Анализ малины на вирусы

Особая опасность этих вирусов (особенно кустистой карликовости малины) заключается в способности передачи от больного растения к здоровому с пыльцой и семенами. Это усложняет контроль за их распространением в насаждениях.

Основным направлением борьбы с вирусными болезнями является перевод питомниководства на безвирусную основу и строгое соблюдение требований сертификации посадочного материала.

Целью работы являлось изучение распространенности вирусов малины в Центральном регионе РФ.

Материалы и методы. Исследования проводились путем визуальной оценки вирусных симптомов, а также методом иммуноферментного анализа (ИФА). Образцы листьев для ИФА отбирали в насаждениях Московской, Брянской и Рязанской областей. В течение 2012-2013 гг. методом ИФА протестировано 370 растений малины на 5 вирусов: кустистой карликовости малины (RBDV), кольцевой пятнистости малины (RpRSV), мозаики резухи (ArMV), черной кольцевой пятнистости томата (TBRV) и латентной кольцевой пятнистости земляники (SLRSV).

Результаты. В 2012-2013 гг. в результате проведенных исследований насаждений малины, расположенных на лабораторном участке и в демонстрационном саду ГНУ ВСТИСП (п. Измайлово) установлена различная зараженность вирусами сортов малины.

Из 12 сортов наиболее поражаемыми вирусами оказались сорта Брянское диво, Геракл, Бальзам, Пересвет, менее поражаемыми - Метеор, Скромница и Солнышко. Общая зараженность по всем тестированным растениям в условиях Московской области оказалась довольно высокой и составила 75%. Наибольший процент заражения установлен по вирусу кустистой карликовости малины, наименьший - вирусом мозаики резухи. Комплекс всех 5 изученных вирусов обнаружен у 16% проверенных растений малины, комплекс из 4 вирусов (ArMV + RpRSV + TBRV + RBDV) - у 50 % растений.

Оценка 19 сортов малины с коллекционных насаждений Кокинского опорного пункта ВСТИСП показала также высокую зараженность вирусами. Общая зараженность составила около 76%, а отдельными вирусами - от 9% (SLRSV) до 50% (RpRSV). В условиях Брянской области, в отличие от Московской, превалировал вирус кольцевой пятнистости малины.

На сортах Пингвин, Рубиновое ожерелье, Золотая осень установлен комплекс из четырех вирусов (ArMV+ RpRSV+SLRSV+RBDV), что составило 27% растений от числа проверенных. Комплекс из 2-х вирусов (RpRSV+RBDV) выявлен у 44% растений на сортах Носорог, Поклон Казакову, Брянская юбилейная, Брянское диво, Жар-птица, Колдунья, Золотая осень.

На Кокинском опорном пункте помимо сортов изучали зараженность вирусами 8 гибридов малины, которая составила 50%, причем наибольшая зараженность выявлена вирусами RBDV (28,9%) и RpRSV (21%).

Обследование насаждений 9 сортов малины в фермерском хозяйстве Рязанской области показало, что 63 % растений оказались зараженными, причем превалировал вирус кустистой карликовости малины. По остальным четырем вирусам отмечены единичные больные растения. Сорта малины Г орд ость России и Г енералиссимус оказались безвирусными.

Полученные результаты в целом согласуются с данными других авторов по зараженности вирусами малины [4,7].

На фоне высокого заражения сортов малины вирусами нами были выявлены 63 свободных от вредоносных вирусов растения 22 сортов: Носорог, Атлант, Пингвин, Элегантная, Поклон Казакову, Оранжевое чудо, Гордость России, Желтый гигант, Евразия, Метеор, Скромница, Солнышко, Абрикосовая, Журавлик, Рубиновое ожерелье, Бальзам, Геракл, Пересвет, Снежеть, Золотая осень, Подарок Кашину, Жар-птица. Выделенные безвирусные растения можно использовать для их последующего ретестирования и размножения.

Заключение. Таким образом, зараженность вирусами ArMV, RpRSV, TBRV, SLRSV, RBDV сортов малины в Центральном регионе России (Московская, Брянская, Рязанская области) варьировала в пределах 63-76%, а вирусами в отдельности: ArMV - 6-12%, RpRSV - 9-50%, TBRV - 6-26%, SLRSV - 4-24%, RBDV - 38-48%.

D.L.//Acta Hort.- 1999.- Vol. 505. - P. 263-271.8.Martin R. R. //Acta Hort.- 1998.-№471.- P.71-74.

Diagnostic of viral diseases of the raspberry. Upadishev M.T., Metlitckaya K.V., Tichonova K.O. All-Russian Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnics and Nursery.

Summary. The general rates of viral infections (ArMV, RpRSV, TBRV, SLRSV and RBDV) on raspberry in the Central Area of Russia (the Moscow, Bryansk, Ryazan Regions) ranged 63 to 76%; the rates for separate viruses were ArMV - 6-12%; RpRSV - 9-50%; TBRV - 6-26%; SLRSV - 4-24% and finally for RBDV - 38-48%.

