Инструкция на набору на гепатит ифа

Новые наборы для экспресс-диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом Ханта-IgМ-экспресс-БЕСТ и Ханта-IgG-экспресс-БЕСТ more

ID] => 2320 [TIMESTAMP_X] => 18.06.2019 09:49:14 [

TIMESTAMP_X] => 18.06.2019 09:49:14 [MODIFIED_BY] => 9321 [

MODIFIED_BY] => 9321 [DATE_CREATE] => 18.06.2019 09:49:14 [

DATE_CREATE] => 18.06.2019 09:49:14 [CREATED_BY] => 9321 [

CREATED_BY] => 9321 [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2318 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2318 [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [SORT] => 500 [

SORT] => 500 [NAME] => Гепатит В [

NAME] => Гепатит В [PICTURE] => [

PICTURE] => [LEFT_MARGIN] => 7 [

LEFT_MARGIN] => 7 [RIGHT_MARGIN] => 8 [

RIGHT_MARGIN] => 8 [DEPTH_LEVEL] => 3 [

DEPTH_LEVEL] => 3 [DESCRIPTION] => [

DESCRIPTION] => [DESCRIPTION_TYPE] => text [

DESCRIPTION_TYPE] => text [SEARCHABLE_CONTENT] => ГЕПАТИТ В [

SEARCHABLE_CONTENT] => ГЕПАТИТ В [CODE] => [

SOCNET_GROUP_ID] => [LIST_PAGE_URL] => /prod/index.php [

LIST_PAGE_URL] => /prod/index.php [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2320 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2320 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

EXTERNAL_ID] => [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) [PATH] => Array ( [0] => Array ( [ID] => 2316 [

ID] => 2316 [CODE] => root_ifa [

CODE] => root_ifa [XML_ID] => [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => [

IBLOCK_SECTION_ID] => [SORT] => 100 [

SORT] => 100 [NAME] => Иммуноферментная диагностика [

NAME] => Иммуноферментная диагностика [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 1 [

DEPTH_LEVEL] => 1 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2316 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2316 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) [1] => Array ( [ID] => 2318 [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2316 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2316 [SORT] => 300 [

SORT] => 300 [NAME] => Вирусные гепатиты [

NAME] => Вирусные гепатиты [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 2 [

DEPTH_LEVEL] => 2 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2318 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2318 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) [2] => Array ( [ID] => 2320 [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2318 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2318 [SORT] => 500 [

SORT] => 500 [NAME] => Гепатит В [

NAME] => Гепатит В [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 3 [

DEPTH_LEVEL] => 3 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2320 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2320 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) ) ) [SECTIONS_COUNT] => 0 )

HBsAg-ИФА-БЕСТ (комплект №2)

HBsAg-ИФА-БЕСТ (комплект №3)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления HBs-антигена вируса гепатита В.

Чувствительность: 0,01 МЕ/мл (нг/мл)

Срок годности: 12 месяцев

Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения присутствия HBs-антигена вируса гепатита В.

Чувствительность: 0,01 МЕ/мл (нг/мл)

Срок годности: 12 месяцев

Вектогеп B-HBs-антиген-авто (комплект 1)

Вектогеп B-HBs-антиген-авто (комплект 2/Чароит)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления HBsAg для автоматических ИФА анализаторов.

Вектогеп B-HBs-антиген (комплект 1)

Вектогеп B-HBs-антиген (комплект 2)

Вектогеп B-HBs-антиген (комплект 3)

Вектогеп B-HBs-антиген (комплект 4)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления HBsAg. Одностадийная постановка.

Чувствительность: 0,05/0,01 МЕ/мл

Срок годности: 24 месяцев

Вектогеп В-HBs-антиген-подтверждающий тест (комплект 1)

Вектогеп В-HBs-антиген-подтверждающий тест (комплект 2)

Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения наличия HBsAg. Одностадийная постановка.

Чувствительность: 0,05/0,01 МЕ/мл

Срок годности: 24 месяцев

Вектогеп B-HBs-антиген-2 (комплект 1/авто)

Вектогеп B-HBs-антиген-2 (комплект 2)

Вектогеп B-HBs-антиген-2 (комплект 3)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления HBsAg. Двухстадийная постановка.

Чувствительность: 0,05 МЕ/мл (нг/мл)

Срок годности: 12 месяцев

Вектогеп B-HBs-антиген-2-подтверждающий тест

Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения выявления HBsAg.

Чувствительность: 0,05 МЕ/мл (нг/мл)

Срок годности: 12 месяцев

Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения HBs-антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови
.

Чувствительность: 0,05 МЕ/мл (нг/мл)

Диапазон измерений: 0 - 10 МЕ/мл (нг/мг)

Набор реагентов для иммуноферментного качественного и количественного определения антител к HBs-антигену вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к core-антигену вируса гепатита В.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к core-антигену вируса гепатита В.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к core-антигену вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления E-антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к HВe-антигену вируса гепатита В.

Набор для внутрилабораторного контроля качества ИФА "Сыворотка, содержащая НВsАg".

HBsAg-стандартная панель сывороток

Набор образцов сывороток крови, содержащих разные субтипы и мутантные формы HBsAg вируса гепатита В.

Описание

Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/09794 от 30.12.10. г. ИФА -ВГС комплект №3

Комплект № 3 для подтверждения наличия антител к антигенам вируса гепатита С

Подтверждение наличия выявленных при скрининге антител классов G и M к отдельным антигенам ВГС в сыворотке (плазме) крови и препаратах крови человека, методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе.

Базовый вариант комплекта включает:

№ по каталогу	Наименование и краткое описание	Количество определений
D-0542	HBsAg-ИФА-БЕСТ (комплект 1/авто)	24x8
D-0543	24x8
D-0544	12x8
D-0546	6x8
D-0560	24x8
D-0549	12x8
D-0555	2x96
D-0557	24x8
D-0556	12x8
D-0559	480
D-0558	6x8
D-0548	100
D-0582	24x8
D-0583	24x8
D-0584	12x8
D-0586	6x8
D-0545	12x8
D-0562	12x8
D-0564	12x8
D-0566	12x8
D-0574	12x8
D-0576	12x8
D-0578	12x8
D-0538	24 флакона по 0,5 мл
D-0540

Иммуносорбент	рекомбинантные антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (core) и неструктурной (NS3, NS4, NS5) областями генома ВГС, сорбированные двумя группами – core-антиген и NS (NS₃+ NS₄ + NS₅) в лунках стрипов полистироловых планшетов с плоским дном для ИФА по 6 стрипов, по краю стрипов нанесена маркировка в виде полос: на стрипах с core-Ag – красного цвета, на стрипах с NS-Ag – синего цвета. Стрипы упакованы раздельно в пакеты из пленки полиэтиленовой.	core – 6 стр. NS – 6 стр.
Контрольный положительный образец (К + )	инактивированный; прозрачная или со слабой опалесценцией жидкость малинового цвета	1 фл. (0,5 мл)
Контрольный отрицательный образец (К – )	инактивированный; прозрачная или со слабой опалесценцией жидкость синего цвета	1 фл. (1,0 мл)
Конъюгат	антитела диагностические против IgG и IgM человека с пероксидазой хрена; прозрачная жидкость красного цвета	1 фл. (1,0 мл)
25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином [ФСБ-Т(х25)]	прозрачная или слегка опалесцирующая, бесцветная, пенящаяся жидкость; возможно выпадение осадка солей, растворяющегося при температуре 37 ºС в течение 30 мин	1 фл. (40 мл)
Раствор для разведения образцов (РРО)	опалесцирующая жидкость сине-фиолетового или красного цвета, допускается выпадение незначительного осадка	1 фл. (12 мл) 1фл. (6,0 мл)
Раствор для разведения конъюгата (РРК)	опалесцирующая жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком, допускается выпадение незначительного осадка	1 фл. (13 мл)
Цитратный буферный раствор с перекисью водорода (ЦБР)	прозрачная, бесцветная жидкость	1 фл. (13 мл)
Хромоген (ТМБ)	раствор тетраметилбензидина; прозрачная жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком или розового цвета	1 фл. (1,3 мл)
Стоп-реагент	прозрачная, бесцветная жидкость	1 фл. (12,5 мл)

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.

Набор может быть дополнительно укомплектован:

вспомогательными пластиковыми емкостями (4 шт.);

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток (16 шт.);

клейкой пленкой для планшетов (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению.

По желанию потребителя базовая комплектация набора (число индивидуальных упаковок с реагентами и их объемы) может быть изменена.

Базовый вариант комплекта рассчитан на исследование 48 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы используется 6 лунок – по 3 лунки на стрип).

Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

Кол-во стрипов

одной группы/всего

1/2

2/4

3/6

4/8

5/10

6/12

Число исследуемых образцов

1-5

6-13

14-21

22-29

30-37

38-45

Основой тест-системы являются раздельно иммобилизованные на поверхности лунок антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (core) и неструктурной (NS_3, NS₄,NS₅) областями генома ВГС.

Тест-система выявляет антитела к разным антигенам ВГС в сыворотке (плазме) крови человека вследствие их взаимодействия с антигенами, иммобилизованными на поверхности лунок планшета. Образующиеся комплексы антиген-антитело обнаруживаются с помощью конъюгата – антител против иммуноглобулинов человека, связанных с пероксидазой хрена.

Диагностическая специфичность и чувствительность 100 % при проверке на сыворотках стандартной панели ОСО 42-28-310-02П.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Образцы до исследования могут храниться при температуре от 2 до 8 о С до 7 сут.; более длительное хранение (до трех месяцев) – при температуре не выше минус 20 о С. Повторное замораживание образцов не допускается.

Образцы, содержащие частицы фибрина или иные видимые глазом примеси, перед исследованием осветлить центрифугированием (10-15 мин при 2500-3000 об/мин).

Для исследования образцов иммуноглобулинов человека исходные растворы развести ФСБ-Т в соотношении 1:10, лиофильно высушенные препараты крови предварительно восстановить согласно инструкции по их применению, затем развести ФСБ-Т в соотношении 1:10.

Для исключения ложноположительных результатов не рекомендуется анализировать сыворотки с микробным проростом, гемолизом, повышенным содержанием липидов.

Потенциальный риск применения набора – класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 6 июня 2012 г.).

С контрольными и исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

Оборудование, материалы и реагенты

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин, термостат на 37 о С, холодильник бытовой, фильтровальная бумага.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08.

Все реагенты до начала анализа должны быть выдержаны не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 о С. Иммуносорбент выдерживать в упакованном виде, для того чтобы избежать конденсации влаги внутри лунок.

2.1. Приготовление раствора для отмывки планшетов (ФСБ-Т)

При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) его необходимо прогреть перед разведением в термостате при 37ºС до полного растворения осадка.

ФСБ-Т(х25) развести водой очищенной в 25 раз, используя объемы концентрата и воды очищенной, указанные в табл. 1 для заданного числа стрипов

Кол-во стрипов	2	4	6	8	10	12
ФСБ-Т(х25), мл	7	13	20	27	33	40
Вода очищ., мл	до 175	до 325	до 500	до 675	до 825	до 1000

Раствор хранить при температуре от 2 до 8 о С не более 14 сут.

Раствор готовить за 10-20 мин до внесения в лунки планшета.

Конъюгат развести в РРК, используя объемы конъюгата и РРК, указанные в табл. 2 для заданного числа стрипов. Необходимый объем РРК перенести в одноразовую емкость и добавить конъюгат в указанном количестве, тщательно перемешать.

Кол-во стрипов	2	4	6	8	10	12
РРК, мл	2	4	6	8	10	12
Конъюгат, мкл

Объем конъюгата, вносимый в РРК; указывается для каждой серии тест-системы.

Стабильность рабочего разведения конъюгата при температуре от 18 до 25 о С не более 6 ч.

Готовить непосредственно перед использованием, избегая попадания прямых солнечных лучей.

ТМБ развести в ЦБР, используя объемы ТМБ и ЦБР, указанные в табл. 3 для заданного числа стрипов. Необходимый объем ЦБР перенести в одноразовую емкость и добавить ТМБ в указанном количестве, тщательно перемешать.

Кол-во стрипов	2	4	6	8	10	12
ЦБР, мл	2	4	6	8	10	12
ТМБ, мкл	200	400	600	800	1000	1200

Стабильность раствора хромогена при температуре от 18 до 25 о С не более 6 ч. в защищенном от света месте.

Примечание: Посуду и наконечники пипеток, контактировавшие с раствором хромогена, отмывать без применения синтетических моющих средств.

РРО перед использованием необходимо тщательно перемешать из-за возможного выпадения осадка. Иммуносорбент, К + , К – , стоп-реагент готовы к использованию.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 о С до истечения срока годности.

Проведение ИФА

3.1. Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов каждой группы. Неиспользованные стрипы допускается хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре от 2 до 8 о С до истечения срока годности.

Расположить стрипы в рамке, чередуя стрипы с core-антигеном и NS-антигеном в соответствии со схемой постановки.

core

К+

№6

№14

№22

№30

№38

К-

№7

№15

№23

№31

№39

К-

№8

№16

№24

№32

№40

№1

№9

№17

№25

№33

№41

№2

№10

№18

№26

№34

№42

№3

№11

№19

№27

№35

№43

№4

№12

№20

№28

№36

№44

№5

№13

№21

№29

№37

№45

3.2. В каждую лунку внести по 80 мкл (или 30 мкл) РРО.

3.3 В одну лунку (напр., А) стрипа с каждой группой антигенов внести 20 мкл (или 70 мкл) К + , в две лунки (напр., В и С) – по 20 мкл (или 70 мкл) К – , в остальные лунки – по 20 мкл (или 70 мкл) исследуемых образцов, , т.е. в соответствии с внесенным объемом РРО (п.1.3.2), затем тщательно перемешать пипетированием (не менее 3 раз) или на шейкере на малой скорости в течение 30 с (100об/мин), цвет РРО при этом должен измениться с сине-фиолетового на зеленый или с красного на желтый.

процедура 1 – 30 мин при 37 о С на шейкере (500 об/мин);

процедура 2 – 1 ч при 37 о С в термостате.

3.5. По окончании инкубации аспирировать содержимое лунок и промыть лунки планшета четыре раза, добавляя в каждую лунку не менее 400 мкл рабочего промывочного раствора. Время между заполнением и аспирацией (замачивание) должно быть не менее 30 сек.

Необходимо следить за полной аспирацией после каждого цикла отмывки (остаточный объем в лунках не должен превышать 10 мкл).

Полностью удалить влагу из лунок, перевернув планшет на сухую чистую фильтровальную бумагу.

Сохранность иммуносорбента между операциями 15 минут.

3.6. Перемешать рабочий раствор конъюгата и внести его по 100 мкл в каждую лунку. Планшет закрыть крышкой и выдержать в течение 30 мин в термостате при температуре 37 о С.

3.8. В каждую лунку внести по 100 мкл свежеприготовленного раствора хромогена, выдержать 30 мин при температуре от 18 до 25 о С в защищенном от света месте (планшет не закрывать) или в термостате при температуре 37 о С в течение 20 мин. (планшет закрыть чистой защитной пленкой).

3.9. В каждую лунку (в той же последовательности, в которой вносился раствор хромогена) внести по 100 мкл стоп-реагента и через 2-3 мин, но не позднее чем через 10 мин, учесть результаты.

Результаты ИФА учитывать при соблюдении следующих условий:

оптическая плотность в лунках с К + (ОП_К+) – не менее 0,5;

оптическая плотность в лунках с К – (ОП_К-) – не более 0,25.

В противном случае исследование повторить

Для каждой группы антигенов рассчитать критическое значение ОП (ОП_крит) по формуле:

где ОП_К-ср – значение ОП в лунках с К – соответствующего стрипа.

Результаты учитывать по каждой группе антигенов отдельно.

Образец учитывать как отрицательный (не содержащий антител к ВГС), если значение ОП в лунке с ним ниже ОП_Крит для каждой группы антигенов.

Образец учитывать как положительный (содержащий антитела к ВГС), если значение ОП в лунке с ним выше или равно ОП_крит по обоим группам антигенов или только по группе структурных антигенов (core) ВГС.

Для интерпретации результатов исследования сывороток можно использовать коэффициент позитивности (КП), который рассчитывается для каждого антигена по формуле:

Если КП больше 1, исследуемый образец расценивать как положительный. Результат анализа считать отрицательным при КП меньше 1 и неопределенным при КП≥1.

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 о С в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.

Набор транспортируют при температуре от 2 до 8 о С. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 о С в течение 10 сут.

ИФА -ВГС комплект №3

Для учреждений здравоохранения.

ИФА -ВГС комплект №3

СВОДНАЯ ТАБЛИЦА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ РЕАГЕНТОВ

Кол-во стрипов	2	4	6	8	10	12
ФСБ-Т
ФСБ-Т(х25), мл	7	13	20	27	33	40
Вода очищ., мл	до 175	до 325	до 500	до 675	до 825	до 1000
Рабочий раствор конъюгата
РРК, мл	2	4	6	8	10	12
Конъюгат, мкл
Рабочий раствор хромогена
ЦБР, мл	2	4	6	8	10	12
ТМБ, мкл	200	400	600	800	1000	1200

Объем конъюгата, вносимый в РРК; указывается для каждой серии тест-системы.

Страница 2 из 2

Сопоставление результатов молекулярной и ИФА-диагностики ХГС

В связи с недостаточной информативностью клинико-лабораторных тестов, при подозрении на ХГ использующихся на первом этапе обследования пациентов с ревматическими заболеваниями, особую актуальность приобретает вирусологическое исследование сыворотки крови с помощью иммуноферментного анализа и ПЦР.

Как указывают некоторые авторы при доступном иммуноферментном анализе возможны ложноположительные результаты, что чаще всего является следствием наличия в анализируемом образце антител к супероксиддисмутазе, совместно с которой в рекомбинантных дрожжевых клетках синтезируется с100–3, использующийся в качестве анигена в иммуноферментных тест-системах для идентификации ВГС [3]. На результаты тестирования также влияют гипергаммаглобулинемия на фоне системных заболеваний соединительной ткани, недавние вакцинации (особенно к кори), криоглобулинемия, т. к. HCV может образовывать криопреципитат [4]. Сообщалось о ложноположительных результатах после повторного размораживания образцов или после их длительного хранения при нестабильной температуре. Антитела к HCV образуются в среднем за 8 – 20 недель с момента инфицирования или через 15 недель от начала гепатита, у некоторых больных для образования антител требуется около года. Отсутствие антител к HCV не исключает диагноз HCV. Кроме того, 20% больных хроническим HCV могут быть серонегативными, так как содержат низкие титры анти-HCV антител на фоне иммунодефицита или иммуносупрессивной терапии [5, 6].

ПЦР ткани печени в парафиновых срезах проведена нами в 44 случаях, из них в 23 (52,3%) зафиксирован отрицательный результат, в 20 (45,5%) – положительный, в одном случае (2,3%) зафиксирован отрицательный результат ПЦР в ткани при положительном ПЦР в крови пациента, что нами было интерпретировано как ранний период вирусного гепатита С на фоне РА.

Из 136 исследований ПЦР крови тест был положительным у 74 пациентов (54,4%), отрицательным в 62 (45,6%) случаях. В трех случаях (2,2%) положительный ПЦР-тест крови у больных РА сочетался с отрицательными данными ИФА, что было расценено как ложноотрицательные результаты иммуноферментного анализа. Два (0,6 %) отрицательных ПЦР теста сопровождались положительным заключением по ИФА при реактивном артрите, что позволило интерпретировать результат как ложноположительный, таблица 3.

ИФА на вирус гепатита С проведено в исследованной группе у 332 пациентов. Тест был положительным в 176 случаях (53%) и отрицательным в 139 (41,9%), в 17 случаях результаты теста были сомнительными (5,1 %), таблица 2.

Таблица 2 – Частота получения ложноположительных и ложноотрицательных заключений на вирус гепатита С методом ИФА при различных заболеваниях

Как видно из таблицы 2 наибольшее число ложноположительных заключений (0,9%) по ИФА-диагностике получено в группе пациентов с СКВ С и РА С, что, на наш взгляд, связано с наличием большого числа циркулирующих иммунных комплексов и несовершенством методики ИФА 1 и 2 поколений для пациентов с аутоиммунной патологией.

Полученные данные свидетельствуют, что при постановке диагноза ХГС на фоне ревматических заболеваний нельзя ориентироваться на результаты одного теста. Все это послужило предпосылкой к сопоставлению результатов различных способов лабораторной диагностики вируса гепатита С.

Нами было отобрано 33 больных, у которых не было однозначной трактовки и направленности в заключениях по наличию вируса гепатита С при ИФА, ПЦР и иммуногистохимической диагностике (таблица 3).

Адаптированной методикой ПЦР в тканях проведено исследование биопсийного материала печени в случаях, когда лабораторная и серологическая диагностика ХГС не позволяла достоверно судить о наличии вируса гепатита С и клинический диагноз не мог быть окончательно установлен.

В целом, изменение окончательного диагноза с учетом результатов молекулярной диагностики биоптата осуществлено у 15 больных из 169 пропунктированных пациентов, что составляет 8,9 %.

Таблица 3 – Соотношение спорных результатов тестирования на ВГС

Особенно настораживает гипердиагностика ХГС с использованием ИФА тест-систем, в данном случае мы имеем дело либо с самой ранней стадией ХГС и его внепеченочной пролиферацией, либо с чистой гипердиагностикой данного заболевания. Имеющиеся различия в заключениях обусловлены тем, что ПЦР не требуют осаждения иммунных комплексов, как при ИФА-тестах, следовательно ложноположительных реакций практически нет. Как отмечено некоторыми авторами из 100 больных с РНК HCV антитела класса Ig M к HCV были обнаружены в 66 % случаев, в то же время из 171 сыворотки с отрицательными ПЦР-данными антитела класса Ig M к HCV были обнаружены в 45 случаях, что свидетельствует либо о ложноположительных результатах, либо о колеблющейся виремии, либо о внепеченочной репликации вируса [7]. В нашем исследовании у 4-х больных (2 – СКВ С, 1 – РА С, 1 – ХГС) были положительны тесты исследования на РНК – ВГС в крови, но отрицательные в ткани печени, что также может быть подтверждением внепеченочной репликации вируса, либо ранней фазой течения ХГС.

Чувствительность и специфичность тестов детекции ВГС в крови и тканях, представлены в таблице 4, из которой следует, что методы молекулярной диагностики высокочувствительны и специфичны.

Таблица 4 – Чувствительность и специфичность тестов детекции ВГС в крови и тканях

Учитывая большое число различных аутоантител, методы молекулярной диагностики вирусных гепатитов по анализам крови более оправданы, чем иммуноферментный анализ у лиц с СЗСТ а верификация неструктурных белков ВГС в тканях возможна только с использованием методов молекулярных диагностики (ПЦР в ткани и иммуногистохимии).

Заключение

Очаговая деструкция хрящевой и костной ткани – ведущий механизм повреждения суставов при РА. В поддержании воспалительных изменений, протекающих при ревматических заболеваниях, значительная роль принадлежит нейтрофилам и лимфоцитам. Показано, что наличие неспецифической реактивности нейтрофилов отражает их патогенетическую значимость и избирательную устойчивость к ВГС. Клиническая картина ХГС в целом ряде наблюдений характеризуется не только поражением печеночной ткани, но и различными внепеченочными проявлениями, которые могут быть обусловлены иммунокомплексными механизмами. Более полному пониманию патогенеза системных проявлений при хронической вирусной инфекции будет способствовать установление факта внепеченочной репликации вирусов гепатита, что подтверждено обнаружением антигенов ВГС в лимфоцитах при использовании высокоспецифичных методов ПЦР и иммуногистохимии.

Методами молекулярной диагностики установлена тропность ВГС помимо печеночной к почечной ткани, причем оба органа поражаются одновременно. Неструктурные белки ВГС обнаружены также в ткани легкого (бронхиальном эпителии), лимфоцитах периферической крови и портальных трактов, эпителии билиарных протоков. В клинически неоднозначных ситуациях с высоким уровнем гепатоспецифических ферментов показано морфологическое исследование печеночного биоптата для верификации ВГС в тканях. Иммуногистохимическое исследование биоптата при криптогенном гепатите позволиляет диагностировать вирусное поражение печени, в том числе ХГС, протекающего без наличия РНК – ВГС в крови. С другой стороны ПБП позволяет исключить диагноз ХГС. В группе больных СЗСТ метод ИФА приемлем в основном для скрининга обследуемых на наличие ВГС и предпочтение следует отдавать методам молекулярной диагностики.

Литература

1. Ивашкин, В. Т. Болезни суставов. Пропедевтика, дифференциальный диагноз, лечение / В. Т. Ивашкин, В. К. Султанов. М.: Литтерра, 2005. 544 с.

2. Serum HCV RNA levels correlate with histological liver damage and concur with steatosis in progression of chronic hepatitis C / L. Adinolfi [et al.] // Dig. Dis. Sci. 2001. Vol. 46. № 8. P. 1677–1683.

3. Disappearance of serum HCV-RNA after short-term prednisolone therapy in a patient with chronic hepatitis C associated with autoimmune hepatitis-like serological manifestations / M. Yoshikawa [et al.] // J. Gastroenterol. 1999. Vol. 34. № 2. P. 269–274.

4. False-positive anti-HCV tests in rheumatoid arthritis / L. Theilmann [et al.] // Lancet. 1990. Vol. 335. № 8701. P. 1346.

5. Amarapurkar, D. Role of autoimmunity in nonviral chronic liver disease / D. Amarapurkar, A. Amarapurkar // J. Assoc. Physicians India. 2000. Vol. 48. № 11. P. 1064–1069.

6. Boyer, N. Patogenesis, diagnosis and management of hepatitis C / N. Boyer, P.Marcellin // J. Hepatol. 2000. Vol. 32. №.2. suppl. P. 98–112.

7. Andreas, C. Chisari Pathogenesis of Chronic Hepatitis C: Immunological Features of Hepatic Injury and Viral Persistence / C. Andreas, V. Francis // Hepatology. 1999. Vol. 30. № 3. P. 595–601.

Читайте также: