Серологических исследований на вирус иммунодефицита человека

Опортунистические заболевания - тяжелые, прогрессирующие болезни, которые развиваются на фоне нарастающей иммуносупрессии и не встречаются у человека с нормально функционирующей иммунной системой (СПИД-индикаторные заболевания).

а) первая группа - это заболевания, которые присущи только тяжелому иммунодефициту (уровень СД4+

Серология что это?

Основа диагностики — обнаружение специфических антител, которые образуются в качестве реакции на инфицирование организма определенным антигеном. В зависимости от того, какие антитела обнаружены в крови, делается вывод о характере инфекции, а количество этих антител говорит о степени активности инфекционного заболевания.

Материал, взятый на исследование в рамках серологического анализа крови, изучается на предмет наличия ВИЧ-инфекции, сифилиса и других опасных заболеваний — герпеса, кишечных инфекций, краснухи, токсоплазмоза, хламидиоза, кори, вирусных гепатитов, хламидиоза. Кроме того, это исследование позволяет утвердить группу крови, определить специфичность белков.

Итак, серологические исследования проводят:

• если поставлен предварительный диагноз и теперь требуется его подтверждение. Исследование основывается на добавлении соответствующего антигена в сыворотку крови. Ответная реакция позволяет сделать вывод о налиии или отсутствии заболевания;
• если диагноз поставить не удается. В рамках исследования в кровь добавляют антитела и определяют вид антигенов, что позволяет определить конкретное заболевание;
• если необходимо подтвердить группу крови и резус-фактор.

Таким образом серологический анализ крови помогает поставить диагноз или назначить наиболее эффективное лечение — при минимальных временных и финансовых затратах.

К достоинствам серологических исследований можно отнести:

• возможность выявления патологических микроорганизмов на ранних стадиях инфекции;
• контроль развития заболевания и уровень эффективности проводимой терапии;
• отсутствие необходимости специальной подготовки перед взятием биоматериала;
• оперативность. Результат будет доступен через два-три часа, что в условиях стационарного лечения очень важно;
• финансовую доступность реагента, что позволяет проводить пробы так часто, как это нужно;
• отсутствие противопоказаний.

Как проводится серологическое исследование

Забор крови проводится из локтевой вены. Важный момент — кровь берется не шприцом, а самотеком — в вену вводится игла без шприца и собирается в пробирку до пяти мл крови. Проводится процедура с утра натощак.

В зависимости от реакций, которые лежат в основе исследования, выделяют несколько видов процедур:

1. реакция нейтрализации. Основывается на свойстве антител иммунной сыворотки реагировать как нейтрализующее средство на микроорганизмы или токсины, предупреждая их негативное воздействие на организм;
2. реакция агглютинации. Может быть прямой или непрямой. В первом случае речь идет об изучении сыворотки крови на предмет присутствия антител (осуществляется вброс убитых микробов в материал, и оценивается реакция — если есть осадок в виде хлопьев, реакция положительная), непрямая реакция основана на введении в материал эритроцитов с адсорбированными на них антигенами (фестончатый осадок говорит о положительной реакции);
3. реакция преципитации. Раствор антигена наслаивается на иммунную сыворотку (выполняет роль жидкой среды). Используется растворимый антиген. Если комплекс антиген-антитело выпадает в осадок, реакция считается положительной;
4. реакция с участием комплемента. Область применение — обнаружение инфекционных заболеваний. Активируется комплемент и исследуются реакции;
5. реакция с мечеными антигенами и антителами. Основывается на том, что антигены тканей или микробы, обработанные особым образом, начинают излучать свет под воздействием УФ-лучей. Метод широко применяется не только при диагностике антигенов, но также для определения гормонов, ферментов, лекарственных средств.

К сдаче анализа необходимо подготовиться: за четыре дня пациент должен отказаться от приема сердечных препаратов, нужно также исключить алкоголь в любом его проявлении, острую и жирную еду, сладости, ограничить физические усилия, избегать стрессов.

Если не соблюдать эти правила, повышается риск ложноположительного результата. Перед назначением повторной сдачи анализов врач обязательно должен выяснить, что делал пациент за день до процедуры, и дать рекомендации по правильной подготовке к обследованию.

Серологический анализ: расшифровка

Серологическое исследование крови — анализ, который позволяет определить/подтвердить тип возбудителя инфекции, помогает специалисту поставить диагноз. Это незаменимая помощь, если врач не может подобрать лекарственную терапию, так как возбудители различных заболеваний отличаются разной чувствительностью к действию конкретных лекарств и антибиотиков.

После того, как процедура сбора материала закончена, лаборанты приступают к следующему этапу — расшифровывают показатели. Так, если в крови у пациента антитела не обнаружены, можно делать вывод, что в организме нет инфекций — результат анализа в таком случае положительный.

Но такое положение вещей, скорее, исключение из правил: если есть симптомы заболевания, серологические исследования выявляют и доказывают наличие серьезной патологии в организме.

Сначала в организме с помощью анализа находят возбудителей заболеваний, далее оценивают количество антител, на основании чего делают вывод о том, насколько серьезно развита инфекция.

Серологическое исследование на гепатит, ВИЧ, сифилис: особенности

Сифилис. При проведении анализа на сифилис специалисты ищут белки, отвечающие за поступление в человеческий организм возбудителя инфекции — речь идет о трепонеме бледной. В качестве биологического материала в этом случае выступает сыворотка крови.

Гепатиты. Вирусные гепатиты — серьезные инфекционные заболевания, опасность которых заключается в том, что они достаточно долгое время могут жить в организме, никак себя не проявляя. Выявить заболевание в ранней фазе, когда оно лучше поддается лечению, можно проведя анализ на маркеры — маркеры появляются в крови после перенесенного заболевания или введения вакцины.

Нужно понимать, что выявление возбудителя возможно только через 1,5-2 месяца после инфицирования. Если анализ сдает беременная женщина, возможен ложноположительный результат.

• рвота;
• плохой аппетит или его отсутствие;
• беспричинное бессилие организма, переутомление;
• желтоватый цвет лица;
• изменения цвета кала и мочи.

ВИЧ. Если анализ на ВИЧ показал положительный результат, это не говорит о том, что пациент инфицирован СПИДом. Если заражение произошло недавно (не более двух месяцев назад), наличие антител не позволяет определить факт развития заболевания. Назначается повторное исследование.

Серологический анализ крови — важнейший метод исследования, основное назначение которого заключается в оперативном выявлении вирусов, инфекций, микробов в организме.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) относится к типу ретровирусов.

• Что такое ретровирус?
• Лабораторная диагностика ВИЧ
• Клиника заболевания: как себя проявляет ретровирус
  • Начальная стадия инфекции (острая фаза)
  • Бессимптомная фаза
  • Стадия начала СПИДа
• Методы диагностики ВИЧ
• ИФА (иммуноферментный анализ)
• Иммунный блотинг (Western Blot)
• ПЦР (полимеразная реакция)
• Экспресс-тестирование
• Сроки и цена диагностики ВИЧ

Что такое ретровирус?

Представляет собой геномный ДНК и хранит генетическую информацию не только как ДНК (большинство других организмов использует только ДНК), но и как РНК (рибонуклеиновая кислота).

На сегодня принято разделять следующие пути инфицирования ВИЧ:

• половой контакт без использования средств защиты
• перинатальный путь заражения (наблюдается у детей)
• в ходе гемотрансфузии (переливания крови)
• при использовании зараженных шприцев (чаще у инъекционных наркозависимых больных)

Когда ВИЧ проникает в клетки человека, он высвобождает рибонуклеиновую кислоту и реплицирует (копирует) ДНК из РНК ВИЧ с помощью фермента, называемого обратной транскриптазой.

Образовавшаяся ДНК включается в ДНК инфицированных клеток. Этот процесс является обратным, так как задействованы человеческие клетки для репликации РНК и ДНК.

Другие вирусы (инфекции) РНК, такие как полиовирус, вирус гриппа, вирус кори, в отличие от ретровируса не производят репликации ДНК после проникновения в клетку. Эти вирусы производят реплики рибонуклеиновой кислоты исходной РНК.

В ВИЧ-инфицированных клетках каждый раз, когда происходит деление клеток, ДНК интегрированного ВИЧ также реплицируется в дополнение к собственной ДНК клетки.

Репликация ДНК ВИЧ находится в одном из следующих состояний:

• Неактивное (скрытое) состояние: вирус существует, но не оказывает пагубного воздействия на организм человека
• Состояние активации: вирус доминирует над функцией инфицированных клеток, он производит большое количество новых репликаций ВИЧ, которые поражают другие клетки организма, провоцируя состояние стойкого приобретенного иммунодефицита

Важным аспектом терапевтического воздействия остается точная и своевременная диагностика заболевания.

Первые лабораторные исследования ВИЧ- патологии проводились более тридцати пяти лет назад.

Современная диагностика включает использование иммунологических, гематологических и молекулярных методов обнаружения вирусного патогена. Используемые тест-системы прошлого столетия имели достаточно ограниченные возможности и определяли ретровирус первого типа.

Их технические возможности не выходили за рамки определения иммуноглобулина G.

По мере развития лабораторной диагностики и усовершенствования методик исследования появилась возможность обнаружения обоих типов вируса.
Появление систем тестирования третьего поколения значительно расширило диагностические возможности.

Теперь обнаружение вируса 1-2 типа возможно уже спустя несколько недель после инфицирования. Такая современная диагностика позволяет быстро назначить антиретровирусное лечение.

В десятки раз сокращает риск развития более тяжелой стадии вируса — СПИД. К последним изобретениям можно отнести системы тестирования 4 поколения. Они являющиеся комбинированными методами исследования.

Лабораторная диагностика ВИЧ

Проведение лабораторных анализов является основным аспектом диагностирования ВИЧ-заболевания и назначения адекватной терапии. Кроме того, диагностика является мониторингом качества лечения и состояния здоровья пациента.

Регулярное проведение лабораторных анализов дает возможность:

• контролировать течение инфекционного процесса
• корректировать схему терапии
• проводить мониторинг побочных реакций от приема медикаментозных средств

Стандартный анализ на ВИЧ подразумевает исследование крови пациента.

Основной биологический материал — венозная кровь, забор которой проводится утром, до приема пищи.
Предварительной, особой подготовки от пациента не требуется.

Основной подготовкой является исключение приема алкоголя за несколько дней. При возможности прекращение приема антибиотиков и противовирусных средств за 5-7 дней до анализа.

Клинико-иммунологическая экспертиза может проводиться в государственной поликлинике. Но в таком случае потребуется направление от врача-терапевта или семейного доктора.

Сегодня все чаще практикуется диагностика ВИЧ, СПИДа и ЗППП в независимых лабораторных центрах, где имеется возможность сдать анализ анонимно.

В ходе диагностики пациенту присваивается особый номер, известный только ему и персоналу учреждения. Однако в данном случае имеется определенный минус.

Результаты тестирования не могут быть переданы в клинику для последующей госпитализации больного. Не предоставляются гинекологу/венерологу/ инфекционисту, не могут быть занесены в реестр инфекционных патологий (ОРУИБ).

Клиника заболевания: как себя проявляет ретровирус

Основной способ передачи ВИЧ-заболевания:

• половой контакт
• от матери к ребенку (трансплацентарно, через родовой путь, грудное молоко)
• в ходе процедуры переливания крови, трансплантации органа
• при введении внутривенных наркотиков нестерильным шприцем

Другими словами, до тех пор, пока нет контакта с кровью или жидкостями организма, вероятность инфицирования ВИЧ в повседневной жизни почти равна нулю.

Количество вируса, содержащегося в секреторной жидкости, такой как слюна или слезы, очень мало. Даже если вирус находится в данных выделениях, то до сих пор не сообщалось о заражении при использовании общей ванны или полотенца.

Первое проявление инфекции наблюдается спустя 2-3 недели после заражения.

В этот период симптомы ВИЧ такие: лихорадка, боль в горле, мышечная боль, сыпь, лимфаденопатия, головная боль, усталость и т. д. Появляются симптомы гриппа или ангины (как правило, моноцитарного типа).

Ранние признаки болезни могут сопровождать пациента от нескольких дней до месяца и более, во многих случаях спонтанно исчезают.
Диагностировать заболевание в данный период считается максимально выгодным для больного. Лечение антиретровирусными препаратами на начальном этапе инфекции показывает наиболее положительные результаты.

Важно! Пациентам, имеющим любые инфекции, передающиеся половым путем (сифилис, гонорея, ВПЧ, хламидии и т. д.) в обязательном порядке рекомендуется сдача анализа на ВИЧ. У больных ретровирусом довольно часто выявляют параллельное течение ЗППП.

Количество вируса в крови, достигшего пика из-за иммунного ответа (индукция ЦТЛ или продуцирование антител) после заражения, снижается до определенного уровня, спустя 6-8 месяцев, и приобретает фазу бессимптомного течения. Подобная фаза может длиться несколько лет.

После чего сменяется периодами обострения: симптомы гриппа, недомогание, увеличение лимфатических узлов. В этот период пациент как никогда уязвим перед другими инфекционными патологиями: ЗППП, гепатит, герпес, туберкулез.

Без анти-ВИЧ-терапии после заражения, инфекция прогрессирует, а CD4-положительные Т-клетки стремительно снижаются. Когда число лимфоцитов CD4 составляет 200 / мм 3 или менее, оппортунистические инфекционные заболевания, такие как пневмония, туберкулез, развиваются с вероятностью в 90%.

Кроме того, если количество лимфоцитов CD4 ниже 50 / мм 3 — высокий шанс развития цитомегаловирусной инфекции, атипичного микобактериоза (в 93% случаев), первичных лимфом ЦНС, злокачественных образований. У больных отмечается резкое снижение аппетита, потеря массы тела вплоть до анорексии, постоянные нарушение дефекации с преобладанием диареи, слабость и тому подобное.

Этиология, патогенез, эпидемиология: ВИЧ — вирус из семейства РНК-содержащих патогенов, поражает клетки иммунной системы, провоцирует развитие СПИДа, оппортунистических инфекций, онкологию. Согласно статистическим данным, приведенным на 2011 год, в мире зарегистрировано 62 миллиона пациентов с диагнозом ВИЧ.

Пока пациент прибегает к антиретровирусной терапии, можно подавить вирусную нагрузку в значительной мере.
Но, к сожалению, полностью ликвидировать вирус из организма невозможно. Поэтому крайне важно как можно быстрее диагностировать заболевание и начать соответствующее лечение.

Методы диагностики ВИЧ

Диагностические мероприятия по выявлению ВИЧ-инфекции включают два этапа:

• выявление факта заражения (наличие в организме ретровируса)
• определение стадии процесса (как давно произошло инфицирование и как сильно поражены клетки иммунной системы)

Результаты диагностики позволят определиться с тактикой терапии и спрогнозировать дальнейшее течение болезни.

Существуют различные серологические методики выявления инфекционных, вирусных и бактериальных патологий. При диагностировании ВИЧ, как правило, применяются следующие серологические анализы.

ИФА (иммуноферментный анализ)

Является наиболее часто назначаемым анализом при необходимости подтвердить/опровергнуть наличие в организме ретровируса.

Анализ основан на определение антител к вирусу, которые образуются в ходе попадания патогена в организм человека. Информативность диагностического метода достигает 96%.

Однако, если исследование проводится на этапе еще отсутствия антител, можно получить ложноположительный результат. В таком случае назначается повторное исследование ИФА через 2-3 месяца.
Но гораздо целесообразней проведение ПЦР-анализа, способного выявить заражение на самых ранних сроках.

Также получить ложноположительный результат можно при наличии у пациента:

• патологий аутоиммунного характера
• инфекций, протекающих в хронической форме
• заболеваний онкологического типа

В другом случае, данный результат может быть получен при наличии ранних сроков беременности.

Иммунный блотинг (Western Blot)

Специфика анализа направлена на выявление белков ВИЧ-инфекции.

Стандартно иммуноблоттинг выдает три варианта результата: положительно, отрицательно, сомнительно. В первых двух случаях расшифровка проста — ВИЧ отсутствует/присутствует.

Сомнительный вариант, как правило, означает присутствие в организме ВИЧ. Но с инфицированием не более трех месяцев назад, когда организм не успел выработать весь спектр антител.

Также, получение сомнительного результата свойственно для пациентов с туберкулезом, злокачественными патологиями, прошедших многократные манипуляции по переливанию крови.

ПЦР (полимеразная реакция)

Суть метода заключается в определении ДНК вируса и его РНК. Является наиболее информативным и точным методом обнаружения патогена.

Может обнаружить ВИЧ на ранних сроках инфицирования, еще до образования антител к ретровирусу. Чувствительность ПЦР составляет 99%, получить ложный результат практически невозможно.

Полимеразная реакция назначается пациенту с целью:

• указать присутствие или отсутствие вируса ВИЧ в организме человека при сомнительных результатах, полученных в ходе других лабораторных тестов
• идентификации типа ретровируса (ВИЧ-1, ВИЧ-2), а также для установления нагрузки на организм, спровоцированной вирусом
• установления статуса рожденного ребенка от матери, имеющей заболевание
• выявления патогена в крови, которая в дальнейшем будет использована для переливания

ПЦР является наиболее точным анализом, способным выявить ретровирус спустя 7-10 дней после попадания в организм.
При этом точность результата на данном сроке будет составлять 98-99%.

Однако, ПЦР имеет некоторые особенности, по этой причине может назначаться несколько раз. В связи с высокой чувствительностью анализ способен реагировать не только на ретровирус. Но и на самые незначительные инфекционные процессы, происходящие в организме. Поэтому окончательный диагноз после одноразового проведения полимеразной реакции не ставится.

Следующая особенность ПЦР — необходимость современной и дорогостоящей аппаратуры. Поэтому анализ не проводится в государственных клиниках. Осуществляется тестирование в современных лабораториях, где стоимость анализа может стартовать от 1000 рублей.

Экспресс-тестирование

Назначается в экстренных ситуациях, когда срочно требуется проведение оперативного вмешательства.

Биологическим материалом для исследования является моча. Экспресс-тест, по мнению некоторых специалистов, имеет точность до 96%, но, тем не менее, является дополнительным тестированием. На основании полученных результатов данного исследования, диагноз не ставится.

В обязательном случае проводится ИФА или ПЦР.

Сроки и цена диагностики ВИЧ

Через какое время можно получить готовый анализ?

Ответ лабораторного центра о результатах анализа можно получить спустя несколько дней, в зависимости от загруженности учреждения.

Относительно ценовой политики, то стоимость будет зависеть от выбранной лаборатории и методики исследования.
Так, стоимость может стартовать от 500 рублей и достигать 10 000-15 000.

Цена Western Blot стартует от 2500 рублей и может достигать 3000-4000. Получить готовый результат можно спустя 2-5 дней.

Если проводится ПЦР в реальном времени с определением обоих типов ретровируса, а также их РНК и ДНК, стоимость может достигать 5000 рублей и выше. Длительность диагностирования от 5 до 10 дней.

Согласно действующему закону РФ, иммунологические исследования, проводимые в государственных учреждениях, предоставляются на бесплатной основе. Анализ на ВИЧ в обязательном порядке назначается пациенткам в период беременности, больным в предоперационный период, донорам органов или части ткани.

• ВИЧ
• Гарднереллез
• Кондиломатоз
• Молочница
• Сифилис
• Трихомониаз
• Баланопостит
• Герпес
• Гонорея
• Микоплазмоз
• Уреаплазмоз
• Уретрит
• Хламидиоз
• ЗППП

Ранняя диагностика заболеваний – залог успешного лечения. Ставшее крылатым выражение, особенно актуально для ВИЧ-инфекции. Ведь заболевание неизлечимо полностью, и только своевременная диагностика позволяет взять течение болезни под контроль и выбрать тактику лечения, чтобы жить полноценной жизнью.

Ранний срок диагностики ВИЧ – со 2 недели от предположительного заражения.

Важность клинической диагностики ВИЧ

В понимании многих людей ВИЧ-инфицированный человек выглядит болезненно, изнеможенно. Он кашляет, чихает, чешется, стонет, у него все болит… На самом деле это не так! Проблема в том, что после инфицирования ВИЧ и в последующий инкубационный период симптомы полностью отсутствуют. Затем наступает острая фаза, на протяжении которой присутствуют симптомы, напоминающие ОРВИ или грипп. Но и они вскоре проходят, и наступает, так называемый, латентный период – продолжительный промежуток времени, когда ВИЧ-инфекция себя ничем не выдает. С момента инфицирования и до стадии пред-СПИДа может пройти порядка 10 лет, в течение которых, ни сам пациент, ни его окружение, даже и не подозревают о болезни. А когда она уже на полную мощность заявляет о себе, контролировать ее очень трудно. Сложно противостоять осложнениям ВИЧ, поддерживать практически разрушенную иммунную систему человека.

Очень важно понимать, что, хотя и есть группы риска – гомосексуалисты, наркозависимые и девушки легкого поведения – в основной массе, пациенты с ВИЧ-инфекцией – это обычные люди. Они учатся, ходят на работу, посещают общественные места, знакомятся в интернете – в общем, живут как все. К сожалению, но от ВИЧ никто не застрахован. Незащищенный половой контакт в порыве страсти, заветное тату без соблюдения стерильности, маникюр за полцены у начинающего мастера, уличная драка – все эти и множество других житейских ситуаций могут обернуться инфицированием ВИЧ.

Не ошибается лишь тот, кто не живет! Мы не можем знать все наперед, не можем исправить уже совершенных ошибок, но мы можем предпринять простые шаги для исправления их последствий – обратиться в ближайший кожно-венерологический диспансер, в местную клинику или специализированный СПИД-центр для сдачи анализов и ранней диагностики ВИЧ.

Благоприятные сроки для диагностики ВИЧ

Факт возможного инфицирования и плохое самочувствие без видимых причин – два веских основания для обращения к специалистам. Но отрицательный результат тестирования на антитела не всегда означает, что человек не инфицирован, так как существует период “серонегативного окна” (время между заражением и появлением антител), который составляет около трех месяцев. Поэтому лучше повторить их спустя 3 месяца с момента возможного инфицирования. Если же ответ опять будет отрицательным, но ваша тревога не проходит, и вы уверены в заражении ВИЧ, тогда лабораторную диагностику необходимо повторить спустя 6 месяцев после факта заражения.

Что касается плохого самочувствия, то поводом провериться на ВИЧ может быть сочетание следующих симптомов:

• увеличение лимфатических узлов на шее, в паху, в области подмышек;
• лихорадка;
• мышечные или головные боли;
• молочница и грибковые поражения, в том числе кандидоз полости рта;
• воспаление слизистой носа, рта или глотки;
• ночная потливость;
• ломота в суставах;
• длительная диарея;
• тошнота, рвота;
• резкое снижение массы тела;
• высыпания на коже.

Важно понимать, что с момента, когда проявляются первые признаки ВИЧ-инфекции и до момента, когда заболевание переходит в латентную стадию, проходит очень мало времени – около 3-6 недель с факта инфицирования. Нельзя упускать из вида этот промежуток времени! Поскольку последующие 8-10 лет вы будет жить, нормально себя чувствовать и даже не подозревать о том, что больны ВИЧ-инфекцией. Драгоценное время будет упущено.

Современные методы диагностики ВИЧ

В настоящее время в диагностике ВИЧ используется двухуровневый подход – косвенные и прямые тесты. Косвенные тесты позволяют обнаружить в крови пациента специфические антитела к ВИЧ, а прямые тесты помогают выявить собственно сам ВИЧ и определить степень вирусной нагрузки на организм. В России стандартная диагностика ВИЧ включает следующие методы лабораторных исследований:

• ИФА (иммуноферментный анализ).
• Иммуноблот (иммунный блоттинг).

Также могут быть применены следующие методики:

• Экспресс-тест ИХА (иммунохроматография).
• ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Диагностические принципы лабораторных исследований и степень их достоверности приведены в нижеследующей таблице.