Репликация вирусной рнк гепатита с

Вирус гепатита С – возбудитель инфекционного заболевания, сопровождающегося постоянным прогрессированием некротических изменений тканей печени, вплоть до злокачественного перерождения и формирования метастатических опухолей.

РНК вируса обнаруживается в крови лабораторными методиками уже спустя 7–14 дней после инфицирования. Но выделение патогена в отдельной культуре и его искусственная репликация до недавнего времени представляли серьезную проблему.

И только в середине 2000-х годов удалось выделить главные структурные протеины и неструктурные белки вируса, механизмы его репликации в гепатоцитах.

Основные случаи инфицирования вирусом HCV связаны с непосредственным попаданием патогена в кровь при гемотрансфузии, с засохших частиц контаминированного материала на медицинских, диагностических и косметологических инструментах.

Гораздо реже возбудитель HCV передается при половом акте. Вероятность внутриутробного инфицирования не превышает 3–5%. При этом окончательно не установлено, происходит передача вируса через плаценту либо во время родов.

История и эпидемиология инфекционной болезни

Изначально большинство специалистов склонялось к мнению, что заболевание является асимптоматическим расстройством функциональной активности печени. При этом утверждалось, в отличие от других известных на тот момент инфекционных болезней органа, гепатит С не способен вызвать значимых осложнений (за исключением неспецифического увеличения концентрации аминотрансфераз).

Но последующее наблюдение за пациентами с HCV продемонстрировало, что у каждого пятого без лечения спустя 10–11 лет развивался цирроз.

С появлением лабораторных методик, позволяющих подробно изучить, как выглядит вирус под микроскопом, выделить из сыворотки крови специфические антитела стали возможными долговременные клинические исследования. Провели культивирование и анализ образцов биологического материала, ранее полученных от пациентов, инфицированных HCV (до 5–10 –15 и более лет назад). Таким образом появились убедительные данные относительно эволюции HCV-инфекции.

Одним из главных выводов стало подтверждение возможности самостоятельной эрадикации вируса на острой стадии течения заболевания. Причем чаще это происходит у больных младше 12 лет.

Риск развития цирроза установили на уровне 15%, и подобные нарушения печени формировались спустя 20–25 лет. Позже, по мере накопления клинического и практического опыта, данные были скорректированы.

Сформировалось четкое представление о прогрессировании вирусной инфекции. Установлена взаимосвязь между HCV и разнообразными внепеченочными проявлениями. Изучение иммунологического ответа на антигены вируса позволило предположить вероятность формирования аутоиммунных нарушений, которые затрагивают щитовидную железу, сосудистую систему, опорно-двигательный аппарат.

Причем если доктора могут с уверенностью сказать, как HCV повлияет на работу печени через 5–20 и более лет после заражения, то прогнозировать внепеченочные проявления инфекции невозможно.

Только недавно частицы вируса были обнаружены в различных структурах нервной системы, в частности, головном мозге. Это позволило предположить прямую связь первых симптомов инфекции (усталости, слабости, психоэмоциональных расстройств и т.д.) с особенностями патогенеза заболевания.

Постоянно появляются новые тест-системы. Причем каждое последующее поколение диагностических наборов отличается большей специфичностью, точностью и чувствительностью.

Общее количество инфицированных колеблется в пределах 3–5% населения земного шара. Но медицинская статистика учитывает только официальные данные, на практике эта цифра гораздо выше. Патология преимущественно распространена в странах, расположенных на севере Африканского континента, в Европе – на юге Италии.

Недавно появились данные относительно увеличения количества заболевших в Китае, Пакистане и некоторых других азиатских странах. Минимальное число пациентов (менее 0,1%) зарегистрировано в Великобритании и странах Скандинавии.

Эпидемиология гепатита С на территории России изучена недостаточно. Полагают, что количество заболевших составляет 2,0–2,9%.

Передача инфекционного гепатита С возможна при:

• переливании крови и ее продуктов;
• трансплантации органов, изъятых у инфицированных доноров;
• инъекциях и другие инвазивных процедурах, выполняемых контаминированным инструментарием.

С появлением высокочувствительных тест-систем вероятность инфицирования при гемотрансфузии практически сведена к нулю. А большая часть случаев заболевания связана с заражением при использовании общих игл (например, в США эта цифра достигает 60% от общего количество заболевших).

По сравнению с парентеральным путем передачи, вероятность заразиться при половом контакте либо внутриутробно низка. Так, при случайном, единоразовом повреждении кожи контаминированным инструментом риск заражения оценивают в 7–10%, перинатально – не более 5–6%.

Данные относительно полового пути передачи HCV противоречивы. Известны случаи длительных постоянных отношений, когда один из партнеров инфицирован, при этом другой оставался совершенно здоровым. Точный источник заражения вирусом установить чаще всего затруднительно.

Что значит РНК вируса гепатита С

К настоящему моменту идентифицировано 6 основных генотипов инфекционного гепатита С, которые отличаются специфической географической привязанностью. Определение конкретной разновидности заболевание имеет огромное значение в подборе схемы терапии патологии. Установлено, что если выявлен 1 генотип, вероятность положительного эффекта лечения ниже.

HCV относится к семейству Flaviviridae. Как и другие представители этого класса, представляет собой заключенный в оболочку нуклеокапсид, который проникает в клетки печени из кровотока. После попадания в гепатоциты внешняя мембрана патогена разрушается, и высвобождаются частицы вируса, размер которых не превышает 70 нм.

N-участок полипротеинов кодирует структурные белки, включая основной элемент нуклеокапсида core и гликопротеины оболочки Е1 и Е2, которые в сочетании с неструктурными протеинами NS2–NS5B формируют вирусные частицы (NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B также играют огромную роль в репликации HCV).

С-конечный участок core и протеины оболочки при помощи специфических пептидаз обеспечивают проникновение вируса в клетку печени и последующее взаимодействие с эндоплазматическим ретикулумом и другими органеллами гепатоцита.

Core и фактически каждый из неструктурных протеинов являются антигенами, провоцирующими выработку антител (АТ). Установление их титра лежит в основе иммуноферментного анализа – одного из основных диагностических тестов для подтверждения болезни. При позитивном результате обследование пациентов продолжают при помощи полимеразной цепной реакции, основная цель которой – определение РНК HCV.

Если РНК не обнаружена, лечение не назначают, даже при позитивном ИФА. Но наличие РНК, подтвержденное результатами ПЦР, свидетельствует об инфицировании. При минимальной виремии (без роста показателей) человек долгое время может оставаться носителем болезни. Но в любой момент распространение процесса может ускориться.

После постановки диагноза у пациента возникает вопросы:

• HCV является вирусом или бактерией?
  Возбудитель заболевания – РНК-содержащий вирус, поэтому прием антибиотиков не только нецелесообразен, но и опасен из-за гепатотоксичности подавляющего большинства антибактериальных средств.
• Когда лучше делать анализ на HCV?
  Антитела к патогену выделяются сразу же после проникновения вируса в организм. Но в количестве, достаточном для определения лабораторным путем, иммуноглобулины накапливаются в среднем через 2 месяца. Что касается ПЦР, сроки выявления зависят от аналитической чувствительности РНК. При использовании современных тестов анализ можно делать уже через 10–14 суток.

Изучение под микроскопом и при помощи других технологий строение вируса позволило создать высокоэффективные препараты, необратимо останавливающие процессы деления РНК.

Устойчивость возбудителя

Распространенность HCV и существующий риск заражения при различных манипуляциях, включая эстетические процедуры, обуславливает устойчивость вируса гепатита С во внешней среде. Перечень биологических жидкостей, где содержится возбудитель в концентрациях, достаточных для заражения, ограничен.

В слюне вирус практически не обнаруживается. Это связывают с находящимися в ротовой полости ферментами, которые разрушают белки, составляющие структуру HCV. Поэтому вероятность передачи патогена при поцелуях минимальна.

Жизненный цикл вируса таков, что он сохраняет активность и контагиозность продолжительное время в засохшей крови. При благоприятных температурных условиях (от 6 до 20 градусов выше нуля) этот срок длится до 4–6 недель. При повышении температуры данный период сокращается до 5–6 суток. При заморозке (в том числе донорского материала) HCV остается жизнеспособным на протяжении неопределенного времени и является заразным и после размораживания.

Какие процессы запускаются после инфицирования

Но применительно к течению патологии у человека эта информация требует подтверждения. Достоверно известно, что HCV отличается тропностью именно к тканям печени.

Выявить возбудителя гепатита С в крови можно при помощи ряда диагностических тестов:

• иммуноглобулины к HCV определяют иммуноферментным анализом;
• установить наличие РНК можно методом качественной или количественной ПЦР.

Косвенно на вирусное поражение печени могут указывать результаты печеночных проб и биохимического анализа крови. Если антитела или РНК патогена в крови не обнаружены, но риск заражения слишком велик (например, после случайного пореза, незащищенного полового акта и т.д.) исследования повторяют через 2–3 месяца.

Генотипирование вируса гепатита С

Разница в структуре между разновидностями патогена составляет порядка 30–35%. Внутри одного генотипа выделяют субтипы, различия между ними не превышают 25%. У каждого пациента Hepatitis C Virus может мутировать с формированием так называемых квази-типов.

Генотипирование вируса гепатита С – один из основных анализов, назначается только один раз и обязательно проводится перед началом курса противовирусной терапии.

Для определения разновидности патогена РНК HCV должна содержаться в крови в достаточно высокой концентрации. Поэтому, если не определяется генотип патогена, исследование повторяют через 1–2 недели.

Тип возбудителя гепатита С в целом влияет как на медикаменты, составляющие схему лечения, так и на прогноз. При 3 генотипе обязательны инструментальные исследования печени из-за высокого риска осложнений. Первый тип крайне сложно поддается терапии.

Генотипирование проводится методом ПЦР.

Эффективность противовирусной терапии напрямую зависит от стадии болезни, когда был поставлен диагноз. Софосбувир, Даклатасвир, Велпатасвир и другие медикаменты прямого действия позволяют вывести вирус из организма практически у всех пациентов вне зависимости от генотипа.

Поэтому при подозрении на заражение следует сдать кровь на ИФА или ПЦР. Для постановки диагноза на ранней стадии эти исследования повторяют ежегодно.

Специфической профилактики (вакцины) от гепатита С не существует.

Для обработки медицинских инструментов и рабочей поверхности используют химические растворы и соединения, способные убить вирус, т. е. содержащие хлористоводородную, фосфорную кислоту, пропанол, этанол.

Когда пациенты интересуются, убивает ли спирт вирус, доктора дают положительный ответ. Но объясняя, погибает ли от спирта возбудитель гепатита С, врач подчеркивает, что концентрация этанола должна быть не менее 70%.

Также патоген уничтожается при термической обработке. При какой температуре убивается возбудитель HCV? При 60°для этого требуется 20–30 минут, при температуре кипячения – до 5 минут, при дезинфекции в автоклаве – около 1,5–2 минут. Подобные режимы обработки подходят для стерилизации медицинского и косметического инструментария, стирки белья, загрязненного контаминированным материалом.

Репликация гепатита С — это период размножения вирусных частиц в клетках печени. Часто этот процесс протекает без видимых симптомов, а само заболевание постепенно переходит в хроническую форму. Только человек с сильным иммунитетом способен самостоятельно победить болезнь. Репликативная фаза может продолжаться долго. Инфицированный чувствует себя хорошо, в то время как вирус продолжает размножаться, постоянно мутируя и поражая новые клетки печени. Распознать гепатит С можно только посредством лабораторных анализов.

Что такое репликация вируса гепатита

Фаза репликации гепатита С — это активное распространение вируса в гепатоцитах. Каждый день инфицированной клеткой производится около 50 вирионов (вирусных частиц). В общей сложности в клетках печени их может быть более одного триллиона. Также вирус поражает иммунные клетки, что приводит к нарушению в работе всех систем и органов человека при хроническом гепатите С.

РНК вируса включает больше 9 тысяч нуклеотидов (фрагментов). Из них примерно 30% постоянно мутирует. Из-за быстрой скорости мутации возникает множество вариантов вируса, которые являются квазивидами, а не обычными видами вирусного гепатита. Чтобы иммунитет начал вырабатывать антитела к новым квазивидам, должно пройти некоторое время, за которое вирус снова мутирует.

За 7 дней HCV успевает полностью изменить антигенную структуру, вследствие чего иммунная система перестает вообще его распознавать.

Интенсивность репликации HCV не такая высокая, в отличие от других видов гепатита. Активность распространения патогенов зависит от генотипа болезни. Самая низкая репликация у 1b генотипа, вследствие чего он не замечается человеком и вскоре приобретает хроническую форму.

Активная фаза репликации начинается в течение 2 недель после инфицирования, когда все вирусные частицы достигают клеток печени. Эта фаза продолжается до 3 месяцев. При сильном иммунитете патогенные клетки могут быть полностью подавлены.

Возможна репликация двух и более вирусов (В, А или D). В этом случае диагностируется микст-гепатит.

Как проявляется стадия репликации ВГС

Чаще всего (в 80% случаев) фаза репликации при гепатите С протекает бессимптомно. Инфицированный чувствует себя хорошо, к врачу не обращается. Однако в это время растет количество зараженных клеток, вследствие чего повышается вирусная нагрузка.

У 10-20% больных стадия репликации сопровождается острой симптоматикой. Первые признаки могут проявляться уже на 2 неделе после инфицирования. Наблюдается:

• повышенная утомляемость, слабость;

• головные боли;

• снижение умственной и физической активности;

• мышечные, суставные боли;

• дискомфорт в области правого подреберья;

• пожелтение кожи и склер глаз (в редких случаях);

• повышение температуры тела до 37,5°C.

При остром гепатите С на стадии репликации также могут появиться следующие жалобы:

• тошнота и рвота;

• ухудшение аппетита;

• обесцвечивание кала и потемнение мочи.

Во время осмотра больного врач диагностирует увеличение размеров печени и селезенки. Биохимия крови показывает повышение уровня печеночных ферментов (АЛТ, АСТ, билирубина). Если сразу же не начать лечение, из фазы репликации спустя полгода разовьется хронический гепатит.

Наличие вируса в организме в стадии репликации выявляется посредством ИФА (иммуноферментного анализа). С его помощью определяется ответ иммунной системы на появление в организме HCV.

Если в крови обнаружен анти-HCV IgM, значит, человек инфицировался недавно, то есть в данный момент происходит активная репликация вирусных частиц и болезнь еще не стала хронической. Анти-HCV IgG свидетельствуют о хронизации гепатита С.

Как протекает гепатит С вне репликации

После стадии репликации начинается хроническая (латентная или скрытая) фаза. Продолжаться она может до 15-20 лет. Больной является хроническим носителем HCV и иногда даже не подозревает, что болен. Симптомы могут быть слабыми или отсутствовать полностью. Лишь иногда после активных физических нагрузок или переедания чувствуется тяжесть в правом подреберье. Вирусная нагрузка стихает, но патогенные клетки все равно продолжают постепенно разрушать гепатоциты.

Хронический вирусный гепатит может резко обостриться. Это называется фазой реактивации, когда заболевание вспыхивает с новой силой. Это может произойти спустя 12-15 лет после репликации вируса, при циррозе печени — через 15-20 лет, а в случае рака печени — спустя 25-28 лет. Клетки печени полностью перестают нормально работать, в процессе обследования диагностируется высокая вирусная нагрузка.

Подбор лечения для разных фаз

Вирус HCV врачи лечат лекарственными средствами, называемыми ингибиторами протеазы и полимеразы. Такие препараты предотвращают самокопирование (репликацию) патогенных микроорганизмов. Подобная терапия проводится:

При помощи этих медикаментов достигается прямое действие на вирус HCV, в отличие от интерферона, который только стимулирует иммунитет на борьбу с возбудителем.

Благодаря ингибиторам протеазы и полимеразы вирусные частицы не могут расщепляться и строить новые РНК. Также для устранения патогенов могут прописываться интерфероны совместно с Рибавирином. Но от такой терапии в последнее время стараются отказаться вследствие невысокой эффективности (до 70%) и большого количества побочных действий.

Для диагностики ВГC часто используется процедура качественного анализа. Это отдельная методика, дающая весьма точные результаты. На сегодняшний день это один из лучших способов определить наличие (или отсутствие) вируса гепатита C. Анализ может принести два результата. Вот возможные варианты:

• Вирус гепатита C кач. РНК не обнаружен – что это значит? Ответ прост: в крови нет фрагментов рибонуклеиновой кислоты ВГC. А если гепатит C РНК не обнаружено, то человек здоров;
• Вирус гепатита С кач. РНК обнаружено – что это значит? В этом случае анализ показал, что человек болен гепатитом C. Или, как минимум, инфицирован. Следовательно, ему требуется лечение.

В целом, если гепатит C РНК не обнаружено, что это значит? А значит, что поводов для беспокойства нет. В случае если в крови нет и намека на ВГC, то лечение не требуется: организм справился с болезнью своими силами. Если же фрагменты рибонуклеиновой кислоты ВГC есть, то надо назначать соответствующий курс приема лекарств.

Основные особенности качественного анализа на наличие ВГC в крови

Гепатит C относится к заболеваниям, которые непросто диагностировать. Внешние признаки наличия этого вируса бессистемны, более того, в ряде случаев он себя никак не проявляет. Поэтому очень важно знать, как выявить наличие этой болезни у пациента. Здесь на помощь приходит качественный анализ крови. С его помощью устанавливается наличие или отсутствие фрагментов РНК ВГC в плазме крови.

Качественный анализ на наличие гепатита C проводится по методу полимеразной цепной реакции, сокращенно – ПЦР. Суть метода такова: используются особые ферменты, копирующие фрагменты РНК возбудителя гепатита C (или любого другого заболевания). После получения анализов лаборанты проверяют пробы по базе данных, выявляя разновидность вируса и его концентрацию в крови.

Специалисты называют следующие преимущества данного метода:

• Точность проверки. При правильном подходе специалисты способны гарантированно определить наличие/отсутствие вируса, равно как и его тип;
• Быстрое получение результатов анализов. Опытные лаборанты способны представить результат в течение 6-7 часов. Даже с учетом очереди, пациент получает требуемую информацию в кратчайшие сроки;
• Высокая чувствительность используемого оборудования. То есть, количество единиц вируса на миллилитр крови (МЕ/мл) может быть весьма низким, но анализ все равно выявит наличие инфекции;
• Низкая цена вопроса. В целом, проводимый анализ мало отличается по цене от других методик. При этом надежность метода качественного анализа (ПЦР) гораздо выше альтернативных вариантов.

Но имеется ряд важных моментов, которые стоит принимать в расчет при проведении анализа. В частности, нужно обращаться только в те клиники, в которых работают действительно хорошие специалисты. Малейшая неточность в работе сделает результат бесполезным. Более того, в этом случае возможно неправильное определение генотипа вируса, либо анализ покажет, что вирус в крови отсутствует. То есть, ценность результатов станет даже отрицательной.

Еще нужно учитывать, что у любого оборудования имеется нижний предел обнаружения вируса. То есть, если инфекция имеется в ничтожно малом количестве, она не будет обнаружена даже с помощью лучших приборов. Поэтому, при наличии подозрений на ВГC, рекомендуется повторить процедуру через определенный срок.

Принципы проведения качественного анализа на ВГC

В целом, к пациенту не имеется особых требований по подготовке к сдаче анализов. Все, что нужно сделать – сдать небольшое количество крови. Строго рекомендуется делать это натощак: в этом случае результаты диагностики будут более точными.

Стоит знать, что качественный анализ по методу ПЦР обычно назначается не сразу. Его рекомендуют проводить в следующих случаях:

• Обнаружение антител вируса гепатита C в крови пациента.
• Был обнаружен ВГC, но антитела в крови не имеются.
• При контроле проводимой противовирусной терапии.

В первых двух случаях качественный анализ назначается после сероконверсии. Если антител нет, но вирус обнаружен, нужно понять: какой именно генотип ВГC присутствует, и почему иммунная система не реагирует. Если есть антитела, то анализ позволяет разобраться: нужно ли лечение, или организм самостоятельно поборол болезнь.

Наконец, при контроле противовирусной терапии анализ делается для проверки эффективности лечения. В частности, метод ПЦР позволит понять, как препараты воздействуют на уже обнаруженный ВГC. Если эффект слабый, то на основе анализов врач решает, нужно ли менять лечение. Стоит запомнить: при контроле противовирусной терапии требуется особо чувствительное оборудование, способное обнаружить РНК гепатита C даже в самой низкой концентрации.

Заключение

Итак, для лучшего запоминания стоит напомнить, что означает тот или иной диагноз, поставленный при качественном анализе. Здесь имеются два варианта:

• Вирус гепатита C кач. РНК обнаружено – что это значит? Второй вариант, более короткий – гепатит C РНК обнаружено. Это, как его называют, положительный результат. Он означает, что в крови имеются фрагменты рибонуклеиновой кислоты ВГC. И человек инфицирован данным заболеванием.
• Вирус гепатита C РНК не обнаружен – что это значит? Либо, гепатит C РНК не обнаружено – что это значит, опять же? Это уже отрицательный результат. Анализ не обнаружил в крови фрагментов вируса. А значит, что организм победил инфекцию, и лечение не требуется.

Стоит запомнить: если человек инфицирован, то лечение надо начинать незамедлительно. Любое промедление в этом вопросе может иметь самые тяжелые последствия. И, конечно же, лечиться надо под руководством специалиста.

РНК вируса гепатита С может быть обнаружена в любой биологической жидкости человека, кроме крови, начиная со слюны и заканчивая жидкостью, которая скапливается в животе при развитии поражений печени. Естественным резервуаром или источником заражения обычно является человек-носитель вирусной инфекции. Но способность вируса гепатита С долгое время бессимптомно существовать в организме приводит не только к опасному состоянию больного, но и к вероятности потенциального заражения контактирующих с ним, в том числе посторонних людей.

Современные методы исследования позволяют обнаружить даже незначительное присутствие вирусных РНК. Для этого существуют методы, изобретенные в молекулярной биологии и поставленные на службу современной медицине в качестве эффективной диагностики.

Характер проблемы

В отличие от других вирусов гепатита человека, содержащих ДНК, опасный ВГС затруднительно выявить обычными лабораторными методами, и ранее проводимые исследования только показывали внешнюю несхожесть вируса с уже известными науке.

Иммунодиагностика для вируса гепатита С неэффективна, потому что процесс заболевания протекает крайне своеобразно:

1. Вирус быстро мутирует, а иммунный ответ организма запаздывает и не может бороться выработанными средствами, потому что они на момент продуцирования уже неэффективны.
2. Период инкубации вируса в клетках может составлять до 26 недель, а это означает, что клиническая диагностика, особенно в безжелтушной, самой характерной для ВГС форме, практически невозможна.
3. Лабораторная диагностика позволят выявить присутствие патогенного агента только через 6 месяцев в лучшем случае, когда появляются антитела к вирусу. Фульминантное течение, с которым пока невозможно справиться, встречается только у одного человека из ста.
4. Отсутствие своевременной диагностики приводит к постоянному присутствию вируса в организме человека, с незначительными признаками, которые легко отнести к переутомлению или расстройствам пищеварения. И все это время он является потенциальным источником заражения, даже не подозревая о собственном вирусоносительстве.
5. Если происходит репликация вируса во внепеченочном пространстве, у больного могут развиваться и тяжелые аутоиммунные реакции, и летальный исход от их присутствия.
6. При подозрении на ОГС назначаются лабораторные анализы – как обязательные, так и дополнительные, при ХГС прибавляется обязательная дифференциальная диагностика, которую проводят с помощью таблицы маркеров. Однако общие анализы мочи и крови, биохимическое исследование и даже иммунотитрование недостаточно информативны.
7. Выявление антител к ВГС и HBsAg – всего лишь свидетельство о контакте организма с вирусом. Но никаких объективных данных о его пребывании, развитии или угасании, репликации или ее отсутствии, иммунодиагностика не представляет. Общие антитела к Hepatitis C Virus можно трактовать вариабельно и их обнаружение не дает возможности определиться с врачебной тактикой.

Что представляет собой метод ПЦР

Метод полимеразной цепной реакции – диагностическая технология, в которой были использованы наработки молекулярной биологии. Ученые Хьелль Клеппе и Кэри Муллис сделали революционное открытие в своей области, разработав проведение ПЦР, позволяющей бесконечно увеличивать количество копий по заданной программе. Выбрав для копирования РНК вируса гепатита С можно выявить с помощью комплементарных праймеров и ДНК-полимеразы даже самое незначительное количество, вплоть до одиноких и не связанных между собой фрагментов.

Суть проводимого анализа состоит в выявлении присутствия вирусных рибонуклеиновых кислот задолго до того, как организм начнет вырабатывать иммунный ответ, который может обнаружить анализ на антитела к вирусу.

Никакие мутации не могут помешать обнаружению РНК, если есть соответствующая программа и специальные праймеры с полимеразой. В амплификаторе обнаруженная молекула тиражируется до уровня, который позволяет получить дальнейшую информацию. В современной медицине есть амплификаторы, способные выполнять и другие функции – например, сохранять размноженные молекулы на протяжении нужного времени или содержать флуоресцентные детекторы для работы с биоматериалом. Второе название анализа РНК на гепатит С (определение РНК вируса HCV-RNA) – ПЦР гепатита С. Это продуктивный способ выявления при исследовании крови человека частичек вирусного генома, проводимый в двух видах – качественном и количественном.

Качественный анализ

В настоящее время несколько менее актуален, чем количественный, потому что позволяет только определить присутствие вируса. Вариантов ответа – всего два – либо Hepatitis C Virus есть, либо его наличие не обнаружено. Успешность проводимой диагностики может быть легко поставлена под сомнение. Иногда чувствительность анализа недостаточно высокая, а концентрация вируса в крови настолько низкая, что тестовая система не может ее обнаружить. То есть даже внешне однозначный вариант ответа – вируса нет, на самом деле означает или его отсутствие, или концентрацию, которая пока недоступна проводимому тесту.

У конкретного пациента может быть низкий удельный уровень содержания РНК вируса из-за того, что он принимает по другому поводу противовирусные препараты. Но и положительный ответ тоже малоинформативен, потому что не дает представления о том, на какой стадии находится заболевание. Это может быть первичное заражение, развитие патологического процесса, его угасание, и даже то, что осталось после самоисцеления пациента, что тоже иногда случается.

Количественный анализ

Нередко отождествляется с вирусной нагрузкой, однако, дает и некоторые дополнительные данные. Получение результата производится методом подсчета количества единиц однониточного РНК вируса в миллилитре крови (другого биоматериала). Самая высокая чувствительность – у транскрипционной амплификации.

Пока этот метод находится в стадии разработки и есть только в крупных медицинских центрах, но это позволяет увидеть10 МЕ или 25 копий в 1 мг, в то время как более дешевый метод разветвленной ДНК видит только500 МЕ (1250 копий), то есть эффективность его в десять раз ниже.

С помощью количественного анализа решается сразу несколько задач. Можно:

• диагностировать заражение на том этапе, когда остальные методы бессильны (в ничем не проявляемом инкубационном периоде);
• определить самоизлечение, в то время как остальные методики дадут картину заражения, ориентируясь на выработанные организмом антитела;
• составить представление об агрессивности генома и степени поражения клеток, с помощью присутствующих компонентов;
• осуществлять мониторинг концентрации РНК вируса при назначении медикаментозной терапии – дает ли она ожидаемые результаты, или необходима смена врачебной тактики.

Генотипирование

Вирус гепатита С – это общее собирательное название нескольких вариантов генотипа, официально признанных – 6, однако, в специальной литературе называются разные цифры (от 8 до 11). Распространенность генотипа на определенной территории не означает, что его нельзя обнаружить на другой, нехарактерной. Генотипирование выявляет не только типы генома, получившие статус квазивируса, но и его мутировавшие разновидности, в то время как тест на антитела не смог бы обнаружить присутствие видоизмененной инфекции.

В некоторых случаях проведение генотипирования тоже может привести к неудачным результатам. Если соответствующего реагента в лаборатории нет в наличии, выдается заключение о невозможности проведения типирования РНК, хотя субтип генома присутствует в организме и развивается со всеми вытекающими из этого последствиями.

Генотипирование РНК вируса гепатита С дает три результата – обнаружен конкретный генотип (субтип), есть РНК редкого вида, для идентификации которого нет ресурсов, или полное отсутствие, означающее, что пациент здоров или концентрация однонитчатой РНК совсем незначительна.