Cvs тест штамма вируса

Номер работы: 62946

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Просмотр 1 страницы = 3 руб

Оглавление диссертации:

1. Отработка оптимальных условий постановки непрямого ИФА.. .58

3.4.2. Определение допустимых значений оптических плотностей контрольных сывороток.: 60

3.4.3. Определение аналитической чувствительности тест-системы непрямого ИФА 61

3.4.4. Определение аналитической специфичности тест-системы непрямого ИФА 62

3.5. Количественное определение антирабических антител к вирусу бешенства в сыворотках крови привитых кошек и собак 63 .

3.5.2. Результаты количественного опр

ВВЕДЕНИЕ ' - Актуальность темы. В Российской Федерации на протяжении последних 11 лет не снижается опасность распространения заболеваний бешенством среди животных и возникновения случаев заболевания людей. Несмотря на то, что основными резервентами и распространителями рабического вируса остаются дикие хищники семейства псовых, все чаще вовлекаются в эпизоотический процесс [1,2,8,15,34]. В 2005году, по сравнению с 2000 годом, число заболевших бешенством животных увеличилось в 3,7 раза с 1406

1.1.1. Эпизоотическая обстановка по бешенству в Российской Федерации. Современны данные о распространении и инцендентности Б в РФ на протяжении последних 10 лет свидетельствуют об ухудшении эпизоотической ситуации.. Так в период 2000-2005гг ярко проявилась тенденция непрерывного подъема эпизоотии бешенства и расширения ареала болезни при сохранении выраженного природного характера [32,36]. Основными-резервентами и распространителями рабического вируса оставались дикие хищники семейства псовых

1.1.2.Эпидемиологическая ситуация бешенства (гидрофобии) в Российской Федерации. На обращаемость населения за медицинской помощью по поводу укусов животными оказывает влияние увеличение популяции диких животных и увеличение численности безнадзорных собак и кошек. За 20002005гг число ежегодных обращений за антирабической помощью стабилизировалось на уровне 450000 случаев, из них на детей в возрасте до 14 лет приходится около 30% обращений. В Москве за период 1999-2003гг рост числа укусов людей

1.2.1. Характеристика возбудителя. В соответствии с классификацией Международного комитета по таксономии вирусов, возбудитель бешенства относится к роду Lyssavirus (от греческого iyssa- бешенство), семейства Rhabdoviridae, порядку Mononegavirales. ВОЗ рекомендует придерживаться следующей классификации вируса бешенства, которая включает 7 серотипов: 1-й серотип включает все фиксированные лабораторные штаммы вируса бешенства, (штамм «CVS" и сходные с ним дикие штаммы, выделенные в различн

1.2.2. Морфология и химический состав. Вирионы вируса Б имеют пулевидную форму, длиной 100-43Онм, диаметром 45-100нм. На наружной поверхности вирусной частицы имеются выступы в виде шипов длинной Юнм, которые прикреплены к двухслойной липидной оболочке. В вирионах вируса бешенства обнаружено 5 протеинов, общей молекулярной массой 420-450 кДа. Рибонуклеопротеин содержит геномную РНК, связанную с тремя внутренними протеинами: транскриптазой (L), нуклеопротеином (N), и фосфопротеином(К8), котор

. Устойчивость вируса бешенства зависит от температуры, так при 23 °С вирус бешенства инактивируется через 28 - 53 дня, при 50°С - через 1 ч, при 60°С - за 5 - 10 мин, при 70°С - мгновенно. Ультрафиолетовые лучи убивают "его за 5 - 10 мин. Вирус устойчив к многочисленному замораживанию и оттаиванию, в растворах с рН 5 - 1 0 вирус стабилен и хорошо хранится в лиофилизированном виде. Однако растворы формальдегида, гидроокиси натрия, хлорной извести инактивируют вирус бешенства. В материале

1.2.4.Культивирование вируса. Вирулентные штаммы вируса бешенства пассируют на восприимчивых видах животных (кроликах и белых мышах), кроме того, вирус бешенства репродуцируется в культуре фибробластов КЭ, в перевиваемых культурах-почки сайгака (ПС) и почки эмбриона африканской козы[42,54]. Фиксированные штаммы успешно репродуцируются при интрацеребральных пассажах на кроликах, овцах, мышах и других видах животных. Показана также возможность культивирования вируса бешенства в культурах клеток

ЭПИЗООТОЛОГИЯ Анализ современного этапа эволюции и эпизоотической ситуации в ми• ре свидетельствуют о том, что ликвидировать Б пока не удается. Число заболевших диких и домашних животных в ряде регионов Земли постоянно растет, несмотря на то, что особенность передачи возбудителя инфекции не предполагает высокий, по сравнению с другими инфекциями, уровень заболеваемости. К вирусу Б чувствительны все виды теплокровных животных, к чрезвычайно чувствительным относятся представители семейства псо

. Вирусный материал, инактивированный формалином, не может быть использован для выделения возбудителя и диагностика в этом случае основывается на применении МФА, иммуногистохимического теста или гистологии. Инфекционность образца может быть сохранена длительное время при комнатной температуре в смеси 50% глицерола в ФБР, поэтому для него можно использовать все лабораторные тесты. Гистологическое исследование. Гистологическое исследование выявляет агрегаты вирусного материала (тельца Негри) в

Биологическая проба. Метод биологической пробы (БП) является одним из основным при постановке диагноза и> обязательным для изоляции вируса Б [17,24]. Из всех видов животных для биопробы используют мышей 3-4 недельного возраста или 2-х дневных мышей, желательно свободных от патогенов (SPF). "Мыши наблюдаются 28 дней и исследуются в МФА. Для уличного бешенства гибель мышей начинается с 9 дня после заражения, для новорожденных мышей на 5,7,9 и 11 дни. Сирийские хомяки по чувствительности

Методы обнаружения генома вируса Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод основан на индикации вирусспецифической РНК вируса бешенства в парафиновых срезах тканей при использовании метода гибридизации in situ. Гибридизация: in siti позволяет определять малое количество инфицированных клеток из общего числа, что является существенным в диагностике на ранних стадиях инфекции. Для идентификации вируса Б животных разработана ПЦР, которая показала, 100% специфичность пррг исследовании тканей

Получение контрольных сывороток для иммуноферментной тест-системы. Для количественного определения антител к вирусу бешенства в сыворотках кошек и собак методом непрямого ИФА необходимы контрольные сыворотки (сыворотка, не содержащая антител к вирусу бешенства и сыантител) и референс- воротка с содержанием вируснейтрализующих препарат. Согласно рекомендациям ВОЗ референс-сывороткой должна быть сыворотка иммунизированных против бешенства собак или антирабический глобулин человека. В ветери

Жаропонижающим препаратом первого выбора является парацетамол.
Основным методом лабораторной диагностики SARS-CoV-2 является амплификации нуклеиновых кислот (без накопления возбудителя).
Исследование газов артериальной крови с определением PaO2, PaCO2, pH, бикарбонатов, лактата рекомендуется пациентам с SрO2 менее 90% по данным пульсоксиметрии.

1. Основным видом биоматериала для лабораторного исследования при инфекции, вызванной SARS-CoV-2 является

1) материал, полученный при заборе мазка из носоглотки и/или ротоглотки;+
2) кал;
3) цельная кровь;
4) сыворотка крови.

2. Основным видом биоматериала для лабораторного исследования при инфекции, вызванной SARS-CoV-2 является

1) назофарингеальный аспират;
2) материал, полученный при заборе мазка из носоглотки и/или ротоглотки;+
3) сыворотка крови;
4) фекалии;
5) мокрота.

3. В настоящее время методы специфической профилактики COVID-19

1) проводятся в пределах предполагаемого инкубационного периода (14 суток) с момента последнего контакта с источником инфекции;
2) не разработаны;+
3) подразумевают назначение противовирусных лекарственных средств;
4) подразумевают назначение противобактериальных лекарственных средств.

4. В настоящее время методы специфической профилактики COVID-19

1) подразумевают назначение противовирусных лекарственных средств;
2) проводятся в пределах предполагаемого инкубационного периода (14 суток) с момента последнего контакта с источником инфекции;
3) подразумевают назначение противобактериальных лекарственных средств;
4) разрабатываются, разрешенные к применению препараты отсутствуют.+

5. Механизмы передачи при инфекции, вызванной SARS-CoV-2

1) трансмиссивный;
2) аспирационный;+
3) контактный;+
4) фекально-оральный.+

6. Жаропонижающим препаратом первого выбора является

1) ацетилсалициловая кислота;
2) парацетамол;+
3) ибупрофен.

7. Жаропонижающим препаратом первого выбора для пациентов с COVID-19 является

1) парацетамол;+
2) ацетилсалициловая кислота;
3) ибупрофен.

8. Основным методом лабораторной диагностики SARS-CoV-2 является

1) иммунохроматографический;
2) вирусологический;
3) амплификации нуклеиновых кислот (без накопления возбудителя);+
4) серологический.

9. Актуальный источник инфекции при инфекции, вызванной SARS-CoV-2

1) люди;+
2) птицы;
3) грызуны.

10. Актуальный источник инфекции COVID-19

1) люди;+
2) грызуны;
3) птицы.

11. Для этиотропного лечения инфекции, вызванной SARS-CoV-2, у взрослых

1) нет однозначных данных об эффективности этиотропных препаратов;+
2) эффективно применение ингибиторов протеазы ВИЧ;
3) эффективно применение рибавирина;
4) эффективно применение хлорохина.

12. Случай COVID-19 считается подтвержденным при

13. Проведение компьютерной томографии органов грудной клетки рекомендуется

1) для скрининга в амбулаторных условиях;
2) для диагностики, дифференциальной диагностикии оценки динамических изменений в стационарных условиях;+
3) в качестве теста первой линии воспалительных изменений органов грудной клетки, обусловленные вирусной этиологией в амбулаторных и стационарных условиях.

14. Исследование газов артериальной крови с определением PaO2, PaCO2, pH, бикарбонатов, лактата рекомендуется

1) пациентам с SрO2 менее 90% по данным пульсоксиметрии;+
2) пациентам с SрO2 в пределах 90-95% по данным пульсоксиметрии;
3) всем пациентам с подтвержденным диагнозом COVID-19.

15. Для оценки пациентов с предполагаемой/известной COVID-19 пневмонией используются методы

1) компьютерная томография;+
2) линейная томография;
3) рентгеноскопия;
4) рентгенография.+

16. Рекомендации для этиотропного лечения инфекции, вызванной SARS-CoV-2, у взрослых

1) эффективно применение хлорохина;
2) эффективно применение рибавирина;
3) эффективно применение ингибиторов протеазы ВИЧ;
4) допустимо по решению врачебной комиссии в установленном порядке;+
5) нет однозначных выводов об эффективности или неэффективности этиотропных препаратов.+

17. Случай COVID-19 у пациента считается подтвержденным при

1) положительном результате лабораторного исследования на наличие РНК SARS-CoV-2 с применением методов амплификации нуклеиновых кислот вне зависимости от клинических проявлений;+
2) наличия эпидемиологических признаков контакта с больным COVID-19, острое течение респираторного заболевания с признаками развития пневмонии вне зависимости от возможности проведения ПЦР;
3) наличия клинических проявлений острого респираторного заболевания и положительного результата лабораторного исследования на наличие РНК SARS-CoV-1 методом ПЦР;
4) наличия тесных контактов за последние 14 дней с лицом, у которого лабораторно подтвержден диагноз COVID-19, и проявления острой респираторной инфекции с ощущением заложенности в грудной клетке.

18. В качестве дополнительного материала для лабораторного исследования при инфекции COVID-19 могут использоваться

1) биопсийный или аутопсийный материал легких;+
2) цельная кровь;+
3) бронхоальвеолярный лаваж;+
4) материал, полученный при заборе мазка из носоглотки и/или ротоглотки;
5) назофарингеальный аспират+
6) мокрота.+

19. Основным методом лабораторной диагностики COVID-19 является

1) серологический;
2) вирусологический;
3) амплификация нуклеиновых кислот (без накопления возбудителя);+
4) иммунохроматографический.

20. Пациентам с COVID-19 проведение компьютерной томографии органов грудной клетки рекомендуется

1) для диагностики, дифференциальной диагностики и оценки динамических изменений в стационарных условиях;+
2) для скрининга в амбулаторных условиях;
3) в качестве теста первой линии воспалительных изменений органов грудной клетки, обусловленные вирусной этиологией в амбулаторных и стационарных условиях.

Последние данные о распространении и ущербе от заболевания — в хронике “Ъ”

Ксения Веретенникова, Валерия Мишина, Владимир Хейфец

Движение на этом участке границы в обычные дни очень активное, так как между территориями налажены тесные связи по различным направлениям

Китайский город Хэйхэ расположен примерно в 600 метрах от столицы Амурской области на противоположном берегу реки Амур

Коронавирус в Хэйхэ не выявлен, но, с учетом того, как он быстро распространился по КНР, санитарный контроль повышен на всех пунктах пропуска возле российско-китайской границы

Как отмечает Роспотребнадзор, использование одноразовой медицинской маски предотвращает попадание в организм здорового человека капель респираторных выделений, которые могут содержать вирусы, через нос и рот. Менять ее необходимо каждые два-три часа

Туристы возвращаются в Россию по маршруту Хэйхэ—Благовещенск не только из городов ближайшей к Приамурью провинции Хэйлуцзян, но и с юга Китая, в частности из города Сямынь, где часть туристов находилась по рабочей визе. В этой провинции опасный коронавирус выявлен у 13 человек

По словам российских туристов, паники в Китае не наблюдается, основные эмоциональные переживания по поводу нового типа вируса наблюдаются у тех, кто приехал в Китай по делам или на отдых

Большинство туристов, за редким исключением, с пониманием и терпением относятся к дополнительным контрольным процедурам на таможне

Для маленькой Майи маска — дополнительный атрибут к гардеробу. Она рассказала, что дома есть маски и с другими рисунками, с сожалением отметив, что производитель разместил кошечку не строго по центру

Медики внимательно осматривают туристов. В случае, если будет явные симптомы, что человек болен, его сразу же уведут в карантинную зону. Среди туристов подозрения вызвала только одна китайская туристка — у нее врачи заметили капельки пота на лице. Женщина пояснила, что ей просто стало жарко из-за теплой одежды и тяжелых сумок, но врачи все же измерили температуру

Вернувшимся из Китая туристам рекомендуется в течение двух недель следить за состоянием своего здоровья и при проявлении симптомов инфекционного заболевания и повышении температуры сразу вызывать медиков

Первыми на границе туристов встречают сотрудники Роспотребнадзора, которые опрашивают туристов и осматривают их тепловизором. Это первый санитарный барьер на российско-китайской границе

Исследовали на модели культур клеток зависимость специфической инфекционной активности вируса бешенства промышленных (фиксированных) штаммов L. Pasteur и CVS от длительности и температуры хранения. Вирусную суспензию накапливали в клеточной культуре / С13 и замораживали при -20 и -80°С. Анализ специфической активности проводили через 1 неделю, 1, 2, 3, 6 и 12 месяцев хранения. Экспериментально установили, что для исследованных штаммов более эффективной для длительного хранения является температура -80°С.

Ключевые слова: вирус бешенства, вируссодержащая суспензия, антирабический иммуноглобулин, антирабическая вакцина, долгосрочное хранение, низкие температуры

The dependence of specific infectious activity on the cell culture model of rabies virus industrial (fixed) strains L. Pasteur and CVS from the duration and storage temperature was investigated. Viral suspension was produced by cell culture / C13 and frozen at -20 and -80°C. Analysis of the specific activity was performed after 1 week, 1, 2, 3, 6 and 12 months of storage. It was experimentally discovered that the temperature -80°C is more effective for storage for the studied strains.

Keywords: rabies virus, virus-containing suspension, rabies immunoglobulin, rabies vaccine, long-term storage, low temperature

Введение

Бешенство является опасным нейроинфекционным заболеванием теплокровных животных (в том числе и человека), которое встречается более чем в 150 странах мира [7, 10]. Возбудителем данного заболевания является РНК-содержащий вирус рода Lyssavirus, семейства Rhabdoviridae, порядка Mononegavirales. Заражение бешенством главным образом происходит через укус, в ходе которого инфекция передаётся со слюной. Основной мишенью вируса бешенства является центральная нервная система (ЦНС). Вирус бешенства является единственным из царства Virae, который поражает всех теплокровных животных с летальностью 100 %. От укусов животных, больных бешенством, ежегодно в мире погибает более 55 000 человек. В связи с этим согласно оценке Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) бешенство входит в пятёрку болезней, которые наносят наибольший ущерб человечеству и мировой экономике. Единственным методом борьбы с данным заболеванием являются пред- и постэкспозиционная профилактика, в рамках которой используются антирабические иммуноглобулин (АИГ) и вакцина (в дальнейшем — антирабические препараты) [1, 7, 10, 11].

Для получения антирабических препаратов и контроля их качества используются аттенуированные (или фиксированные) штаммы вируса бешенства, которые получают в ходе воздействия на полевые изоляты мутагенов или других факторов, позволяющих менять свойства вирионов. В отличие от полевых изолятов штаммы фиксированного вируса бешенства могут быть полностью или частично лишены способности к заражению целого организма животного или человека, но сохраняют возможность заражать ткани и клетки при непосредственном контакте. Наиболее распространёнными в производстве антирабических препаратов являются фиксированные штаммы вируса бешенства L. Pasteur и CVS, выделенные более 100 лет назад из полевых изолятов, ослабленные путём пассирования через мозг кроликов и адаптированные к мозгу мышей и клеточным линиям. С 1996 года ВОЗ рекомендует при производстве антирабических препаратов полностью отказаться от использования вируса бешенства, полученного пассированием через мозговую ткань животных, и использовать для накопления вирусной суспензии клеточные культуры [8, 11].

Цель исследования

Цель исследования — экспериментально определить эффективный температурный режим для долгосрочного хранения суспензии вируса бешенства штаммов L. Pasteur и CVS в условиях производства.

Материалы и методы

В качестве субстрата для накопления суспензии вируса бешенства использовали перевиваемую клеточную линию ВНК-21 / C13 (ATCC CCL-10), которая широко применяется для производства культуральной вакцины против бешенства [5, 6, 8, 12]. Клеточную линию накапливали в пристеночном монослое 1 сутки в стерильных пластиковых флаконах (SPL, Германия). В ходе исследования использовали фиксированные штаммы вируса бешенства L. Pasteur (адаптированный к клеточной линии Vero, № 2061 / Vero, 15 пассаж) и CVS (challenge virus standard), рекомендованные ВОЗ для производства АИГ и антирабических вакцин для животных и человека [8, 12]. Штамм L. Pasteur был адаптирован к клеточной линии ВНК-21 / C13 [6] и предоставлен Институтом Пастера (Нови-Сад, Сербия) вместе с технологическим регламентом производства антирабического антигена.

Вирусную суспензию культивировали в течении 4-х суток с момента заражения в поддерживающей среде DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) c 0, 2 % бычьего альбумина (PAA, Австрия) в СО₂-инкубаторе (Binder, Германия) при 33ºС и 5 % СО₂. Сбор вирусной суспензии проводили на 4 сутки после заражения. Полученную вирусную суспензию центрифугировали при 3000 об/мин 15 минут в рефрижераторной центрифуге (MPW, Польша) при 4ºС для удаления клеточного детрита. Супернатант собирали, добавляли к нему сахарозу с конечной концентрацией 5 %, расфасовывали в пластиковые криопробирки (PAA, Австрия) и замораживали при -20 и -80ºС в морозильных камерах (National Lab, Германия). Контроль температуры, при которой хранили криопробирки, производили с помощью спиртовых термометров [5, 6, 8, 12].

Для определения специфической инфекционной активности вирусной суспензии использовали метод титрации вируса в культуре клеток линии ВНК-21 / C13. Суспензию вируса бешенства размораживали через 1 неделю, 1 , 2, 3, 6 и 12 месяцев хрнения при низких температурах (срок наблюдения) и титровали с коэффициентом разведения 5 на культуре клеток ВНК-21 / C13 в 96-луночных планшетах (SPL, Германия) в 5-ти повторах (n = 5). Культивировали клетки 48 часов в СО₂-инкубаторе при 37ºС и 5 % СО₂, затем фиксировали монослой клеточной лини охлаждённым при -20ºС ацетоном. Так как промышленные штаммы вируса бешенства не оказывают на клеточные линии цитопатогенного действия, то для определения инфекционной активности вирусной суспензии использовали метод непрямой флуоресценции. Для этого применяли специфические моноклональные антитела к вирусу бешенства, меченные изотиоцинатом флуоресцина (FITC) (Fujirebio, U.S.A.), которыми производили окрашивание клеточного монослоя. Учёт результатов производили с помощью медицинского микроскопа (МИКМЕД-6, ЛОМО, Россия) (увеличение 100×) с люминисцентной насадкой. При микроскопировании учитывали яркое специфическое свечение зелёного цвета, которое свидетельствует о наличии вируса бешенства в клетках, и лунки с таким свечением отмечали как положительные (рисунок 1) [4, 5, 9, 12].

Рисунок 1 — Клетки лини ВНК-21 / С13, инфицированные вирусом бешенства штамма L. Pasteur. Окраска FITC-меченными моноклональными антителами, увеличение 100×

Расчёт титра вируса проводили с помощью формулы Спирмена-Карбера и выражали в десятичном логарифме 50 %-ой фокусформирующей инфицирующей дозы (lg FFD₅₀):

, где

x₀ — lg наибольшего разведения, в котором во всех лунках отмечается положительное свечение;

d — lg фактора разведения;

n_i — общее количество лунок, приходящихся на каждое разведение титрации вирусной суспензии;

r_i — количество положительных лунок в каждом разведении титрации вирусной суспензии [3, 9, 12].

Статистический анализ данных осуществляли с помощью стандартных пакетов компьютерных программ Microsoft Excel-2010 и Past. Вид распределения определяли с помощью W-критерия Шапиро-Уилка, достоверность различий между группами данных рассчитывали с использованием параметрического t-критерия Стьюдента (для групп с нормальным распределением данных). Расхождение считали статистически значимым при p ≤ 0, 05.

Результаты и обсуждение

В ходе проведенных исследований была проанализирована сохранность специфической инфекционной активности суспензии вируса бешенства штаммов L. Pasteur и CVS после хранения при температурах -20 и -80°С через 1 неделю, 1, 2, 3, 6 и 12 месяцев (срок наблюдения). В качестве контроля использовали данные по хранению вируса на протяжении 1-ой недели.

При анализе данных по хранению вирусной суспензии промышленного штамма L. Pasteur при -20ºС были получены следующие результаты. Активность вирусной суспензии через 1 неделю после замораживания при температуре -20°С составила 8,11±0,29 lg FFD₅₀ (n = 5) (рисунок 2). При сравнении данных по специфической активности вируса после 1-ого месяца хранения различия не были статистически значимыми (р ≥ 0, 05). После 2-х месяцев хранения при этой температуре активность вируса данного штамма начала снижаться (р ≤ 0, 05 ). Аналогичные данные были получены при сравнении активности вирусной суспензии после хранения на протяжении 3-х, 6-ти и 12-ти месяцев при температуре -20°С. Различия между данными по специфической активности после указанных сроков хранения были статистически значимы (р ≤ 0, 05). Через 12 месяцев хранения при температуре -20°С активность вируса штамма L. Pasteur составила 4, 75 ± 0, 19 lg FFD₅₀, что на 3, 36 lg FFD₅₀ меньше, чем данные контроля.

Рисунок 2 — Динамика изменения инфекционной активности вируса бешенства штамма L. Pasteur в ходе хранения при температурах -20°С и -80°С, * — статистически значимые различия между контролем и последующими сроками хранения; # — статистически значимые различия между каждым из сроков; $ — статистически значимые различия между показателями активности одного срока хранения, но при разных температурах

Специфическая инфекционная активность вирусной суспензии штамма L. Pasteur через 1 неделю после замораживания при температуре -80°С составила 8, 18 ± 0, 19 lg FFD₅₀ (n = 5) и не изменялась в течение 2-х месяцев (р ≥ 0, 05). Между 2-м и 3-м месяцами хранения при температуре -80°С инфекционная активность вируса начала достоверно снижаться (р ≤ 0, 05 ), как и на протяжении последующего хранения. Через 12 месяцев хранения при температуре -80°С активность вируса штамма L. Pasteur составила 5, 66 ± 0, 29 lg FFD₅₀, что на 2, 52 lg FFD₅₀ меньше, чем данные контроля. Со 2-ого по 12-й месяцы хранения при -80°С показатели инфекционной активности были достоверно выше (р ≤ 0, 05 ), по сравнению с образцами, хранившимися при -20°С.

Активность вирусной суспензии промышленного штамма CVS через 1 неделю после хранения при температуре -20°С составила 6, 78 ± 0, 19 lg FFD₅₀ (n = 5) (рисунок 3) и не изменялась до 2-х месяцев хранения (р ≥ 0, 05). Между 2-м и 3-м месяцами хранения при данной температуре произошло достоверное снижение (р ≤ 0, 05 ), активности, как и на протяжении последующего хранения. Через 12 месяцев хранения при температуре -20°С активность штамма CVS составила 4, 96 ± 0, 29 lg FFD₅₀, что на 1, 82 lg FFD₅₀ меньше, чем специфическая активность вируса при хранении в данном температурном режиме в течение недели.

Рисунок 3 — Динамика изменения инфекционной активности вируса бешенства штамма CVS в ходе хранения при температурах -20°С и -80°С, * — статистически значимые различия между контролем и последующими сроками хранения; # — статистически значимые различия между каждым из сроков; $ — статистически значимые различия между показателями активности одного срока хранения, но при разных температурах

Активность вирусной суспензии штамма CVS через 1 неделю после замораживания при температуре -80°С составила 6, 78 ± 0, 47 lg FFD₅₀ (n = 5) и не изменялась в течение 6-ти месяцев (р ≥ 0, 05). Достоверное снижение (р ≤ 0, 05) показателя активности вируса произошло между 6-м и 12-м месяцами хранения при данной температуре. После 12 месяцев хранения при температуре -80°С активность вирусной суспензии снизилась на 0,28 lg FFD₅₀ и составила 6, 5 ± 0, 19 lg FFD₅₀ по сравнению с данными контроля. С 3-ого по 12-й месяцы хранения при -80°С показатели инфекционной активности данного штамма были достоверно выше (р ≤ 0, 05 ), по сравнению с образцами, хранившимися при -20°С.

В результате проведенных исследований более низкие результаты сохранности обоих штаммов вируса были получены при хранении вирусной суспензии при температуре -20°С. Это может быть связано с тем, что эвтектическая температура солевых растворов, входящих в состав среды консервирования и ультраструктурных компонентов вирионов находится ниже -20°С, и вирионы подвергаются действию повреждающих факторов, связанных с кристаллизацией жидкой фазы, изменением рН и гиперконцентрацией электролитов [2].

Результаты исследования показали, что фиксированный штамм CVS более устойчив к хранению при низких температурах, чем штамм L. Pasteur. Предположительно, различия криоустойчивости изучавшихся промышленных штаммов вируса бешенства обусловлены особенностями строения их капсидов. Этот вопрос требует отдельного изучения.

Полученные результаты по сохранности вируса бешенства промышленных штаммов в суспензии не соответствуют требованиям производства, так как необходимо сохранение спицефической ативности вируса на протяжении более длительных сроков. Поэтому следует провести исследования по применению различных режимов замораживания вирусной суспензии и использованию различных криозащитных сред. Полученные данные, вероятно, смогут позволить хранить промышленные штаммы вируса бешенства при низких температурах более длительное время без потери их специфической активности.

Читайте также: