Этапы лабораторной диагностики туберкулеза

Для осуществления поставленных задач в Республике Беларусь вводится единая система проведения микробиологических исследований при выявлении, диагностике и лечении туберкулеза, включающая три этапа:

I этап - первичное исследование диагностического материалав учреждениях ОЛС и в противотуберкулезных учреждениях. Целью данного этапа является выявление кислотоустойчивых микобактерий (КУМ) в мокроте или другом диагностическом материале методом прямой микроскопии по Ziehl-Neelsen среди лиц с подозрением на туберкулез по клиническим и/или рентгенологическим симптомам. На данном этапе выявляется наиболее эпидемически опасная категория пациентов.

Организационные мероприятия на I этапе включают: определение в каждом регионе лабораторий для проведения прямой микроскопии мокроты; определение радиуса обслуживания, организацию пунктов сбора мокроты в ЛПУ ОЛС и ПТУ, проведение централизации бактериоскопических исследований.

С учетом географических особенностей, плотности населения, транспортных возможностей и других социально-экономических факторов микроскопические исследования могут проводиться централизованно на базе лабораторий центральных районных больниц по решению местных органов управления здравоохранения. При этом необходимо организовать регулярную и своевременную доставку диагностического материала из прикрепленных учреждений, а также обеспечить адекватную организацию мест сбора диагностического материала с соблюдением необходимых санитарно-эпидемических норм. Централизация исследований способствует повышению качества выполняемых исследований.

Основные факторы, определяющие эффективность работы КДЛ по лабораторной диагностике туберкулеза:

§ правильный отбор показанных на обследование лиц;

§ качественный сбор мокроты;

§ наличие бинокулярных микроскопов с высокой разрешающей способностью;

§ непрерывность обучения персонала;

§ обучение персонала по микроскопической диагностике туберкулеза;

§ проведение внутрилабораторного и внешнего контроля качества микроскопических исследований на туберкулез.

II этап- диагностика микобактерий туберкулезного комплексакультуральными методами. Этот этап обеспечивают бактериологические лаборатории ПТУ. На этом этапе осуществляется верификация положительных или сомнительных результатов первичного лабораторного исследования, а также диагностика случаев туберкулеза с отрицательными результатами первичного исследования диагностического материала методами микроскопии.

Организационные мероприятия II этапа включают: бактериоскопию по Ziehl-Neelsen (люминесцентная), посев, обучение лаборантов периферийных лабораторий, мониторинг и контроль качества работы периферийных лабораторий.

III этап - определение лекарственной устойчивости к противотуберкулезным препаратам и идентификация выделенного возбудителяв бактериологических лабораториях противотуберкулезных учреждений (II-IV уровень)

Бактериологические лаборатории противотуберкулезных учреждений должны обеспечить решение следующих задач:

§ подтвердить туберкулезную природу заболевания;

§ определить таксономическую принадлежность возбудителя;

§ определить его лекарственную чувствительность;

§ внедрить систему внутрилабораторного и внешнего контроля качества лабораторных исследований;

§ осуществлять персонифицированный учет больных туберкулезом и мониторинг состояния микобактериальной популяции;

§ осуществлять совместно с лечащими врачами интерпретацию данных микробиологических исследований.

При формулировании клинического диагноза и оценке эффективности лечения больного должны учитываться результаты микроскопических и культуральных исследований, включающие микроскопическое исследование мазка осадка диагностического материала, выделение возбудителя (посев), дифференциацию выделенной культуры, определение ее лекарственной чувствительности. В качестве методов, альтернативных классическому культуральному исследованию, возможно использование автоматизированных и полуавтоматизированных систем быстрого обнаружения и определения лекарственной чувствительности микобактерий, основанной на использовании жидких питательных сред и различных способах индикации роста микобактерий.

С целью быстрого выявления микобактерий туберкулеза в качестве дополнительного допускается использование метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), основанного на амплификации фрагментов генома микобактерий и других молекулярно-генетических методов. ПЦР-анализ может быть применен для исследования мокроты, промывных вод бронхов, мочи и спинномозговой жидкости, а также культур микроорганизмов. Технология проведения ПЦР приводится в описаниях и инструкциях по применению соответствующих наборов (тест-систем). Лаборатории, использующие такие методы, должны быть устроены соответствующим образом для исключения кросс-контаминации образцов.

Алгоритм первичного лабораторного обследования описан в приложениях к настоящему приказу. Унифицированные методики и учетно-отчетные формы используются во всех лечебно-профилактических учреждениях независимо от их ведомственной принадлежности.

Кратность и сроки микробиологических исследований в ходе лечения и диспансерного наблюдения различных групп пациентов определены в инструкциях по химиотерапии больных туберкулезом и по организации диспансерного наблюдения и учету контингентов противотуберкулезных учреждений.

На бактериологические лаборатории противотуберкулезных учреждений возлагаются обязанности по оказанию организационно-методической помощи КДЛ ОЛС, обучению их персонала и внешний контроль качества выполняемых КДЛ микроскопических исследований путем повторного исследования части препаратов.

К работе с материалом, зараженным туберкулезными и нетуберкулезными микобактериями (III–IV группы), допускаются лаборатории, имеющие специальное разрешение в соответствии с санитарными правилами, нормами и гигиеническими нормативами.

Туберкулез давно перестал быть самой распространенной болезнью, но все еще представляет большую опасность для людей. Примерно треть населения является носителем бактерии-возбудителя, которая может передаваться от человека к человеку по воздуху. Поэтому крайне важно вовремя диагностировать туберкулез и принимать все меры для его излечения. Подробнее о лабораторной диагностике туберкулеза, микробиологии этого заболевания и о его лечение вы сможете прочесть в этой статье.

Туберкулез

Что представляет собой туберкулез? Эту болезнь вызывает особая бактерия Mycobacterium tuberculosis. Она преодолевает защиту иммунной системы и начинает бесконтрольно размножаться. В результате инфекция поражает легкие человека, вызывая распад тканей и приводя к серьезному поражению внутреннего органа. В определенный период развития заболевания человек становится заразным, при этом никаких явных симптомов у него может не появляться некоторое время. Так как туберкулез передается по воздуху, такой больной становится опасен для множества людей и прежде, чем болезнь обнаружат, успевает заразить множество здоровых людей. Более того, почти треть всех людей на нашей планете имеет в своем организме бактерии, вызывающие туберкулез. Просто их иммунитет достаточно силен для того, чтобы сдерживать их рост. Такие пассивные носители не могут заразить других до того момента, пока болезнь не перейдет в острую форму. Туберкулез может передаваться не только от человека к человеку, но и через зараженные продукты, в частности, мясо птиц и животных. Для того чтобы избежать эпидемии среди населения, существует метод лабораторной диагностики туберкулеза ГОСТ 26072-89, который позволяет вовремя выявить наличие возбудителя.

В некоторых странах туберкулез распространен больше, чем в других, и влиять на это могут разные факторы. Например, распространение ВИЧ может вызывать также и рост инфицирования туберкулезом, поскольку вторичный иммунодефицит человека делает организм больного открытым для всех болячек. Например, в США наибольшее распространение туберкулез достиг в 1985 году. К 1993 году благодаря мощной государственной поддержке число случаев заражения удалось снизить, но количество больных во всем мире до сих пор вызывает тревогу. Лабораторная диагностика туберкулеза у взрослых крайне важна, так как позволяет на начальной стадии выявить разные формы туберкулеза. В результате пациент получает достаточное лечение, а люди, контактирующие с ним, избегают опасности заражения.

Методы диагностики туберкулеза

Это заболевание опасно. Его очень трудно выявить только с помощью одного метода исследования. Поэтому чаще всего врачи прибегают к дифференциальной диагностике туберкулеза, которая включает в себя несколько способов и позволяет точно установить диагноз. Какие основные методы диагностики можно выявить?

• Флюорография позволяет выявить наличие заболевания по измененному рисунку легких.
• Сбор анамнеза – изучение истории болезни пациента, его жалоб, анкетирование. Сам по себе данный метод не является основанием для постановки диагноза, но опытный специалист вкупе с другими способами может достаточно быстро выяснить причину плохого самочувствия.
• Осмотр пациента – прослушивание легких и перкуссия позволяют выявить хрипы и другие расстройства дыхания.
• Лабораторная диагностика проводится на основе анализов и направлена на выявление возбудителя и атипичных реакций организма (например, воспаления).

Лабораторная и инструментальная диагностика туберкулеза у детей – это достаточно сложная задача, поскольку диагноз сложно подтвердить при помощи микроскопического исследования, а симптомы часто бывают размыты и схожи с другими болезнями. Вот почему детям в школе и в детских садах часто ставят пробу Манту, которая показывает, есть ли иммунный ответ на введенные бактерии.

Лабораторная диагностика туберкулеза

Этот метод является разновидностью клинической диагностики и позволяет выявить наличие заболевания по изменению в химических и количественных составляющих тканей человека. Для лабораторной диагностики могут браться в качестве материалов для исследования следующие жидкости:

Современные методы лабораторной диагностики туберкулеза предполагает использование всех способов одновременно в том случае, если необходим быстрый и четкий ответ. Ведь в некоторых ситуациях счет может идти на часы. Своевременно поставленный диагноз может помочь назначить верное лечение и спасти жизнь пациенту. Лабораторная диагностика туберкулеза включает несколько методов, каждый из которых обладает своими плюсами и минусами.

Микроскопический метод

Микроскопический метод позволяет установить наличие в организме бактерий при помощи реагентов, которые при контакте с возбудителем туберкулеза окрашиваются в определенный цвет. Например, если в организме найдена Mycobacterium tuberculosis в превышающем норму количестве, то контраст становится красного цвета. Для ускорения процедуры микроскопии иногда используют люминесцентный метод, который позволяет выявить возбудителя гораздо быстрее. В этом случае чужеродные организмы подсвечиваются синим или зеленым светом. Несмотря на плюсы в виде быстрого результата и относительно простоты, микроскопический метод не считается идеальным. Он редко показывает точный результат. Если человек болен туберкулезом, но число возбудителей недостаточно для того, чтобы отразиться на цвете контраста, то болезнь запросто можно пропустить. Тем не менее, такой метод все еще используют в некоторых государственных учреждениях.

Бактериологический метод

Среди лабораторных методов диагностики туберкулеза следует отметить бактериологический способ, так как он используется чаще всего. Для данного анализа в качестве исследуемого материала берется мокрота из легких, которая всегда присутствует при туберкулезе легких. Поскольку в ней содержится множество бактерий и грибов, то для идентификации определенной группы микроорганизмов может потребоваться до восьми недель. В течение этого времени лаборант обычно выполняет следующие процедуры:

• Выделяет бактерии из первоначальной пробы.
• Высеивает бактерии и выращивает чистую культуру, изучая ее свойства. Именно этот процесс занимает дольше всего времени, так как микроорганизмам требуется время для размножения.
• Детально исследует клетки.

Для того чтобы бактерии не погибли, их помещают в особую питательную среду, в которой они чувствуют себя точно так же, как и в человеческом организме. Когда чаще всего применяется бактериологический метод? Обычно его используют в тех случаях, когда диагноз уже предварительно установлен и лишь нуждается в дополнительном подтверждении. Бактериологический метод является одним из самых точных способов, но, к сожалению, скорость ответа оставляет желать лучшего.

Проба Манту

Проба Манту – это наиболее ранний вид диагностики туберкулеза. Он был изобретен еще в 1908 году. Это простой и быстрый способ понять, есть ли у человека туберкулез. В больших коллективах (особенно детских) больной может послужить источником заражения для всех остальных. Вот почему проба Манту чаще всего ставится профилактически детям раз в год. При наличии симптомов туберкулеза туберкулин может быть введен повторно.

Во время исследования под кожу в руке пациента вводят антиген возбудителя туберкулеза. Он не является опасным для организма человека и уж конечно же не может заразить его. Процедура проводится с помощью специальной маленькой иглы и практически не вызывает никаких болевых ощущений. Если в вашем организме есть возбудители туберкулеза, то на месте укола образуется большое красное пятно, превышающее принятые нормы. Специалист обычно измеряет его с помощью линейки. Если патология обнаружена, то человека отправляют на дополнительное обследование. Само по себе увеличение реакции Манту не может считаться основанием для постановки диагноза. Но и слишком маленький размер Манту также не является положительным результатом, так как это может указывать на проблемы с иммунитетом.

Для того чтобы метод исследования показал как можно более четкий результат, после подкожного введения туберкулиновой пробы нужно соблюдать несколько правил:

• не чесать место укола;
• не мочить его.

Если же рекомендации не были соблюдены, то об этом обязательно нужно рассказать врачу, так как это может исказить результаты исследований.

Серологический метод

Серологические методы диагностики туберкулеза пришли к нам также из XX века. Однако после многочисленных испытаний ученые осознали, что в отличие от всех остальных инфекций, серологический метод в отношении туберкулеза не обладает нужной чувствительностью и не может гарантировать точную постановку диагноза. Именно поэтому после анализа методов лабораторной диагностики туберкулеза серологический способ не был рекомендован специалистами для массового применения. Возможно, в ближайшем будущем будут созданы более дешевые и эффективные способы серологической диагностики, которые будут способны выявлять специфические антигены туберкулеза, но пока что в медицине применяют другие методы.

Метод ПЦР на данный момент считается одним из самых эффективных лабораторных методов ранней диагностики туберкулеза. Что он собой представляет? Полиразмерная цепная реакция позволяет добиться значительного увеличения некоторых фрагментов ДНК и оценить визуально ее составляющие. Этот метод разработал в 1983 году ученый Кэри Мюллис, и в XXI веке он продолжает использоваться во всем мире. Кроме простого увеличения, ПЦР позволяет производить и некоторые другие манипуляции, которые также способны дать определенную информацию об организме человека.

ПЦР отлично зарекомендовал себя в качестве диагностического способа, поэтому его часто применяют как отдельно, так и в комплексе с другими исследованиями. Для анализа браться может любая жидкость, но чаще всего исследуется слюна или мокрота пациента. Если речь идет о менингите, вызванном туберкулезом, то в этом случае для анализа берут спинномозговую жидкость. Главный плюс данного метода заключается в том, что он обладает высокой чувствительностью и позволяет выявить даже минимальную концентрацию туберкулезной палочки. Кроме того, результат можно получить очень быстро – обычно ответ появляется в течение суток.

Цитология и гистология

К сожалению, во врачебной практике довольно часто встречаются такие случаи, в которых на лицо наличие клинической картины туберкулеза, рентген также показывает изменения в структуре тканей, но по анализам невозможно установить точную причину недомогания. Тем временем без лабораторного подтверждения невозможно грамотно назначить лечение. В этих случаях для исследования может быть использован гистологический или цитологический метод.

Гистологическое исследование представляет собой анализ ткани, который проводится под большим увеличением. Для постановки диагноза чаще всего берут биопсию из легких. Забор тканей происходит с помощью небольшого среза. Данная операция может быть довольно болезненной, поэтому ее делают только при наличии четких показаний.

Цитологическое исследование мокроты считается во многих случаях обязательным при постановке диагноза. Высушенные и предварительно окрашенные мазки рассматривают под большим увеличением. У больных туберкулезом на них можно рассмотреть гнойно-слизистые образования, чуждые здоровым легким. Также отмечается скопление моноцитоидных мононуклеаров. Две этих методики – цитология и гистология обладают высокой информативностью для специалистов, но при этом не требуют больших материальных или временных затрат, поэтому применяются достаточно часто.

Симптомы туберкулеза

Вы можете быть носителем бактерии, вызывающей туберкулез, но если ваш иммунитет при этом довольно сильный, то вы не заболеете. Так называемый скрытый туберкулез не является заразным и не представляет опасности для окружающих. Но для самого больного скрытая форма туберкулеза не является хорошим вариантом, так как может стать активной в любой момент. Такой человек является своеобразной бомбой замедленного действия, которая может активироваться в любой момент. Вот почему лечение одинаково и для скрытой, и для активной формы. Какие основные симптомы туберкулеза?

• Кашель, который не проходит более трех недель.
• Кровянистые выделения из легких (кашель с кровью).
• Потеря веса без особых причин.
• Боль в груди и при дыхании.
• Повышенная температура.
• Потливость и слабость.
• Озноб.
• Потеря аппетита.

Туберкулез может воздействовать не только на легкие, но и на другие внутренние органы: например, на почки, позвоночник и мозг. Если туберкулез распространяется вне легких, то симптомы могут различаться в зависимости от места локализации бактерий. Например, туберкулез позвоночника может заставить вас чувствовать боли в спине, а туберкулез почек приводить к повышенному мочеиспусканию. Однако чаще всего туберкулез начинается именно в легких, поэтому симптомы у пациентов схожи между собой.

Причины и профилактика

Анализ бактериологических методов лабораторной диагностики туберкулеза показывает, что данный способ является весьма эффективным для лечения и предупреждения развития активной формы туберкулеза. Но не всегда удается найти эффективное лечение, особенно на поздних стадиях болезни. Поэтому врачи предпочитают предупреждать болезнь и настаивают на различных профилактических методах. Что может вызвать развитие туберкулеза?

Он появляется лишь от одной микобактерии, которая передается от больного во время разговора, чихания или смеха. Этого оказывается достаточно для того, чтобы собеседник подхватил болезнь. Но шансы заразиться от незнакомца минимальны. Гораздо большую опасность представляют люди, которые не знают о своем заболевании, но находятся с вами в близком контакте. Однако вы можете предпринять следующие меры для предотвращения развития заболевания:

• Избегайте общественных мест и скоплений людей.
• Носите специальную маску.
• Периодически проверяйтесь.

Все перечисленные методы работают лишь на треть. Поскольку все мы живем в окружении других людей, полностью избежать контакта с ними не представляется возможным. Ношение маски может снизить риск заражения. Поэтому все, что на самом деле в наших руках – это заботиться о своем здоровье и вовремя подмечать настораживающие симптомы. Особенно следует быть осторожными людям, которые имеют следующие заболевания:

• сахарный диабет;
• ВИЧ;
• рак;
• болезни почек;
• критично низкую массу тела.

Своевременная дифференциальная диагностика туберкулеза помогает увеличить шансы на полное выздоровление и защищает ваших близких от заражения.

Факты

Вот несколько фактов о туберкулезе, которые заставят вас задуматься.

• Туберкулез входит в тройку основных причин смерти пациентов в возрасте от 15 до 44 лет.
• По оценкам ВОЗ примерно девять миллионов человек в год болеют туберкулезом, из них три миллиона никогда не узнают о своей болезни.
• Симптомы туберкулеза, такие как потливость, потеря веса и невысокая температура могут быть слабо выражены на протяжении многих месяцев, за время которых люди могут заразить около 10-15 человек.
• Туберкулез – это патоген, который может передаваться от человека к человеку исключительно по воздуху.

Лечение

Диагностика и лечение туберкулеза крайне важно для поддержания здоровья. Ведь без лечения 2/3 больных умирают. Однако при своевременном приеме препаратов болезнь является излечимой в 100 % случаев. На ранних стадиях применяются антибиотики, а на поздних может потребоваться и операция. В некоторых случаях бактерии туберкулеза могут мутировать в инфекцию, которая окажется невосприимчивой к стандартным лекарствам. Тогда потребуется более длительное лечение препаратами нового поколения, которые доступны далеко не во всех странах. Также после излечения нередко наступают рецидивы, которые требуют повторного курса лекарств. Микроорганизмы туберкулеза чрезвычайно устойчивы и могут быть уничтожены только специальными и довольно сильными препаратами. При помощи народной медицины и других альтернативных методов вылечить это серьезное заболевание нельзя.

Клиническая диагностика туберкулеза обязательно должна проводиться регулярно даже при отсутствии каких-либо симптомов. Своевременное обследование может предотвратить многие проблемы, связанные со здоровьем.

Наиболее характерные изменения в анализах крови.У больных с начальными формами туберкулеза в крови со­держится нормальное количество эритроцитов и гемоглобина. По мере нарастания патологических изменений в легочной ткани может развиться гиперхромная анемия, при резком исхудании больного могут наблюдаться явления гипохромной анемии. Может наблю­даться лейкоцитоз в пределах 12—15∙109. или ко­личество лейкоцитов в норме. Более характе­рен нейтрофильный сдвиг влево.

Тяжелые формы туберкулеза протекают с эозинопенией и лимфопенией. При малых и свежих формах туберкулеза обычно наблюдается лимфоцитоз.

Повышенная СОЭ зависит от процесса туберкулеза, только при туберкулезном менингите она может быть в пределах нормы.

Обнаружение микобактерий.Имеет решающее значение не толь­ко для диагностики туберкулеза, оно чрезвычайно важно при про­гнозировании течения процесса, выборе рациональной схемы ле­чения и правильной оценке его эффективности.

Основными методами лабораторной диагностики туберкулеза являются классические микробиологические методы: бактерио­скопия; культуральное исследование, или посев; биологическая проба на чувствительных к туб. инфекции лабораторных животных.

Сбор материала на исследование. От соблюдения правил сбора, хранения и транспортировки биолог. материала зависит не только достоверность результатов, но и эпидемиологическая безопасность окружающих.

Материал для исследования собирают в стерильные контейнеры (стеклянные банки) с плотно завинчивающимися крышками. Это предотвращает попадание содержимого и загрязнение окружающей среды микобактериями и обеспечивает изоляцию исследуемого материала от широко распространенных в окружающей среде кислотоустойчивых бактерий.

Для исследования может быть использован разнообразный патологический материал: мокрота, аспират, содержимое бронхов и другие материалы, получаемые при бронхоскопии, промывные воды бронхов и желудка, экссудаты, гной, отделяемое ран, спинномозговая жидкость, кровь, моча, операционный материал, смывы с предметов и др.

У больных легочными формами объектом исследования чаще служит мокрота. Желательно, чтобы сбор мокроты производился в отдельной, хорошо вентилируемой комнате. Собирают утреннюю порцию. Если больной выделяет мало мокроты, ее следует собирать в течение суток, при этом обязательно собранный материал хранить в холодильнике. Если исследование проводится на фоне лечения, за 2 суток до сбора мокроты прием противотуберкулезных препаратов отменяется. Сбор мокроты должен производиться в присутствии и при непосредственном участии среднего мед. персонала.

Лица, ответственные за сбор мокроты, руководствуются следующими правилами:

1. Объяснить больному причины исследования и необходимость откашливать содержимое глубоких отделов дыхательных путей, а не собирать слюну или носоглоточную слизь. Необходимо предупредить больного, что он должен предварительно почистить зубы и прополоскать полость рта кипяченой водой, чтобы механически удалить основную часть микрофлоры, вегетирующей в ротовой полости.

2. Присутствующий при сборе мокроты мед. работник должен открытьь стерильный контейнер, снять с него крышку и передать больному только донную часть контейнера.

3. Стоя позади больного, следует рекомендоватьему держать контейнер как можно ближе к губам и сразу же сплевывать в него мокроту по мере ее откашливания.

4. По завершении сбора мокроты мед. работник оценивает ее количество и качество; контейнер с порцией мокроты не менее 3-5 мл, содержащей уплотненные или гнойные комочки без слюны, тщательно закрывают завинчивающейся крышкой, маркуруют и помещают в специальный ящик для транспортировки в лабораторию.

Если больной не выделяет мокроту или выделяет ее только эпизодически и в скудном количестве, то накануне и рано утром в день сбора мокроты больному следует дать отхакивающее средство или применить раздражающие аэрозольные ингаляции (усиливаются секреция бронхов, кашль и отделение мокроты). Для этого используют портативные аэрозольные ингаляторы. В качеств ингалируемой смеси можно использовать 15% р-р хлорида натрия в 1% р-ре бикарбоната натрия (150г NaCl и 10г NaHCO3 на 1 литр дистиллированной воды).

Если мокроту не удалось получить, используют промыные воды бронхов или желудка (преимущественно у детей младшего возраста, которые плохо откашливают мокроту и заглатывают ее).

Промывные воды желудка берут натощак, предварительно дав больному выпить или введя че­рез зонд 100—150 мл раствора бикарбоната натрия (питьевой соды). Промывные воды желудка должны исследоваться немедленно, чтобы исключить повреждающее воздействие на возбудителя же­лудочных ферментов.

Более ценным материалом для исследования при отсутствии мокроты являются аспираты из трахеи и бронхов, бронхоальвеолярная лаважная жидкость, а также материалы прицельной биопсии, получаемые при бронхологических исследованиях.

Исследование кала на микобактерии необходимо производить при наличии признаков туберкулеза кишечника. Для исследования берут несколько комочков кала со слизью или гноем, размеши­вают с 5%-м изотоническим раствором хлорида натрия и фильт­руют. В настоя­щее время туберкулез кишечника встречается исключительно редко, а поэтому исследование кала на БК практически не про­изводится.

Для обнаружения микобактерии в плевральном экссудате, в пунктатах и отделяемом из свищей препарат приготавливают так же, как и при исследовании мокроты.

Особого методического подхода требует исследование менст­руальной крови. Этот материал незамедлительно доставляют в лабораторию.

Сбор мочи. Для исследования ис­пользуют обычно среднюю порцию утренней мочи, полученной после тщательного туалета наружных половых органов растворами антисептиков (слабый раствор перманганата калия, риванола и пр.)

Хранение, консервация и транспортировка диагностического ма­териала. В противотуберкулезных учреждениях функционируют специализированные лаборатории, производящие бактериологи­ческие исследования.

В стационарах стерильные контейнеры с мокротой или другим патологическим материалом доставляются непосредственно в ла­бораторию. Сбор материала от амбулаторных больных произво­дится под непосредственным наблюдением среднего медицинского работника.

Если в лечебном учреждении не проводятся исследования для выявления кислотоустойчивых микобактерий, собранный диа­гностический материал должен централизованно доставляться в лабораторию. Обычно такая доставка осуществляется один или два раза в неделю. Следовательно, материал должен накапливаться в течение нескольких дней. Для этого используют биксы или специ­альные транспортировочные ящики, вмещающие 10 — 20 контей­неров, которые хранятся в холодильнике.

Во время транспортировки материал необходимо предохранять от воздействия прямых солнечных лучей и тепла. В определенных ситуациях используют консервант - 2 —3%-й раствор борной кислоты в соотношении 1:1 или глицерин. В качестве кон­серванта можно также использовать 10%-й раствор трехзамещенного фосфата натрия или 0,05—0,1%-й раствор хлоргексидин биглюконата в соотношении 1:1; Рост микобактерий может быть получен даже после хранения мокроты с консервантом при температуре 30 °С в течение 10—12 дней.

Бактериоскопическое исследование. Оно является одним из ос­новных и наиболее распространенных методов. Преимущества его заключаются в простоте, дешевизне и быстроте получения ре­зультатов. Однако возможности метода ограничены. В препарате можно обнаружить единичные микобактерии, если в 1 мл мате­риала содержится не менее 10 000— 100 000 бактериальных клеток (предел метода).

Наиболее распространенным методом окраски для выявления кислотоустойчивых микобактерий является способ Циля—Ниль­сена.

Мокроту на предметном стекле окрашивают карболовым фуксином, при одновременном воздействии нагревания обесцве­чивают мазок в 3%-м растворе солянокислого спирта (приводит к обесцвечиванию всех некислотоустойчивых структур) и докраши­вают метиленовым синим. Только микобактерии, обладающие вы­раженной кислото- и спиртоустоичивостью, стойко удерживают краситель и остаются окрашенными в красный цвет.

Микобакте­рии обнаруживаются в препарате в виде тонких, прямых или слегка изогнутых ярко-красных палочек.

В настоящее время применяется метод окраски люминисцентными красителями (более высокая информативность).

В тех случаях, когда в патологическом материале не удается обнаружить микобактерии методом бактериоскопии, производят бактериологическое исследование. Культуральный метод — посев материала на питательные среды. Преимущество метода в высокой чувствительности. Достаточно 20—100 микобактерий в 1 мл материала. Недостаток метода заключается в длительности роста колоний: 1 — 3 мес.

Применение двух методов в совокупности позволяет более точно количественно оценить степень бактериовыделения.

Исследуемый материал высевают на специальные среды после предварительной обработки. Наиболее часто используют яичные среды. Пер­вые колонии микобактерий появляются на 18 —30-й день, а иногда и через 3 месяца.

Бактериологическое и бактериоскопическое исследование не­обходимо проводить в сочетании.

Биологический метод заражения животных сейчас при­меняется только в научно-исследовательских институтах.

В настоящее время началось использование молекулярно-биологического метода - полимеразной цепной реакции (ПЦР). Сначала выделяется ДНК ми­кобактерии, затем она клонируется и идентифицируется. Метод очень чувствительный (достаточно 1 МБТ), однако без одновре­менной оценки клинической картины заболевания использовать его надо осторожно. Это — перспек­тивный метод, но его роль еще до конца не определена.

Определение лекарственной устойчивости микобактерий.В на­стоящее время разработаны и внедрены в практическую деятель­ность диспансеров методы определения лекарственной чувстви­тельности (устойчивости) микобактерий к туберкулостатическим препаратам. Различают первичную лекарственную устойчивость у больных, не леченных противотуберкулезными препаратами, и вторичную, развивающуяся в процессе лечения. Частота первич­ной устойчивости составляет 20 —80 %.

Лекарственная устойчивость микобактерий может быть: моно - к одному препарату, множественная — к смеси изониазида и рифампицина, полирезистентная — к двум и более пре­паратам кроме рифампицина и изониазида, перекрестная — к препаратам со сходной химической структурой.

В настоящее время внедряются генетические методы определе­ния лекарственной устойчивости с помощью ПЦР-метода.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском: