Анализ на бешенство юннатов

Бешенство (гидрофобия) – медленная вирусная инфекция поражающая теплокровных животных, птиц и человека. Это одно из наиболее тяжелых заболеваний, неизбежно приводящее к смертельному исходу.

Бешенство встречается на всех континентах, но более 95% случаев смерти людей происходит в Азии и Африке. В мире ежегодно погибает от этой инфекции свыше 55 тысяч человек, 40% людей, подвергшихся укусам предположительно бешеным животным – это дети в возрасте до 15 лет.

Бешенство - природно-очаговая инфекция, которая регистрируется в более 150 странах мира и является десятой по значимости причиной смерти людей в структуре инфекционных заболеваний.

Ежегодно на территории Московской области регистрируются случаи заболевания и гибели животных от бешенства, в том числе это домашние животные - собаки и кошки, владельцы которых ( москвичи) не захотели провести профилактические прививки против бешенства своим животным .В Московской области в 2017 г. наиболее неблагополучными районами по бешенству у животных являлись Лотошинский, Ногинский, Раменский , Истринский, Клинский, Наро – Фоминский, Одинцовский, Щелковский районы. Среди животных, погибших от бешенства лисицы, собаки, кошки, а также бешенство регистрировалось среди енотовидных собак, лосей, ежей и белок.

Положение усугубляется тем, что владельцы не прививают от бешенства домашних питомцев, вывозят их на территории, неблагополучные по этому заболеванию, либо привозят в Москву подобранных больных безнадзорных животных. При этом они подвергают риску свою жизнь и жизнь людей, которые контактируют с больным животным. Кроме того, подвергаются риску заражения бешенством другие животные, которые выгуливаются и контактируют вблизи места жительства с больными животными до их гибели. Опасность представляет и приобретение животных через различные сайты в сети интернет. Как правило, такие животные не прошли ветеринарное освидетельствование и представляют опасность для людей и животных. Так, в апреле 2017 года по объявлениию товарах и услугах от частных лиц и компаний на интернет-сайт объявлений Avito, московской семьей была приобретена кошка, которая через 1,5 месяца заболела бешенством. В контакте с заболевшим животным находились 5 человек, в т.ч. двое детей. Все они были покусаны и поцарапаны заболевшей кошкой и получают курс прививок против бешенства.

Основной источник бешенства в природе – дикие плотоядные животные. Есть природные очаги бешенства, которые поддерживаются представителями собачьих (волки, лисы, енотовидные собаки, песцы), а также дикими кошками, рысью, плотоядными и насекомоядными летучими мышами.

К бешенству восприимчивы все теплокровные животные, но чаще инфекцию распространяют такие животные как лисы, волки, енотовидные собаки, кошки и собаки. Также бешенство может регистрироваться среди коров, лошадей, мелкого рогатого скота, кабанов, ежей.

От диких животных инфекция может переходить на домашних. Так возникает городской очаг, который поддерживается бродячими собаками и кошками.

Заболеваний от животных человеку передается через укусы, ссадины, царапины, ослюнения кожных покровов, слизистую оболочку глаз, полости рта, носа и при соприкосновении с каким-либо предметом или одеждой, загрязненной слюной бешенного животного.

Инкубационный период (время от укуса до заболевания), зависит от локализации укуса и длится от 10 дней до 3-4 (но чаще 1-3) месяцев, может удлиняться до года и более. Наиболее опасны укусы в голову, кисти рук. Болезнь начинается с появление болей по ходу нервов в месте укуса, тошноты, рвоты. Больные теряют сон, возникает чувство тоски, беспокойство. В дальнейшем на фоне подъема температуры, возникает возбуждение и чувство страха. Несмотря на жажду, появляется водобоязнь, судороги. Смерть наступает на 4-6 сутки. Срочная вакцинация после попадания вируса в организм позволяет предупредить развитие симптомов и заболевание человека.

Средств лечения бешенства нет. При наличии клинических проявлений у человека болезнь заканчивается летальным исходом.

Основными причинами заболеваний людей являются: отсутствие настороженности и знаний об опасности заражения бешенством при укусах, оцарапывании, ослюнении животными и несвоевременное обращение за медицинской антирабической помощью.

За 2017 год в травматологические пункты ЗАО обратились за антирабической помощью 1982 человека. Пострадали от укусов владельческими животными 48,8% обратившихся за антирабической помощью, от укусов безнадзорными животными – 42,2% пострадавших.

Антирабическая помощь людям, пострадавшим от укусов, оцарапывания, ослюнения животными в ЗАО г.Москвы оказывается в травматологических пунктах, расположенных по адресам:

В настоящее время бешенство остается одной из важнейших проблем как здравоохранения, так и ветеринарии. Его эпидемиологическая значимость определяется абсолютной летальностью и повсеместным распространением.

Эпизоотическая обстановка по бешенству в Московском регионе,в т.ч. в городе Москве в 2017 году остается напряженной. Все чаще в эпизоотический процесс вовлекаются домашние животные, в том числе собаки и кошки, владельцами которых являются москвичи!

Положение усугубляется тем, что владельцы не прививают бешенства домашних питомцев, вывозят их на территории неблагополучные по этому заболеванию, либо привозят в Москву подобранных больных животных. При этом они подвергают риску свою жизнь и жизнь людей, которые контактируют с больным животным.Кроме того, подвергают риску заражения бешенством других животных.

В Москве, на территории Троицкого и Новомосковского административных округов отмечаются активные проявления эпизоотических процессов по бешенству. За 2016 год в Московской городской ветеринарной лаборатории выявлено 10 положительных результатов на бешенство: кошки – 6 случаев, собаки – 3 случая, лисица – 1 случай. Заражение домашних животных произошло, при вывозе животных на территорию Московской области.

В 2016 году на территории Москвы зарегистрировано 20 486 укусов животными, в том числе домашними животными, из них 106 случаев связаны с укусами бешеными животными.

В первом квартале 2017 года в городе Москве зарегистрировано 3 965 укусов, (в том числе 9 укусов бешеными животными), за аналогичный период 2016 года – 3 713 укусов, из них 23 укуса бешеными животными.

Заболеваний бешенством населения в ЗАО г. Москвы не зарегистрировано.

Опасность представляет и приобретение животных через различные сайты в сети интернет. Как правило, такие животные не прошли ветеринарное освидетельствование и представляют опасность для окружающих и людей, и животных. Так, в апреле текущего года по объявлению товарах и услугах от частных лиц и компаний на интернет-сайт объявлений Avito, московской семьей была приобретена кошка, которая через 1,5 месяца заболела бешенством. В контакте с заболевшим животным находились 5 человек, в т.ч. двое детей. Все они стали пострадавшими от действий заболевшей кошки, были покусаны и поцарапаны. Пострадавшие проходят курс прививок.

До сих пор единственным средством помощи людям, подвергшимся риску инфицирования, является своевременное введение антирабического иммуноглобулина и назначение курса иммунизации. Применяемая в нашей стране концентрированная антирабическая вакцина очищенная культуральная (КОКАВ) является высокоэффективным препаратом, соответствующим всем требованиям Всемирной организации здравоохранения.

В 2016 году в Москве 15192 человека получили курс антирабических прививок.
Управление Роспотребнадзора по г. Москве совместно с Комитетом ветеринарии города Москвы проводит динамическое наблюдение за эпидемическим процессом бешенства, целью которого является оценка ситуации и разработка адекватных санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий, направленных на недопущение распространения инфекции среди людей и осложнение эпизоотической ситуации на территории города Москвы.

В случае укуса, полученного от животного, необходимо немедленно обратиться в ближайший травмпункт, так как успех вакцинопрофилактики бешенства зависит от того, насколько быстро начато лечение. Желательно сообщить врачу в травмпункте следующую информацию — описание животного, его внешний вид и поведение, наличие ошейника, обстоятельства укуса. Затем следует пройти курс прививок, назначенный врачом.

Вакцины, используемые в настоящее время, как правило, вводятся 6 раз: инъекции делаются в день обращения к врачу (0-й день), а затем на 3-й, 7-й, 14-й, 30-й и 90-й дни. Если за укусившим животным удалось установить наблюдение, и в течение 10 суток после укуса оно осталось здоровым, то дальнейшие инъекции прекращают.

Профилактика бешенства заключается в борьбе с бешенством среди животных: вакцинации (домашних, бездомных и диких животных), установлении карантина в случае выявления больного животного на конкретной территории и другие мероприятия. На данный момент объявлен карантин в Юго-Восточном административном округе до 9 июня.

Настоятельно рекомендуем владельцам домашних животных регулярно прививать своих питомцев от бешенства. Особенно это касается дачников, вывозящих кошек и собак за город.
Благодаря вакцинации от бешенства у собак и кошек вырабатывается иммунитет к заболеванию, достигающий максимальной эффективности через 3-4 недели и сохраняющийся не менее года.

Обращаем внимание!
Бешенство (гидрофобия) – острая вирусная зоонозная инфекция, характеризующаяся симптомами полиэнцефалита. При наличии клинических проявлений у человека болезнь заканчивается летальным исходом.

Первые признаки болезни почти всегда проявляются в месте укуса в виде зуда, боли. Больные испытывают беспричинный страх, тоску, тревогу, появление повышенной чувствительности к звуковым и световым раздражителям, отмечается субфебрильная температура.

Стадия предвестников длится 1-3 дня, после чего наступает стадия развития болезни, характеризующаяся приступами гидрофобии: болезненные сокращения мышц глотки и гортани при попытке пить и даже при звуках льющейся воды; аэрофобии, фотофобии, акустикофобии. Далее возникает паралитическая стадия дыхательного центра, которая всегда заканчивается летальным исходом.

Резервуаром инфекции в природных биотопах являются плотоядные животные и летучие мыши, в населенных пунктах –домашние плотоядные (собаки, кошки) и сельскохозяйственные животные.

На территориях с повышенной плотностью популяции диких животных формируются стойкие природные очаги бешенства.

Источником инфекции для человека являются животные, находящиеся в инкубационном периоде заболевания или с клинической картиной.

Пострадавшие от укусов животными должны знать, что возбудитель бешенства может находиться в слюне больного животного за 10 дней до появления первых признаков заболевания.

Инкубационный период заболевания определяется локализацией и тяжестью нанесенных повреждений и составляет от нескольких дней до 1 года и более.

Механизм передачи возбудителя реализуется путем непосредственного контакта человека с источником инфекции в результате нанесения укуса, ослюнения и других повреждений кожных покровов или наружных слизистых оболочек, возможен также аэрозольный механизм передачи инфекции.

Обслуживающий больного бешенством персонал должен работать в защитной одежде (халаты, очки, маски, перчатки), особенно при проведении таких процедур, как интубирование, отсасывание жидкостей и другие.

Следует обратить внимание, что от укусов чаще страдают дети, которых необходимо оберегать от ненужных контактов с животными. Особые меры предосторожности необходимо принимать при контакте с дикими животными, в том числе грызунами, во время летнего отдыха на природе. Неправильное поведение зачастую приводит к различным осложнениям, тяжелым укусам, увечьям, угрожающим здоровью и жизни людей.

Владельцы животных должны строго соблюдать правила содержания домашних животных.

Животные должны быть зарегистрированы в ветеринарной станции по борьбе с болезнями животных административного округа и ежегодно прививаться против бешенства.

Прививки против бешенства животным проводятся бесплатно.
При любом заболевании животного и особенно при появлении симптомов бешенства (обильное слюнотечение, затруднение глотания, судороги) немедленно обращайтесь в ближайшую ветеринарную станцию. Ни в коем случае не занимайтесь самолечением!

Если ваше животное укусило человека, не убегайте, а сообщите пострадавшему свой адрес и доставьте собаку или кошку для осмотра и наблюдения ветеринарным врачом ветеринарной станции. Владелец животного несет полную административную, а при нанесении тяжелых увечий и смерти пострадавшего, — уголовную ответственность.

Бешенство человека можно предупредить только профилактическими прививками, эффективность которых зависит от срока обращения за медицинской помощью.
В целях профилактики бешенства все пострадавшие от укусов, при оцарапывании и ослюнении животным для проведения курса антирабических прививок должны немедленно обратиться за медицинской помощью в травматологический пункт по месту жительства, в котором незамедлительно будет начат курс антирабических прививок.

Прививки против бешенства людям проводятся бесплатно, независимо от наличия или отсутствия полиса обязательного медицинского страхования.
В практике применяется вакцина, которая практически не дает осложнений и вырабатывает высокий уровень иммунитета. Курс прививок отечественной антирабической вакциной составляет всего 6 уколов, делаются в день обращения к врачу (0-й день), а затем на 3-й, 7-й, 14-й, 30-й и 90-й дни.вакцина вводится в дозе 1,0 мл в дельтовидную мышцу (плечо).

Помните, что только своевременно проведенные антирабические прививки могут предупредить заболевание бешенством!
Антирабическое лечение включает в себя местную обработку раны, проводимую как можно раньше после укуса или повреждения и введение антирабической вакцины. При наличии показаний проводится комбинированный курс лечения: антирабический иммуноглобулин (АИГ) с целью пассивной иммунизации и антирабическая вакцина в соответствии с инструкциями по применению антирабических препаратов.
Мероприятия по недопущению возникновения случаев бешенства среди людей включают:
благоустройство населенных пунктов, регулирование численности безнадзорных животных и их иммунизация против бешенств, соблюдение правил содержания и выгула домашних животных и их иммунизация против бешенства, иммунизация против бешенства сельскохозяйственных животных на неблагополучных по бешенству территориях и сельскохозяйственных животных, принимающих участие в культурных массовых мероприятиях; регулирование численности синантропных грызунов, наличие специальных медицинских учреждений по оказанию антирабической помощи населению, профилактическую иммунизацию лиц, имеющих профессиональный риск заболевания бешенством; — санитарно-просветительную работу с населением.
Профилактической вакцинации против бешенства подлежат:
Работники служб, проводящих отлов животных (ловцы, водители, охотники, лесники и другие.);
Работники ветеринарных станций по борьбе с болезнями животных, имеющие контакт с животными (ветврачи, фельдшера, лаборанты, младший персонал);
Работники научно-исследовательских институтов и диагностических лабораторий, проводящих исследования на бешенство;
Работники вивариев и других учреждений, работающих с животными.
В медицинских организациях профилактической вакцинации против бешенства из числа обслуживающего персонала подлежат только лица с высоким риском заражения (патологоанатомы, специалисты, участвующие в проведении парентеральных вмешательств больным бешенством).

Куда нельзя отдавать животных!

Осторожно: Карантин по бешенству, Москва, ул. Юннатов, 16!

Ветврачам на карантине по бешенству запрещено трогать, лечить и оказывать любую помощь больным, травмированным животным. Можно только поить и кормить. И самое страшное, там нельзя усыплять животных, в том числе травмированных, как бы сильно они не мучились. Животное, по мнению этих "людей", должно умереть само.
Тем не менее, эти "врачи" часто забирают травмированных и больных животных, не разъяснив все это людям, которые приносят животных. Принимая животных, например у людей, которые подобрали на улице раненое животное, они, молча, дают подписать им какую-то бумагу в одном экземпляре, которую мало кто читает. Люди думают, что отдали животное для лечения или усыпления. После того, как человек узнает страшную правду, забрать животное обратно невозможно. Они не отдают животных даже владельцам, которые по незнанию этих обстоятельств отдали туда свое животное!
Это единственная государственная организация, которая бесплатно принимает кошек и собак в Москве.
Все это не имеет ничего общего с борьбой с бешенством. В Западной Европе, где уже давно нет бешенства вообще, о таком обращении с животными не может быть и речи. Никогда, ни при каких условиях в цивилизованных странах животное не могут оставлять без лечения, обезболивания или усыпления. На карантине там содержат только таких животных, которые не страдают от боли. При подозрении на бешенство, любых травмированных или больных животных безболезненно умерщвляют, а затем проводят патологоанатомическое исследование.
В Центр правовой зоозащиты поступало несколько сообщений о принятии на карантин по бешенству на ул.Юннатов травмированных животных. В 2015 году была принята кошка с переломом позвоночника. Ее отдал прохожий, нашедший эту кошку на улице. Была принята собака, которая на глазах у очевидцев попала под машину и получила множественные переломы. В обоих случаях сотрудники Центра правовой зоозащиты и те граждане, которые по незнанию сами отдали животных на карантин, несколько дней умоляли отдать животных, обращались в Объединение ветеринарии Москвы. Но все бесполезно. Животные умерли в страшных муках. Врачи-садисты, с которыми приходилось общаться, сами заявляли, что такие травмированные животные у них на карантине постоянно, и они спокойно смотрят, как они умирают.
В 2015 году женщина подобрала на улице собаку породы хаски, которая, как потом выяснилось, страдала эпилепсией. Когда у собаки начался припадок эпилепсии, женщина, не разобравшись, отдала собаку на карантин по бешенству. Потом нашлись хозяева собаки и умоляли отдать собаку, объясняя, что без лечения она неизбежно погибнет. Но "врачи" отказались. В результате эта собака умерла через несколько дней после того, как ее вернули с карантина. Она была в ужасающем состоянии.
Этот садизм врачи оправдывают борьбой с бешенством. Но на самом деле с бешенством в России никто не только не борется, но наоборот искусственно распространяют его при прямом содействии Роспотребнадзора и Минсельхоза. Как это происходит, читайте в статье "Вся правда о бешенстве и бродячих собаках".
Достаточно сказать, что в 2015 году в Московской области официально узанонена программа отлов-стерилизация-возврат. То есть свобы бродячих собак законно находятся на всей территории Подмосковья. О какой борьбе с бешенством может при этом идти речь?
2015.

НОВОСТИ

Фашисты из Гестапо для животных на улице Юннатов, 16 каждый день продолжают мучить животных за деньги налогоплательщиков.
21.09.2016 они приняли в свою камеру пыток кошку с переломами, на которую напали бродячие собаки.
Житель дачного поселка рядом с Зеленоградом нашел раненную кошку на которую на глазах у других жителей садового товарищества напали бродячие собаки. Он позвонил в карантин по бешенство. Несмотря на то, что это Московская область, изуверы приехали и забрали животное.
Все происходило по обычному сценарию. Забирая животное на ул. Юннатов, они, как обычно, ни слова не сказали заявителю о том что животное, срочно нуждающееся в помощи, будет сидеть в клетке и мучиться там от боли без лечения и усыпления пока не умрет.
Сегодня нашелся хозяин кошки. По телефону ему уже отказано в выдаче животного. Хотя сначала женщина, которая подошла к телефону сказала что конечно отдадут, мол приезжайте. Но потом к телефону подошел мужчина и сказал что они передумали и не отдадут потому что у кошки нет чипа. Они так издеваются. Потом сказали, что возможно отдадут, если хозяин приедет вместе с заявителем.
В четверг они поедут туда. То есть не хозяину, а другому человеку который бы хотел спасти кошку от издевательств они бы ее не отдали.
Будем держать вас в курсе.

22.09.2016 утром, когда позвонил хозяин , они сообщили что кот умер. Белый с черным, полтора года.

Название документа	Особые условия	Стоимость
Содействие в получении ветеринарного свидетельства формы №1, №4	в зависимости от сложности ситуации	4500 рублей на одно животное
Содействие в обмене ветеринарного свидетельства формы №1 на международный сертификат формы №5а	в зависимости от количества животных	от 6000 рублей
Содействие в оформлении ветеринарного паспорта	при перемещении за пределы РФ, только в связке с получением ветсвидетельства формы №1	2500 рублей
Содействие в получении результатов теста на наличие антител к бешенству	в зависимости от срочности получения результатов	от 14000 рублей
Евросертификат, сертификат на ввоз в другие страны	в страны, требующие данный сертификат	2000 рублей
Содействие в получении разрешения на ввоз животного в разные страны	в страны, требующие данное разрешение	Стоимость требует уточнения в зависимости от страны ввоза
Содействие в получении разрешения на вывоз и ввоз животных из / в Россию	требуется при перевозке CARGO	2000 рублей

Здравствуйте, дорогой читатель. В этой статье нам бы хотелось рассказать Вам подробнее, что такое тест на наличие антител к вирусу бешенства, в каких случаях он требуется, когда и где его нужно сдавать, сколько он стоит и иные подробности. Итак, обо всё по порядку:

1. Некоторые страны, и в особенности страны Ближнего Востока, имеют обязательное требование — наличие данного анализа при ввозе собак и кошек в их страну. К этим странам относятся Южная Корея, ОАЭ, ЮАР, Малайзия, Израиль, Япония, Тайвань, с недавних пор Украина и прочие государства. Собственно говоря, для чего они это делают, если у всех ввозимых животных есть в наличии ветеринарные паспорта, в которых указано, что ввозимые кошки и собаки привиты от бешенства и пройден срок инкубации? Делают они это потому, что наша страна входит, по их мнению, к ряду стран с эпидемиологически опасной ситуацией по бешенству. Правда, тут сразу вполне резонен вопрос - почему другие государства, к примеру США и страны Европы, не считают Россию эпидемиологически опасным регионом? Ответ, дорогой читатель, мы предлагаем Вам додумать самостоятельно. Правда, справедливости ради стоит отметить, что есть страны (например Южная Корея), которые позволяют ввозить собак и кошек, если их возраст ещё не достиг положенного возраста для вакцинации против бешенства, т.е. ранее 3-ёх месяцев. Однако тут сразу возникает иная сложность уже в России, где сейчас уже невозможно получить ветеринарное свидетельство №1 с формулировкой "Не привит по возраст". Подробнее об этой теме мы писали в этой статье: Читать.
2. 
   Когда же позволительно сдавать тест на наличие антител к бешенству? Ответ кроется в самом вопросе - когда в крови Вашей собаки или кошки уже сумели выработаться антитела к данной вирусной болезни и срок этот равен от 30-ти дней после самой проведённой вакцинации, а также если от даты сделанной прививки прошло не более 1-го года.
3. Анализ на наличие антител к бешенству считается успешным, если их наличие в крови животного не менее 0,05 МЕ/мл (IU/ml) . Если данный показатель меньше указанных цифр, то даже не стоит пытаться отправлять животное в страну импортёр с таким результатом. В противном случае Вашу собаку или кошку, в лучшем случае, вышлют из страны обратно, в менее лучшем случае животное привьют от бешенства ещё раз и посадят на карантин на 30-ть дней с выставлением, в конце прохождения инкубационного периода, весьма круглой суммы для оплаты услуг содержания животного на карантине. Ну и, при самом негативном сценарии, животное просто подлежит усыплению.
4. Где же можно сдать анализ на наличие антител к бешенству? К сожалению надо констатировать, что лабораторий, аккредитованных проводить подобный тест, совсем немного:
   1. Федеральный центр охраны здоровья животных в г. Владимир;
   2. Центр молекулярной диагностики ФГБУ "ВГНКИ" в г. Москва;
   3. НИИ диагностики и профилактики болезней человека и животных в г. Москва.
5. Стоимость анализа на наличие антител к бешенству зависит от выбранной лаборатории, а также от срочности его выполнения. Так, для ориентира, на момент написания статьи (14.04.2020), сроки и стоимость в лаборатории ВГНКИ следующая:
   1. Срок изготовления течении 2-ух недель - 5500 рублей;
   2. Срок изготовления течении 3-ёх рабочих дней - 10 500 рублей.

Уважаемый читатель, если Вы проживаете далеко от указанных выше городов или регионе, а также если просто нуждаетесь в содействии при получении результата теста на наличие в крови Вашей собаки или кошке антител к вирусу бешенства, то Вы можете обратиться к нам за помощью, воспользовавшись наиболее удобным для Вас способом связи в разделе Контакты.

Методы выявления антигенов. При бешенстве для экспресс-диагностики можно использовать методы флуоресцирующих антител (МФА), реакции преципитации (РП) в агаровом геле, методы иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для прижизненной диагностики бешенства у человека требуется несколько тестов.

Определение антител к антигенам вируса бешенства. Выявление антител в сыворотке крови или в цереброспинальной жидкости — важный метод диагностики. Серологическое исследование рабиес-специфических антител проводится в сыворотке крови для определения пред- и постэкспозиционной вакцинации и определения времени бустерной иммунизации с целью повышения иммунного ответа.

Выделение вируса. Для выделения и идентификации вируса используют метод биопробы на белых мышах. Исследуемый материал суспендируют в физиологическом растворе, содержащем антибиотики и эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота. Суспензия вводится интрацеребрально белым мышам массой 5–6 г. Для доказательства развития инфекции за мышами ежедневно наблюдают до 30-го дня после инокуляции. Мыши, у которых за этот период развивается заболевание, немедленно подвергаются эвтаназии, и ткани мозга исследуются методом прямой МФА.

Преимущество данного подхода состоит в возможности определить малые количества вируса бешенства в материале. Недостаток метода — необходимость многодневного (7–18 суток) ожидания между инокуляцией и проявлением первых признаков заболевания. Для сокращения инкубационного периода применяют мышей-сосунков. Для экспресс-диагностики можно использовать мышей в возрасте менее 3 дней: у мышей, забитых через 3 дня, уже выявляется антиген вируса в мозге, который можно выявить методом МФА.

Такой метод выделения вируса практикуется в качестве подтверждающего диагностического теста при отрицательных результатах по выявлению антигена и телец Бабеша – Негри и в случае укуса человека подозрительным на бешенство животным. Он обеспечивает надлежащую чувствительность и специфичность, т. е. расценивается на уровне диагностической значимости метода прямой иммунофлуоресценции. Кроме того, этот метод является основным для идентификации вариантов вируса и перспективен для разработки диагностических реагентов.

Выделение и идентификация вируса на культуре клеток. Основным недостатком выделения вируса при инфицировании лабораторных животных является длительность метода. Избежать этого можно при использовании культур клеток. Обычно для этих целей используют культуру клеток нейробластомы мышей, если нужно исследовать ткани головного мозга. Мозг суспендируют в культуральной питательной среде, суспензию наносят на монослой культуры клеток и инкубируют от одного до нескольких дней.

Чувствительность данной культуры к вирусу можно повысить обработкой ее ДЕАЕ декстраном. Монослой клеток затем отмывают, фиксируют на холоде ацетоном или смесью формалина с метанолом и исследуют методом иммунофлюоресценции. Если животное было инфицировано вирусом бешенства, то в монослое культуры клеток выявляются цитоплазматические включения антигена вируса бешенства.

Показано, что на клетках мышиной нейробластомы линии Na C1 300 в сочетании с МФА антиген вируса бешенства можно выявить через 2 дня. Чувствительность метода сравнима с методом изоляции вируса на мышах.

Хотя вирус бешенства обладает облигатной нейропатогенностью in vivo, он способен инфицировать широкий круг клеток-хозяев in vitro, что можно использовать для исследования других тканей и органов на наличие вируса бешенства. Установлено, что вирус бешенства размножается в клетках ВНК-21 и Vero, в первичных клетках куриных эмбрионов или почек хомяка. Показано, что адсорбция вируса и внедрение его в клетку происходят в течение 7 часов. Через 24–48 часов внутри клетки образуются новые вирусные частицы, через 72 часов происходит почкование их из клеточной оболочки в межклеточное пространство.

Для экспресс-диагностики бешенства могут быть использованы:

а) метод МФА — для выявления антигена вируса бешенства в отпечатках роговицы или заднего отдела шеи больного, содержащего луковицы волос;
б) метод ПЦР — для выявления РНК вируса в биоптатах тканей, слюне, спинномозговой или слезной жидкости;
в) метод ИФА — для выявления специфических антител (антигена) у больных с типичным или атипичным течением.
г) метод биопробы — для выделения вируса на ранних этапах заболевания или для выявления антител в крови или спинномозговой жидкости на поздних стадиях заболевания. Для экспресс-диагностики используется комплексный метод (биопроба + МФА), заключающийся в заражении исследуемым материалом 2-дневных новорожденных мышей и исследования их мозга на 3–4-е сутки в МФА.

Выбор методов прижизненной диагностики в значительной мере зависит от стадии болезни: метод, основанный на выявлении антигенов, как правило, обладает высокой чувствительностью в конце инкубационного периода, в течение первых нескольких дней заболевания, в то время как вируснейтрализующие антитела обычно появляются в спинномозговой жидкости и сыворотке крови после 7-10 дней от начала болезни.

Реакция иммунофлюоресценции. Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например, флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики.

Метод обладает наиболее высокой степенью чувствительности, он положен в основу экспресс-диагностики и позволяет обнаруживать вирусные антигены в течение нескольких часов

Основные достоинство МФА: быстрота выполнения, высокая специфичность (100%). Затрачиваемое время на диагностику заболевания с его помощью — менее одного дня. Применяются прямой и непрямой варианты МФА.

Прямая иммунофлуоресценция остается наиболее предпочитаемым методом диагностики бешенства. Предметные стекла, содержащие мазки-отпечатки тканей мозга, или стекла с монослоем культуры тканей фиксируют в ацетоне в течение 1–4 часов. Затем препараты высушивают и обрабатывают флуоресцирующими поликлональными антинуклеокапсидными антителами (иммунофлуоресцентный реагент).

Этот реагент представляет собой конъюгат, приготовленный из специфических поликлональных антител IgG класса к нуклеокапсидному антигену вируса и флуоресцеина изоцианата (ФИТЦ). Специфические антитела получают путем гипериммунизации животных (кроликов, хомяков или лошадей) смесью эпитопов нуклеокапсида вируса.

В настоящее время для этих целей все шире используют мышиные моноклональные антитела к нуклеокапсиду вируса бешенства. После 30-минутной инкубации при 37° С диагностические препараты многократно отмывают физиологическим раствором и дистиллированной водой.

Антитела, меченные ФИТЦ, фиксируются только в местах локализации вирусных нуклеопротеидных антигенов. Затем препараты высушивают на воздухе и исследуют методом световой микроскопии, используя в качестве источника света ксеноновую лампу и соответствующий фильтр.

При непрямом варианте антиген сначала соединяют с неокрашенной специфической иммунной сывороткой. Затем на образовавшиеся нефлуоресцирующие комплексы антиген-антитело воздействуют меченой флуорохромом иммунной сывороткой, содержащей антитела к белкам специфической сыворотки. Непрямой вариант МФА наряду с выявлением антигена позволяет количественно определять антитела в исследуемой сыворотке путем соответствующего ее разведения.

Меченые ФИТЦ образования в клетках разных тканей выявляются в виде желто-зеленого флуоресцентного окрашивания на темном фоне (в виде округлой или овальной формы внутрицитоплазматических включений).

Иммуноферментный анализ. Метод основан на принципе сорбции белков на твердой фазе с последующим образованием комплексов антиген-антитело, выявляемых субстрат-индикаторным раствором. Добавляемый в лунки антиген специфически связывается с антителами. На слой антигена наносят исследуемые сыворотки в нужных разведениях. При наличии в них специфических антител последние связываются с антигеном. Для выявления связывания на слой антител наносят иммуноглобулин против глобулинов сыворотки людей, коньюгированный с пероксидазой хрена. Количество сорбирующего коньюгата пропорционально количеству связавшихся с антигеном антител сывороток людей. Это можно определить, используя индикаторный раствор (ортофенилилендиамин + перекись водорода), компоненты которого в результате действия пероксидазы коньюгата окрашивают жидкость в коричнево-желтый цвет. При обследовании неясных случаев применение ИФА дополнительно к методам РП или РСК позволяет увеличить достоверность лабораторной диагностики бешенства, благодаря большой чувствительности этого метода. Метод позволяет обнаруживать инфекционные и дефектные частицы.

Для определения антирабических антител в процессе вакцинации можно применять непрямой метод ИФА, используя в качестве антигена очищенный вирус, а для определения антител класса IgG в человеческой сыворотке — А-белок стафилококка, связанный с пероксидазой хрена. Результаты ИФА сравнимы с полученными в тестах вирусной нейтрализации на мышах. Метод позволяет выявлять присутствие IgМ в начале процесса иммунизации.

Иммуноферментные методы — весьма перспективны для выявления нуклеокапсидного антигена вируса при посмертной диагностике в тканях головного мозга. В их числе, например, быстрый иммуноферментный метод диагностики бешенства, основанный на приготовлении плашек сенсибилизированных антителами IgG изотипа к нуклеокапсиду первого серотипа, разведенных в карбонатном буфере.

Материал для исследования гомогенезируют в буфере или культуральной среде, осветляют центрифугированием, вносят в лунки и инкубируют в плашках. Фиксированный специфическими антителами нуклеокапсидный антиген идентифицируют добавлением пероксидазного конъюгата с антинуклеокапсидными противорабическими антителами иной видоспецифичности и хромогенного субстрата. Чувствительность метода составляет 0,8–1,0 нг/мл.

Этим методом можно выявлять антигены вирусов различных серотипов. Применение конъюгатов нуклеокапсидспецифичных антител, меченых биотином, повышает чувствительность метода до 0,1–0,2 нг/мл.

Методом ИФА успешно выявляется антиген нуклеокапсида [139], но материал, даже разложившийся, не должен фиксироваться формалином.

Метод полимеразной цепной реакции. Для экспресс-диагностики вируса бешенства и идентификации лиссавирусов наиболее удобен метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод ПЦР — самый надежный и быстрый для выделения вирионной РНК из любых проб, содержащих вирус в низкой концентрации. С его помощью можно создать много копий РНК вируса. Этот метод используется для подтверждения результатов МФА и для определения вируса в слюне, луковицах волос заднего отдела шеи и головы.

ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации) вирусоспецифической последовательности ДНК с помощью термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок, так называемых праймеров.

Каждый цикл состоит из трех стадий с различным температурным режимом. В каждом цикле удваивается число копий синтезируемого участка. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат в качестве матрицы для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации, что позволяет за 25–35 циклов наработать достаточное число копий выбранного участка ДНК для ее определения, как правило, с помощью электрофореза в агарозном геле.

Особенно высокая чувствительность ПЦР при использовании праймеров, комплементарных N-гену, когда удается выявлять РНК вируса в пробах, содержащих вирус в титре 10 МЛД50. Методом ПЦР можно выявлять РНК вируса даже в разложившемся патологическом материале.

В настоящее время разработаны и широко используются на практике подтверждающие (конфирматорные) тесты, такие как ПЦР в обратно-транскриптазном исполнении (ОТ-ПЦР). Метод ОТ-ПЦР — высокочувствительный и наиболее эффективный. РНК экстрагируется из тканей инфицированного вирусом органа, транскрибируется в кДНК, которая затем амплифицируется методом ПЦР. Для постановки ОТ-ПЦР необходимы праймеры, полученные к консервативным областям генома вируса бешенства. Обычно используются гены, кодирующие нуклеопротеин или N-белок.

Метод ПЦР высокоспецифичен и очень чувствителен. Является одним из наиболее точных тестов детекции рабического антигена, позволяет диагностировать бешенство даже при наличии в материале хотя бы одного вириона. В основе теста лежит комплементарное достраивание РНК-матрицы, осуществляемое in vitro с помощью фермента РНК-полимеразы. В последние годы ПЦР находит все более широкое применение для диагностики и мониторинга вирусных инфекций. Однако методика проведения сложна, дорогостояща и пока недостаточно унифицирована для рутинного применения.

Цитологические методы в настоящее время имеют ограниченное диагностическое значение, но при ряде инфекций по-прежнему должны применяться. Исследуются материалы аутопсии, биопсии, мазки, которые после соответствующей обработки окрашиваются и анализируются под микроскопом. При бешенстве — это выявление включений в цитоплазме клеток (тельца Бабеша – Негри).

Результативность методов диагностики бешенства может варьировать в зависимости от ряда факторов (стадии болезни, сроков забора материала, качества полученных проб, условий их хранения, опытности персонала, качества реактивов и др.). Если положительный результат подтверждает бешенство, то отрицательный не всегда свидетельствует об отсутствии болезни. Поэтому при бешенстве эксперты ВОЗ рекомендуют использовать несколько тестов, особенно МФА в сочетании с биопробой на новорожденных (2–3 дневных) белых мышах.

Меры личной профилактики

Все работы с материалом, предположительно содержащим вирус бешенства, равно как и с животными, подозрительными на бешенство, должны проводиться с соблюдением мер личной безопасности. Медицинские работники и ветеринарные врачи должны работать в халатах, перчатках, масках.

По окончанию работы боксы обрабатывают 3% раствором перекиси водорода.

Средства индивидуальной защиты обеззараживают кипячением или автоклавированием. Рабочую поверхность стола и руки обеззараживают дезраствором (0,5% раствор хлорамина).