Смывы на микобактерии туберкулеза

Цель: обнаружение микобактерий туберкулеза, научить пациента самостоятельно собрать мокроту. 11оказание: заболевания органов дыхания.

Приготовьте:

-три плевательницы многоразовые или одноразовые или контейнеры с герметично завинчивающимися крышками; чистую -сухую широкогорлую банку из прозрачного стекла 50-200 мл с крышкой;

напишите и наклейте направление (ФИО пациента, год рождения, дата забора, идентификационный номер пациента, направление ф. ТБ- 05).

Алгоритм действия:

1. Проведите инструктаж с пациентом о правилах сбора мокроты на исследование.

2. Проводите забор мокроты в отсутствие посторонних лиц на открытом воздухе, либо в специально отведенной для этих целей отдельной комнате, хорошо проветриваемой, с открывающимися окнами, с наличием вытяжной вентиляции и кварцевой лампы.

3. Наденьте маску, клеенчатый фартук, резиновые перчатки.

4. Собирайте мокроту рано утром до приема пищи 3 дня подряд. Выдайте пациенту открытую плевательницу или контейнер.

5. Попросите пациента почистить зубы и прополоскать полость рта и зев водой или раствором соды.

6. Встаньте за спиной пациента и попросите его поднести ко рту плевательницу или контейнер.

7. Попросите пациента накрыть рот платком или тканью и сделать 3 глубоких вдоха и выдоха и в конце сильно откашлянуться и сплюнуть мокроту в количестве 3-5 мл в плевательницу или контейнер, не касаясь ее краев.

8. Закройте плевательницу (контейнер) крышкой.

9. Осмотрите мокроту и убедитесь, что мокрота содержит плотные гнойные частицы, а не слюну.

10.Отправьте собранную утреннюю пробу мокроты в лабораторию в течение суток.

11.Оформите бланк направление ф. ГЬ-05.

Примечание: при сборе мокроты для бактериоскопииеского исследования в условиях поликлиники, амбулатории, ФАПа мокроту собирают согласно выше описанных правил. Особенностью сбора мокроты вне стационара является сбор мокроты в два приема.

Первая проба мокроты собирается при обращении пациента в поликлинику утром под наблюдением медработника.

Вторая проба - утром следующего дня дома и доставляется в лабораторию. Третья проба собирается пациентом в этот же день в поликлинике под наблюдением медработника ( т.е. 2-3 пробы собираются в один день).

- сбор мокроты проводится обязательно под контролем медработника;

- многоразовые плевательницы и контейнеры подлежат дезинфекции и стерилизации;

одноразовые плевательницы после использования подлежат уничтожению.

Цель: диагностическая: выявление возбудителя заболевания.

Показания: туберкулез и другие инфекционные заболевания.

Приготовьте: стерильную сухую плевательницу или стеклянную чистую сухую широкогорлую банку с плотно закрывающейся крышкой, бикс, чашку с кипяченой водой (остуженной), салфетку, бланки направлений, ручку, стеклограф, перчатки, маску, емкость с дезраствором, КБУ.

Алгоритм действия:

1. Собирайте мокроту в день исследования утром натощак.

2. Пронумеруйте плевательницу или банку.

3. Оформите направление в бактериологическую лабораторию.

4. Проведите деконтаминацию рук на гигиеническом уровне, наденьте перчатки, маску.

5. Установите доверительные отношения с пациентом и объясните ход и цель процедуры.

6. Проведите инструктаж с пациентом о правилах сбора мокроты.

7. Предупредите пациента, что он должен собрать мокроту при глубоком кашле, а не при отхаркивании и чтобы он не касался краев посуды руками или ртом.

8. Попросите пациента:

- почистить зубы утром за 2 часа до сбора мокроты; прополоскать полость рта и глотку остуженной кипяченой водой;

- встать или сесть прямо;

- открыть крышку плевательницы;

- накрыть рот платком или тканью, сделать 3 глубоких вдоха, в конце 3-го выдоха сильно откашлянуть мокроту из более глубоких отделов легких в плевательницу, при этом пациент должен держать ее у нижней губы и тщательно сплюнуть мокроту, не касаясь краев плевательницы.

9. Закройте плевательницу плотной крышкой.

10.Обработайте наружную поверхность плевательницы салфеткой, смоченной в дезрастворе.

11.Осмотрите собранную мокроту, упакуйте плевательницу в металлический бикс.

12.Доставьте мокроту в бактериологическую лабораторию.

13.Снимите маску, перчатки, поместите в КБУ.

14. Вымойте и просушите руки.
Примечание:

- при затруднении отделения мокроты ее взятие следует провести после назначения отхаркивающих средств;

- мокроту собирают до назначения антибиотиков;

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Начиная с открытия Коха, длительное время основным и наиболее распространенным методом выявления микобактерий туберкулеза являлась бактериоскопия.

В настоящее время метод бактериоскопии считается недостаточным для диагностики туберкулеза. В практической работе противотуберкулезных учреждений необходимо чаще применять посев исследуемого материала на питательную среду, т. е. бактериологический метод.

Кроме бактериоскопии и метода посева, необходимо в ряде случаев использовать и прививки лабораторным животным, т. е. биологический метод.

Микобактерии туберкулеза можно обнаружить в различном материале, полученном от больного. Таким материалом является прежде всего мокрота. С усовершенствованием лабораторных методов удается обнаружить микобактерии туберкулеза в мокроте при незначительных изменениях в легких, а в ряде случаев — и без видимых на рентгенограмме туберкулезных поражений в легких. При отсутствии мокроты или невозможности ее получения исследуют промывные воды желудка. Этот способ после работ Арман-Делилля [Armand-Delill, 1927] имеет широкое применение в практике противотуберкулезных учреждений. Предполагали, что микобактерии туберкулеза попадают с мокротой в желудок как у взрослых, так и особенно у детей, страдающих легочным туберкулезом. Исследования и клинические наблюдения, проведенные в СССР и за рубежом, показали, что микобактерии туберкулеза в промывных водах желудка можно обнаружить не только при легочном, но и при внелегочном туберкулезе (кожи, костей, глаз, лимфатических узлов). Эти наблюдения доказывают возможность поступления микобактерии туберкулеза в желудок лимфогематогенным путем независимо от локализации туберкулезного процесса.

При отсутствии мокроты можно исследовать, кроме промывных вод желудка, слизь из гортани, а также промывные воды бронхов. Для этого больному натощак после предварительной анестезии дыхательных путей 1 % раствором дикаина орошают гортань подогретым изотоническим раствором хлорида натрия (10—15 мл) с помощью гортанного шприца. При этом необходимо создать такое положение больного, которое способствовало бы попаданию раствора в бронхи пораженного легкого. Изотонический раствор хлорида натрия, раздражая слизистую оболочку бронха, вызывает усиленное отделение слизи. Выделяемые при откашливании больным промывные воды бронха собирают в стерильный сосуд и подвергают дальнейшему исследованию.

Можно исследовать микобактерии туберкулеза, выделенные в фекальных массах, но при обнаружении в них микобактерий туберкулеза трудно решить вопрос, из каких органов последние выделяются.

Исследовать можно также мочу, спинномозговую жидкость, другие биологические жидкости и патологический материал.

Бактериоскопические методы выявления микобактерий туберкулеза

Бактериоскопические методы выявления микобактерий включают: обычную бактериоскопию мазков, окрашенных по Цилю — Нильсену, флотацию и люминесцентную микроскопию.

Обычная бактериоскопия. В мазках, окрашенных по Цилю — Нильсену, микобактерии туберкулеза могут быть обнаружены только при наличии не менее 50 000 бактериальных клеток в 1 мл патологического материала (предел чувствительности метода), причем тогда, когда микобактерии не изменены тинкториально или морфологически под влиянием антибактериальных препаратов (при лечении больного).

Для приготовления мазков мокроту выливают в чашку Петри и заостренными деревянными палочками из 5—6 участков выбирают гнойные комочки на два предметных стекла для приготовления мазков. Один препарат используют для исследования на эластические волокна. На другом стекле комочки мокроты растирают третьим стеклом и получают таким образом два препарата, один из которых окрашивают по Цилю — Нильсену, а второй, например, флюорохромными красками, если имеется возможность произвести люминесцентную микроскопию.

При окраске по Цилю — Нильсену на препарат наливают карболовый фуксин, подогревают до появления паров, обесцвечивают 6% раствором серной кислоты или 3% солянокислым алкоголем и докрашивают 0,25% раствором метиленового синего.

Окрашенные мазки микроскопируют с иммерсионной системой. При этом микобактерии туберкулеза выглядят красными на синем фоне. Типичные микобактерии имеют вид тонких, прямых или слегка изогнутых зернистых палочек.

Количество микобактерий туберкулеза, обнаруживаемых методом бактериоскопии в мокроте больного, зависит от многих причин и может колебаться в различных пределах. Учитывая возможные случайности и затруднения для определения количества микобактерий туберкулеза, мокроту больного рекомендуется исследовать повторно.

С введением в практику бактериостатических средств, препятствующих росту и размножению микобактерий туберкулеза в организме больного, определение количества их в мокроте в период лечения может быть относительным критерием эффективности антибактериальной терапии, учитывать который необходимо в комплексе с клиническими, рентгенологическими и другими лабораторными исследованиями. При отрицательных результатах бактериоскопии мокроты больных туберкулезом или лиц, подозрительных на туберкулез, рекомендуется производить повторные исследования мокроты 4—5 дней подряд или гомогенизировать мокроту при помощи химических веществ, т. е. превращать в однородную массу, и центрифугировать ее с целью концентрации микобактерий туберкулеза в небольшом объеме.

В мокроте могут быть различные форменные элементы: лейкоциты, эритроциты, эпителий, альвеолярные клетки, пылевые клетки, цилиндрический мерцательный эпителий, эластические волокна, известковые соли, кристаллы холестерина. Плоский эпителий может исходить из полости рта, глотки, гортани. У лиц, вдыхающих угольную пыль и дым, в мокроте обнаруживаются пылевые клетки. Цилиндрический эпителий может включаться в мокроту при прохождении последней через бронхи и трахею. Эритроциты, единичные и неизмененные, могут попадать в мокроту из поврежденных десен и носоглотки, но наличие эритроцитов в мокроте может быть и вследствие кровохарканья.

В мокроте могут быть, кроме описанных, эластические волокна Коплена — Джонса, или коралловидные. Они представляются толстыми, шероховатыми образованиями, заканчивающимися колбасообразно. Можно обнаружить и обызвествленные эластические волокна.

Наличие эластических волокон в мокроте указывает на разрушение легочной ткани. При свежем распаде пучки волокон сохраняют альвеолярное строение, при пролиферативных формах туберкулеза эластические волокна выделяются в виде пучков без сохранения альвеолярного строения. Волокна могут выделяться при всех формах туберкулеза; волокна Коппена — Джонса появляются преимущественно в случаях старого туберкулеза. Обызвествленные волокна можно видеть при распаде обызвествленных очагов во время обострения процесса.

Необходимо иметь в виду, что эластические волокна также можно обнаружить и при ряде нетуберкулезных заболеваний легких, например при абсцессе легких.

В мокроте больных туберкулезом можно обнаруживать известковые соли (карбонаты и сульфаты), имеющие под микроскопом вид темных зерен разной величины. Попадают они в мокроту чаще всего из старых, распадающихся обезвествленных очагов. Известковые соли от прибавления разведенной азотной кислоты растворяются.

Кристаллы холестерина в мокроте имеют вид нежных пластинок разной величины, большей частью с обломанными краями. Эти кристаллы обнаруживаются при наличии в легких старых каверн.

Метод флотации. Этот метод применяется в случаях скудного содержания микобактерий туберкулеза в исследуемом материале и при отрицательном результате бактериоскопии. По сравнению с обычной бактериоскопией микобактерии туберкулеза обнаруживаются методом флотации в патологическом материале примерно на 10—15% чаще. Для исследования методом флотации мокроту в количестве 12—15 мл помещают в колбу емкостью 250 мл, добавляют примерно равное количество 0,5% раствора едкого натра или кали и для лучшей гомогенизации встряхивают в течение 5—10 мин, затем до половины емкости колбы наливают дистиллированную воду с добавлением 0,5 мл ксилола или бензина. Все содержимое встряхивают 5—10 мин, после чего доливают дистиллированную воду до окончательного объема — 250 мл. Спустя 30—60 мин капельки бензина (ксилола) всплывают на поверхность, увлекая за собой микобактерии туберкулеза, концентрируя их в небольшом объеме образовавшегося на поверхности кольца. Полученное флотационное кольцо пипеткой переносят на два предметных стекла. Один препарат окрашивают по Цилю — Нильсену.

При флотации промывных вод, гноя, экссудата, спинномозговой жидкости и другого материала, не требующих гомогенизации, к ним добавляют меньшее количество раствора щелочи (от 1—2 капель до 1—2 мл в зависимости от количества материала). В дальнейшем поступают так же, как при флотации мокроты.

Люминесцентная микроскопия. Метод люминесцентной микроскопии основан на способности микобактерий туберкулеза, окрашенных флюорохромами, светиться под воздействием сине-фиолетовых лучей.

Этот метод позволяет дополнительно выявлять микобактерии туберкулеза на 17% чаще по сравнению с обычной бактериоскопией и на 8% чаще по сравнению с методом флотации. При люминесцентной микроскопии исследование производится при малом увеличении, что расширяет поле зрения и способствует обнаружению микобактерий туберкулеза, содержащихся в исследуемом материале в небольшом количестве.

Для люминесцентного исследования пользуются либо специальным микроскопом (МЛ-1 и МЛ-2), либо обычным микроскопом типа МБИ-1 с добавочным осветителем. Ко всем комплектам осветительной аппаратуры прилагаются наборы необходимых светофильтров.

Люминесцентным методом исследуют различный патологический материал. Фиксированные над пламенем препараты

окрашивают при легком подогревании в течение 15 мин специальной смесью: аурамин 00—0,5 г, радомин С — 0,05 г на 1000 мл дистиллированной воды. Затем мазок промывают водой и в течение полминуты обесцвечивают 3% солянокислым спиртом, снова промывают водой и докрашивают для гашения фона 0,25% раствором метиленового синего. При люминесцентной микроскопии микобактерии флюоресцируют золотисто-желтым цветом на темном нефлюоресцирующем фоне. Этот метод в настоящее время находит широкое применение.

Бактериологические методы

Больной туберкулезом в процессе антибактериального лечения может выделять микобактерии туберкулеза, измененные морфологически и в небольшом количестве, что не позволяет обнаружить их бактериоскопическими методами (обычная бактериоскопия, метод флотации, люминесцентная микроскопия). Поэтому в комплекс исследований, направленных на обнаружение микобактерий туберкулеза, в настоящее время обязательно включается посев патологического материала. Выделение культур микобактерий туберкулеза позволяет определить жизнеспособность возбудителя, его лекарственную чувствительность, ферментативную активность и вирулентность.

Для бактериологического исследования может быть использован любой патологический материал.

Поскольку обычно в посевном материале содержится и неспецифическая микрофлора, требуется его так обработать, чтобы уничтожить сопутствующую микрофлору и сохранить при этом жизнеспособность микобактерий туберкулеза.

В последние годы в связи с широким применением противотуберкулезных препаратов в 19—20% случаев наблюдается диссоциация между обнаружением микобактерий туберкулеза при бактериоскопическом исследовании и ростом их при посеве патологического материала. Это явление заключается в том, что видимые под микроскопом, они не растут на питательных средах. Такая диссоциация обусловлена воздействием на микобактерии туберкулеза лекарственных препаратов.

Биологическая проба. Наиболее чувствительным методом обнаружения микобактерий туберкулеза является заражение морских свинок. Однако не всегда удается получить развитие генерализованного туберкулеза в тех случаях, когда в патологическом материале содержатся микобактерии туберкулеза, устойчивые к препаратам гидразида изоникотиновой кислоты. В таких случаях микобактерии оказываются невирулентными для этих животных, и тогда при положительном результате посева патологического материала имеет место отрицательный исход заражения.

При развитии туберкулезного процесса после подкожного заражения в области введения материала к концу месяца прощупываются увеличенные лимфатические узлы. Аллергические реакции определяются при внутрикожном введении 0,1 мл ATK 1 : 10. При положительной биологической пробе у морских свинок развивается генерализованный туберкулез.

Бактериологический метод исследования мокроты при туберкулезе

Д.В. Шевчук, О.Е.Кузнецов

Бактериологический (культуральный) метод имеет ряд преимуществ перед микроскопическим и другими методами. Основное преимущество состоит в возможности обнаружения скудного количества жизнеспособных МБТ в клиническом материале: положительные результаты получают при наличии в исследуемом материале от 20 до 100 жизнеспособных микробных клеток в 1 мл. Однако ему свойственны и недостатки, обусловленные длительностью сроков появления видимых колоний микобактерий туберкулеза. В тоже время возможность получения чистой культуры возбудителя, которая может быть подробно исследована, позволяет решать вопросы изучения ее лекарственной чувствительности, вирулентности и других биологических свойств (типовой принадлежности).

Для нормального развития МБТ требуются специальные питательные среды, содержащие углерод, азот, водород, кислород, фосфор, магний, калий, а также железо, хлор, натрий, серу. Кроме того, для полноценного развития МБТ, как и других микроорганизмов, необходимо наличие факторов роста, которые в минимальных количествах улучшает рост бактерий на средах. Факторы роста не входят в состав ферментных систем клетки, но используются для их построения. Известны факторы роста, родственные по своей природе витаминам группы В, ряд аминокислот, органических кислот и липидов. Все эти факторы содержаться в разных количествах в питательных средах – яичных, кровяных, картофельных. Следует отметить, что потребности микробов в ростовых веществах весьма вариабельны и существенно зависят от условий культивирования. Имеющиеся в литературе сведения по этому вопросу немногочисленны и зачастую противоречивы.

В популяции МБТ обычно встречаются быстро и медленно растущие, персистирующие и лекарственно-устойчивые штаммы микобактерий. В зависимости от преобладания тех или иных штаммов МБТ с разными свойствами, меняется скорость и характер их роста на питательных средах, а при снижении жизнеспособности МБТ их рост на среде может не только замедлиться, но даже и не появиться. Первичные культуры микобактерий, выделенные из патологического материала, особенно чувствительны к отсутствию факторов роста. По-видимому, при вегетировании в тканях организма они теряют способность самостоятельно синтезировать такие вещества. Следовательно, для таких культур необходимы полноценные питательные среды.

По составу среды можно разделить на 3 группы:

1. среды, содержащие глицерин;
2. белковые среды (сывороточные, яичные);
3. синтетические (безбелковые) среды.
4. смешанные среды, которые являются более полноценными.

По консистенции среды делят на твёрдые, полужидкие и жидкие. Для культивирования и дифференциации микобактерий туберкулёза используется большое количество разнообразных по составу и консистенции питательных сред.

Питательные среды, используемые для получения культур микобактерий можно разделить на три группы:

1. яичные (Левенштейна-Йенсена, Финна, Петраньяни и др.);
2. агаровые (Миддлбрука 7Н10, 7Н11 и др.);
3. бульонные или жидкие (Миддлбрука 7Н9, 7Н12, Дюбо, Школьниковой и др.).

Для культивирования МБТ используют различные питательные среды: жидкие, полужидкие и плотные. Жидкие и полужидкие среды используются редко, в связи с возможностью возникновения аварийных ситуаций и внутрилабораторного заражения персонала. Стандартной плотной средой, рекомендуемой ВОЗ для выделения возбудителя и определения его лекарственной чувствительности является яично-солевая среда Левенштейна-Йенсена. Она выпускается в виде порошка, который разводится, разливается в пробирки и подогреваясь, приобретает плотную консистенцию, за счет сворачивания яичного белка. Предварительно, перед сворачиванием, среда подкрашивается бриллиантовым зеленым для облегчения в последующем идентификации колоний МБТ.

Существуют другие варианты плотных яичных сред: Финна II (L-аспарагин заменен на глутамат), Аникина (без аспарагина), Гельберга (приготовленная на картофельном отваре). Однако они имеют ряд недостатков: высокая стоимость с учетом широкого распространения бактериологического исследования в противотуберкулезных учреждениях, относительно медленный рост МБТ, особенно при их пониженной жизнеспособности, что особенно часто встречается в условиях химиотерапии. Разработка новых плотных питательных сред, позволяющих ускорить выделение микобактерий, повысить интенсивность их роста, а также, что весьма важно, снизить себестоимость в условиях массового применения, является несомненно актуальной проблемой, заслуживающей серьезного внимания.

Диагноз туберкулеза у пациента подтверждается на основании лабораторного исследования при обнаружении в диагностическом МБТ при параллельных микроскопических и культуральных исследованиях. Именно поэтому исследования в микробиологических лабораториях противотуберкулезной службы, помимо микроскопии мазков из клинического материала, должны обязательно включать культуральные исследования, направленные на идентификацию кислотоустойчивых микобактерий и определение их принадлежности к виду M. tuberculosis или к другим видам нетуберкулезных микобактерий, а также определение чувствительности микобактерий к лекарственным препаратам.

Бактериологический метод является более чувствительным и достоверным, он позволяет выявить МБТ, если их содержится около 100 в 1 мл. материала. Важным преимуществом этого метода является возможность выделения возбудителя и изучение его видовой принадлежности, вирулентности, лекарственной чувствительности.

Недостатками бактериологического метода можно считать:

1. сложность – выполним только в специализированной бактериологической лаборатории.
2. высокую стоимость исследования.
3. длительность исследования может составить 20-90 дней, в зависимости от типа роста микобактерии.

МБТ – очень требовательные гетеротрофы, нуждающиеся в глутаминовой и особенно аспарагиновой кислоте и глицерине (источнике углеводов) Стимулятором роста является лецитин, содержащийся в больших количествах в яичном желтке.

В связи с ограничением объема массовых флюорографических обследований должны проводится бактериологические исследования на туберкулез у лиц из контингентов повышенного риска заболевания туберкулезом:

• с остаточными туберкулезными изменениями.
• больных хроническими неспецифическими болезнями органов дыхания
• больных с хроническими заболеваниями мочеполовой системы (хронический пиелонефрит, цистит, простатит, мочекаменная болезнь, осложненная пиелонефритом, лица с неясными болями в поясничной области, расстройством мочеиспускания, находящиеся на гемодиализе, после пересадки почки)
• перенесшие туберкулез любой локализации и имеющих урологические жалобы с дизурией, гематурией и альбуминурией
• женщин с бесплодием и хроническими воспалительными заболеваниями гениталий
• работников из неблагоприятных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйств
• с гиперэргическими реакциями Манту и имеющих контакт с больным туберкулезом
• нетранспортабельных больных
• при подозрении на туберкулез легких, туберкулез лимфатических узлов, костно-суставной и туберкулез других локализаций
• бактериологическое обследование на туберкулез производятся у всех лиц при обращении в поликлинику за медицинской помощью с субфебрильной температурой неясной этиологии, грудной симптоматикой и простудными заболеваниями
• рентгенположительные лица обследуются при наличии отягощающих факторов (перенесенные тяжелые заболевания, длительное лечение кортикостероидными препаратами и др.)

Бактериологическому исследованию подвергается самый разнообразный материал: мокрота, промывные воды бронхов, желудка, экссудат, отделяемое ран, моча, ликвор, биопсийный и секционный материал и др.

Результативность бактериологического обследования зависит от правильности сбора патологического материала, хранения и его доставки, особенно от больных с бронхолегочными заболеваниями. При необходимости транспортировки патологического материала на дальние расстояния (особенно в летний период) необходимо применять консерванты, которыми должна снабжать специализированная баклаборатория. В качестве консервантов употребляют стерильные: 10% раствор трехзамещенного фосфорнокислого натрия, 10% раствор глицерина на дистиллированной воде и 2-3% раствор борной кислоты на дистиллированной воде. Патологический материал заливается в соотношении 1:1, вязкая мокрота 1:2, 1:3. В случае использования консерванта допускается более длительное хранение патологического материала (до 2-3 суток в условиях холодильника).

Материал доставляется в лабораторию в стерильной, хорошо закрытой посуде. С целью максимально гомогенизировать материал и подавить рост неспецифической гнилостной и гноеродной флоры, при отсутствии предварительной консервации, материал обрабатывается 10% трехзамещенным фосфорнокислым натрием (фосфат натрия), или 2%-6% стерильным водным раствором серной кислоты (метод Гона).

Для повышения информативности метода целесообразно исследовать патологический материал 3-кратно, в течение одной недели. Такая мера повышает чувтвительность метода на 3,4-5,8%. Рядом авторов установлено, что максимальный прирост высеваемости МБТ у вновь выявленных пациентов наблюдается при 6-кратных посевах (36-37%).

Для повышения результативности культурального метода рекомендуют посев осуществлять одновременно на две-три различные по составу питательные среды, чаще на среду Левенштейна-Йенсена и на среду Финна II. Посевы просматриваются каждые 7 дней, рост МТ появляется на 3-6 неделе. Большинство посевов дает рост МТ в течение 2-х месяцев. Однако, отдельные штаммы растут до 90 дней, поэтому необходимо инкубировать посевы до 3-х месяцев. При отсутствии роста к этому времени посев считается отрицательным.

Вирулентные культуры МБТ растут на плотных питательных средах в виде R-колоний (шероховатых) различной величины. Колонии чаще сухие, морщинистые, цвета слоновой кости, иногда с розоватым или желтоватым оттенком. Гладкие колонии (S-формы) характерны для микобактерий бычьего типа, которые в посдедние годы встречаются крайне редко. Следует помнить, что гладкие колонии с влажным ростом могут вырастать после курса проведенной химиотерапии больному туберкулезом. В виде S-форм с ярко оранжевой или желтой пигментацией растут сапрофиты и атипичные микобактерии.

Результаты учитывают путем ежедневного, начиная с третьего дня инкубации, сравнения сроков появления роста на питательной среде и оценки интенсивности роста колоний МБТ.

Интенсивность роста оценивалась путем подсчета колоний по 3-х бальной системе (колониеобразующие единицы – КОЕ):

Наилучшие результаты получают при одновременном использовании двух различных плотных сред. При этом не следует ограничиваться однократным или даже повторным исследованием, а необходимо последовательно, через известные интервалы производить посевы мокроты или промывных вод бронхов. Целесообразность такой диагностической тактики подтверждается повседневным опытом и, в частности, наблюдениями, проведенными в Институте туберкулеза в Будапеште. При троекратном исследовании методом посева мокроты у значительной группы больных туберкулезом легких микобактерии были обнаружены у 70,3% из них, после 5 анализов — у 80,7%, а после 10 — у 97,9%.

При бактериологическом способе исследования удается не только выявить и подсчитать количество выросших колоний микобактерии туберкулеза, но и изучить их различные свойства, дифференцировать от кислотоупорных сапрофитов и атипичных штаммов, определить типовую принадлежность, ферментативную активность, лекарственную чувствительность и др.

Успехи различных способов культивирования микобактерии, естественно, ограничили сферу применения биологического метода исследования, т. е. заражения животных исследуемым материалом. Но они ни в какой мере пе исключают его. Путем заражения высокочувствительных к туберкулезу лабораторных животных, главным образом морских свинок, можно обнаружить микобактерий, даже если они содержатся в исследуемом материале в небольшом количестве. Это обстоятельство приобретает, конечно, весьма важное диагностическое значение. Тем же способом удается лучше дифференцировать вирулентные и атипичные штаммы от сапрофитов, определить тип микробов, к которым одни виды животных чувствительны, а другие устойчивы, а также установить патогенность и вирулентность микобактерий туберкулеза.

Следует подчеркнуть, что при специфической химиотерапии затрудняется обнаружение микобактерий в различных выделениях, жидкостях и тканях организма больного. Это явление связано с тем, что под влиянием антибактериальных препаратов, особенно при длительной терапии, понижается жизнеспособность микобактерий и изменяются их морфологические свойства и химический состав, что отражается на тинкториальной способности, так как может вести к снижению или утрате присущей микобактериям кислотоустойчивости. Мертвые микобактерий по Цилю—Нельсену окрашиваются так же, как и живые. Для их дифференциации применяют специальные методы окраски. Так, живые микобактерий, в которых содержится нативная дезоксирибонуклеиновая кислота, окрашиваются метиловым зеленым. Погибшие микробы лучше окрашиваются пиронином в розовый цвет, а сафранином — в красный. При докраске карболовым фуксином живые микобактерий окрашиваются в зеленый цвет, а погибшие — в красный.

Распознавание таких биологически и морфологически измененных форм возбудителя туберкулеза, особенно в условиях повседневной практики, естественно, встречает затруднения. Этим отчасти можно объяснить, что у некоторых больных даже деструктивным туберкулезом легких не находят микобактерий туберкулеза в мокроте уже вскоре после начатой химиотерапии. Нет сомнения, что только у части из них произошло стойкое и полное морфологическое и биологическое оздоровление стенок туберкулезных каверн. У остальных имеет место мнимая абациллярность, что подтверждается возможностью обострения процесса при динамическом наблюдении, а также обнаружением микобактерий в полости или стенках каверны при специальном исследовании. В этом можно убедиться, если произвести пункцию, казалось бы, излеченной каверны и исследовать ее содержимое после промывания физиологическим раствором. Пользуясь таким методом, Neef (1966) из 49 больных с остаточными, большей частью небольшими (до 0,5 см в диаметре), посттуберкулезными полостями в легких у 11 больных, т. е. почти в 1/4 случаев, обнаружил микобактерий, которые не удавалось найти в мокроте или в промывных водах бронхов всеми доступными способами.

Таким образом, в условиях современной химиотерапии возникает необходимость дальнейшего усовершенствования методов обнаружения микобактерий туберкулеза. В то же время обязательным условием является одновременное динамическое комплексное применение различных лабораторных способов исследования патологического материала: бактериоскопии, посева, по возможности заражения лабораторных животных. Необходимо, кроме того, использование ряда специальных методов для выявления не только классических, но и других вариантов возбудителя.

Так, применяя новые питательные среды, а также пенициллин и дигидрострептомицин, можно выделить из мокроты, спинномозговой жидкости, мочи и тканей больных туберкулезом L-формы микобактерий в виде мелких зерен и шаровидных тел.

При дифференциации типичных и атипичных микобактерий используют комплекс многих методов исследования: определяют кислотно- и спиртоустойчивость микобактерий; изучают особенности их роста при различной температуре, на отдельных питательных средах, при наличии и отсутствии солнечного света; исследуют морфологию культур и способность образовывать пигмент; устанавливают степень чувствительности к туберкулостатическим препаратам. Существенное диагностическое значение имеют некоторые биохимические тесты: амидазный и ниациновый, определение каталазной, дегидрогеназной, пероксидазной, уреазной и липазной активности и реакция восстановления нитратов. О вирулентности тех или иных штаммов микробов судят по результатам определения корд-фактора и цитохимическим тестам. Их патогенность устанавливают при заражении морских свинок, белых мышей, кроликов, кур. Эти исследования дополняются изучением антигенных структур, а также аллергическими пробами с туберкулином и сенситинами, серологическими реакциями у больных.

Определенную роль в клинике туберкулеза органов дыхания играет вторичная — смешанная — инфекция, что связано прежде всего с тем что при нем нередко отмечаются хронический бронхит и пневмония, пневмосклероз, бронхоэктазы. Эти изменения могут сопутствовать туберкулезу или становятся его осложнением, особенно при длительном течении. В том и другом случае, отмечают Н. В. Татарский и А. Я. Цигельник (1968), создаются условия для проявления активности вторичной флоры и развития ряда клинических симптомов: повышения температуры, увеличения количества мокроты, нарастания катаральных явлений в легких, амилоидоза и т. д. При бактериологическом исследовании при этом обнаруживают различного вида стрептококки и стафилококки, грамположительные и грамотрицательные кокки, кишечную палочку и т. д. Все они имеют различную степень чувствительности к отдельным антибиотикам. При этом обязательным является выделение чистых культур и определение их патогенности.

При дифференциальной диагностике туберкулеза и глубоких микозов— аспергиллеза, гистоплазмоза, актиномикоза, кокцидиомикоза, нокаридиоза, кандидомикоза и т. д. — важно не только тщательно исследовать нативные и окрашенные препараты мокроты на присутствие дрожжеподобных грибов рода Candida, Coccidoides immitis, Histoplasma capsulatum, Aspergillus fumigatus и т. д., но и производить посевы на специальные питательные среды, главным образом на среду Сабуро с агаром или без него. Положительные результаты приобретают большее диагностическое значение, если одновременно у больных выявляются кожные реакции на кокцидиоидин, гистоплазмин, аспергиллин, бластомицин и др., а также серологические реакции с соответствующими антигенами (реакция преципитации, связывания комплемента).

- Вернуться в оглавление раздела "Пульмонология."