациллой туберкулеза, как и с любым другим чужеродными агентом (вирусы, бактерии, глистная инвазия), иммунная система человека начинает вырабатывать специфические белки — антитела, блокирующие жизнедеятельность бактерий. Так осуществляется один из видов защиты организма человека от многочисленных болезнетворных микробов и вирусов. После внедрения бактерий туберкулеза клетки иммунной системы начинают вырабатывать специфические антитела различных классов — IgM, IgA, IgG, которые циркулируют в кровеносном русле. На обнаружении таких специфических антител построена серологическая диагностика туберкулеза. К основным современным методам серологической диагностики относятся тест-системы, основанные на технологиях, использующихся в иммунохимии — ИФА (иммуноферментное исследование), РИА (радиоиммунный анализ), иммунохроматографические методы (Hexagon TB, TB Check-1), иммуноблот. Повышение чувствительности методов ИФА постепенно приводят к вытеснению дорогостоящих радиоиммунных методов в диагностике туберкулеза. Первыми антителами, появляющимися в крови, являются антитела класса IgM. Как правило, они выявляются в сыворотке крови через 2-3 недели после встречи с инфекцией и могут обнаруживаться на протяжении двух лет. Большинство тестов на основе ИФА технологий разработано для выявления антител класса IgG и суммарных антител (IgG + IgA + IgM). Метод иммуноблота относится к подтверждающим методам диагностики наличия инфекционного процесса, поскольку позволяет выявлять одновременно несколько видов антител различных классов иммуноглобулинов к различным белкам бактерий. Разновидностью иммуноблота можно считать метод TB-Spot, где в качестве антигенов используются два вещества, довольно специфичных именно для микобактерий (липоарабиноманнан и белок весом 38 кДа). При наличии антител к микобактериям туберкулеза в сыворотке крови происходит их связывание с данными белками, сопровождающееся характерной окраской. Микобактерия туберкулеза имеет в своем составе различные вещества (антигены), на которые организм человека вырабатывает антитела. Чем специфичнее/уникальнее бактериальный антиген, тем специфичнее будут образоваться на этот антиген антитела. Проблема повышения специфичности состоит в обнаружении таких антигенов и создании высокоспецифичных ИФА тест-систем для диагностики туберкулеза. Одним из таких белков, применяющихся в одностадийной тест-системе, является белок А60, специфичный для микобактерии. Этот белок после специальной очистки фиксируется на мембране. После добавления сыворотки больного человека и наличия в ней антител происходит их связывание с белком. Место связывание окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Применение иммуноферментных методов исследования является важным приемом в диагностике латентного туберкулеза. Выявление антител при помощи иммуноферментных технологий возможно не только в сыворотке крови, но и в моче, плевральной жидкости, мокроте, спинномозговой жидкости. Бактериологический метод (посев материала на специальные среды) обнаружения микобактерий туберкулеза является высокоспецифичным методом, но имеет существенный недостаток: для идентификации бактерии при посеве на классические среды требуется около 4-8 недель. Этот способ выделения микобактерий обладает большей чувствительностью по сравнению с микроскопическим методом и позволяет после обнаружения микобактерий провести исследование по определению чувствительности к противотуберкулезным препаратам. Применение новых питательных сред и специализированного бактериологического оборудования позволяет определить рост микобактерий уже через 2 недели. После расшифровки ДНК микобактерий туберкулеза и введения в лабораторную практику метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), данный способ стал широко применяться в диагностике этого заболевания. Метод высокоспецифичен и позволяет проводить исследования небольшого количества материала. По оценкам ряда исследователей, метод ПЦР по чувствительности и специфичности превосходит культуральный метод диагностики при внелегочных формах туберкулеза. Цитологические и гистологические методы диагностики туберкулеза позволяют выявить характерные морфологические признаки наличия заболевания. Обнаружение клеток Лангханса может свидетельствовать о наличии туберкулеза. Следует учитывать, что эти клетки могут появляться и при других инфекционных заболеваниях — саркоидозе, сифилисе, бруцеллезе. Одним из самых ранних методов диагностики туберкулеза является реакция Манту (с 1908 года). Суть этой реакции заключается во введении внутрикожно туберкулина, представляющего собой очищенную смесь убитых культур микобактерий человека и бычьего вида. Результат пробы оценивают по величине инфильтрата через трое суток. Проведение диаскинтеста заключается во внутрикожном введении двух белков, присутствующих у микобактерий опасных для человека, с последующей оценкой реакции в месте введения. Квантифероновый тест проводится в пробирке крови взятой у пациента. Тест основан на способности белков, выделенных из микобактерий туберкулеза, стимулировать выработку гамма-интерферона сенсибилизированными Т-лимфоцитами человека, то есть инфицированного пациента. Накопленный опыт в лечении туберкулеза свидетельствует о трудностях диагностики этого заболевания. Применение одного метода часто бывает недостаточно, поэтому существует необходимость использования различных приемов из арсенала инструментальных и лабораторных способов. Следует учитывать, что каждый из методов имеет свои недостатки, а их сочетание может привести к более достоверному заключению. Внедрение новейших методов скрининга туберкулеза является одной из существенных задач, решение которых позволило бы снизить высокий уровень заболеваемости и смертности от этого заболевания. Традиционно для скрининга используется проба Манту. Однако специфичность этого теста не так высока, не исключены ложноположительные и ложноотрицательные результаты, низка информативность у подростков, большинство из которых уже инфицировано микобактериями туберкулеза. Квантифероновый тест (QuantiFERON TB-2G, используемый в большинстве западных государств, отличается высокой чувствительностью и специфичностью, проводится in vitro, безопасен, не дает побочных эффектов, не имеет противопоказаний, не ограничен временем проведения, интерпретация результатов лишена субъективизма. Вместе с тем, квантифероновый тест не позволяет дифференцировать латентный и активный туберкулез. Величина уровня гамма-интерферона не коррелирует со стадией и степенью инфицирования, уровнем иммунной реактивности или вероятностью перехода латентного туберкулеза в активный. Таким образом, несмотря на неоспоримые преимущества в сравнении с пробой Манту, результаты квантиферонового теста не позволяют окончательно поставить или исключить диагноз туберкулеза. Однако использование теста является весьма ценным в целом ряде случаев, что требует внедрения этого метода в систему диагностики туберкулезной инфекции в РК. Туберкулез развивается приблизительно у 10% людей, инфицированных M.tuberculosis, а в остальных случаях благодаря иммунной системе патологический процесс не инициируется и инфекция остается латентной. Однако, несмотря на отсутствие каких-либо клинических проявлений, выявление и превентивное лечение латентной туберкулезной инфекции является одним из важнейших условий предупреждения роста заболеваемости туберкулезом [1]. В настоящее время для ее диагностики в РК применяют пробу Манту (туберкулинодиагностику). Проба Манту на протяжении многих лет являлась распространенным и предпочтительным видом скрининга из-за возможности выявления ранних форм туберкулеза, а также из-за простоты пробы и низкой стоимости для массовых обследований [3]. Вместе с тем, специфичность этого теста не так высока, так как очищенный туберкулин, используемый в кожном тесте, представляет собой неопределенную смесь фрагментов белков, только часть из которых специфична для Mycobacteriumtuberculosis, а большая часть имеет сходство с белками многих других бактерий, микобактерий окружающей среды и различными белками противотуберкулезной вакцины BCG. Среди подростков он имеет низкую информативность, так как большинство из них уже инфицировано микобактериями туберкулеза [5]. Возможны как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Кроме того, туберкулиновая проба может вызывать различные реакции, такие как повышение температуры, головные боли и головокружение,боли в мышцах, аллергические высыпания на коже, местные реакции, сопровождающиеся лимфангоитами, лимфаденитами, микронекрозами, а иногда и такие тяжелые, как отек Квинке и анафилактический шок. К проведению пробы имеется целый ряд противопоказаний: кожные, острые инфекционные заболевания, хронические заболевания в период обострения, аллергические состояния, ревматизм, бронхиальная астма и др. В большинстве европейских стран туберкулинодиагностика как метод массового скрининга отменена и применяется только в группах риска. Как альтернатива кожному тесту, в этих государствах используется квантифероновый тест (QuantiFERON TB-2G), который называют золотым стандартом в диагностике латентного туберкулеза [1,2,4]. QuantiFERON TB-2G введен в обязательный комплекс фтизиатрического обследования в 78 странах мира. В крови людей, инфицированных комплексом M.tuberculosis, обычно присутствуют сенсибилизированные микобактериями туберкулеза лимфоциты, распознающие микобактериальные антигены и реагирующие в ответ повышениемсинтеза и секреции цитокина IFN-γ. Квантифероновый тест основан на выявлении in vitro продукции INF-γ (гамма-интерферона) сенсибилизированными Т-клетками крови пациента, стимулированными in vitro специфическими протеинами (ESAT-6 и CFP-10, ТВ7.7) микобактерий туберкулеза, входящих в комплекс Mycobacteriumtuberculosiscomplex (M. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi, M. microti, M. africanum и др.).Указанные выше протеины отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. Marinum, чем достигается высокая специфичность показаний теста. Учет его результатов проводят не через 2 дня, как при кожной пробе, а на следующий день, причем автоматизация выявления интерферона повышает как чувствительность теста, так и объективность его показаний [7]. Проведенные японскими специалистами из Исследовательского института туберкулеза [6] испытания показали, что специфичность и чувствительность теста QuantiFERON TB- 2G составляют 98,1 и 89,0%, соответственно. Исследования, проведенные в Санкт-Петербургском НИИ фтизиопульмонологии [5], также подтвердили высокую диагностическую значимость квантиферонового теста (Таблица 1): Читайте также: Прививка от туберкулеза сколько действует у взрослых Туберкулезный тонзиллит на латыни Презентация туберкулез центральной нервной системы Туберкулез легких комбинированный с другими заболеваниями Как принимать барсучий жир при туберкулезе легких применение Контакты Политика конфиденциальности

Положительный результат

Сомнительный результат

Отрицательный результат

Инфицирование МБТ;
Инфицирование нетуберкулезными микобактериями (M. kansasii, M. szulgai, M. marinum).

Индивидуальные особенности иммунитета;
Нарушение преаналитических требований.

Не исключает инфицирования МБТ или туберкулеза.

В ранние сроки инфицирования;
При иммунодефицитных состояниях;
У детей

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Туберкулез — хроническое инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis). Микобактерия была открыта в 1882 году немецким бактериологом Р. Кохом, поэтому ее часто называют палочкой Коха.

Механизм заражения туберкулезом

Микобактерии туберкулеза широко распространены в окружающей среде. Носителями и источником инфекции являются больные люди и крупный рогатый скот. Заражение чаще происходит через дыхательные пути и реже — алиментарным путем.

После проникновения в организм человека микобактерии инфицируют макрофагов, образуя в дальнейшем микобактериальные фагосомы. Микобактерии противодействуют дальнейшему превращению фагосомы, нарушая процессы лизиса бактериальной клетки. Такой механизм защиты позволяет микобактериям выживать в клетках хозяина. Находясь в макрофаге, микобактерии размножаются. После гибели макрофага, бактерии попадают во внеклеточную среду. Дальнейшее существование бактерий зависит от иммунных свойств организма — активности макрофагов и Т-лимфоцитов.

Виды микобактерий и здоровье человека

К роду микобактерий относится несколько десятков видов. Основную угрозу для здоровья людей несут микобактерии человека (Mycobacterium tuberculosis) и микобактерии бычьего типа (Mycobacterium bovis). Кроме них, патогенными свойствами обладают микобактерии Mycobacterium africanum, М. microti, М. canetti, М. caprae, М. pinnipedii. Эти виды проводят к развитию туберкулеза человека с его типичными клиническими и морфологическими признаками. Перечисленные микобактерии составляют, так называемый, комплекс туберкулезных микобактерий (МТВС). Выделяют также Мycobacterium avium complex (M.avium, М. avium paratuberculosis и др.). В него входят бактерии, вызывающие диссеминированные процессы внелегочной локализации у человека.

К нетуберкулезным видам микобактерий, приводящих к развитию микобактериозов, относятся такие виды, как Mycobacterium chelonae, M. kansassi, M. xenopi и другие. Эти микобактерии вызывают заболевания легких, похожие на туберкулезный процесс, однако они более эффективно поддаются лечению противотуберкулезными средствами.

Один из видов микобактерий вызывает другое серьезное заболевание — лепру. Возбудителем в этом случае является Mycobacterium leprae.

Устойчивость микобактерий

Микобактерии чрезвычайно устойчивы во внешней среде. В высохшей мокроте и в пыли они могут находиться до 1 года, в почве до полугода. Их высокая устойчивость создает значительные трудности в борьбе с этой инфекцией.

Важной особенностью микобактерий является их свойство долгое время находиться в организме человека в латентном состоянии. При определенных ситуациях латентная фаза, протекающая без клинических проявлений, может перейти в активную форму. Скрытое протекание инфекции и стертость клинических проявлений существенно затрудняют раннюю выявляемость заболевания. Именно поэтому диагностика латентного туберкулеза является крайне важной.

Лабораторные тесты для выявления микобактерий

Разработано большое количество лабораторных тестов для идентификации микобактерий туберкулеза в различных биологических жидкостях и тканях. Основными являются микроскопия биологических жидкостей с окраской мазков по Цилю-Нильсену, бактериологический посев, серологические методы исследования, применение метода полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Микроскопический способ выявления микобактерий основан на их способности окрашиваться в красный цвет при использовании специальных красителей, тогда как другая микрофлора приобретает при этом синий цвет. Недостатком метода является его низкая чувствительность, поскольку для выявления микобактерий требуется их достаточное содержание в исследуемом образце. Повышение чувствительности микроскопического метода можно увеличить, применяя люминисцентную микроскопию.

Высокочувствительными методами диагностики туберкулеза являются серологические методы диагностики. После встречи человека с бациллой туберкулеза, как и с любым другим чужеродными агентом (вирусы, бактерии, глистная инвазия), иммунная система человека начинает вырабатывать специфические белки — антитела, блокирующие жизнедеятельность бактерий. Так осуществляется один из видов защиты организма человека от многочисленных болезнетворных микробов и вирусов.

После внедрения бактерий туберкулеза клетки иммунной системы начинают вырабатывать специфические антитела различных классов — IgM, IgA, IgG, которые циркулируют в кровеносном русле. На обнаружении таких специфических антител построена серологическая диагностика туберкулеза.

К основным современным методам серологической диагностики относятся тест-системы, основанные на технологиях, использующихся в иммунохимии — ИФА (иммуноферментное исследование), РИА (радиоиммунный анализ), иммунохроматографические методы (Hexagon TB, TB Check-1), иммуноблот. Повышение чувствительности методов ИФА постепенно приводят к вытеснению дорогостоящих радиоиммунных методов в диагностике туберкулеза.

Первыми антителами, появляющимися в крови, являются антитела класса IgM. Как правило, они выявляются в сыворотке крови через 2-3 недели после встречи с инфекцией и могут обнаруживаться на протяжении двух лет. Большинство тестов на основе ИФА технологий разработано для выявления антител класса IgG и суммарных антител (IgG + IgA + IgM).

Метод иммуноблота относится к подтверждающим методам диагностики наличия инфекционного процесса, поскольку позволяет выявлять одновременно несколько видов антител различных классов иммуноглобулинов к различным белкам бактерий. Разновидностью иммуноблота можно считать метод TB-Spot, где в качестве антигенов используются два вещества, довольно специфичных именно для микобактерий (липоарабиноманнан и белок весом 38 кДа). При наличии антител к микобактериям туберкулеза в сыворотке крови происходит их связывание с данными белками, сопровождающееся характерной окраской.

Микобактерия туберкулеза имеет в своем составе различные вещества (антигены), на которые организм человека вырабатывает антитела. Чем специфичнее/уникальнее бактериальный антиген, тем специфичнее будут образоваться на этот антиген антитела. Проблема повышения специфичности состоит в обнаружении таких антигенов и создании высокоспецифичных ИФА тест-систем для диагностики туберкулеза. Одним из таких белков, применяющихся в одностадийной тест-системе, является белок А60, специфичный для микобактерии. Этот белок после специальной очистки фиксируется на мембране. После добавления сыворотки больного человека и наличия в ней антител происходит их связывание с белком. Место связывание окрашивается в красно-фиолетовый цвет.

Применение иммуноферментных методов исследования является важным приемом в диагностике латентного туберкулеза. Выявление антител при помощи иммуноферментных технологий возможно не только в сыворотке крови, но и в моче, плевральной жидкости, мокроте, спинномозговой жидкости.

Бактериологический метод (посев материала на специальные среды) обнаружения микобактерий туберкулеза является высокоспецифичным методом, но имеет существенный недостаток: для идентификации бактерии при посеве на классические среды требуется около 4-8 недель. Этот способ выделения микобактерий обладает большей чувствительностью по сравнению с микроскопическим методом и позволяет после обнаружения микобактерий провести исследование по определению чувствительности к противотуберкулезным препаратам. Применение новых питательных сред и специализированного бактериологического оборудования позволяет определить рост микобактерий уже через 2 недели.

После расшифровки ДНК микобактерий туберкулеза и введения в лабораторную практику метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), данный способ стал широко применяться в диагностике этого заболевания. Метод высокоспецифичен и позволяет проводить исследования небольшого количества материала. По оценкам ряда исследователей, метод ПЦР по чувствительности и специфичности превосходит культуральный метод диагностики при внелегочных формах туберкулеза.

Цитологические и гистологические методы диагностики туберкулеза позволяют выявить характерные морфологические признаки наличия заболевания. Обнаружение клеток Лангханса может свидетельствовать о наличии туберкулеза. Следует учитывать, что эти клетки могут появляться и при других инфекционных заболеваниях — саркоидозе, сифилисе, бруцеллезе.

Одним из самых ранних методов диагностики туберкулеза является реакция Манту (с 1908 года). Суть этой реакции заключается во введении внутрикожно туберкулина, представляющего собой очищенную смесь убитых культур микобактерий человека и бычьего вида. Результат пробы оценивают по величине инфильтрата через трое суток.

Проведение диаскинтеста заключается во внутрикожном введении двух белков, присутствующих у микобактерий опасных для человека, с последующей оценкой реакции в месте введения.

Квантифероновый тест проводится в пробирке крови взятой у пациента. Тест основан на способности белков, выделенных из микобактерий туберкулеза, стимулировать выработку гамма-интерферона сенсибилизированными Т-лимфоцитами человека, то есть инфицированного пациента.

Накопленный опыт в лечении туберкулеза свидетельствует о трудностях диагностики этого заболевания. Применение одного метода часто бывает недостаточно, поэтому существует необходимость использования различных приемов из арсенала инструментальных и лабораторных способов. Следует учитывать, что каждый из методов имеет свои недостатки, а их сочетание может привести к более достоверному заключению.

Внедрение новейших методов скрининга туберкулеза является одной из существенных задач, решение которых позволило бы снизить высокий уровень заболеваемости и смертности от этого заболевания. Традиционно для скрининга используется проба Манту. Однако специфичность этого теста не так высока, не исключены ложноположительные и ложноотрицательные результаты, низка информативность у подростков, большинство из которых уже инфицировано микобактериями туберкулеза. Квантифероновый тест (QuantiFERON TB-2G, используемый в большинстве западных государств, отличается высокой чувствительностью и специфичностью, проводится in vitro, безопасен, не дает побочных эффектов, не имеет противопоказаний, не ограничен временем проведения, интерпретация результатов лишена субъективизма. Вместе с тем, квантифероновый тест не позволяет дифференцировать латентный и активный туберкулез. Величина уровня гамма-интерферона не коррелирует со стадией и степенью инфицирования, уровнем иммунной реактивности или вероятностью перехода латентного туберкулеза в активный. Таким образом, несмотря на неоспоримые преимущества в сравнении с пробой Манту, результаты квантиферонового теста не позволяют окончательно поставить или исключить диагноз туберкулеза. Однако использование теста является весьма ценным в целом ряде случаев, что требует внедрения этого метода в систему диагностики туберкулезной инфекции в РК.

Туберкулез развивается приблизительно у 10% людей, инфицированных M.tuberculosis, а в остальных случаях благодаря иммунной системе патологический процесс не инициируется и инфекция остается латентной. Однако, несмотря на отсутствие каких-либо клинических проявлений, выявление и превентивное лечение латентной туберкулезной инфекции является одним из важнейших условий предупреждения роста заболеваемости туберкулезом [1]. В настоящее время для ее диагностики в РК применяют пробу Манту (туберкулинодиагностику). Проба Манту на протяжении многих лет являлась распространенным и предпочтительным видом скрининга из-за возможности выявления ранних форм туберкулеза, а также из-за простоты пробы и низкой стоимости для массовых обследований [3]. Вместе с тем, специфичность этого теста не так высока, так как очищенный туберкулин, используемый в кожном тесте, представляет собой неопределенную смесь фрагментов белков, только часть из которых специфична для Mycobacteriumtuberculosis, а большая часть имеет сходство с белками многих других бактерий, микобактерий окружающей среды и различными белками противотуберкулезной вакцины BCG. Среди подростков он имеет низкую информативность, так как большинство из них уже инфицировано микобактериями туберкулеза [5]. Возможны как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Кроме того, туберкулиновая проба может вызывать различные реакции, такие как повышение температуры, головные боли и головокружение,боли в мышцах, аллергические высыпания на коже, местные реакции, сопровождающиеся лимфангоитами, лимфаденитами, микронекрозами, а иногда и такие тяжелые, как отек Квинке и анафилактический шок. К проведению пробы имеется целый ряд противопоказаний: кожные, острые инфекционные заболевания, хронические заболевания в период обострения, аллергические состояния, ревматизм, бронхиальная астма и др.

В большинстве европейских стран туберкулинодиагностика как метод массового скрининга отменена и применяется только в группах риска. Как альтернатива кожному тесту, в этих государствах используется квантифероновый тест (QuantiFERON TB-2G), который называют золотым стандартом в диагностике латентного туберкулеза [1,2,4]. QuantiFERON TB-2G введен в обязательный комплекс фтизиатрического обследования в 78 странах мира.

В крови людей, инфицированных комплексом M.tuberculosis, обычно присутствуют сенсибилизированные микобактериями туберкулеза лимфоциты, распознающие микобактериальные антигены и реагирующие в ответ повышениемсинтеза и секреции цитокина IFN-γ. Квантифероновый тест основан на выявлении in vitro продукции INF-γ (гамма-интерферона) сенсибилизированными Т-клетками крови пациента, стимулированными in vitro специфическими протеинами (ESAT-6 и CFP-10, ТВ7.7) микобактерий туберкулеза, входящих в комплекс Mycobacteriumtuberculosiscomplex (M. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi, M. microti, M. africanum и др.).Указанные выше протеины отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. Marinum, чем достигается высокая специфичность показаний теста. Учет его результатов проводят не через 2 дня, как при кожной пробе, а на следующий день, причем автоматизация выявления интерферона повышает как чувствительность теста, так и объективность его показаний [7]. Проведенные японскими специалистами из Исследовательского института туберкулеза [6] испытания показали, что специфичность и чувствительность теста QuantiFERON TB- 2G составляют 98,1 и 89,0%, соответственно.

Исследования, проведенные в Санкт-Петербургском НИИ фтизиопульмонологии [5], также подтвердили высокую диагностическую значимость квантиферонового теста (Таблица 1):

Читайте также: