Вирусвакцина для оральной иммунизации диких плотоядных животных против бешенства

ОРАЛЬНАЯ ВАКЦИНАЦИЯ ПЛОТОЯДНЫХ ПРОТИВ БЕШЕНСТВА (ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР)

Бешенство ( Rabies ) - фатальный прогрессирующий энцефалит вирусной этиологии всех млекопитающих. Это заболевание с необратимым поражением центральной нервной системы и самым высоким уровнем летальности, одно из наиболее злокачественных инфекционных болезней [5]. Г лавным резервуаром и источником возбудителя бешенства являются дикие животные (волки, лисы, еноты, песцы, хорьки и др.), бродячие собаки и кошки.

Чтобы обезопасить животных и людей от вируса бешенства проводят вакцинацию основных носителей бешенства-лисиц. Вакцинация проводится весной и осенью. Раскладка вакцины - наиболее эффективный метод защиты диких животных от вируса бешенства.

Для вакцинации диких плотоядных животных в РФ зарегистрированы следующие вакцины:

Приманка по внешним признакам представляет собой цилиндр или параллелепипед серого или темно-коричневого цвета. Изготавливается она из продуктов, которые являются наиболее съедобными для плотоядных животных, обладают специфическим запахом, тем самым повышая вероятность того, что животное обратит внимание на нее [1].

Приманка изготовлена в виде брикета, который проглотить невозможно, можно только раскусить. Животное, почуяв запах, раскусывает брикет и вакцина попадает на слизистую ротовой полости, далее вакцина попадает в организм. На 21 день после вакцинации формируется иммунитет против вируса бешенства продолжительностью до 12-ти месяцев [1].

Это говорит о том, что оральная вакцинация плотоядных животных является самым эффективным методом для выработки антител против вируса бешенства. Для того, чтобы точно обнаружить съеден брикет или нет он изготовлен специальным способом: в него введен биомаркер (тетрациклин), он накапливается в костной ткани и зубах животного на всю жизнь, обнаружить его можно легко с помощью флуоресцентного метода. Вирусвакцина безвредна, ареактогенна для диких животных (лисицы, песца, енотовидной собаки, кабана, лося, медведя), а также для домашней свиньи и собаки.

Раскладка вирусвакцины. Перед началом вакцинации в данной области необходимо информировать административные органы, обучить людей, которые будут привлечены к размещению вакцины. Доставка препарата к месту назначения осуществляется транспортными средствами, обеспечивающими температурный режим не выше минус 20 °С. Работы по организации вакцинации проводятся под контролем представителей ветеринарной службы и специалистов охотоведов. Размещение вакцины осуществляют ручным способом или с помощью авиации. Для предупреждения запаха человека при контакте с препаратом необходимо пользоваться защитными перчатками. При раскладке в полевых условиях брикеты осторожно пальцами выдавливают из коробок на землю. Препарат следует маскировать, защищая от прямых солнечных лучей, после укладки брикеты закрывают естественным материалом (листья, трава и т. д.). Раскладывают вакцину по площади равномерно. При сбрасывании препарата методом авиации его сбрасывают через каждые 250 м. При ручном распределении раскладывают в местах обитания диких животных вблизи их нор.

Раскладка вирусвакцины должна обеспечивать попадание не менее чем 8-10 брикетов на каждый реальный или потенциальный норный охотничий участок. Типичный радиус норного участка у лисицы при хорошей кормовой базе не превышает 500 м. Норный участок енотовидной собаки практически такой же. Если брикеты не были съедены-их собирают и уничтожают с помощью сжигания. В городах приманку не раскладывают.

Срок годности и условия хранения вирусвакцины. С даты выпуска срок годности составляет 10 месяцев при соблюдении всех правил хранения. Хранят в сухом месте при температуре от -10°С до -20 °С. Вирусвакцину хранят в местах недоступных для детей и случайных лиц [3].

Побочные действия. При передозировке вакцин побочных действий не выявлено [4].

Особые указания. При работе с брикетами-приманками работники должны быть в перчатках, во избежание попадания вследствие разрыва брикета содержимого на кожу. При отсутствии маркировки на вакцине, нарушении условий хранения, она подлежит немедленной утилизации автоклавированием [4].

Вакцина для оральной иммунизации диких плотоядных животных против бешенства. [Электронный ресурс]- Режим доступа:https://центр-ветеринарии.рф/images/docs/Biopreparaty/primenenie/Вакцина%20для%20оральной%20иммунизиции%20диких%20плотоядных%20животных%20против%20бешенства%20Рабивак-О_333.pdf

Вирусвакцина для оральной иммунизации диких плотоядных животных против бешенства. [Электронный ресурс]- Режим доступа:http://www.arriah.ru/en/main/production/price-vaccines/116/virusvaktsina-dlya-oralnoi-immunizatsii-dikikh-plotoyadnykh-zhivo

Макаров В. В. Бешенство [Текст] / В.В. Макаров. Российский ветеринарный журнал. – 2017. - №1. - 28 с.

Еще фото

Ключевые слова: бешенство диких животных, оральные антирабические вакцины

Key words: rabies of wild animals, oral rabies vaccines

Аннотация

В поддержании и распространении бешенства ведущую роль играют безнадзорные собаки и кошки, а также дикие плотоядные, поэтому основные меры должны быть направлены на борьбу с бешенством у данной категории животных. Для диких животных в РФ применяются различные оральные антирабические вакцины, эффективность которых в местах применения необходимо строго контролировать по наличию в зубной ткани вакцинируемых животных биомаркера (тетрациклин) и наличию у них антирабических антител в сыворотках крови.

Summary

In maintenance and distribution rabies the leading role is played by neglected dogs and cats, and also wild carnivorous therefore the main measures have to be directed on fight against rabies at this category of animals. The different oral rabies vaccines which efficiency in places of application needs to be supervised strictly on existence in teeth of vaccinated animals of a biomarker (tetracycline) and to existence of rabies antibodies in serums are applied to wild animals in the Russian Federation.

В последние 20 лет в Российской Федерации сложилась непростая эпизоотическая ситуация по многим особо опасным инфекциям, однако, на этом фоне ситуация с бешенством не может не вызывать особую тревогу. За короткий период (1997-2007 гг.) число случаев заболевания бешенством среди животных в РФ возросло более чем в 4 раза (с 1052 в 1997 г. до 4860 в 2007 г.) [1]. В 2011-2012 гг. произошло незначительное снижение количества заболевших животных до 3188 и 2799, соответственно.

Однако успокаиваться и говорить о победе над бешенством еще слишком рано.

Анализ эпизоотической ситуации показывает, что в России имеются стойкие природные очаги заболевания, поддерживаемые в первую очередь за счет диких плотоядных (лисица, енотовидная собака и др.), на долю которых приходится около 50% всех регистрируемых в РФ случаев бешенства [1, 5, 6, 16]. В эпизоотический процесс вовлекаются также безнадзорные собаки и кошки, которые на ряду с дикими плотоядными представляют серьезную опасность для человека.

По данным Роспотребнадзора в Российской Федерации за период с 2008 по 2011 гг. зарегистрировано 57 летальных исходов заболеваний людей гидрофобией (бешенством). Источниками заражения людей в 30 случаях (52,6%) явились больные бешенством собаки и кошки, половину из которых составили безнадзорные животные; в 24 случаях (43,6%) — дикие животные (лисицы — 12, енотовидные собаки — 9, волки — 2, дикий кабан — 1).

У одного человека заболевание возникло в процессе ухода за бешеной коровой, а у двоих источник не был установлен [11].

Учитывая крайне высокую степень опасности для человека распространения бешенства среди диких и безнадзорных плотоядных животных, являющихся основным резервуаром и источником данной инфекции, меры борьбы должны быть направлены в первую очередь на снижение, вплоть до полного искоренения, указанного заболевания именно среди этой группы животных.

Обращаясь к мировому, особенно передовому европейскому опыту по ликвидации бешенства, следует отметить, что на сегодняшний день в развитых европейских странах безнадзорных собак и кошек практически нет. Это достигается за счет неукоснительного исполнения законодательства в области содержания домашних животных.

В РФ порядок содержания домашних животных определяется местной администрацией, при этом за его обеспечение никто не отвечает, что влечет за собой многочисленные нарушения. Ситуации, когда хозяева избавляются от надоевших домашних любимцев, просто выбрасывая их на улицу, не являются редкостью. Часто владельцы берут на лето животных на дачу, а, возвращаясь осенью в город, оставляют их без всякого попечительства. В сложившейся ситуации необходимо повысить личную ответственность за содержание и благополучие домашних животных, как среди владельцев, так и со стороны администрации поселений (садоводческих товариществ и др.):

1. в целях упорядочивания содержания домашних животных можно предложить обязательное чипирование всех собак и кошек, что позволит не только полностью их идентифицировать, но и, в случае необходимости, установить и привлечь к ответственности хозяев;

2. еще одной действенной мерой мог бы быть налог на содержание собак и кошек, что, позволило бы с одной стороны повысить ответственность у их владельцев, а с другой – упорядочить контроль за содержанием домашних животных;

3. на сегодняшний день за случаи нападения безнадзорных животных на жителей никто ответственности не несет, поэтому наличие бродячих собак в населенных пунктах и вблизи садовых участков мало кого заботят, по всей видимости, персональную ответственность должны нести представители местной администра­ции, что, несомненно, повлияет на улучшение ситуации с безнадзорными животными в населенных пунктах.

В целях ограничения численности безнадзорных животных в РФ применяют различные меры: отстрел, отлов с последующей стерилизацией и возвращением и др. Если первая мера представляется неприемлемой как негуманная, то вторая оказалась абсолютно не эффективной [8].

Как показывает практика, скопление безнадзорных животных часто происходит вблизи продуктовых рынков, свалок пищевых отходов, т.е., там, где есть источники пищи. В связи с этим первоочередной мерой по борьбе с бешенством является полная ликвидация открытых источников пищевых отходов (свалок, мусорных куч и т.д.).

Второй составляющей в плане искоренения бешенства должен быть безвозвратный отлов безнадзорных собак и кошек, для чего необходимо создать целую сеть приютов для этих животных, способную вместить всех отлавливаемых животных.

Борьба с бешенством диких плотоядных включает в себя две основных составляющих: регулирование численности и вакцинация с помощью оральных вакцин.

Международное эпизоотическое бюро (МЭБ) рекомендует поддерживать численность лисиц, основных переносчиков бешенства, на уровне не более 1-2 животных на 10 км 2 , что должно обеспечивать эпизоотическое благополучие территорий. Однако данная рекомендация, основанная на условиях Западной Европы, не учитывает влияния других диких плотоядных, включающихся в процесс распространения бешенства, а также является лишь временной мерой, не обеспечивающей устойчивого эпизоотического благополучия [10].

Тем не менее, до конца 70-х годов прошлого века регулирование численности диких плотоядных являлось единственной действенной мерой борьбы с бешенством [3]. С появлением оральных антирабических вакцин ситуация изменилась. Первые кампании по оральной вакцинации лисиц были проведены в 1978 г. в Швейцарии, а первые документированные положительные результаты в национальных масштабах были получены на территории ФРГ в результате широкомасштабной межгосударственной кампании ОВЛ в 1983-1986 гг. [9]. В качестве приманок использовали куриные головы, внутрь которых помещали пакет из пластика и алюминиевой фольги с вакцинным штаммом SAD и тетрациклином в качестве биомаркера. Позднее широкомасштабные кампании оральной вакцинации были применены в других европейских странах и на сегодняшний день в странах Евросоюза регистрируются только отдельные случаи заболевания бешенством среди диких животных [10].

В условиях России полномасштабные кампании оральной вакцинации не осуществимы как по техническим причинам, так и по финансовым соображениям. Тем не менее, на отдельных территориях оральную вакцинацию проводить не только возможно, но и необходимо. Поэтому в стране были разработаны пероральные антирабические вакцины на базе отечественных штаммов РВ-97 и ТС-80.

Вирусвакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных производства ВНИИВВиМ содержит фиксированный штамм вируса бешенства ТС-80, полученный в 1980 г. Сафоновым Г.А. и др., и депонированный в ВГНКИ 17 февраля 1988 г. Данная вакцина выпускается в очень ограниченном объеме и не получила широкого распространения в практике.

Поскольку основными критериями при выборе штамма, применяемого для приготовления живых вакцин, являются безопасность и иммуногенность [16], большим недостатком вакцин из штаммов ТС-80 и РВ-97 является их остаточная вирулентность для грызунов [2,12].

Поскольку ветеринарные службы не в состоянии дифференцировать эпизоотические изоляты от вакцинных штаммов вируса, то при появлении сообщений о случаях бешенства среди грызунов некоторые специалисты стали говорить о не эффективности и даже вредности оральной вакцинации диких плотоядных [4]. Тем не менее, работа в области оральной вакцинации диких животных против бешенства продолжалась.

Широкомасштабное распространение живых антирабических вакцин требует пристального контроля за их безопасностью и эффективностью. Применяемые в РФ оральные вакцины проходят обязательный контроль на безвредность для целевых животных в течение не менее 90 суток и биологическую активность в культуре клеток.

При оценке эффективности оральной вакцинации в полевых условиях используют два основных метода: определение наличия тетрациклина, используемого в качестве маркера поедаемости оральных антирабических вакцин, в зубной ткани и костях целевых животных отстрелянных в зонах вакцинации, а также определение у них титра антирабических антител [9].

Традиционный метод определения вируснейтрализующих антител — реакция нейтрализации на белых мышах или в культуре клеток трудоемки, продолжительны по времени и требуют больших материальных затрат для определения антирабических антител в блок-ИФА была разработана и апробирована в полевых условиях универсальная иммуноферментная тест-система, не требующая наличия антивидовых пероксидазных конъюгатов к каждому виду животного 13.

К сожалению, в Российской Федерации до сих пор не принята государственная программа по борьбе с бешенством, что существенно затрудняет ликвидацию данного заболевания на всей её территории.

Литература

2. Борисов А.В. Разработка технологии изготовления вирусвакцины против бешенства диких плотоядных: Автореф. дис. канд. вет. наук / Всерос. НИИ защиты животных: Владимир, 2003.

3. В.А. Ведерников, В.А. Седов, Э.В. Ивановский. Бешенство животных //Москва, - Колос. 1974.

5. Дудников С.А. Лисицы как маркер риска при бешенстве: II Противоэпизоотические мероприятия // Труды конференции ВНИИВВиМ, г. Покров, 2003 г. С. 69-73.

8. А. А. Заволока О регулировании численности бездомных животных из-за проблем с бешенством // VetPharma, 2013, №4, С. 25-27.

9. В.В. Макаров Оральная вакцинация лисиц против бешенства безальтернативна // Ветеринарная патология. 2009. №4. С. 104-107.

10. Метлин А.Е., Чернышева Е.В., Рыбаков С.С. Бешенство животных: эпизоотология, меры борьбы и перспективы // Ветеринария Кубани. 2009. №6. С. 2-4.

12. Сливко И.А. Иммунобиологические свойства вакцинных штаммов ТС-80 и 71 БелНИИЭВ-ВГНКИ вируса бешенства: Автореф. дис. канд. вет. наук / Всерос. НИИ вет. вирусологии и микробиологии: Покров, 2003.

13. Хисматуллина Н.А., Гулюкин А.М., Сабирова В.В., Гафарова А.З., Елаков А.Л. Разработка и применение блок-иммуноферментной тест-системы для контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства // Ветеринарна медицина. Мiжвiдомчий тематичний науковий збiрник. Вып. 96. 2012 г. – Украина, г. Харкiв - С. 64-66.

14. Н.А. Хисматуллина, Т.П. Петрова, А.М. Гулюкин, В.В. Сабирова, А.З. Гафарова, Ш.М. Насыров, М.И. Маркова, А.Л. Елаков. Контроль эффективности вакцинопрофилактики бешенства дикой фауны на территории Калининградской области РФ //Ветеринарный врач. 2012. №6, С.8-11

15. Н.А.Хисматуллина, А.М.Гулюкин, В.В.Сабирова, А.З.Гафарова, М.Насыров, М.И.Маркова, А.Л.Елаков, С.Р.Кулакова, И.В.Амирова. Контроль эффективности вакцинопрофилактики бешенства дикой фауны на территории Смоленской области РФ// Труды ВИЭВ. – Москва, 2013; Т.77 – С. 197-200.

16. Шестопалов А. М. Экологический полиморфизм и территориальная значимость различных вирусных патогенов: Автореф. дис. докт. биол. наук / Новосибирск, 2010.

17. K. Habel. Общие соображения относительно определения безвредности и иммуногенности / Методы лабораторных исследований по бешенству. Третье издание. Всемирная организация здравоохранения, Женева, 1975.

Владельцы патента RU 2311924:

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Вакцина представляет собой приманку-таблетку с привлекательным для плотоядных животных вкусом и запахом. Она содержит лиофилизированный вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток почки сайги, защитные компоненты, пищевые и формообразующие компоненты. Предложен также способ ее получения. Способ предусматривает выращивание вакцинного штамма ТС-80 вируса бешенства, лиофильное высушивание со стабилизирующими добавками, размалывание лиофилизированного вакцинного штамма, смешивание его с пищевыми и формообразующими добавками и последующее прессование смеси. 2 н.п. ф-лы.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, а именно к вакцине против бешенства, и способу ее получения.

Наиболее приемлемой для диких плотоядных животных является оральная иммунизация.

Известна вакцина против бешенства, использовавшаяся для оральной вакцинации собак. Вакцина состоит из центрального ядра, содержащего лиофилизированный вакцинный штамм вируса бешенства SAG 2, и тонкого слоя матричного покрытия из материалов животного происхождения, искусственно увеличивающих поедаемость агентов и синтетического полимера. Эффективность вакцинации собак составила 73% [1].

Имеется вакцина против бешенства для оральной иммунизации плотоядных, которую изготавливают выращиванием вакцинного вируса бешенства, штамм ТС-80, в перевиваемой культуре клеток почки сайги. Суспензию выращенного вакцинного штамма смешивают со стабилизирующими компонентами, разливают во флаконы или кассеты, замораживают, высушивают сублимацией, размалывают в шаровой мельнице и заполняют высушенной вакциной полые брикеты-приманки из мясо-рыбного фарша [2].

Недостатки этой вакцины в том, что она не представляет собой гомогенную приманку-вакцину, а способ ее изготовления трудоемкий и длительный, требует отдельного изготовления приманок и лиофилизированного вакцинного штамма.

Существует способ изготовления вирус-вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, заключающийся в нанесении на пористый брикет вирусного материала, выращенного в перевиваемой культуре клеток и смешанного с защитными компонентами, замораживании и лиофилизации брикетов [3].

Недостатки этого способа состоят в том, что полученная вакцина не является гомогенной, брикеты не стандартизованы и могут крошиться при хранении.

Целью предлагаемого изобретения является иммунологически эффективная вирус-вакцина для оральной иммунизации, представляющая собой приманку-таблетку с привлекательным для плотоядных вкусом, запахом, равномерным распределением лиофилизированого вакцинного штамма по всей приманке-таблетке. Поставленная цель достигается методом прямого прессования смеси лиофилизированного вакцинного штамма ТС-80 вируса бешенства с защитными компонентами (пептон, лактоза, пектин), пищевыми и формообразующими добавками. Положительный эффект достигается при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Лиофилизированный вакцинный
штамм ТС-80 вируса бешенства с
защитными компонентами	15,5-16,0
Молоко сухое обезжиренное	27,2-27,9
Лактоза	24,8-25,6
Порошок яичный	20,0-22,0
Мел тонкодисперсный Т-60	4,6-4,8
Мел тонкодисперсный Т 90	2,3-3,1
Стеарат кальция	Остальное

Способ получения вакцины заключается в следующем: смешивают вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток почки сайги, с защитными компонентами (40% пептона, 8% лактозы, 4% раствора пектина) в соотношении 1:2, затем полученную техническую жидкость (ТЖ) разливают во флаконы или кассеты, замораживают ТЖ, высушивают сублимацией. Лиофилизированный вакцинный штамм измельчают в шаровой мельнице, смешивают с пищевыми и формообразующими компонентами, а затем прессуют на пневматическом прессе при рабочем давлении 5-6 атм.

Примеры конкретного исполнения:

10 л суспензии вируса бешенства штамм ТС-80 с инфекционной активностью 7,2 lg МЛД₅₀/см 3 , выращенного в перевиваемой культуре клеток почки сайги, смешивают с 10 л защитными компонентами, состоящими из 40% раствора пептона и 8% раствора лактозы, к полученной смеси добавляют 20 л 4% раствора пектина. Полуфабрикат разливают в 5 л флаконы по 1,0 л, замораживают раскаткой при - 50°С и высушивают в аппарате лиофильной сушки в течение 42-44 часов. Лиофилизированный вакцинный штамм размалывают в шаровой мельнице с фарфоровыми шарами диаметром 1,0 см в течение 5 минут при скорости вращения барабана 50 об/мин. Для таблетируемой смеси используют размолотую вакцину с инфекционной активностью 6,5 lg МЛД₅₀/г, пищевые и формообразующие добавки из расчета 1 таблетка-приманка - 1 доза. С этой целью смешивают: 16 кг полученной вакцины, 27,9 кг сухого обезжиренного молока, 22 кг яичного порошка, 25,6 кг Д-лактозы, 4,8 кг мела Т-60, 3,1 кг мела Т-90, 0,6 кг стеарата кальция. Таблетируемую смесь тщательно перемешивают в шаровой мельнице с фарфоровыми шарами диаметром 1,0 см в течение 5-7 минут при скорости вращения барабана 50 об/мин и прессуют на пневматическом прессе при рабочем давлении 5 атм, прессуют таблетки размером: диаметр 3,0 см, высота 0,5 см; массой 6,3 г. Таблетки испытывают на прочность (при свободном падении с высоты 1 м таблетка оставалась целой), кислотоустойчивость в искусственном желудочном соке (при экспозиции в течение часа при 37°С в 0,1 н. растворе соляной кислоты инфекционная активность таблетки не снижалась по сравнению с первоначальной), контаминацию грибной и бактериальной микрофлорой (количество микробных тел в 1 см 3 таблетки не превышает 500), безвредность (пятикратные дозы, скормленные 5-месячным щенкам, не вызывали видимых клинических изменений в течение 30 суток). В сыворотках проб крови 5-месячных щенков, иммунизированных двукратно с интервалом 15 суток 1 дозой (таблеткой) вакцины, титр вируснейтрализующих антител составил через 30 суток после второй иммунизации от 1:8 до 1:22.

Вирус-вакцина для орального применения в виде приманок-таблеток сохраняла свои иммунобиологические характеристики в течение 12 месяцев при 6-8°С.

40 л суспензии вируса бешенства штамм ТС-80 с инфекционной активностью 7,2 lg МЛД₅₀/см 3 , выращенного в перевиваемой культуре клеток почки сайги, смешивают с 40 л защитными компонентами, состоящими из 40% раствора пептона и 8% раствора лактозы, к полученной смеси добавляют 80 л 4% раствора пектина. Полуфабрикат разливают в 5 л флаконы по 1 л или в поддоны по 12,5 л, замораживают при - 50°С и высушивают в аппарате лиофильной сушки в течение 72-78 часов. Лиофилизированный вакцинный штамм размалывают в шаровой мельнице с фарфоровыми шарами диаметром 1,0 см в течение 5 минут при скорости вращения барабана 50 об/мин. Для таблетируемой смеси используют сухую вакцину с инфекционной активностью 6,5 lg МЛД₅₀/г пищевые и формообразующие добавки из расчета 1 таблетка-приманка - 1 доза. С этой целью смешивают: 15,5 кг полученной вакцины, 27,2 кг сухого обезжиренного молока, 20 кг яичного порошка, 24,8 кг Д-лактозы, 4,6 кг мела Т-60, 2,3 кг мела Т-90, 5,6 кг стеарата Са. Таблетируемую смесь тщательно перемешивают в шаровой мельнице с фарфоровыми шарами диаметром 1,0 см в течение 5-7 минут при скорости вращения барабана 50 об/мин и прессуют на пневматическом прессе, при рабочем давлении 6 атм, таблетки размером: диаметр 3,0 см, высота 0,5 см; массой 6,5 г.

1000 таблеток раскладывали в отдельном районе госкомплекса "Завидово" вблизи мест обитания рыжих лисиц из расчета 1 доза (таблетка) на голову. Через 1,5 месяца проводили отстрел лис и определяли наличие вируснейтрализующих антител в пробах сывороток крови. При однократном применении приманок-таблеток в 55% случаев были обнаружены вируснейтрализующие антитела в титрах от 1:8 до 1:16. Вирус-вакцина сохраняла свои свойства в течение 12 месяцев при 6-8°С.

Представленные данные показывают, что предлагаемая технология изготовления вакцины прямым прессованием из смеси лиофилизированного вакцинного штамма ТС-80 с пищевыми и формообразующими компонентами позволяет получить таблетированную вирус-вакцину против бешенства с высокой иммунологической эффективностью при оральной иммунизации плотоядных животных. Предлагаемый способ технологичен, воспроизводим, таблетки представляют собой вакцину-приманку, в которой вакцинный вирус распределен равномерно и которая обладает привлекательностью для диких плотоядных и поедаемостью.

1. Rupprecht C.E., Shaddock J.S., Sanderlin D.W., Hanlon C.A., Niezgoda M. and Schumacher C.L.: Oral rabies vaccination of dogs Israel Journal Of Veterinary Medicine. Vol.53 4, 1998.

2. Патент РФ №2157700, 25.01.1999 г.

3. Патент РФ №2250781, 27.04. 2005 г.

1. Вирус-вакцина против бешенства, включающая лиофилизированный вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток почки сайги и защитные компоненты, отличающаяся тем, что дополнительно содержит пищевые и формообразующие компоненты в следующем соотношении, мас.%:

Лиофилизированный вакцинный
штамм ТС-80 вируса бешенства с
защитными компонентами	15,5-16,0
Молоко сухое обезжиренное	27,2-27,9
Лактоза	24,8-25,6
Порошок яичный	20,0-22,0
Мел тонкодисперсный Т-60	4,6-4,8
Мел тонкодисперсный Т 90	2,3-3,1
Стеарат кальция	Остальное

2. Способ изготовления вирус-вакцины против бешенства по п.1, включающий выращивание вакцинного штамма ТС-80 вируса бешенства в перевиваемой культуре клеток почки сайги, смешивание его с защитными компонентами, лиофильное высушивание и измельчение, отличающийся тем, что вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток почки сайги смешивают с защитными компонентами в соотношении 1:2, затем полученную техническую жидкость разливают во флаконы или кассеты, замораживают, лиофилизируют, далее измельчают в шаровой мельнице, смешивают с пищевыми и формообразующими компонентами в количестве по п.1, а затем прессуют на пневматическом прессе при рабочем давлении 5-6 атм.

Специфическую профилактику необходимо проводить не только среди собак, но в ряде регионов и среди сельскохозяйственных животных. В Бразилии, например, ежегодные потери крупного рогатого скота от бешенства составляют 30 000 голов, что свидетельствует о широких масштабах циркуляции вируса у векторных животных.

В настоящее время для специфической профилактики бешенства применяют инактивированные и живые вакцины. В медицине используют только инактивированные, слабоаллергенные или безаллергенные вакцины. Они в основном различаются по способу размножения вируса, концентрации и степени очистки вирусного антигена. Вирус размножают в культуре диплоидных клеток человека или в культуре клеток эмбриона птиц, или в культуре клеток почки обезьян. В качестве адъюванта применяют ГОА. Однако наиболее перспективным субстратом для производства медицинской вакцины оказались клетки Vero, которые обеспечивают более высокий выход вирусного антигена, чем первичные или диплоидные культуры клеток человека или животных. Клетки Vero можно выращивать на микроносителях, получая клеточные популяции высокой плотности. Культивирование этих клеток в ферментах большой емкости обеспечивает возможность крупномасштабного промышленного производства вакцины, что снижает ее стоимость. При изготовлении вакцины для человека на клетках Vero путем соответствующей очистки снижают до приемлемого уровня содержание ДНК клеточного происхождения.

Аналогичным образом готовят вакцину для животных, используя различные клеточные субстраты, в том числе ВНК-21, обеспечивающие высокое накопление вирусного антигена. Для изготовления инактивированной вакцины для животных вирус выращивают в культуре клеток ВНК-21, в том числе суспензионным методом с использованием ферментов, что позволило значительно снизить стоимость вакцины.

Систематически вакцинация собак и крупного рогатого скота значительно уменьшает случаи бешенства у животных и предотвращает заражение от них человека. Для иммунизации животных применяли живые и инактивированные вакцины. Живые вакцины из аттенуированных штаммов ERA, SAD, Flury и Roxane защищали 100% вакцинированных животных в течение не менее одного года. В Латинской Америке широкомасштабную вакцинацию собак проводили с использованием разных вакцин. Сейчас для иммунизации животных рекомендовано применять культуральную инактивированную адъювантную вакцину. Хорошие результаты получены при иммунизации диких плотоядных, в том числе диких собак, с помощью вакцины из вируса, размноженного в клетках ВНК-21 на микроносителе.

При изготовлении живых вакцин чаще всего использовали культуру клеток ВНК-21, в которой вакцинные штаммы накапливаются в титре 6,5—7,0 lg ТЦД50/мл. Два штамма фиксированного вируса бешенства были адаптированы к культурам клеток Vero и ВНК-21. Живые вакцины были высокоэффективны и полностью безопасны. Даже после интрацеребральных пассажей на собаках реверсии вирулентных свойств не отмечено. Безвредность штамма Flury-HEP/BHK-21 подтверждена в опытах на 207 диких животных 15 видов, обитающих в Европе. Антиген вакцинного штамма обнаружили в центральной нервной системе методом иммунофлуоресценции у 9,7% животных через 100 дней после прививки. Слабая репликация вируса в центральной нервной системе обнаружена у небольшой части (11,6%) животных. Живая вакцина из штамма SAD/BHK-21 (7,3 lg ТЦД50/мл) оказалась безвредной при введении собакам, кошкам и лисицам. Через семь дней после вакцинации вирус обнаружен в миндалинах у 2 из 36 лисиц и в подчелюстных железах некоторых кошек. После однократной вакцинации выраженную сероконверсию отмечали у 75% собак и 71% лисиц. Живой вакциной ERA прививали крупный рогатый скот в Южной Америке. Испытания, проводимые в экспериментальных и практических условиях, показали эффективность живых вакцин при парентеральном и оральном способах иммунизации домашних и диких плотоядных животных.

Живые вакцины при оральной иммунизации диких плотоядных в естественных условиях оказались незаменимыми. Установлена полная безопасность и эффективность оральной вакцинации лисиц живой вакциной из штамма SAD B-19, адаптированного к культуре клеток ВНК-21.

В Европе и Северной Америке ведется работа по вакцинации диких животных против бешенства. Два основных типа вакцин используют в настоящее время для вакцинации диких животных: живые вирусные вакцины и живые рекомбинированные вакцины для орального применения. Все используемые живые вакцины происходят из оригинального штамма SAD. Четыре из них (ERA, SAD-Bern, SAD-B19 и Внуково-32) патогенны для взрослых мышей при введении в мозг, мышцы и орально. SAG-вакцина из делеционного мутанта штамма SAD (потеря аргинина в 333 положении) патогенна только для новорожденных мышей при интроцеребральном и оральном введении.

Для оральной иммунизации диких плотоядных, кроме традиционных живых вакцин, предложены реплицирующиеся рекомбинантные вакцины с использованием вируса осповакцины в качестве вектора гена G гликопротеина вируса бешенства.

Для оральной иммунизации лисиц использовали рекомбинантный вирус осповакцины (WTGgR AB). В качестве приманки использовали куриные головы, содержащие 8,0 lg БОЕ рекомбинантного вируса. Иммунизация лисиц таким способом сопровождалась образованием высокого титра ВН-антител и обеспечивала их устойчивость к контрольному заражению в течение 18 мес. Аналогичные результаты получены на енотах при оральном и парентеральном методах введения рекомбинантного вируса осповакцины бешенства.