Серьезную проблему при выращивании малины, в том числе малины ремонтантной, представляют различные вирусные болезни. Заражение возбудителями вирусных болезней (вирусами) происходит при попадании сока больного растения на поврежденную ткань здорового. Вирусные болезни передаются тлями, клещами, нематодами. Не исключено заражение вирусами через инструмент, используемый при обработке почвы и при обрезке. В отдельных случаях источником вирусной инфекции может быть пыльца пораженного растения. При вегетативном размножении зараженного вирусными болезнями растения все его потомство также оказывается зараженным. Выздоровления пораженного вирусами растения никогда не происходит. [1]

В настоящие время, во всем мире описано около 30 вирусных болезней малины, снижающих ее урожайность и ухудшающих качество посадочного материала.

Наиболее опасными и распространенными вирусными болезнями малины считаются курчавость, инфекционный хлороз, кустистая карликовость, мозаика. Кроме того, малина повреждается близким по характеру действия к вирусам, так называемым, микоплазменным израстанием.

Наиболее распространенным и трудоконтролируемым патогеном малины и ежевики является вирус кустистой карликовой малины (ВККМ), который выявлен во всех во всех областях возделывания Rubus. [2]

Кустистая карликовость малины

Кустистая карликовость — это единственное вирусное заболевание малины, не имеющее переносчиков среди насекомых. От больного растения к здоровому, вирус передается с пыльцой, которая может переноситься на большие расстояния. Очень опасной особенностью кустистой карликовости является то, что больные растения по внешнему виду не отличаются от здоровых. Признаки поражения этим вирусом можно заметить только на созревающих ягодах. Ягоды на пораженных кустистой карликовостью кустах, плохо выполнены, они состоят из отдельных, слабо соединённых между собой костянок (так называемая "рассыпуха").

Заболевание поражает все сорта красной малины летнего и осеннего сроков созревания при неблагоприятных погодных условиях (низкие температуры в начале периода вегетации). Бороться с ним практически невозможно, но можно предупредить.

Заболевание выражается пожелтением областей между жилками листьев и бледно-желтым мозаичным узором.

Иногда наблюдается образование колец или линейных рисунков или полное пожелтение листа. В смешанных формах вирусов, переносимых тлей, у малины отмечается уменьшение жизнеспособности кустов, карликовость растений, а так же измельчение и рассыпание плодов. Урожай полностью теряет свой товарный вид.

Во второй половине лета и осенью признаки вируса на листьях полностью исчезают и растения выглядят практически здоровыми. Больные растения от здоровых отличить очень трудно.

Возбудитель курчавости — вирус кольцевой пятнистости малины. От растения к растению он передается тлями и нематодами. Болезнь проявляется на побегах, листьях, соцветиях и ягодах. Листья становятся темно-зелеными, жесткими, морщинистыми, с загнутыми к низу краями. К осени они приобретают бронзово-коричневую окраску. Плодовые веточки деформируются, ягоды на них засыхают. Пораженные курчавостью растения растут слабо, их верхушки усыхают.

Инфекционный хлороз или желтуха малины также передается тлями. Болезнь проявляется в начале лета. Листья между жилками начинают желтеть, затем желтую окраску приобретает весь лист. Нередко поврежденные листья асимметрично скручиваются и сморщиваются. Побеги утончаются, вытягиваются в длину. Ягоды мельчают, деформируются и засыхают.

Под общим названием мозаика объединен ряд вирусных болезней малины и ежевики, переносимых тлями. Среди этих болезней наиболее распространены хлороз жилок, желтая сетчатость, кольцевая пятнистость (вирус, повреждающий, как томат, так и малину), латентный некроз. Болезни особенно сильно проявляются во влажную, прохладную погоду. Листья на поврежденных кустах приобретают мозаичную окраску разнообразной интенсивности. При сильном поражении на листьях появляются выпуклые участки, в местах желтых пятен листовая пластина утончается. Больные растения отстают в росте, их побеги утончаются, ягоды мельчают, становятся безвкусными. Нередко пораженные мозаикой кусты погибают.

Болезни малины нередко приводят к потере большого количества урожая. При сильном заражении могут погибнуть все кусты, поэтому нужно знать особенности заболеваний растения и способы лечения культуры.

Грибковые заболевания малины

Кусты могут поражаться грибками различных видов. Инфекция попадает на здоровые растения следующим образом:

• через растительные остатки и зараженный грунт;
• от больных растений.

Грибковые болезни могут прогрессировать, если длительное время идет дождь, установилась чрезмерно влажная и сырая погода, наблюдается обильная роса.

При такой болезни плоды покрываются маленькими серыми пятнами, которые начинают увеличиваться, поражая все ягоды. Они гниют и покрываются налетом с грибковыми спорами. При влажной погоде споры распространяются намного быстрее, из-за чего может поразиться весь малинник. Серая гниль способна заражать как ягоды, так и побеги. Больные кусты чаще всего не переживают холода и гибнут.

Вызывает такое заболевание гриб, зимующий в почве. Проникает внутрь растений через корни и через сосудистую систему начинает распространяться по всему кусту. При такой болезни листовые пластины желтеют и засыхают. Верхние листья остаются на месте, а нижние опадают. Побеги становятся пурпурного или темно-голубого цвета и перестают расти. Верхушки у них вянут и отмирают.

Если поврежденные побеги сохранятся до следующего года, они принесут урожай сухих и мелких ягод. Корни таких растений жизнеспособны на протяжении длительного времени, однако новых побегов становится все меньше.

При вертициллезе кусты малины гибнут в течение 1-2 сезонов.

Поражает кусты во влажную погоду. При этом внутренняя сторона листовой пластины покрывается мелкими круглыми выпуклыми пятнами желто-оранжевого цвета. Вызывается заболевание спорами грибка, которые в течение лета способны образовываться несколько раз. Листья сохнут, в результате чего малина не переносит зимовку и погибает.

Возбудитель болезни способен поразить все наземные части куста. В первую очередь начинают страдать листья, вдоль прожилок которых возникают округлые пятна, имеющие пурпурную окантовку и серую середину. Они сливаются, приводя к скручиванию и усыханию листовых пластин.

Побеги малины покрываются серыми язвочками. Кора у растений сереет, на ней появляются трещины. Антракнозные пятна начинают окольцовывать плодовые кисти, способствуя их усыханию. У пораженных кустов ягоды буреют и деформируются. На язвах и пятнах возникают многочисленные споры грибка. Возбудитель заболевания хорошо переносит холода. Антракноз можно вылечить, если он поразил малину несильно.

Ягоды, побеги и листья малины покрываются серым или белым налетом, напоминающим пыль. Если растение только заболело, росу легко можно убрать пальцами. При отсутствии лечения куст может поразиться полностью. Споры грибка при попадании на кустарник способствуют развитию грибницы, которая пронзает своими отростками поверхность плодов, стебля и листьев.

Корни грибка способны высосать из растения все питательные вещества, что приводит к увяданию и гибели малинника. У пораженного куста быстро нарушаются жизненно важные функции. Плотный слой налета препятствует испарению лишней влаги и дыханию. Происходит угнетение процесса фотосинтеза. Болезнь приводит к отмиранию тканей растения.

Возбудитель проникает внутрь малины через повреждения коры. Период появления первых признаков пурпуровой пятнистости — начало лета. На молодых побегах появляются маленькие пятна светло-лиловой окраски. Они начинают распространяться вверх и объединяются в участки длиной около 30 см.

Пятна приобретают красно-бурый цвет. На зараженных плодовых ветках, черенках и листьях малины возникают некротические пятна. Ягоды, не успев поспеть, засыхают, а почки отмирают.

Такое заболевание чаще всего проявляется в середине лета, поражая листья малины, в результате чего они начинают преждевременно опадать. Развитию болезни способствует влажная погода. На листовых пластинах возникают крупные пятна, которые быстро увеличиваются в размере. У них нет каймы, и они не светлеют. При благоприятных условиях эпидермис листа рвется, из-под прорывов появляются споры.

Потеря жизнеспособности листовой пластины приводит к тому, что снижается урожайность будущего года.

Поражаются побеги и листья. На листовых пластинах появляются небольшие округлые пятна светло-бурого цвета с темным ободком, что можно увидеть на фотографии. Через некоторое время центр пятен светлеет. На молодых побегах болезнь проявляется светлой пятнистостью, которая охватывает их основание. Постепенно поврежденные ткани начинают разрываться, и растение засыхает.

Вирусные заболевания

Малина нередко подвергается вирусам. Заражают растения вирусными болезнями нематоды, клещи, тля. Здоровые кусты могут поражаться от больных при попадании сока. Кроме того, вирус может передаваться через инструмент, применяемый при обрезке малинника и обработке почвы. Существует более 30 вирусных болезней ремонтантной малины и обыкновенной. При этом сильно снижается урожайность. Такие заболевания считаются неизлечимыми.

Это болезнь, возникающая из-за укусов насекомых — цикадок Nacropsis fuscula (Zett.). Паразиты высасывают из побегов малины сок. Насекомые такие мелкие, что обнаружить их сразу не получается. В результате вирус начинает распространяться по всему растению, и через некоторое время оно погибает.

Внешне болезнь проявляется развитием на одном кусте около сотни низкорослых и тонких побегов.

Листья у пораженной малины имеют хлорозный оттенок. Цветки деформируются, и нередко из них не образуются завязи. Если ничего не предпринимать, листовые пластины становятся мелкими, а стебли короткими. Это сильно снижает урожайность, или она отсутствует.

Вирусное заболевание нередко приводит к болезням листьев малины. При этом происходит патологическое разрастание их тканей, изменяется форма листовой пластины, меняется ее цвет. Лист утолщается, его ткани разрастаются неравномерно, из-за чего он начинает скручиваться, делается выпукло-вогнутым или волнистым, покрывается вздутиями в виде пузырей. Поражения нередко сопровождаются некрозом, когда отмирают ткани. Деформированные листья начинают рано засыхать и опадать.

Растения заражает вирусом тля и другие сосущие насекомые. При таком заболевании листья приобретают мозаичную окраску, состоящую из расплывчатых желтых и зеленых пятен, расположенных хаотично. Поверхность побегов и надземной части становится неровной и шершавой. Вдоль боковых прожилок листьев возникают хлоротичные пятна, но они нередко отсутствуют.

Такое заболевание ослабляет рост молодых и взрослых кустов. Побеги становятся тонкими, отстают в развитии, весной их количество сильно уменьшается.

Новая поросль малочисленна, плохо и слабо развивается, имеет мелкие листья.

В начале развития протекает бессимптомно. Через некоторое время появляются следующие признаки:

Лист начинает желтеть вдоль центральной жилки, и через некоторое время желтизна охватывает всю его площадь. Побеги вытягиваются, а плоды, если и появляются, нередко имеют однобокую форму и обладают неприятным вкусом. Листовые пластины нередко скручиваются и сморщиваются.

Передается вирус кольцевой пятнистости с нематодами и посадочным материалом. При такой болезни побеги сильно укорачиваются, листья приобретают жесткость, становятся морщинистыми, их края загибаются книзу.

Осенью темно-зеленые листовые пластины становятся бронзовыми, возникает стекловидность и некроз жилок. Наблюдается сильное видоизменение цветков, происходит их деформирование, из-за чего плоды не образуются.

Верхняя часть молодых побегов сохнет. Пораженные кусты начинают плохо расти, урожайность снижается в несколько раз. Ягоды мельчают, засыхают, приобретают кислый вкус. На листьях иногда образуются хлоротические пятна в виде колец, имеющие четкие края. Вирус способен привести к образованию на молодых листьях энаций — листоподобных выростов.

Заболевания бактериального характера

К наиболее распространенным заболеваниям, которые вызываются бактериями, относят стеблевой и корневой бактериальный рак.

По описанию бактериальный корневой рак — это опухоль с бугристой поверхностью. Наросты возникают на основании стебля и корнях куста. В начале развития опухоль мягкая, через некоторое она время отвердевает, а в конце наблюдается ее гниение. Корни при таком заболевании не получают необходимых питательных веществ, и малина засыхает.

Корневой рак неизлечим. При выявлении болезни куст рекомендуется уничтожить.

При стеблевом раке новообразование возникает на нижней части стебля. Из-за опухоли растение недополучает питательные вещества, оно начинает сохнуть, листья желтеют и опадают. Бактерия рака может длительное время находиться в стеблях куста. Пораженную малину выкапывают и сжигают.

Лечение заболеваний

При обнаружении больных кустов малины рекомендуется как можно быстрее начать их лечение. Существует много эффективных способов борьбы с заболеваниями.

Практически все грибковые болезни хорошо вылечиваются. Нередко применяют следующие препараты:

Чаще всего пораженные кусты обрабатывают бордоской жидкостью. Представлена она в виде смеси гашеной извести и медного купороса. Препарат воздействует непосредственно на споры грибков и не допускает появления ожогов на растениях.

Хорошо помогают бороться с грибковыми болезнями малины фунгициды:

1. Бенлат, Эупарен. Опрыскивают кусты каждые 4-6 дней, пока не исчезнет серая гниль.
2. Купрозан. Избавляет от пятнистости.
3. Нитрафен, Топаз, Вектра, СКОР. Помогают бороться с серой гнилью и мучнистой росой.
4. Медный и железный купорос. Выпускается в виде кристаллической соли или порошка, который разводят непосредственно перед опрыскиванием малинника. Применяется для лечения всех видов грибковых болезней.
5. Фундазол. Используют для лечения и профилактики.

Химические препараты применяют за сезон 3 раза: весной, когда проклюнутся первые листья, потом после цветения кустов и как только уберут урожай.

Если малину поразили вирусные заболевания, борьба с ними сводится к тому, что кусты выкапывают и сжигают. Препараты бессильны против вирусов. Малину не рекомендуется сажать 4-5 лет на участках, где были выявлены больные растения.

Если малину поразил бактериальный рак, способы лечения подразумевают внесение в почву смеси калийной соли с сульфатом аммония или суперфосфата. Благодаря этому почвенные микроорганизмы начинают интенсивно разрушать возбудителей такого заболевания. С помощью органических удобрений подавляется развитие патогенных бактерий.

Нехимические препараты и народные методы

Лечить малину можно не только химическими средствами, но и экологически чистыми препаратами. Они содержат грибы-антагонисты, вирусы и бактерии, которые не наносят вреда кустам, но помогают избавиться от заболеваний. Биологические лекарства оздоравливают малинник и представляют собой отличную подкормку.

1. Бисолбифит. Помогает стимулировать иммунитет у растений и защищает малину от различных болезней. Весной применяется для профилактической обработки.
2. Битоксибациллин. Препарат помогает бороться с личинками и яйцами на молодых побегах. Вызывает массовую гибель паразитов.
3. Фитоверм. Средство, которое оказывает комплексное воздействие. В его состав входят продукты жизнедеятельности почвенных микроорганизмов. Действие начинается через 4 часа после попадания в грунт.

Биологические препараты могут растворяться в грунтовых водах, поэтому в почву должны попадать в сухом виде.

Нередко больные кусты малины обрабатывают народными средствами. К самым эффективным методам относятся:

1. Настой бархатцев. 500 г сухих листьев заливают 10 л кипятка и настаивают 2 суток. Помогает бороться с тлей и грибковыми болезнями.
2. Полив малинника горячей водой. Осуществляют ранней весной, когда сходит снег. Воду кипятят, переливают в лейку и обрабатывают растения. Это позволяет избавиться от отдельных видов грибков и паразитов.
3. Отвар хвоща. 400 г свежей травы замачивают в 3 л холодной воды на сутки. Доводят до кипения и 30 минут выдерживают на слабом огне. Охлаждают, процеживают и разводят водой в соотношении 1:5. Опрыскивают кусты раз в 7 дней. Используют против мучнистой росы.
4. Нашатырный спирт. 4 ст. л. средства разводят в 10 л воды и выполняют обработку малины весной от болезней. 1 ведра хватает на полив 2 кустов. Помогает от бактериальных и грибковых заболеваний.

Малинник можно с двух сторон обложить мочевиной. Это позволяет подкормить растения, укрепить их иммунитет и защитить от насекомых-вредителей.

Профилактические меры

В борьбе с заболеваниями малины большое внимание уделяют профилактике их развития. Следует выращивать на участке только здоровые саженцы, которые проявляют устойчивость к различным инфекциям. Кроме того, к мерам профилактики относят:

Список устойчивых к заболеваниям сортов

Проявляют устойчивость к вредителям и болезням следующие сорта малины:

• Абрикосовая;
• Блестящая;
• Желтый гигант;
• Каскад брянский;
• Метеор;
• Ранний сюрприз;
• Полка;
• Уголек.

Заметив, что кусты малины имеют признаки заболеваний, следует использовать различные препараты, но легче не допустить заражения.

Вирус – самый опасный возбудитель заболеваний малиновых посадок, которые уже вылечить невозможно. Вирусные болезни малины передаются через сок заражённого растения, который разносят клещи, тля, черви нематоды, инструменты садовода, иногда пыльцой и посадочным материалом.

На сегодняшний день точно не установлено количество вирусов малины, но уже известно более 30 видов. Все они очень опасны, заражаются чаще ослабленные кусты, страдают при этом все их органы. Больные растения, их листву необходимо сжигать.

Вирусные болезни малины и их симптомы

Очаговая болезнь быстрого распространения по плантации. Вирус попадает внутрь сквозь небольшие ранки на кожице стебля. Заболевает в возрасте 1 год, куст перестаёт расти вверх, не плодоносит.

На третий год даёт множество, до 200 и больше, истончённых низких побегов с мелкими листьями. Начинает цвести поздно, лепестки больше похожи на листики, органов размножения нет. Появившиеся ягоды мелкие, распадающиеся. В таком состоянии может жить 10 лет.

Это основная вирусная болезнь малины. Разносчики вируса кольцевой пятнистости, круглые черви нематоды, живут в корнях. Сразу болезнь незаметна, чем она и коварна. Проявляется в весеннее или осеннее время жёлтым цветом листьев.

У зараженного растения листовые пластинки становятся мелкими, морщинистыми, курчавыми, скручиваются к середине. К концу лета нижняя часть листьев покрывается тёмно — жёлтыми пятнами, прожилки отмирают.

Цветы неправильной формы, без завязей. Имеющиеся ягоды сохнут, сереют, приобретая кислый вкус.

Ветви делаются короткими, уродливыми, новые не вырастают. Плантация гибнет за 3 года. Вирус, оставшийся в почве, может заразить и новые посадки.

Самая часто встречающаяся вирусная болезнь малины. Больные кусты слабые, низкого роста, гибнут в сильные морозы. Сохранившиеся дают урожай вполовину меньше обычного, а после лета и вовсе пропадают.

Ягода мелкая и невкусная. Молодых отпрысков почти нет, а те, что появились, не в состоянии выжить. Со временем увядает всё растение.

Источник болезни – инфекция в клетках тлей, клещей. Этот вирус не боится очень жаркого лета. Заболевание определяется с началом лета по желтизне листьев около прожилок, полностью желтеющих и высыхающих с усугублением болезни. По некоторым схожестям признаков можно перепутать с курчавостью малины, неинфекционным хлорозом или мозаикой.

Стебли растут медленно, они слабые, истончённые и вытянутые. Мелкая, созревшая с одной стороны, некрасивая ягода сохнет, становится деревянной. К концу лета эта вирусная болезнь малины менее заметна.

Вирус зимует, а по весне от него умирает весь куст, заражаются другие. Почва остаётся заражённой в течение 10 лет.

Профилактические меры

Вирусные болезни малины неизлечимы, поэтому их важно предупредить. Чтобы инфекция не распространялась дальше, больное растение нужно срочно выкопать и выбросить в огонь. Также не нужно высаживать кусты близко друг к другу. Искать для разведения полностью здоровые саженцы.

Несколько раз за лето пропалывать и рыхлить землю. Регулярно бороться с тлёй и муравьями, которые её разводят. Осматривать побеги на наличие повреждений насекомыми и самим, при работе, быть аккуратными. После работы в малиннике тщательно очищать инструменты.

Плохие соседи малины – картофель, помидоры, земляника. Опасно высаживать после капусты, перца, клубники.

Аннотация научной статьи по агробиотехнологии, автор научной работы — Мытницкая Ю. Ф., Немцова Е. В., Евдокименко С. Н., Заякин В. В., Нам И. Я.

Одним из наиболее опасных патогенов малины является вирус кустистой карликовости малины (ВККМ). Для его диагностики был разработан метод RT-PCR. В данной работе был осуществлен анализ ВККМ в полевых растениях малины, культивируемых in vitro, а также в гибридных сеянцах. Вирус был обнаружен в 90% исследуемых образцов

Похожие темы научных работ по агробиотехнологии , автор научной работы — Мытницкая Ю. Ф., Немцова Е. В., Евдокименко С. Н., Заякин В. В., Нам И. Я.

TRANSFER OF THE VIRUS OF BUSHY DWARFISM OF RASPBERRY AT SEED AND VEGETATIVE REPRODUCTION

Raspberry bush dwarf virus (RBDV) is one of the most dangerous pathogens of the raspberry. Method RT-PCR was devised for its diagnostic. In this work an analysis RBDV was implemented in the field raspberry plants, cultivated in vitro, as well as in the hybrid seedlings. The virus was detected in 90% of the samples.

ПЕРЕДАЧА ВИРУСА КУСТИСТОЙ КАРЛИКОВОСТИ МАЛИНЫ ПРИ СЕМЕННОМ И ВЕГЕТАТИВНОМ РАЗМНОЖЕНИИ*

Ю. Ф. Мытницкая, Е. В. Немцова, С. Н. Евдокименко, В. В. Заякин, И. Я. Нам

Одним из наиболее опасных патогенов малины является вирус кустистой карликовости малины (ВККМ). Для его диагностики был разработан метод RT-PCR. В данной работе был осуществлен анализ ВККМ в полевых растениях малины, культивируемых in vitro, а также в гибридных сеянцах. Вирус был обнаружен в 90% исследуемых образцов.

Ключевые слова: ремонтантная малина - вирус кустистой карликовости малины - метод RT-PCR -диагностика ВККМ - культура in vitro.

Малина - ценная ягодная культура. В Брянской области проводится целенаправленная селекция ремонтантной малины, которая характеризуется большей продуктивностью по сравнению с неремонтантными сортами [1, с. 26]. Для ускорения селекции ремонтантных форм малины ранее была проведена оптимизация метода клонального микроразмножения [2, с. 209], [3, с. 51]. В настоящей работы были использованы полевые растения малины как ремонтантных, так и неремонтантных сортов малины, предоставленные селекционерами Казаковым И. В. и Евдокименко С. Н., а таже растения, культивируемые in vitro. Существенной проблемой при возделывании данной ягодной культуры оказывается восприимчивость к различным заболеваниям, в том числе вирусным. Одним из наиболее распространенных патогенов является вирус кустистой карликовости малины (ВККМ), снижающий урожайность и ухудшающий качество посадочного материала. ВККМ обнаружен при обследовании посадок 15-ти сортов и форм малины Кокинского ОП ВСТИСП [4, с. 98]. В естественных условиях ВККМ передается при семенном размножении и с пыльцой. Это делает контроль за его распространением в селекционных питомниках и производственных насаждениях особенно сложным. Вирус поражает все растение вместе с корневыми отпрысками, заболевшие кусты подлежат уничтожению. Для предотвращения распространения данного патогена в посадках малины необходимо своевременно проводить обследование растений на наличие ВККМ [5].

Для анализа вирусов в настоящее время применяются две группы методов: иммунологические (с помощью ИФА) и молекулярно-генетические методы на основе полимеразной цепной реакции. Для диагностики ВККМ и других вирусов разработаны и рекомендованы к применению наборы, содержащие поли- и моноклональные антитела, а также такие методы, как IC-RT-PCR [6, р. 842], RT-LAMP [7, р. 153], RFLPA [8, р. 151]. В России запатентована и используется разработанная нами методика диагностики ВККМ на основе RT-PCR [9].

Методика и материалы

Для проведения исследования в данной работе были использованы полевые растения малины красной сортов Бальзам, Гусар, Метеор, малины черной сорта Кумберленд и ежевики сорта Агавам. Были проанализированы пробирочные растения 9 сортов и генотипов малины красной (R. idaeus L.), культивируемой in vitro: Бабье лето-2, Геракл, Жар-птица, Пингвин, 37-15-4, 8-79-2, 8-202-1, Евразия и Абрикосовая.

Для предварительной оценки возможности вертикальной передачи вируса через семена и получения не зараженных сеянцев были проанализированны усредненные пробы из листьев гибридных сеянцев ремонтантной малины 35 различных семей. Отбирали листья с трех помеченных этикетками растений каждой семьи и объединяли.

Выделение тотальных нуклеиновых кислот из листьев растений проводилось с помощью фенол-хлороформенного метода с экстракцией гуанидинизотиоцианатным буфером [10, р. 156], [11, с. 76]. Анализ осуществлялся разработанным ранее методом диагностики ВККМ на основе RT-PCR, с использованием 2 пар праймеров, комплементарных генам белка оболочки (CP) и генам транспортного белка (MP) вируса (таблица 1).

_Последовательности использованных праймеров_

Работа выполнена при поддержке грантов ФЦП №02.740.11.0285, АВЦП 2.11/224 и Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно - технической сфере

RBDV-МР^а/ обратный сасagg ate саа ста ttgtggaggatttgc

RBDV-МP+55aдапрямой сасagg ate саа ста ttgtggaggatttgc

RBDV-CP-3&/ обратный tgtcgtcgacggсасcgcсс

RBDV-CP+3ßaw прямой сасagg ate сgа catgtctatgtctgcтааgg

Результаты и обсуждение

Проведена оптимизация методики диагностики ВККМ методом RT-PCR. Так, были подобраны оптимальные количества препаратов нуклеиновых кислот для внесения в реакционную смесь при проведении обратной транскрипции (0,8 мкг), а также количество праймеров при проведении ПЦР (12,5 имоль) (рис. 1). _ _ _

1 2 3 4 5 * Б 7 8 '

Рис. 1. Электрофореграмма продуктов RT-PCR сорта Бабье лето-2

1 - маркер GeneRuler 3 kb DNA Ladder; треки 2-5 - 25 пмоль праймеров, треки 6-9 - 12,5 пмоль праймеров, 2,6 - 0,2 мкг РНК, 3,7 - 0,4 мкг РНК, 4,8 - 0,6 мкг РНК, 5,9 - 0,8 мкг РНК

На данной электрофореграмме наиболее четкие полосы длиной 383 bp расположены на треках 5 и 9. Данные треки отражают результаты ПЦР, для проведения которой было взято 0,8 мкг РНК и 12,5 пмоль праймеров.

Модифицированным методом осуществлен анализ растений 3 сортов малины красной, 1 сорта малины черной и 1 сорта ежевики, произрастающих в полевых условиях. Во всех исследованных образцах был обнаружен ВККМ (рис. 2)._

Рис. 2. Электрофореграмма продуктов RT-PCR

1 - маркер GeneRulerO 3 kb DNA Ladder; 2 - красная малина сорт Метеор, 3 - красная малина сорт Гусар, 4 и 5 - черная малина сорт Кумберлен, 6 - ежевика сорт Агавам, 7- отриц. контроль

Это согласуется с данными о том, что ВККМ поражает различные виды рода Rubus, в том числе ежевику, черную малину [12, р. 82]. Полосы, соответствующие вирусным фрагментам, на различных треках отличаются разной интенсивностью флуоресценции. Так, при использовании проб РНК, выделенных из молодых листьев черной малины сорта Кумберленд (трек 5) накопление вирусных ампликонов длиной 383 bp происходило более эффективно, чем при использовании старых листьев (наблюдалась полоса, характеризующаяся наиболее яркой флуоресценцией). Наиболее эффективным для диагностики ВККМ является использование молодых тканей цветущих растений малины, не содержащих значительных количеств фенольных соединений, затрудняющих протекание полимеразной цепной реакции.

Метод RT-PCR обладает достаточной чувствительностью, что позволяет обнаруживать инфекцию в растениях, культивируемых in vitro. Был проведен анализ на наличие вируса в пробирочных растениях 9 сортов и генотипов малины красной. Во всех проанализированных образцах пробирочных растений был обнаружен ВККМ. На полученной элекрофореграмме была обнаружена характерная полоса, соответствующая вирусспецифичному фрагменту ДНК длиной 383

bp. Это согласуется с литературными данными, что размножение изолированных апексов инфицированных растений in vitro не освобождает посадочный материал от вируса [13, р. 70].

Так как ВККМ передается при семенной размножении, нами проведен анализ вируса в сеянцах малины различных семей.

Рис. 3. Электрофореграмма продуктов RT-PCR, полученных из проб нуклеиновых кислот из

1 - маркер GeneRulerO 3 kb DNA Ladder; 2-10 - образцы семей №№13-21 гибридных сеянцев Результаты скрининга ВККМ в сеянцах ремонтантной малины представлены в таблице 2.

№ семьи Результат анализа № семьи Результат анализа № семьи Результат анализа

Из данных таблицы следует, что ВККМ обнаружен в выборках растений в 24 из 35 семей гибридных сеянцев. По литературным данным [14, р. 271], процент передачи вируса кустистой карликовости малины колеблется от 15% до 77% в зависимости от вида малины. Результаты скрининга ВККМ в некоторых семьях сеянцев ремонтантной малины представлены на рис. 3, из которого следует, что в 6 образцах из 9 обнаружен ВККМ.

Полученные данные свидетельствуют о том, что ВККМ эффективно передается при вегетативном размножении растений, в том числе в условиях in vitro после меристемной культуры и вертикально в семьях гибридных сеянцев. Поскольку вирус в естественных условиях передается с пыльцой на значительные расстояния даже между разными видами рода Rubus мероприятия по оздоровлению могут оказаться не эффективными, поэтому наиболее перспективным является создание устойчивых к ВККМ форм растений.

Raspberry bush dwarf virus (RBDV) is one of the most dangerous pathogens of the raspberry. Method RT-PCR was devised for its diagnostic. In this work an analysis RBDV was implemented in the field raspberry plants, cultivated in vitro, as well as in the hybrid seedlings. The virus was detected in 90% of the samples.

The key words: remontant raspberry - Raspberry Bushy Dwarf Virus - the method of RT-PCR - the diagnostic of RBDV - the culture in vitro.

1. Казаков И. В. Проблемы и перспективы создания сортов малины ремонтантного типа // Селекционно-генетические проблемы развития садоводства в средней полосе европейской части России. Мичуринск, 1995. С. 26-29.

3. Нам И.Я., Заякин В.В., Вовк В.В., Казаков И.В. Оптимизация метода клонального микроразмножения для ускоренной селекции межвидовых ремонтантных форм малины // Сельскохозяйственная биология. 1998. №3. С. 51-56.

4. Немцова Е.В., Заякин В.В. Обнаружение вируса кустистой карликовости методом RT-PCR в некоторых генотипах ремонтантной малины селекции опорного пункта ВСТИСП // Материалы четвертого съезда Общества биотехнологов России (6 - 7 декабря 2006 г). Москва, 2006. С.98.

6. Kokko H.I., Kivineva M., Karenlampi S.O. Single-step immunocapture RT-PCR in the detection of Raspberry Bushy Dwarf Virus // Biotechniques. 1996б. Vol. 20, №5. P.842-846.

7. Wang Q., Cuellar W.J., Akita M., Rajamaki M.L., Valkonen J.P.T. Localization and LAMP-based detection of the pollen-transmitted raspberry bushy dwarf virus (RBDV) in meristematic tissues and regenerated plants of Rubus idaeus following cryopreservation. PubMed. 2005.

8. Barbara D.J., Morton A., Spence N.J., Miller A. Rapid differentiation of closely related isolates of two plant viruses by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis // Journal of Virological Methods. 1995. Vol. 55. P.121-131

9. Заякин В. В., Немцова Е. В., Нам И. Я. Набор олигонуклеотидов-праймеров для идентификации РНК вируса кустистой карликовости малины. Номер 2385934. Начало действия патента 27.04.2009

10. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by Acid guanidine thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem. 1987. Vol. 162. P. 156-159.

12. Ellis M.A., Converse R.H., Williams R.N., Williamson B. Compendium of Raspberry and Blackberry diseases and insects // American Phytopathological Society. St. Paul, MN, 1991.

13. Lankes C. Elimination of Raspberry Bushy Dwarf Virus // Acta Horticulturae: VII International Symposium on Small Fruit Virus Diseases. 1995. Vol. 385. P. 70-75.