Анализ на вирусные полиморфизмы

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Николаева Людмила Ивановна, Самохвалов Евгений Иванович, Альховский Сергей Владимирович, Колотвин Андрей Васильевич, Самоходская Лариса Михайловна

Цель исследования выявить роль генетического полиморфизма вируса гепатита С, выражающегося, прежде всего, в существовании генотипов /субтипов вируса, и однонуклеотидного полиморфизма (ОНП) генов пациентов с хроническим гепатитом С в формировании устойчивого вирусологического ответа (УВО) на противовирусную терапию. Изучены образцы крови от 100 пациентов восточно-славянского происхождения с разным ответом на терапию. Установлено, что на вероятность достижения УВО среди изученных ОНП семи генов влияют отдельные аллельные варианты генов IL-1β, IL-28B, TGF-β1 и генотипы вируса.

Genetic polymorphisms and effecacy of antivital therapy ofchronic viral hepatitis C

Aim: to determine influence of genetic polymorphisms of hepatitis C virus and single nucleotide polymorphisms (SNPs) of patients with chronic hepatitis C on achieving sustained virological response (SVR) to antiviral therapy. One hundred blood samples of eastern-Slavonic patients with different response to the therapy were analyzed. It was determined, that among SNPs of 7 human genes only allelic variants of IL-1β, IL-28B, TGF-β1 and viral genotypes can influence on probability to achieve SVR.

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРОТИВОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ С*

Л.И. Николаева, Е.И. Самохвалов, С.В. Альховский

А.В. Колотвин, Л.М. Самоходская

ГУНУ факультет фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова Ломоносовский пр., 31, стр. 5, Москва, Россия, 119192

Клинический отдел инфекционной патологии

Кафедра инфекционных болезней с курсом эпидемиологии Медицинский факакультет

Российский университет дружбы народов ул. Миклухо-Маклая, 8, Москва, Россия, 117198

Цель исследования — выявить роль генетического полиморфизма вируса гепатита С, выражающегося, прежде всего, в существовании генотипов/субтипов вируса, и однонуклеотидного полиморфизма (ОНП) генов пациентов с хроническим гепатитом С в формировании устойчивого вирусологического ответа (УВО) на противовирусную терапию. Изучены образцы крови от 100 пациентов восточно-славянского происхождения с разным ответом на терапию. Установлено, что на вероятность достижения УВО среди изученных ОНП семи генов влияют отдельные аллельные варианты генов IL-1ß, IL-28B, TGF-ß1 и генотипы вируса.

Ключевые слова: хронический вирусный гепатит С, вирусологический ответ, геном, полиморфизм, генотипы.

Вирусный гепатит С — повсеместно распространенное инфекционное заболевание, вызываемое парентерально передающимся вирусом гепатита С (ВГС). Для этого вируса характерно частое формирование хронической инфекции, которая постепенно прогрессирует, приводя к развитию фиброза, к циррозу печени у трети больных и, реже, к гепатоцеллюлярной карциноме. В последние годы возрастает интерес к изучению влияния полиморфизма генома ВГС и отдельных генов больных людей на формирование устойчивого вирусологического ответа (УВО) при противовирусной терапии (ПВТ).

ВГС относится к сем. Flaviviridae, род. Hepacivirus. Геном вируса представлен одноцепочечной РНК, которая имеет полиморфные участки, что привело к необ-

* Данное исследование поддержано грантом РФФИ офи-ц 09-04-13853.

ходимости классифицировать вирус на генотипы и субтипы, каждый из которых имеет разную чувствительности к ПВТ. На генетическое разнообразие вируса накладывается полиморфизм генов людей, что тоже вносит свой вклад в вероятность достижения УВО при ПВТ.

В настоящее время выявляют несколько основных групп человеческих генов, для которых показана зависимость между их полиморфизмом и вариантами течения хронического гепатита С (ХГС). Это гены, определяющие особенности иммунного ответа, контролирующие продукцию и деградацию внеклеточного мат-рикса, кодирующие вазоактивные пептиды, вовлеченные в окислительный стресс, участвующие в метаболизме липидов, контролирующие катаболизм эндогенных и экзогенных молекул [1]. Несмотря на значительное число исследований, посвященных поиску взаимосвязи между аллельными вариантами генов-кандидатов и ответом на ПВТ, убедительные данные установлены для небольшого их числа. При этом в ряде исследований получены противоречивые данные.

Перечисленные причины определяют актуальность проведения исследования. Учитывая влияние иммунных реакций и повышенного содержания железа на эффективность ПВТ, нами был исследованы ОНП генов, продукты которых участвуют в этих процессах, — IL-1p, IL-6, IL-10, 1Ь-28В, TNF-a, TGF-^1 (цитокины) и HFE (белок-регулятор обмена железа)

Методы исследования. Исследованы образцы крови от 51 мужчины и 49 женщин восточно-славянского происхождения (средний возраст 38,8 ± 1,6 г.). У всех больных был выявлен ХГС без других гепатитов и ВИЧ-инфекции, стадии фиброза печени перед началом терапии имели значение от минимальной до F3 (по системе METAVIR). Больным был проведен 24- и 48-недельный курс терапии ПЕГ-интерфероном-a в комбинации с рибавирином. Длительность курса терапии зависела от субтипа вируса. Через 6 месяцев после окончания терапии были сформированы группы больных c УВО и без него (БВО).

Выделение геномной ДНК пациентов, условия ПЦР для локусов генов IL-1b (-511 C/T), IL-6 (-174 G/C), IL-10 (-1082 G/A), TNF-a (-238 G/A), TGF-p1 (+915 G/C), (Н63Б, ffi82Y), а также праймеры и анализ продуктов реакции проводили, как описано ранее [4].

Генотипирование полиморфных локусов (rs8099917, rs12979860) гена IL-28B осуществляли методом ПЦР в реальном времени, используя «Комплект реагентов

Статистически значимые различия в группах больных рассчитывали с помощью ¿-критерия Стьюдента, %2-критерия и точного метода Фишера. Различия считались достоверными прир Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Длительность ХГС к началу терапии 6,1 ± 0,7 11,5 ± 1,0 р 0,05

Женщины 25 (50%) 24 48(%) р > 0,05

АЛТ, превышение нормы 3,36 ± 0,68 2,54 ± 0,42 р > 0,05

АСТ, превышение нормы 1,68 ± 0,34 1,96 ± 0,38 р > 0,05

Данные по анализу генетических параметров ВГС у больных двух этих групп представлены в табл. 2. В группе с УВО преобладали субтипы вируса 3а и 1Ь, в группе БВО — 1Ь, что согласуется с результатами других исследований [5, 6]. Доля пациентов, инфицированных вирусом субтипа 1Ь и достигших УВО, составила 38,6% (22 пациента из 57), что не противоречит опубликованным сведениям — 36—48% [5, 6]. Количество пациентов, инфицированных вирусом субтипа 3а, достигших УВО в нашем исследовании, составило 67,6% (23 из 34), что входит в диапазон значений, полученных другими авторами — 65—80% [5, 6].

Генетические параметры ВГС в группах больных

Показатели Группа c УВО (п = 50) Группа c БВО (п = 50)

Субтипы вируса: 1а 1 (2%) 1 (2%)

Количество РНК до ПВТ: > 106 ^/мл) (7,53 ± 3,68) • 105 (8,76 ± 2,86) • 105

Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Полиморфизм генов, вовлеченных в вероятность достижения пациентами УВО

Ген, локус и генотип Группа УВО, доля пациентов с данным генотипом Группа БВО, доля пациентов с данным генотипом Достоверность различий,р

IL-1 в, -511, Т/T 2,0% 12,0% p Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

[16] Halfon P., Bourliere M., Ouzan D. et al. A single IL-28B genotype SNP rs12979860 determination predicts treatment response in patients with chronic hepatitis C Genotype 1 // Eur. J Gastroenterol. Hepatol. — 2010. — V. 23. — P. 931—935.

[17] Moghaddam A., Melum E., Reinton N. et al. IL-28B genetic variation and treatment response in patients with hepatitis C virus genotype 3 infection // Hepatol. — 2011. — V. 53. — P. 746—754.

[18] He J., Pei X., Xu W. et al. The relationship between tumor necrosis factor-a polymorphisms and hepatitis C virus infection: a systematic review and meta-analysis // Ren. Fail. — 2011. — V. 33. — P. 915—22.

[19] Carneiro M.V., Souza F.F., Teixeira A.C. et al. The H63D genetic variant of the HFE gene is independently associated with the virological response to interferon and ribavirin therapy in chronic hepatitis C // Eur. J Gastroenterol. Hepatol. — 2010. — V. 22. — P. 1204—1210.

[20] Ishizu Y., Katano Y., Honda T. et al. Clinical impact of HFE mutations in Japanese patients with chronic hepatitis C // J Gastroenterol. Hepatol. — 2011. Nov. 18. epub ahead of print.

[21] Sikorska K., Stalke P., Izycka-Swieszewska E. et al. The role of iron overload and HFE gene mutations in the era of perylated interferon and ribavirin treatment of chronic hepatitis C // Med. Sci. Monit. — 2010. — V. 16. — Р. 137—143.

[22] Distante S., Bjoro K., Hellum K.B. et al. Raised serum ferritin predicts nonresponse to interferon and ribavirin treatment in patients with chronic hepatitis C infection // Liver. — 2002. — V. 22. — Р. 269—275.

GENETIC POLYMORPHISMS AND EFFECACY OF ANTIVITAL THERAPY OF CHRONIC VIRAL HEPATITIS С

L.I. Nikolaeva, Е.I. Sамоkhvalov, S.V. Al'khovskiy

Lab. of genetically engineered products D.I. Ivanovsky institute of virology

Gamaleya Str., 16, Moscow, Russia, 123098

A.V. Kolotvin, L^. Samokhodskaya

Lab. of genetic and cellular technology M.V. Lomonosov Moscow State University

Lomonosovsky Av., 31-5, Moscow, Russia, 119192

Clinical department of infection pathology Central institute of epidemiology

Novogireevskaya Str., 3a, Moscow, Russia, 111123

Department of infection diseases with epidemiologic course Peoples' Friendship University of Russia

Miklukho-Maklaya Str., 8, Moscow, Russia, 117198

Aim: to determine influence of genetic polymorphisms of hepatitis C virus and single nucleotide polymorphisms (SNPs) of patients with chronic hepatitis C on achieving sustained virological response (SVR) to antiviral therapy. One hundred blood samples of eastern-Slavonic patients with different response to the therapy were analyzed. It was determined, that among SNPs of 7 human genes only allelic variants of IL-ip, IL-28B, TGF-pi and viral genotypes can influence on probability to achieve SVR. Key words: chronic hepatitis C, virological response, genome, polymorphisms, genotypes.

Информация об исследовании

Вирусный гепатит С – широко распространенное во всем мире инфекционное заболевание, вызываемое вирусом гепатита С ( HCV ), которым инфицировано примерно 170 млн. человек.

После острой фазы заболевания вирус гепатита С персистирует в крови у 85-90% больных и, независимо от пути заражения, у 50-70% пациентов заболевание в дальнейшем переходит в хронический гепатит. Нередко хронический гепатит прогрессирует медленно и долгое время не имеет клинических проявлений. Но, даже при легком хроническом гепатите С, протекающем почти бессимптомно при умеренном повышении активности аминотрансфераз и незначительном изменении печеночной ткани в первое десятилетие от инфицирования, почти у 30% больных через десятилетия развивается цирроз печени, который при хроническом гепатите С, может привести к печеночноклеточному раку.

Европейская ассоциация по изучению печени объявила вирусный гепатит С излечимым заболеванием. Это означает, что ограниченный по времени курс лечения противовирусными препаратами назначается пациенту один раз. В результате лечения достигается элиминация вируса из крови (устойчивый вирусологический ответ – УВО), нормализация биохимических показателей крови, улучшение состояния печени по данным УЗИ и эластометрии (снижение показателей фиброза вплоть до нормальных значений). Однако, УВО достигается не всегда. Кроме того, среди пациентов, прошедших курс стандартной противовирусной терапии, возможны рецидивы заболевания. В этих случаях назначаются повторные курсы лечения, которые часто приводят к достижению УВО. Современная противовирусная терапия представляет собой противовирусную терапию пегилированным интерфероном и рибавирином, согласно рекомендациям американской ассоциации по изучению болезней печени (АА LSD ) и Европейской ассоциации по изучению болезней печени ( EALS ).

Как показали исследования последних лет, особое влияние на результат лечения, а также возможность самостоятельного выздоровления при заражении вирусом гепатита С, оказывают генетические факторы, особенно полиморфизмы гена интерлейкина 28В.

Интерлейкин 28В является представителем интерферонов-лямбда, или интерферонов 3 типа, обладающих сильным противовирусным действием и подавляющих репликацию вируса гепатита С. Были изучены полиморфизмы гена интерлейкина 28В, связанные с устойчивым вирусологическим ответом. При определенных генотипах достижение устойчивого вирусологического ответа достигается в 2 раза чаще.

Для оценки прогноза гепатита С чаще всего используются два основных полиморфизма: rs12979860 и rs8099917. В зависимости от нуклеотидов в этих локусах, выделены аллели C (цитозин), T (тимин), G (гуанин) и соответствующие генотипы: для аллели rs12979860 — СС, СТ, ТТ, а также ТТ, ТG, GG для аллелей rs8099917. Получены данные, что генотип интерлейкина 28В является независимым и наиболее достоверным фактором, влияющим на частоту раннего и устойчивого вирусологического ответа на ПВТ среди других факторов прогноза. При этом полиморфизмы rs12979860 отвечают за получение ответа, а полиморфизмы rs8099917 тесно связаны с отсутствием ответа на ПВТ.

Более успешные результаты ПВТ получены у больных с генотипами СС rs1297960 и ТТ rs8099917 – более 70 %, по сравнению с генотипами rs1297960 СТ и ТТ и генотипами rs8099917 GT и GG – около 30 %. Определение полиморфизмов интерлейкина 28В позволяют прогнозировать вероятность достижения УВО с чувствительностью более 60 % и специфичностью около 80 %. Благоприятными аллелями являются rs1297960 CC и rs8099917 ТТ. Все другие генотипы определяют отрицательный прогноз.

Благоприятные генотипы часто ассоциируются с большей воспалительной активностью и стадией фиброза. Кроме того, отмечена связь полиморфизма rs12979860 Т с возникновением гепатоцеллюлярной карциномы. Носительство этого аллеля расценивается как независимый фактор риска в сочетании с другими известными факторами риска.

Определение генотипа интерлейкина 28В и учет других неблагоприятных факторов прогноза противовирусной терапии позволяет искать пути повышения эффективности лечения сразу при назначении терапии. Было показано, что увеличение дозы интерферона в 2 раза у пациентов с неблагоприятным генотипом интерлейкина 28В увеличивало эффективность лечения и снижало количество рецидивов значительно в меньшей степени, чем увеличение длительности лечения до 72 недель. Более того, у больных с благоприятным генотипом и быстрым вирусологическим ответом возможно укорочение сроков лечения до 24 недель.

Таким образом, связь генотипов интерлейкина 28В с достижением устойчивого вирусологического ответа достоверна . Изучение полиморфизма гена интрлейкина 28В наряду с другими факторами прогноза дает возможность более четко определить прогноз течения инфекции и эффективности лечения. Это важный шаг к индивидуализированной противовирусной терапии, позволяющий индивидуально определять сроки лечения и дозы препаратов, и не только увеличивая их, но и уменьшая.

Правила подготовки к исследованию:

Не требуется предварительной подготовки.

Медженцентр специализируется на диспансерном наблюдении и лечении пациентов с нарушениями свертывания. В нашей лаборатории патологий гемостаза выполняют около 30 тестов на генетический полиморфизм – фибриногена, протромбина, факторов Хагемана, Лейдена и многих других.

Цена анализов на полиморфизм генов*

1 000 Р Анализ на полиморфизм в гене фактора II (протромбина)
1 000 Р Анализ на полиморфизм в гене фактора I (фибриногена)
1 000 Р Анализ на полиморфизм в гене фактора XII (фактора Хагемана)
1 000 Р Анализ на полиморфизм в гене MTHFR
1 000 Р Анализ на полиморфизм в гене гликопротеина GpIba
1 000 Р Анализ на мутацию в гене фактора V (FV Leiden)
300 Р Забор крови

Расчет стоимости лечения Все цены

* Принимаются пациенты старше 18 лет.

Когда назначают анализы на полиморфизм генов гемостаза

Поскольку смертность от ССЗ (сердечно-сосудистых заболеваний) занимает лидирующее место в мире (31% всех случаев), сдать кровь на полиморфизм генов гемостазиологи рекомендуют каждому человеку.

В особой группе риска находятся пациенты, родственники которых имели сердечно-сосудистые катастрофы, артериальную гипертензию, акушерские осложнения и тромбозы.

Генетическое исследование показано женщинам, планирующим беременность, – чтобы избежать фетоплацентарной недостаточности, отслойки нормально расположенной плаценты, выкидышей и преэклампсии.

Специалисты

акушер-гинеколог, гемостазиолог, доктор медицинских наук

акушер-гинеколог, гемостазиолог, профессор, доктор медицинских наук, эксперт международного уровня по проблемам тромбозов и нарушений свертывания крови

Как сдают анализ

Забор биоматериала в лаборатории МЖЦ проводят в первой половине дня. Для анализа на полиморфизм генов берется венозная кровь.

Расшифровка анализа на полиморфизм генов гемостаза

При интерпретации результатов берут во внимание положение двух аллелей – форм одного и того же гена, расположенного в хромосомах:

G/G – нормальный ген;
G/A – гетерозиготная мутация;
A/A – оба аллеля гена имеют дефекты (гомозиготная мутация).

Ген	Проявления полиморфизма
Фактор V (FV Leiden) Замена аргинина на глутамин в положении 506	Риск ишемического инсульта, венозных и артериальных тромбозов в молодом возрасте. Акушерские осложнения – фетоплацентарная недостаточность, ВЗР, выкидыши во II-м, III-м триместрах.
Янус-киназа (JAK-2) V617F	Миелопролиферативные заболевания - патологии костного мозга (миелолейкоз, тромбоцитемия, миелофиброз). Самопроизвольное прерывание беременности.
Фактор VII (Hageman factor)	Гемофилия D, геморрагический диатез у новорожденных, болезнь Хагемана – врожденное нарушение свертывания крови.
Фактор I (FGB) G (-455) A	Повышает риск инсульта при наличии артериальной гипертензии. Осложнения беременности – фетоплацентарная недостаточность, привычное невынашивание.
Фактор II (Протромбин) 20210 G>A	Венозная тромбоэмболия. Отслойка нормально расположенной плаценты, выкидыши в I-м триместре, гестоз.
Метилен тетра гидрофолат редуктаза (MTHFR) 677 C>T	Акушерские патологии: преэклампсия, ВЗР, поздний гестоз, антенатальная гибель плода, преждевременные роды.

Гомозиготная мутация и наличие сразу нескольких полиморфизмов отягощают диагноз. Пациенткам с мутациями гемостаза необходим индивидуальный подход при ведении беременности и консультация профильного специалиста – гемостазиолога. Это поможет избежать репродуктивных потерь и акушерских осложнений.

Лаборатория патологий гемостаза при МЖЦ работает 6 дней в неделю. Также у нас функционирует круглосуточная телефонная линия – позвоните нам прямо сейчас и забронируйте удобное для вас время посещения клиники!

Aнализы на генетические полиморфизмы при выкидышах и замерших беременностях в первом триместре

Поскольку 80%[1] потерь приходятся на первые три месяца беременности, только этих ситуаций мы коснемся в статье. Причины потери беременности после 12 недель – предмет отдельного обсуждения.

Непросто поверить, но риск спонтанного прерывания беременности на сроке 6-12 недель у здоровой женщины моложе 35 лет составляет не менее 10%[2], и повлиять на причины этих событий можно в меньшинстве случаев.

Итак, женщина понимает: ребенка не будет. Одно из первых желаний в такие моменты – узнать причину. И находятся желающие эту потребность удовлетворить: ошарашенной женщине назначают многочисленные обследования и анализы, и редко обходится без тестов на:

Вариантов названий у этой услуги множество. Суть одна: по материалу матери определяют ее генотип по полиморфизмам нескольких генов.

Полиморфизмы – это то, что делает нас разными. Это генетические оттенки, из-за которых один может за милую душу выпить литр молока, а другой после пары глотков будет искать туалет. Благодаря полиморфизмам у нас столько цветов глаз и волос. Из-за них у кого-то кровь сворачивается чуть быстрее среднего, а у кого-то – чуть медленнее. Удивительно, но весь этот спектр форм, цветов и особенностей задается комбинациями четырех букв-нуклеотидов, составляющих наши гены: A, G, T и C. Одну букву мы получаем от мамы, другую – от папы. Так получается наш собственный генотип: например GG, GA или TC. Результатом анализа на полиморфизмы как раз и будут пары букв.

Например, в гене фактора свертывания крови V (этот ген называется F5) буквой под номером 1691 может быть G, а может – А. Отсюда три варианта генотипов: GG, GA и AA. Вариант GG — удел большинства людей, ему не свойственны какие-то особенности. Около 2-7% людей имеют генотип GА, то есть несут полиморфизм А (так называемую Лейденскую мутацию), из-за чего склонны к повышенной свертываемости крови. Людей с генотипом АА крайне мало.

Назовём героев этой статьи поимённо!

Не пугайтесь того, что эти названия вам ни о чем не говорят, и пока что поверьте: они и врачу вашему в большинстве случаев ничего не скажут.

F5: 1691 G>A (Arg506Gln) NB!
F2: 20210 G>A NB!
F7: 10976 G>A (Arg353Gln)
F13: G>T (Val34Leu)
FGB: -455 G>A
ITGA2: 807 C>T (Phe224Phe)
ITGB3: 1565 T>C (Leu33Pro)
SERPINE1 (PAI-1): -675 5G>4G
MTHFR: 677 C>T (Ala222Val)
MTHFR: 1298 A>C (Glu429Ala)
MTR: 2756 A>G (Asp919Gly)
MTRR: 66 A>G (lle22Met)

NB ! Обратите внимание, что эти два полиморфизма могут играть важную роль в принятии решения о назначении КОК (комбинированных оральных контрацептивов).

Когда ученые узнали о существовании полиморфизмов, они задумались: а нельзя ли использовать это знание для выделения группы людей с предрасположенностью к определенным заболеваниям, и заблаговременно их предупреждать? Известно же: предупредить легче, чем лечить!

Вот как рассуждали эти исследователи: уже упоминавшаяся Лейденская мутация связана с повышенной свертываемостью крови. Известно, что формирование и функционирование плаценты сильно зависит от агрегатных свойств крови, а при невынашивании беременности в плацентах нередко находят очаги тромбоза. Логично предположить, что у носительниц Лейденской мутации эти нарушения могут встречаться чаще. Осталось провести исследование и проверить эту гипотезу. Такие исследования были проведены и некоторые показали наличие связи между наличием Лейденской мутации и повышенным риском потери беременности.

Когда результаты научных исследований переносятся в клиническую практику без должной оценки последствий, страдают кошельки и нервы пациентов.

Около 70% беременностей, прервавшихся в первом триместре, не могли развиваться из-за генетических аномалий ЭМБРИОНА (не матери. )[3]. Не путайте с генетическими полиморфизмами!

Полиморфизмы – это генетические особенности мамы, а приводящие к выкидышу нарушения структуры и количества хромосом – это грубые аномалии эмбриона. Возникновение таких эмбрионов – часть жизни, так же, как и их ранняя отбраковка.

Оставшиеся 30% ранних потерь беременности тоже не имеют отношения к полиморфизмам, а обусловлены антифосфолипидным синдромом, неправильным функционированием шейки матки, инфекциями и другими причинами, к которым генетические полиморфизмы матери не относятся.

В отличие от мутаций, вызывающих редкие генетические болезни, которые встречаются у одного из десятков тысяч людей, какие-то полиморфизмы есть у всех. Каждый день мимо вас проходят люди с такими же GG, GA и TC, как у вас. Возможно, у них есть дети, но может быть и нет. Есть вероятность, что они сталкивались с потерей беременности, а может быть их это несчастье обошло стороной. В любом случае: от вас они отличаются тем, что не тратили деньги на анализ полиморфизмов.

Например, вероятность развития венозного тромбоза хоть в некоторой степени и зависит от наличия, например, уже знакомой нам Лейденской мутации, но на львиную долю определяется весом, статусом курения, возрастом, наличием беременности, принимаемыми препаратами и другими факторами.

Пример из жизни:

Но вернемся к цифрам. Увеличение в 3,5…5,5 раз – это существенно? Конечно существенно! Если мне завтра в три с половиной раза увеличат зарплату, это будет ой как существенно…

А если посмотреть не относительный, а абсолютный риск? Когда у вас есть Лейденская мутация, ваш ежегодный риск получить венозную тромбоэмболию равен 0,05…0,2%. Иными словами:

Наличие Лейденской мутации означает,

что с вероятностью 99,95…99,80% у вас

НЕ будет венозной тромбоэмболии (ВТЭ) в течение следующего года

Абсолютный риск ВТЭ настолько мал, что даже увеличение в разы не делает его существенным для жизни отдельного конкретного человека. Беременность в совокупности с Лейденской мутацией повышает риск ВТЭ, но шанс на то, что тромбоза НЕ будет, всё равно не опускается ниже 95%.

Они не имеют доказанной эффективности в улучшении исходов беременности у женщин с полиморфизмами в системе свертывания.

Анализы на генетические полиморфизмы женщинам, столкнувшимся с потерей беременности один или несколько раз, делать не нужно

[4] Scott M. Stevens et al. Guidance for the evaluation and treatment of hereditary and acquired thrombophilia. J Thromb Thrombolysis (2016) 41:154–164

Описание

Комплексное генетическое исследование риска развития тромбофилии и нарушения фолатного цикла.

Наличие генетической предрасположенности к тромбофилии сопряжено с повышенным риском развития осложнений беременности: привычное невынашивание, плацентарная недостаточность, задержка роста плода, поздний токсикоз. Полиморфизмы генов F2, F5, F7, F13, FGB, PAI-1, ITGA2, ITGB3 и MTHFR, MTRR, MTR также могут являться причиной развития венозных тромбозов.

Тромбофилия
Тромбофилия — патологическое изменение в свёртывающей системе крови, приводящие к образованию кровяных сгустков.

Тромбофилия может быть наследственной и приобретённой. Приобретённые тромбофилии могут возникнуть во время беременности или при ожирении. Появление тромбофилий может быть обусловлено внешними причинами: хирургическими операциями, использованием гормональных контрацептивов, антифосфолипидным синдромом, повышением уровня гомоцистеина, курением или долгим периодом неподвижности. При наследственных тромбофилиях происходят изменения в генах, ответственных за поддержание гемостаза.

Наиболее частыми из известных генетических факторов, предрасполагающих к тромбозам, являются полиморфизмы в генах факторов свёртывания крови F2 (c.*97G>A) и F5 (c. 1601G>A), и полиморфизмы в генах фолатного цикла (метилентетрагидрофолат-редуктаза, MTHFR; метионин-синтаза редуктаза, MTRR; метионин-синтаза, MTR). Полиморфизмы в генах факторов F2 и F5 вносят больший вклад в риск развития тромбофилий и имеют самостоятельное клиническое значение. Одновременное выявление нескольких генетических факторов предрасположенности к тромбофилическим состояниям значительно увеличивает риск развития тромбозов.

Тромбозы — наиболее частое проявление тромбофилии
При тромбозах в сосудах образуются тромбы, которые блокируют кровоток. Она может приводить к развитию артериальных и венозных тромбозов, которые в свою очередь зачастую являются причиной инфаркта миокарда, ишемической болезни сердца, инсульта, тромбоэмболии лёгочной артерии и др. Повышенная склонность к тромбообразованию — наиболее частое проявление тромбофилии.

Ген F2
Ген F2 кодирует аминокислотную последовательность белка протромбина. Протромбин или коагуляционный фактор II является одним из главных компонентов свёртывающей системы крови. В результате его ферментативного расщепления образуется тромбин. Данная реакция является первой стадией образования кровяного сгустка.

Полиморфизм гена F2 (20210 G-> A) обусловлен заменой нуклеотидного основания гуанина (G) на аденин (A) в позиции 20210 гена, приводит в случае варианта А к повышенной экспрессии гена. Избыточная продукция протромбина является фактором риска инфаркта миокарда, различных тромбозов, в том числе тромбоэмболии лёгочной артерии, часто имеющей смертельный исход. Неблагоприятный вариант полиморфизма (А) наследуется по аутосомно-доминантному типу. Это означает, что повышенный риск тромбофилии имеет место даже при гетерозиготной форме полиморфизма.

Ген F5
Ген F5 кодирует аминокислотную последовательность белка — коагуляционного фактора V (фактор Лейдена). Функция коагуляционного фактора V заключается в активизации реакции образования тромбина из протромбина.

Полиморфизм (1691 G-> A (R506Q)) гена F5 обусловлен заменой нуклеотидного основания гуанина (G) на аденин (A) в положении 1691, что приводит к аминокислотной замене аргинина на глутамин в позиции 506. Замена аминокислоты придаёт устойчивость активной форме фактора Лейдена к расщепляющему действию регулирующего фермента, что приводит к гиперкоагуляции (повышенной свёртываемости) крови. Носители варианта А обладают повышенной склонностью к развитию сосудистых тромбозов, являющихся фактором риска венозных и артериальных тромбоэмболий, инфаркта миокарда и инсульта. Наличие данного варианта полиморфизма несёт серьёзную опасность для беременных, повышает вероятность развития целого ряда осложнений беременности: выкидыша на ранних сроках, отставания развития плода, позднего токсикоза, фетоплацентарной недостаточности и др.

Ген F7
Ген F7 кодирует коагуляционный фактор, который участвует в образовании кровяного сгустка. Вариант 353Gln (10976A) приводит к понижению производительности (экспрессии) гена фактора VII и является защитным фактором в развитии тромбозов и инфаркта миокарда. При исследовании пациентов со стенозом коронарных артерий и инфарктом миокарда обнаружено, что наличие мутации 10976A приводит к понижению уровня фактора VII в крови на 30% и 2-х кратному понижению риска инфаркта миокарда даже при наличии заметного коронарного атеросклероза. В группе пациентов, не имевших инфаркта миокарда, наблюдалась повышенная встречаемость гетеро- и гомозиготных генотипов 10976A, соответственно G/A и G/G.

Ген F13
Ген F13 кодирует фактор XIII. Это фибринстабилизирующий фактор, или фибриназа участвует в образовании нерастворимого фибрина, представляющего собой основу кровяного сгустка, или тромба. Тромбы, образовавшиеся в присутствии фибриназы, очень медленно подвергаются лизису. Повышение активности фактора XIII сопровождается увеличением адгезивности и агрегации кровяных пластинок. У больных с тромбоэмболическими осложнениями активность фибриназы повышена.

Мутация 134Leu наблюдается у 51% женщин с привычным невынашиванием беременности. Риск привычного невынашивания беременности еще выше у лиц — носителей мутации 134Leu в сочетании с мутацией 5G/4G в гене PAI-1.

PAI-1
Ген РАI1 кодирует ингибитор активатора плазминогена — I типа SERPINE1. РАI1 является компонентом противосвёртывающей системы крови. Мутации 5G/4G и 4G/4G приводит к его сверхпродукции. В результате увеличивается риск тромбозов. Гомозиготная мутация 4G/4G является фактором риска для развития тромбозов, в том числе тромбозом портальной вены и тромбозом внутренних органов, и инфаркта миокарда, семейной предрасположенности к ИБС. Также приводит к таким осложнениям беременности, как тяжёлый гестоз (у носительниц генотипа 5G/4G риск увеличивается в 2 раза, а у женщин с генотипом 4G/4G в 4 раза), остановки развития на малых сроках, внутриутробная гибель плода, гипотрофия и задержка внутриутробного развития, хроническая внутриутробная гипоксия плода, преждевременное созревание плаценты.

Назначение специальной профилактики во время беременности: низкодозированная ацетилсалициловая кислота и малые дозы препаратов гепарина позволяет практически полностью устранить риск осложнений беременности у женщин с генотипами 5G/4G и 4G/4G.

Ген ITGB3
Ген ITGB3 кодирует аминокислотную последовательность белковой молекулы тромбоцитарного рецептора фибриногена. Данный рецептор обеспечивает взаимодействие тромбоцитов с фибриногеном плазмы крови, в результате чего происходит агрегация тромбоцитов и образование тромба.

Ген ITGА2
Ген ITGA2 кодирует аминокислотную последовательность a2-субъединицы интегринов — специализированных рецепторов тромбоцитов, за счёт которых происходит взаимодействие тромбоцитов с тканевыми белками, обнажаемыми при повреждении стенки сосудов. Благодаря интегринам тромбоциты образуют монослой в области повреждённых тканей, что является необходимым условием включения последующих звеньев свёртывающей системы крови, предохраняющей организм от кровопотери.

Ген FGB
Ген FGB кодирует аминокислотную последовательность бета-цепи фибриногена. Фибриноген занимает одно из главных мест в свёртывающей системе крови. Из фибриногена образуется фибрин — основной компонент кровяного сгустка.

Нарушения фолатного цикла

Ген MTHFR
Ген MTHFR кодирует аминокислотную последовательность фермента метаболизма гомоцистеина. Гомоцистеин — продукт метаболизма метионина — одной из 8 незаменимых аминокислот организма. Он обладает выраженным токсическим действием на клетку. Циркулируя в крови, гомоцистеин повреждает сосуды, тем самым повышая свёртываемость крови и образование микротромбов в сосудах. Снижение активности метилентетрагидрофолатредуктазы — одна из важных причин накопления гомоцистеина в крови.

Дефицит МТГФР приводит к снижению метилирования ДНК, что приводит к активации многих клеточных генов, в том числе онкогенов. В случае сниженной активности МТГФР во время беременности усиливается влияние тератогенных и мутагенных факторов внешней среды.

Известно около десяти вариантов гена MTHFR, влияющих на функцию фермента. Наиболее изучен полиморфизм 677 C->T (A223V).

Полиморфизм 677 C->T (A223V) связан с заменой в позиции 677 нуклеотида цитозина (С) на тимин (Т). Это приводит к замене аминокислотного остатка аланина на валин в позиции 223, относящейся к участку молекулы фермента, ответственному за связывание фолиевой кислоты. У лиц, гомозиготных по данному варианту (генотип Т/Т) фермент МТГФР проявляет чувствительность к температуре и теряет свою активность примерно на 65%. Вариант Т связан с четырьмя группами многофакторных заболеваний: сердечно-сосудистыми, дефектами развития плода, колоректальной аденомой и раком молочной железы и яичников. У женщин с генотипом Т/Т во время беременности, дефицит фолиевой кислоты может приводить к дефектам развития плода, в том числе, незаращению нервной трубки. У носителей этого генотипа высок риск развития побочных эффектов при приёме некоторых лекарственных препаратов, используемых в раковой химиотерапии, например, метотрексата. Неблагоприятное воздействие варианта Т полиморфизма сильно зависит от внешних факторов — низкого содержания в пище фолатов, курения, приема алкоголя. Сочетание генотипа Т/Т и папилломавирусной инфекции увеличивает риск цервикальной дисплазии. Назначение фолиевой кислоты может значительно снизить риск последствий данного варианта полиморфизма.

Ген MTRR
Ген MTRR кодирует цитоплазматический фермент метионин-синтаза-редуктазу (МСР). Фермент играет важную роль в синтезе белка и участвует в большом количестве биохимических реакций, связанных с переносом метильной группы. Одной из функций МСР является обратное превращение гомоцистеина в метионин.

Ген MTR
Ген MTR кодирует цитоплазматический фермент метионин-синтазу (альтернативное название — 5-метилтетрагидрофолат-гомоцистеин S-метилтрансфераза). Катализирует повторное метилирование гомоцистеина с образованием метионина, в качестве кофактора выступает кобаламин (предшественник витамина В₁₂).

Показания:

женщинам с первым эпизодом ВТЭ, возникшим во время беременности, в послеродовом периоде, или во время приёма оральных контрацептивов;
женщинам с необъяснимой внутриутробной гибелью плода во время второго или третьего триместра беременности;
женщинам с первым эпизодом ВТЭ, получающим заместительную гормональную терапию;
пациентам, имеющим в анамнезе повторные случаи венозных тромбоэмболий (ВТЭ);
пациентам с первым эпизодом ВТЭ в возрасте до 50 лет;
пациентам с первым эпизодом ВТЭ при отсутствии средовых факторов риска в любом возрасте;
пациентам с первым эпизодом ВТЭ необычной анатомической локализации (мозговых, брыжеечных, печеночных вен, портальной вены и т.д.);
пациентам с первым эпизодом ВТЭ в любом возрасте, имеющих родственников первой степени родства (родители, дети, сибсы) с тромбозами до 50 лет.

Подготовка
Генетическое обследование не требует специальной подготовки. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приёма пищи.

Перед диагностикой не рекомендуется подвергать себя стрессовым ситуациям, принимать спиртные напитки и курить.

Рацион и приём лекарственных препаратов не влияет на результат исследования.

Интерпретация результатов
Для интерпретации результатов генетического тестирования требуется консультация врача-генетика.

Читайте также: