Набор реагентов для иммуноферментного выявления антигена вируса гепатита а

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита А в сыворотке (плазме) крови.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления HBs-антигена вируса гепатита В.

Чувствительность: 0,01 МЕ/мл (нг/мл)

Срок годности: 12 месяцев

Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения присутствия HBs-антигена вируса гепатита В.

Чувствительность: 0,01 МЕ/мл (нг/мл)

Срок годности: 12 месяцев

Набор реагентов для иммуноферментного выявления HBsAg для автоматических ИФА анализаторов.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления HBsAg. Одностадийная постановка.

Чувствительность: 0,05/0,01 МЕ/мл

Срок годности: 24 месяцев

Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения наличия HBsAg. Одностадийная постановка.

Чувствительность: 0,05/0,01 МЕ/мл

Срок годности: 24 месяцев

Набор реагентов для иммуноферментного выявления HBsAg. Двухстадийная постановка.

Чувствительность: 0,05 МЕ/мл (нг/мл)

Срок годности: 12 месяцев

Набор реагентов для иммуноферментного подтверждения выявления HBsAg.

Чувствительность: 0,05 МЕ/мл (нг/мл)

Срок годности: 12 месяцев

Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения HBs-антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови
.

Чувствительность: 0,05 МЕ/мл (нг/мл)

Диапазон измерений: 0 — 10 МЕ/мл (нг/мг)

Набор реагентов для иммуноферментного качественного и количественного определения антител к HBs-антигену вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к core-антигену вируса гепатита В.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к core-антигену вируса гепатита В.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к core-антигену вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления E-антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к HВe-антигену вируса гепатита В.

Набор образцов сывороток крови, содержащих разные субтипы и мутантные формы HBsAg вируса гепатита В.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита Дельта.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к вирусу гепатита Дельта.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу гепатита Е.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита Е.

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител класса IgG к Treponema pallidum.

Иммуносорбент – смесь синтетических и рекомбинантных HCV-антигенов, сорбированных в лунках планшета для ИФА 96-луночные разборные или цельные планшеты для ИФА из прозрачного бесцветного полистирола, сорбированные HCV-антигенами
Конъюгат (х51 концентрат) - моноклональные антитела мыши против IgG человека, меченные пероксидазой хрена Прозрачная жидкость сине-зелёного цвета
К+ - контрольный положительный образец инактивированный Прозрачная жидкость красного цвета
К- - контрольный отрицательный образец инактивированный Прозрачная жидкость жёлтого цвета
РИП - разбавитель исследуемых проб Прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета
ФСР-Т (х25 концентрат) - фосфатно-солевой буферный раствор с твином-80 Прозрачная или опалесцирующая жидкость бесцветная или жёлтоватого цвета, допускается выпадение бесцветного кристаллического осадка
ЦБ – цитратный буферный раствор, содержащий Н2О2 Прозрачная бесцветная жидкость
ТМБ (х5 концентрат) – раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина в димексиде
Стоп-реагент – 1 М раствор кислоты серной
Набор №1 рассчитан на проведение 192 определений, набор №2 рассчитан на проведение 96 определений, включая контрольные.

Набор реагентов предназначен для выявления антител к вирусу гепатита С в сыворотке (плазме) крови человека и препаратах крови.
Принцип метода
В основе метода лежит принцип непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления антител класса IgG к антигенам вируса гепатита С.
При внесении исследуемых или контрольных образцов в лунки планшета, антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС), в случае их наличия в образце, связываются с антигенами, иммобилизованными на твердой фазе, образуя иммунный комплекс антиген-антитело. Не связавшиеся антитела удаляют промыванием лунок. Внесение пероксидазного конъюгата моноклональных антител к IgG человека приводит к образованию комплекса антиген-антитело-конъюгат, на поверхности лунок планшета. Избыток конъюгата удаляют промыванием. Для выявления образовавшегося комплекса в лунки добавляют бесцветный субстратный раствор, в состав которого входит водорода перекись и хромоген (ТМБ). В результате
ферментативной реакции из водорода перекиси выделяется кислород, который переводит хромоген в окрашенную форму. Ферментативную реакцию останавливают внесением раствора кислоты серной. Измеряют оптическую плотность (ОП), величина которой зависит от концентрации анти-ВГС в образце.

Подготовка реагентов для ИФА
Все компоненты перед использованием выдержать не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 °C. В случае выпадения кристаллов солей в ФСР-Т (х25 концентрат), прогреть его при температуре 37 °C до полного растворения осадка. Растворы готовить в зависимости от количества используемых стрипов иммуносорбента в соответствии с таблицей.
Рабочий раствор ФСР-Т хранить при температуре от 2 до 8 °C не более 3 сут. Рабочий раствор конъюгата и субстратный раствор готовить непосредственно перед применением. Не хранить. К+, К-, РИП и Стоп-реагент готовы к использованию.
После отбора необходимого количества оставшиеся концентраты реагентов и неиспользованные стрипы хранить плотно закрытыми в пакете в течение срока годности при температуре от 2 до 8 °C.

Подготовка к исследованию препаратов крови
Лиофилизированные препараты крови перед исследованием растворить в дистиллированной воде (если иное не указано в ФСП на препарат) и довести объем до номинального.
Все препараты иммуноглобулинов перед исследованием дополнительно развести рабочим раствором ФСР-Т до конечной концентрации белка:
- 10+1 мг/мл (для иммуноглобулинов внутривенного введения),
- 5+0,25 мг/мл (для иммуноглобулинов внутримышечного введения),
- 5+0,4 мг/мл (для иммуноглобулинов энтерального применения).
Растворенные препараты крови хранению не подлежат.

Проведение ИФА
Иммуносорбент перед использованием промыть 2 раза рабочим раствором ФСР-Т, заполняя лунки до краёв и удаляя промывающий раствор в ёмкость с дезинфицирующим раствором.
Во все лунки внести по 100 мкл РИП, добавить по 20 мкл контрольных или исследуемых образцов и перемешать пипетированием. При этом цвет раствора в лунках (за исключением К+) должен измениться с сине-фиолетового на сине-зеленый. При использовании 1 стрипа иммуносорбента контрольные образцы вносить каждый в 1 лунку. При использовании большего количества стрипов контрольные образцы внести не менее чем в 2 лунки каждый.
Планшет закрыть липкой лентой или крышкой и инкубировать при температуре 37 °C в течение 30-40 мин, затем промыть 5 раз как описано выше.
Во все лунки внести по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, планшет закрыть липкой лентой или крышкой и инкубировать при температуре 37 °C в течение 30-40 мин, затем промыть 5 раз как описано выше.
Во все лунки внести по 100 мкл субстратного раствора, выдержать в течение 10-15 мин при температуре от 18 до 25 °C в защищённом от света месте, затем добавить по 50 мкл стоп-реагента и не позднее чем через 5 мин учесть результаты ИФА.

Учет и интерпретация результатов

Провести измерение оптической плотности (ОП) раствора в лунках иммуносорбента с помощью анализатора иммуноферментного при двух длинах волн. Тест-фильтр – 450 нм, референс-фильтр – 620-680 нм. Допускается одноволновое измерение при 450 нм.
Результаты оценивать, если среднее значение ОП в лунках с К- (ОПср.К-) не превышает 0,150, в лунках с К+ - не менее 1,000.
Исследуемые образцы, ОП которых не выше критического значения ОПкрит., оценивать как отрицательные. Образцы, ОП которых выше ОПкрит., оценивать как положительные. Значение ОПкрит. вычислять по формуле:
ОПкрит. = ОПср.К- + 0,150

Входящие в набор реагентов контрольные образцы инактивированы. Однако исследуемая сыворотка и плазма крови людей, а также растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ним следует осторожно: при работе использовать резиновые перчатки; оборудование, находившееся в контакте с биологическими образцами и реагентами, дезинфицировать до и после работы спирта этилового раствором 70 %; все использованные материалы обеззараживать водорода перекиси раствором 6 % или хлорамина Б раствором 3 % в течение 2 ч, или автоклавированием при (2,0±0,1) кгс/см2 ((0,20±0,01)МПа), температуре (132±2) °C в течение 60 мин; при работе с растворами ТМБ и кислоты серной не использовать пипетки с металлическими частями и избегать попадания этих растворов на кожный покров. Загрязненные участки кожи и слизистые оболочки обильно промывать водой.

Описание

Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/09794 от 30.12.10. г. ИФА -ВГС комплект №3

Комплект № 3 для подтверждения наличия антител к антигенам вируса гепатита С

Подтверждение наличия выявленных при скрининге антител классов G и M к отдельным антигенам ВГС в сыворотке (плазме) крови и препаратах крови человека, методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе.

Базовый вариант комплекта включает:

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.

Набор может быть дополнительно укомплектован:

вспомогательными пластиковыми емкостями (4 шт.);

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток (16 шт.);

клейкой пленкой для планшетов (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению.

По желанию потребителя базовая комплектация набора (число индивидуальных упаковок с реагентами и их объемы) может быть изменена.

Базовый вариант комплекта рассчитан на исследование 48 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы используется 6 лунок – по 3 лунки на стрип).

Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

Основой тест-системы являются раздельно иммобилизованные на поверхности лунок антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (core) и неструктурной (NS_3, NS₄,NS₅) областями генома ВГС.

Тест-система выявляет антитела к разным антигенам ВГС в сыворотке (плазме) крови человека вследствие их взаимодействия с антигенами, иммобилизованными на поверхности лунок планшета. Образующиеся комплексы антиген-антитело обнаруживаются с помощью конъюгата – антител против иммуноглобулинов человека, связанных с пероксидазой хрена.

Диагностическая специфичность и чувствительность 100 % при проверке на сыворотках стандартной панели ОСО 42-28-310-02П.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Образцы до исследования могут храниться при температуре от 2 до 8 о С до 7 сут.; более длительное хранение (до трех месяцев) – при температуре не выше минус 20 о С. Повторное замораживание образцов не допускается.

Образцы, содержащие частицы фибрина или иные видимые глазом примеси, перед исследованием осветлить центрифугированием (10-15 мин при 2500-3000 об/мин).

Для исследования образцов иммуноглобулинов человека исходные растворы развести ФСБ-Т в соотношении 1:10, лиофильно высушенные препараты крови предварительно восстановить согласно инструкции по их применению, затем развести ФСБ-Т в соотношении 1:10.

Для исключения ложноположительных результатов не рекомендуется анализировать сыворотки с микробным проростом, гемолизом, повышенным содержанием липидов.

Потенциальный риск применения набора – класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 6 июня 2012 г.).

С контрольными и исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

1. Оборудование, материалы и реагенты

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин, термостат на 37 о С, холодильник бытовой, фильтровальная бумага.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08.

Все реагенты до начала анализа должны быть выдержаны не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 о С. Иммуносорбент выдерживать в упакованном виде, для того чтобы избежать конденсации влаги внутри лунок.

2.1. Приготовление раствора для отмывки планшетов (ФСБ-Т)

При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) его необходимо прогреть перед разведением в термостате при 37ºС до полного растворения осадка.

ФСБ-Т(х25) развести водой очищенной в 25 раз, используя объемы концентрата и воды очищенной, указанные в табл. 1 для заданного числа стрипов

Раствор хранить при температуре от 2 до 8 о С не более 14 сут.

Раствор готовить за 10-20 мин до внесения в лунки планшета.

Конъюгат развести в РРК, используя объемы конъюгата и РРК, указанные в табл. 2 для заданного числа стрипов. Необходимый объем РРК перенести в одноразовую емкость и добавить конъюгат в указанном количестве, тщательно перемешать.

Объем конъюгата, вносимый в РРК; указывается для каждой серии тест-системы.

Стабильность рабочего разведения конъюгата при температуре от 18 до 25 о С не более 6 ч.

Готовить непосредственно перед использованием, избегая попадания прямых солнечных лучей.

ТМБ развести в ЦБР, используя объемы ТМБ и ЦБР, указанные в табл. 3 для заданного числа стрипов. Необходимый объем ЦБР перенести в одноразовую емкость и добавить ТМБ в указанном количестве, тщательно перемешать.

Стабильность раствора хромогена при температуре от 18 до 25 о С не более 6 ч. в защищенном от света месте.

Примечание: Посуду и наконечники пипеток, контактировавшие с раствором хромогена, отмывать без применения синтетических моющих средств.

РРО перед использованием необходимо тщательно перемешать из-за возможного выпадения осадка. Иммуносорбент, К + , К – , стоп-реагент готовы к использованию.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 о С до истечения срока годности.

1. Проведение ИФА

3.1. Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов каждой группы. Неиспользованные стрипы допускается хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре от 2 до 8 о С до истечения срока годности.

Расположить стрипы в рамке, чередуя стрипы с core-антигеном и NS-антигеном в соответствии со схемой постановки.

3.2. В каждую лунку внести по 80 мкл (или 30 мкл) РРО.

3.3 В одну лунку (напр., А) стрипа с каждой группой антигенов внести 20 мкл (или 70 мкл) К + , в две лунки (напр., В и С) – по 20 мкл (или 70 мкл) К – , в остальные лунки – по 20 мкл (или 70 мкл) исследуемых образцов, , т.е. в соответствии с внесенным объемом РРО (п.1.3.2), затем тщательно перемешать пипетированием (не менее 3 раз) или на шейкере на малой скорости в течение 30 с (100об/мин), цвет РРО при этом должен измениться с сине-фиолетового на зеленый или с красного на желтый.

процедура 1 – 30 мин при 37 о С на шейкере (500 об/мин);

процедура 2 – 1 ч при 37 о С в термостате.

3.5. По окончании инкубации аспирировать содержимое лунок и промыть лунки планшета четыре раза, добавляя в каждую лунку не менее 400 мкл рабочего промывочного раствора. Время между заполнением и аспирацией (замачивание) должно быть не менее 30 сек.

Необходимо следить за полной аспирацией после каждого цикла отмывки (остаточный объем в лунках не должен превышать 10 мкл).

Полностью удалить влагу из лунок, перевернув планшет на сухую чистую фильтровальную бумагу.

Сохранность иммуносорбента между операциями 15 минут.

3.6. Перемешать рабочий раствор конъюгата и внести его по 100 мкл в каждую лунку. Планшет закрыть крышкой и выдержать в течение 30 мин в термостате при температуре 37 о С.

3.8. В каждую лунку внести по 100 мкл свежеприготовленного раствора хромогена, выдержать 30 мин при температуре от 18 до 25 о С в защищенном от света месте (планшет не закрывать) или в термостате при температуре 37 о С в течение 20 мин. (планшет закрыть чистой защитной пленкой).

3.9. В каждую лунку (в той же последовательности, в которой вносился раствор хромогена) внести по 100 мкл стоп-реагента и через 2-3 мин, но не позднее чем через 10 мин, учесть результаты.

Результаты ИФА учитывать при соблюдении следующих условий:

оптическая плотность в лунках с К + (ОП_К+) – не менее 0,5;

оптическая плотность в лунках с К – (ОП_К-) – не более 0,25.

В противном случае исследование повторить

Для каждой группы антигенов рассчитать критическое значение ОП (ОП_крит) по формуле:

где ОП_К-ср – значение ОП в лунках с К – соответствующего стрипа.

Результаты учитывать по каждой группе антигенов отдельно.

Образец учитывать как отрицательный (не содержащий антител к ВГС), если значение ОП в лунке с ним ниже ОП_Крит для каждой группы антигенов.

Образец учитывать как положительный (содержащий антитела к ВГС), если значение ОП в лунке с ним выше или равно ОП_крит по обоим группам антигенов или только по группе структурных антигенов (core) ВГС.

Для интерпретации результатов исследования сывороток можно использовать коэффициент позитивности (КП), который рассчитывается для каждого антигена по формуле:

Если КП больше 1, исследуемый образец расценивать как положительный. Результат анализа считать отрицательным при КП меньше 1 и неопределенным при КП≥1.

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 о С в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.

Набор транспортируют при температуре от 2 до 8 о С. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 о С в течение 10 сут.

ИФА -ВГС комплект №3

Для учреждений здравоохранения.

ИФА -ВГС комплект №3

СВОДНАЯ ТАБЛИЦА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ РЕАГЕНТОВ

Объем конъюгата, вносимый в РРК; указывается для каждой серии тест-системы.

Читайте также:

• Бактерии вирусы грибки что это
• Грипп при циррозе печени
• Язвы во рту что это вирус
• Что за новый вирус появился в мире
• Цефтриаксон от гриппа и простуды отзывы