Заражение человека вирусом лейкоза

Возможно ли заражение человека лейкозом крс?

К ВОПРОСУ О ВОЗМОЖНОСТИ ЗАРАЖЕНИЯ ЧЕЛОВЕКА ВИРУСОМ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Вирус лейкоза крупного рогатого скота занимает одно из ведущих мест в структуре инфекционной патологии крупного рогатого скота в мире. В свете постоянного контакта большого количества людей с большим количеством зараженных животных и полученной от них пищевой продукции обсуждается вопрос о возможности заражения данным вирусом человека.

Лейкоз крупного рогатого скота — хроническая ре-тровирусная пролиферативная болезнь, возбудителем которой является вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС) — Bovine Leukemia virus (BLV), относящийся к семейству Retroviridae, роду Deltaretrovirus. Первое сообщение о болезни было сделано Leisering в 1871 году, а тремя годами позже Bollinger описал лейкоз КРС как ясно очерченную нозологическую форму. Сам вирус впервые выделен в 1969 г.. Природного резервуара ВЛ КРС не выявлено. Геном вируса полностью секвенирован в 1985 г.. У большинства животных, инфицированных ВЛ КРС (около 70%), заболевание протекает бессимптомно, приблизительно у трети животных развивается легкая форма — персистентный лимфоцитоз . Летальная лимфосаркома возникает менее чем у 0,6-5% зараженных животных, преимущественно взрослых (старше 4-5 лет). Основные подходы, применяемые для борьбы с ВЛ КРС, заключаются в идентификации и элиминации или изоляции заражен-ных ВЛ КРС животных.

В данной статье речь пойдет об одном из наиболее острых вопросов, связанных с ВЛ КРС, - возможностью заражения человека данным вирусом и последствий данного заражения. В природных условиях ВЛ КРС заражает коров, однако экспериментальные данные показывают, что тот же вирус легко поражает овец, у которых намного быстрее и с большей частотой развивается В-клеточная лимфосаркома. Также показана возможность заражения коз и кроликов. ВЛ КРС не заражает кошек, собак, обезьян и человека, хотя сероконверсия может появиться и у этих видов. Между тем известно, что зараженные коровы являются продуцентами вирусных частиц, а в их молоке и мясе обнаруживаются как инфицированные, так и опухолевые клетки. Было показано, что зараженные пищевые продукты не могут быть полностью очищены от вируса путем пастеризации или температурной обработки. Между тем эпидемиологические исследования показали, что потребление сырого молока от коров, инфицированных ВЛ КРС, не приводит к увеличению частоты заболеваемости гемобластозом у человека. Однако формально это не может быть исключено. Кроме того, выявлено четыре родственных ВЛ КРС вируса человека: Т-лимфотропный вирус человека типы 1-4 (HTLV-1, -2, -3, -4), относящиеся к тому же роду, что и ВЛ КРС. Вирусом HTLV-1 инфицировано около 20 млн людей во всем мире. У 2-3% из них развивались острая Т-клеточная лимфома, миелопатический спастический парапарез, нейровоспалительное заболевание центральной нервной системы. Оральный путь передачи HTLV был описан у человека, что указывает на потенциальную возможность оральной передачи ВЛ КРС человеку.

Ряд исследований показал наличие в крови человека антител к структурным белкам ВЛ КРС. В этих исследованиях использовались реакция связывания комплемента (РСК) и реакция иммунодиффузии (РИД). Использование более чувствительных, чем РКС или РИД, серологических методов — иммуноферментный анализ (ИФА) и иммуноблотинг, показало на выборке здоровых людей, контактирующих с коровами (257 человек), в 74% случаев присутствие специфических антител к ВЛ КРС. Однако наличие в сыворотке крови человека антител, которые реагируют с антигенами к ВЛ КРС, может просто указывать на присутствие в организме вируса или его фрагментов, т.к. потребление мяса, молока и молочных продуктов от зараженных животных может привести к иммунной реакции на вирусные антигены.

Наиболее важным вопросом является возможность присутствия ВЛ КРС в крови человека и его интеграция в геном человека. Существует ряд доказательств возможности интеграции вируса в геном человека in vitro. Показано, что клетки В-клеточной миеломы человека могут быть заражены ВЛ КРС, а зараженные в культуре клетки почки плода ягненка могут передавать вирус посредством клеточных контактов другим клеткам млекопитающих, включая клетки человека. В клетках, получивших геном вируса путем такой передачи, была обнаружена экспрессия вирусных белков.

В единственной работе, выполненной с использованием двух методов — ИФА и пролимеразной цепной реакции (ПЦР), — показано, что в выборке из 454 человек 12,5% (57/454) дали положительный ответ с ИФА. Давшие положительный ответ индивиды были протестированы с помощью ПЦР, и только 12,3% (7/57) были идентифицированы как носители провирусной ДНК. Результаты этой работы показывают, что интеграция вируса лейкоза КРС в геном клеток крови человека возможна, а процент такого события с эпидемиологической точки зрения достаточно высок.

В заключение хочется отметить, что хотя опасность развития лейкоза у человека в результате инфекции ВЛ КРС оценивается как маловероятная, нельзя быть уверенным в отсутствии негативных последствий инфицирования вирусом. Особенно негативные последствия могут быть при рекомбинации ВЛ КРС и HTLV, т.к. показано, что замена участка РНК ВЛ КРС, содержащего первичный и вторичный сигналы инкапсулирования на гомологичный регион HTLV-1 или -2, позволяет получить рекомбинантный вирус, способный реплицироваться в клеточной культуре. Гетерологичные РНК могут быть упакованы в частицы ВЛ КРС с помощью минимальных последовательностей укладки РНК. Вероятность такого события достаточно высока, поскольку сходство геномов ВЛ КРС и HTLV составляет 58%, т.е. для осуществления рекомбинации теоретически необходимо только одно условие — присутствие в клетке обоих провирусов. Появление рекомбинантного вируса в естественных условиях может крайне негативно сказаться на эпидемиологической обстановке, т.к. такой вирус, вполне вероятно, сможет с одинаковой эффек-тивностью поражать как КРС, так и человека.

- низкая чувствительность РСК и РИД,

- зависимость от иммунного и физиологического статуса животного,

- невозможность проведения тестирования животных моложе 6 месяцев (вследствие отсутствия иммунного ответа),

- возможность наличия антител к вирусу у здоровых животных (ложноположительные результаты).

Использование ПЦР для детекции ВЛ КРС является наиболее эффективным методом раннего выявления животных-вирусоносителей, т.к. позволяет выявлять зараженных животных на 7-14 день после рождения, обладает наибольшей чувствительностью по сравнению с используемыми серологическими и биохимическими методами, обладает низкой себестоимостью и простотой исполнения.

Принимая во внимание все вышесказанное, трудно отрицать вероятность распространения вируса лейкоза крупного рогатого скота, а также необходимость дальнейшего его изучения с целью выявления подходов к противовирусной терапии и ранней диагностике вируса лейкоза крупного рогатого скота.

Т-лимфотропный вирус человека (англ. Human T-lymphotropic virus, HTLV) - серотип вида Т-лимфотропного вируса из рода дельта-ретровирусов (Deltaretrovirus). Связан с такими злокачественными новообразованиями лимфоидной и кроветворной тканей, как Т-клеточный лейкоз и Т-клеточная лимфома. Более короткое название – HTLV 1 и 2 типа. Обследование на антитела к HTLV позволяет выявить инфицированных людей. Инфицирование бывает бессимптомным и может протекать в таком виде долгое время, человек при этом является потенциальным распространителем инфекции (при переливании крови или донорстве органов).

Антитела при Т-клеточной лимфоме, антитела при HTLV I - ассоциированной миелопатии (тропическом спастическом парапарезе), вирус HTLV I и II типа (ретровирусы типа С).

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Т-лимфотропный вирус представляет собой штамм вируса, поражающий в основном взрослых людей. Вероятно, что он принимает участие в патогенезе некоторых демиелинизирующих заболеваний, например тропического спастического парапареза. Геном Т-лимфотропного вируса человека является диплоидным и состоит из двух копий одноцепочечных РНК, на которых в организме хозяина синтезируется одноцепочечная и далее двуцепочечная ДНК. Двуцепочечная ДНК далее интегрируется в геном хозяина в виде провируса.

HTLV I - Т-лимфотропный вирус человека первого типа (HTLV-I), также известный как вирус Т-клеточной лимфомы взрослых (ТЛВЧ-1), ассоциирован с такими заболеваниями, как HTLV-I-связанная миелопатия, гиперинфекция, вызванная круглым червём Strongyloides stercoralis, а также вирусная лейкемия. По некоторым данным, у 4-5 % заражённых появляются злокачественные опухоли в результате активности этих вирусов.

HTLV-II - Т-лимфотропный вирус человека второго типа (ТЛВЧ-2, HTLV-II) близкородственен Т-лимфотропному вирусу человека первого типа, имеет гомологию генома около 70 % по сравнению с HTLV-I.

Было выяснено, что возбудителем острого Т-клеточного лейкоза у человека являлся вирус, который назвали вирусом Т-клеточной лейкемии человека - HTLV I. По существующей классификации он был отнесен к классу ретровирусов.

HTLV-1 стал первым обнаруженным ретровирусом человека и был отнесен к подклассу онковирусов, т.е. вирусов, вызывающих рак. Несмотря на то что большинство попыток выделить ретровирусы из опухолевых клеток человека оказались безуспешными, установлено, что, по крайней мере, один вид ретровирусов вызывает злокачественное новообразование у человека. Это Т-лимфотропный вирус человека типа 1 - возбудитель Т-клеточного лейкоза - лимфомы взрослых. В отличие от онкогенных ретровирусов животных, Т-лимфотропный вирус человека типа 1 не содержит онкогенов, а его трансформирующие свойства связывают с белком Tax.

Т-лимфотропный вирус человека типа 1 передается от матери к ребенку (особенно через молоко), при половых контактах (чаще от мужчины к женщине), а также при переливании инфицированной крови и использовании инфицированных игл. Чаще всего заражение происходит в перинатальном периоде. В отличие от ВИЧ, который может передаваться с бесклеточным материалом, Т-лимфотропный вирус человека типа 1 менее заразен и для его передачи обычно необходим контакт между клетками.

Т-лимфотропный вирус человека типа 1 широко распространен в юго-западной части Японии и на острове Окинава, где заражено более 1 млн человек. Несмотря на высокий риск заражения, здесь выявляют только 500 случаев Т-клеточного лейкоза-лимфомы взрослых ежегодно.

Хотя ранние эпидемиологические исследования выявили растущее число носителей антител к Т-лимфотропному вирусу человека типа 1 среди инъекционных наркоманов, применение более специфичных методов серодиагностики показало, что в подавляющем большинстве случаев инфекция у инъекционных наркоманов обусловлена Т-лимфотропным вирусом человека типа 2.

Т-клеточный лейкоз-лимфома взрослых редко возникает у лиц, инфицированных при переливании компонентов крови; в то же время около 20 % больных тропическим спастическим парапарезом заражается через кровь. Развитие прогрессирующей спастической или атаксической миелопатии у носителей антител к Т-лимфотропному вирусу человека типа 1, вероятно, обусловлено прямым воздействием вируса на нервную систему; похожее заболевание может быть вызвано ВИЧ или Т-лимфотропным вирусом человека типа 2. Изредка у больных с тропическим спастическим парапарезом антитела к вирусу отсутствуют в сыворотке, но обнаруживаются в спинномозговой жидкости.

У носителей Т-лимфотропного вируса человека типа 1 вероятность заболеть в течение жизни Т-клеточным лейкозом-лимфомой взрослых составляет 2-5%, такой же риск развития тропического спастического парапареза. Эти заболевания встречаются только там, где распространен Т-лимфотропный вирус человека типа 1, причем у 95 % больных в сыворотке присутствуют антитела к этому вирусу.

Т-клеточный лейкоз-лимфома взрослых развивается через много (20 и более) лет после заражения. В половине случаев тропического спастического парапареза продолжительность латентного периода чаще составляет около 3 лет.

T-лимфотропный вирус человека типа 2, возможно, вызывает небольшую часть случаев волосатоклеточного лейкоза и различных Т-клеточных лимфом и лейкозов. Хотя Т-лимфотропный вирус человека типа 2 был выделен у одного больного с Т-клеточным вариантом волосатоклеточного лейкоза, его этиологическую связь с каким-либо заболеванием доказать не удалось. Однако, по некоторым данным, Т-лимфотропный вирус человека типа 2 может играть роль в развитии ряда заболеваний нервной системы, крови и кожи. Эти факты требуют проверки, особенно с учетом нечеткого различения Т-лимфотропных вирусов человека типа 1 и 2 в ранних исследованиях.

Инфекция HTLV-II эндемична для коренного населения Южной Америки, кроме того, встречается повсеместно у лиц, употребляющих наркотики внутривенно.

Вирус HTLV-II впервые был выделен от больного с волосатоклеточной лейкемией, однако с тех пор способность вируса вызывать лимфопролиферативные заболевания не подтвердилась. Патогенез HTLV-II-инфекции связывают с развитием HAM/TSP и других неврологических синдромов, а также пневмонии, бронхита и артрита. В Европе и США HTLV-II часто выявляют у ВИЧ-инфицированных лиц.

Лабораторная диагностика HTLV-I/II-инфекции основана на выявлении антител к вирусам, серологические свойства которых имеют значительное сходство; для скрининга используются методы ИФА и агглютинации латексных частиц. Подтверждающий иммуноблотинг с применением рекомбинантных антигенов позволяет различить эти две инфекции. Для уточнения диагноза дополнительно используется метод ПЦР; количественный вариант ПЦР позволяет оценить вирусную нагрузку, которая коррелирует с вероятностью развития ATL и TSP у носителей HTLV-I.

Сходство в строении Т-лимфотропных вирусов человека типа 1 и 2 до недавнего времени препятствовало созданию высокоспецифичных серологических методов, поэтому при эпидемиологических исследованиях нередко эти вирусы не разделяли. В результате сложилось ошибочное мнение, что среди инъекционных наркоманов преобладают носители Т-лимфотропного вируса человека типа 1. Однако обследование больших групп инъекционных наркоманов с применением высокоспецифичных серологических методов показало, что в подавляющем большинстве случаев они заражены Т-лимфотропным вирусом человека типа 2. Поскольку среди инфицированных Т-лимфотропным вирусом человека типа 2 значительно преобладают женщины, сделан вывод, что этот вирус легче передается от мужчин к женщинам, чем от женщин к мужчинам.

Обнаружение заболевания основывается на серологической диагностике инфицирования вирусом HTLV I и II типа и состоит в скрининговом обследовании, за которым следуют подтверждающие и уточняющие тесты. Обычно в качестве скрининговых тестов применяют иммуноанализ (ИФА), при получении повторно реактивных результатов в скрининговых тестах проводят подтверждение. Подтверждающими тестами для результатов ИФА тестов могут быть вестерн-блот или радиоиммунопреципитация.

Когда назначается исследование?

Наличие симптомов злокачественных новообразований лимфоидной и кроветворной тканей (Т-клеточный лейкоз и Т-клеточная лимфома).
Наличие симптомов демиелинизирующих заболеваний, например тропического спастического парапареза.
Наличие контакта с установленным носителем Т-лимфотропного вируса человека типа 1 и 2.
Лицам из групп риска – наркоманам, жителям эндемичных областей, после возможного контакта с инфицированными, при незащищенных половых связях (особенно во время пребывания в странах Тихоокеанского региона и Карибского моря). Специфических симптомов у носителей инфекции может не быть, но слабость в ногах и руках, признаки мышечной дистрофии после поездки за рубеж или после незащищенного контакта - показания для проверки на инфицирование.

Для чего используется исследование?

Наиболее точное определение причины злокачественных новообразований лимфоидной и кроветворной тканей, таких как Т-клеточный лейкоз и Т-клеточная лимфома, демиелинизирующих заболеваний, например тропического спастического парапареза.
Ранняя диагностика Т-лимфотропного вируса человека типа 1 и 2.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

отсутствие HTLV I / II- инфекции.

потенциально возможная HTLV I / II- инфекция или бессимптомное вирусоносительство.

Что может влиять на результат?

У пациентов с онкопатологией в ряде случаев (примерно в 3 %) возможен ложноположительный результат.

Вирус второго типа не имеет прямой связи с каким-либо заболеванием, но есть данные, что он может вызывать определенные неврологические расстройства и гематологические изменения.
Исследование позволяет выявить инфицированных людей и включить их в группу риска. Наличие антител к вирусам не обязательно приводит к появлению клинической симптоматики, поэтому важно как можно раньше выявить инфекцию, чтобы не допустить ее дальнейшего распространения.

Кто назначает исследование?

Невропатолог, терапевт, врач общей практики, инфекционист, гематолог.

Литература

Рак крови, белокровие, лейкемия, лейкоз… Эти термины-синонимы еще сравнительно назад были мало известны немедикам. К сожалению, сегодня — из-за широкого распространения болезни — они стали общеизвестными. Впервые эта болезнь была описана немногим более ста лет назад великим немецким патологом Рудольфом Вирховом, наблюдавшим ее у человека. Вскоре другие исследователи обнаружили подобное же заболевание и у животных.

Об одинаковой природе лейкозов и злокачественных опухолей говорят многие факты. Картина болезни в том и другом случаях во многом одинакова. Кроме того, лейкозы и опухоли могут быть искусственно вызваны одними и теми же химическими веществами или ионизирующей радиацией. Биохимические изменения при лейкозах и опухолях весьма сходны. Химические вещества и некоторые другие факторы, подавляющие рост лейкозных тканей, обычно тормозят и рост опухолей. Поэтому сегодня абсолютное большинство специалистов твердо придерживается того мнения, что лейкозы — одна из своеобразных форм злокачественных (раковых) новообразований.

Лейкоз становится все более и более частой болезнью. Параллельно с распространением лейкозов человека более частыми становятся случаи подобных заболеваний и у животных. Причем у последних распространенность заболевания растет, возможно, более быстрыми темпами, чем у людей.

Совершенно очевидно, что предупреждение и излечение лейкозов (как и других злокачественных новообразований) могут быть до конца успешными лишь тогда, когда станет известной истинная причина возникновения болезни. За последние десятилетия в ее установлении достигнуты значительные успехи.

Роль химических веществ в возникновении болезни незначительна. Более опасна в этом плане ионизирующая радиация. Это доказано многочисленными исследованиями на лабораторных животных. Это же подтверждается и тем фактом, что в Японии, например, люди, пережившие взрывы атомных бомб, болели белокровием в 11—18 раз чаще, чем те, кто не подвергался воздействию радиации.

Однако в последние годы все больше укрепляется та точка зрения, что радиация приводит к развитию лейкозов не непосредственно, а лишь активизируя деятельность вирусов — возбудителей лейкозов, которые и до той поры находились в организме животного или человека.

Вирусная теория происхождения рака получила свое экспериментальное обоснование в ходе изучения опухолей птиц. Первым злокачественный новообразованием, для которого еще в 1908 году была доказана вирусная природа возникновения, был лейкоз кур. Сегодня вирусы-возбудители нескольких видов хорошо изучены. Под электронным микроскопом можно увидеть их характерную структуру; их можно культивировать вне организма больных птиц; найден способ получения специальной сыворотки. Важно отметить, что вирус одного из видов лейкозов, а именно лимфоматоза кур, может передаваться от больных птиц к здоровым со слюной, через воду и даже через воздух — капельным путем, а от родителей к детям — через яйцеклетки.

Вторым заразным злокачественным новообразованием явились некоторые виды опухолей у мышей, крыс, морских свинок, кроликов, хомяков и хорьков, первопричиной которых оказался вирус полиомы.

Самые большие успехи вирусной теории рака связаны с изучением вирусов лейкозов мышей и крыс. (Мыши и крысы — лучшие объекты онкологических исследований; лейкозы мышей по всем своим свойствам весьма близки лейкозам человека.)

Первый вирус лейкоза мышей был открыт Людвигом Гроссом в 1950 году. К настоящему времени описано 15 разновидностей вирусов лейкозов мышей. Все они имеют те или иные различия, но в то же время и некоторые черты сходства.

В первых опытах лейкозы у мышей удавалось получить только в том случае, если вирус вводился новорожденным мышатам, причем только у мышей определенных пород. В дальнейшем появилась возможность вызывать лейкозы при введении вируса взрослым мышам различных пород и даже животным других видов — крысам, хомякам.

Активность вирусов была повышена до такой степени, что они приводили к развитию лейкозов у 100 процентов животных уже через несколько недель после заражения. Вирусы удавалось обнаруживать не только в тканях животных, больных лейкозом, но и в опухолевых тканях.

Величина лейкозных вирусов — около 100 миллимикрон. Они разрушаются при высокой температуре, сохраняются при низкой, размножаются в культурах тканей вне организма, дают образование специфических антител, нейтрализуются антисыворотками — это позволяет создать против них вакцины — и имеют другие характерные для вирусов черты.

Лейкозные вирусы передаются от животного к животному самыми различными путями, в том числе и с молоком матери. Некоторые вирусы передаются от зараженных матерей их потомству еще в материнской утробе.

С той поры, как была установлена вирусная природа лейкозов мышей и крыс, начались активные поиски вирусных возбудителей лейкоза человека и других животных.

Серьезные доказательства были получены в отношении участия вируса в возникновении лейкоза крупного рогатого скота — заболевания, которое получает все большее и большее распространение. Заболевание это тем более опасно, что, подобно обычным инфекционным заболеваниям, передается от больных животных к здоровым при контакте.

Недавно появились экспериментальные данные, подтверждающие предположение о существовании вирусов — возбудителей лейкоза человека. С помощью электронного микроскопа в лейкозных тканях и крови человека удается увидеть характерные вирусные частицы, которые имеют много сходных черт с вирусами лейкозов кур, мышей и крыс.

Очень важно, что в иммунологических реакциях доказана их специфичность для лейкоза. Трудность окончательного доказательства вирусной природы лейкозов человека связана с тем, что испытания на животных имеют некоторые недостатки, а какие-либо иные признаки, реакции, тесты, по которым мы могли бы судить о присутствии вируса лейкоза человека в данной среде, отсутствуют. Заражение же человека, по понятным причинам, исключено.

Однако то обстоятельство, что лейкозы у многих животных, безусловно, вызываются вирусами, делает биологически абсурдным предположение о невирусной причине лейкозов человека. Все имеющиеся факты говорят в пользу вирусной природы лейкозов человека. И если это будет доказано окончательно, откроются ясные перспективы предупреждения заболевания лейкозами и избавления людей от этого тяжелого недуга. Мы имеем блестящий тому пример: выделение вируса полиомиелита привело к реальной перспективе полного искоренения этой болезни.

Есть прецеденты и в борьбе с возбудителями лейкозов. Большинство вирусов лейкозов мышей подавляется специфическими антисыворотками. Против некоторых из них найдены соответствующие вакцины. Это показывает, что в случае выделения вируса лейкоза человека откроется возможность для иммунопрофилактики и иммунотерапии болезни.

Исключительно важное значение имеет изучение путей распространения вирусов лейкозов животных и человека и выяснение возможности передачи болезни от одного вида животных к другому и особенно от животных к человеку.

Выше мы уже говорили о том, что лимфоматоз кур — заразное заболевание, передающееся при контакте больных птиц со здоровыми.

У мышей и крыс контактная передача лейкоза не описана. Наиболее важные пути естественного сохранения и распространения вирусов лейкозов у этих животных — передача их от одного поколения к другому через зародышей и с молоком матери. Возможно также заражение через желудочно-кишечный тракт.

Большое внимание уделяется в последнее время изучению путей распространения лейкозов крупного рогатого скота. Это особое внимание вполне понятно: ведь человек по условиям жизни и питания повседневно связан с крупным рогатым скотом. Отмечено, что эта болезнь может распространяться контактным путем. В здоровых стадах, если в них вводили больных животных, лейкозом заболевали многие особи. Болезнь передается и от поколения к поколению — от больных коров к телятам и в материнской утробе и с материнским молоком. Отмечена даже передача болезни от отца к потомству — со спермой быка.

Таким образом, пути распространения вируса лейкоза и заболеваний лейкозом для различных видов животных оказываются в основном сходными. Этот факт заставляет обратить самое серьезное внимание на выяснение возможных путей распространения лейкоза человека. Не менее важно исследовать, какова степень опасности возникновения лейкоза у людей в результате существующего (подчас тесного) контакта их с животными.

В первую очередь, естественно, надо обратить внимание на продукты питания человека — молоко, яйца, мясо крупного рогатого скота и птиц. До настоящего времени этот вопрос не был предметом глубоких и широких исследований, и поэтому достаточных экспериментальных данных для ответа на него пока нет. Однако в разных странах и в ряде областей их отмечен параллелизм между высокой заболеваемостью лейкозом крупного рогатого скота и людей, например, в штате Миннесота в США.

Очень мало пока известно о возможных переносчиках вирусов лейкозов. Исключительное значение для проблемы возникновения и распространения рака человека в целом имеет изучение злокачественной лимфомы в тропической Африке. Эта болезнь особенно тяжело поражает детей, обычно в возрасте 3—6 лет. Злокачественная опухоль выявляется в области нижней челюсти и быстро метастазирует по организму.

Заболевание распространяется поясом от восточного до западного побережья тропической Африки, в низменных местностях. Область распространения его соответствует области обитания определенного вида москитов. Производятся попытки выделить вирус, ответственный, как полагают специалисты, за возникновение лимфомы и переносимый насекомыми от больных людей к здоровым. Интересно, что в тех же районах отмечено распространение аналогичного заболевания у обезьян. Причем от больных обезьян удается изолировать вирус, вызывающий это заболевание.

Если вирусная природа лимфомы африканских детей будет доказана и установлена передача вируса с насекомыми, это будет принципиальным доказательством вирусной природы опухолей человека вообще и возможности их распространения подобно инфекционным заболеваниям. Нет необходимости указывать, какое это будет иметь значение для решения всей проблемы лейкоза и рака человека.

Однако не следует панически бояться вирусов лейкоза и других злокачественных опухолей. Надо помнить, что практически они не заразны. Об этом свидетельствует весь опыт медицины.

Опухолеродные вирусы обладают очень слабой болезнетворностью, и только немногие организмы с особой наследственной предрасположенностью к лейкозам и опухолям — при ряде дополнительных нарушений в организме — могут заболеть. Ничего похожего на распространение острых инфекций при этом заболевании не существует. Более того, следовало бы страстно желать, чтобы природа лейкозов и опухолей оказалась вирусной и возбудитель этих болезней был найден как можно скорее. Ведь общеизвестно, что нет вирусного заболевания, которое рано или поздно не удалось бы ликвидировать. Надо надеяться, что настойчивые усилия ученых увенчаются полным успехом.

Лейкемия кошачьих представляет собой широко распространенное вирусное заболевание кошек (FeLV). FeLV был открыт в 1964 г. (Jarret et al., 1964), он является природным ретровирусом. В некоторых странах этот вирус является основной причиной смерти кошек, связанной с инфекционными заболеваниями.

В клинических исследованиях не удалось выявить взаимосвязи между лейкемией человека и FeLV (Sordillo and Markovich, 1982), однако in vitro клетки костного мозга человека могут быть инфицированы этим вирусом (Morgan et al., 1993). Инфицирование FeLV может привести к персистентной инфекции и носительству. (Hoover et al., 1975; Lutz et al., 1980; Hoover and Mullins, 1991). Большинство кошек с персистентной инфекцией погибают в течение 4 лет после инфицирования (McClelland et al., 1980). В этом случае кошки приобретают иммунитет к вирусу после первой вирусемии и считаются иммунными к реинфекции (Charreyere and Pedersen, 1991). Другая же группа кошек становится иммунной после первого воздействия FeLV, клинические признаки инфекции у них отсутствуют (Rojko and Kociba, 1991).

FeLV распространяется горизонтально и вертикально. Вирус передаётся со слюной, кровью, слезной жидкостью, молоком и другими жидкостями организма. Для распространения инфекции требуется непосредственный контакт между кошками (Hardy 1981). Имеются также данные о трансплацентарной передаче (Hoover and Mullins, 1991). Возможен и альтернативный путь передачи инфекции с участием кровососущих паразитов, которые могут переносить вирус при отсутствии непосредственного контакта между кошками.

Известно, что блохи являются переносчиками бактерий, риккетсий и даже ленточных червей (Hinaidy, 1991; Mehlhorn, 2001). Однако о том, способны ли блохи быть переносчиками вирусов, почти ничего не известно. В данном исследовании была изучена потенциальная способность кошачьей блохи C. felis переносить вирус лейкоза кошек.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Блохи были выращены в искусственных условиях, близких к естественным условиям обитания блох на теле собаки. (Фривилл, США). Температуру воздуха внутри искусственной среды поддерживали на уровне 39 С, что приводило к тому, что температура питательной среды (аналога крови собаки) составляла 37 С.

Вирусную РНК выделяли из образцов крови с помощью набора вирусных РНК QiAamp Ò в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя (Qiagen, Hilden, Германия). Для получения вирусной РНК блох замораживали в жидком азоте и измельчали в стальной ступке. Измельченный материал смешивали с буферным раствором и выделяли вирусную РНК.

Для выделения вирусной РНК из экскрементов блох, экскременты перемешивали с буферным раствором и продолжали выделение. Для того чтобы не допустить загрязнения ДНК, все препараты затем обрабатывали ДНК-азой I из не содержащего ДНК Набора (Ambion, Остин, США). Обратную транскрипцию вирусной РНК осуществляли с помощью Набора для обратной транскрипции – полимеразной цепной реакции, предназначенного для синтеза 1-нитевой к ДНК (Roche, Индианаполис, США). Амплификацию ДНК выполняли в пробирках вместимостью 100 мкл в объеме 50 мкл, с использованием набора Taq PCR Core Kit (Qiagen, Hilden, Германия).

Первоначально популяцию блох кормили в течение 24 часов кровью, инфицированной FeLV. Блохи и экскременты были протестированы на наличие вирусной РНК. Затем одну популяцию блох кормили в течение 24 часов (этап 1), а вторую популяцию – в течение 5 часов (этап 2) неинфицированной кровью. После этого были протестированы на наличие вирусной РНК блохи и их экскременты (тест на поглощение вируса) и два полученных в результате образца крови (тест на передачу вируса). Во время третьего кормления блох вновь перенесли на свежую неинфицированную кровь и кормили в течение 24 часов (этап 3) и 5 часов (этап 4), соответственно. Блох, экскременты и полученные в результате образцы крови тестировали на наличие РНК FeLV, аналогично тестированию после 2-го кормления.

Во время первого кормления группу, состоявшую из 110 блох, инфицировали FeLV путём 24-часового кормления 2 мл крови инфицированной кошки. Для подтверждения успешной передачи вируса 10 блох и все экскременты данной группы были протестированы на наличие РНК FeLV.

Вирусная РНК была обнаружена в обоих образцах (блохах и их экскрементах). Произошло выделение с экскрементами FeLV, который попал в организм блохи с питательной средой. Далее оставшиеся 100 инфицированных блох были разделены на 2 группы, и группу 1, состоявшую из 50 блох, кормили в течение 24 часов, а группу 2 – в течение 5 часов 300 миллилитрами неинфицированной крови здоровой кошки. Через определенное время 10 блох и экскременты каждой группы тестировали на FeLV.

Вирусная РНК была обнаружена в блохах из обеих групп и их экскрементах. РНК FeLV можно было обнаружить в течение 5 и 24 часов, соответственно, после проникновения ее в блох и кормления их неинфицированной кровью. Чтобы узнать, произошла ли передача FeLV, была изучена кровь, оставшаяся после 1-го и 2-го кормления. Вирусная РНК была обнаружена в обоих образцах ранее неинфицированной крови, полученной от клинически здоровой кошки. Это доказывает, что кошачья блоха С. felis может выполнять роль переносчика РНК вируса лейкемии кошачьих in vitro.

Вирусную РНК можно было обнаружить в блохах и их экскрементах в период до 24 часов. Кроме того, блохи успешно переносили РНК FeLV непосредственно из инфицированного образца крови в неинфицированный образец.

Во время третьего кормления блох вновь кормили свежей неинфицированной кровью. После 5 и 24 часов, соответственно, блох, экскременты и образцы крови исследовали на наличие FeLV. После этого третьего кормления вирусная РНК не обнаруживалась ни в блохах, ни в экскрементах, ни в образцах крови. РНК FeLV можно было обнаружить в блохах в период до 24 часов после кормления. В течение этого времени вирусная РНК также выделялась с экскрементами блох. Кроме того, блохи могли передавать РНК FeLV непосредственно из одного образца крови в другой, являясь, таким образом, переносчиком вируса. При проведении всех экспериментов в качестве контроля была использована неинфицированная кровь. Ни в одном эксперименте РНК FeLV не обнаружена.

Известно, что вирус лейкемии кошачьих передается от больной кошки к здоровой со слюной (при облизывании), с кровью (при царапании или драке) и другими жидкостями организма (Hardy et al., 1975). Для распространения вируса в группе животных достаточно близкого контакта между здоровыми и инфицированными кошками (Essex et al., 1977). Результаты нашей работы показывают возможность другого, не связанного с тесным контактом кошек, способа передачи вируса лейкоза кошек посредством кошачьей блохи C. felis. Некоторые виды блох могут жить на разных животных, а также питаться кровью человека. Таким образом, некоторые инфекции могут передаваться между видами, например, от крысы к человеку (чума). Недавно обсуждалась даже возможное участие блох в инфицировании человека рикетсиями (Rickettsia felis) (Richter et al., 2002).

Однако, пока достаточно немногое известно о блохах как переносчиках вирусов. Имеются сообщения о том, что некоторые вирусы могут оставаться активными в организме блохи в течение, по крайней мере, 24 часов (Smetana 1965). Один из выводов данного исследования заключается в подтверждении возможности выделения с экскрементами блох вирусной РНК после 24-часового питания их FeLV – вирусоположительной кровью. Этот факт может приобрести большое значение при рассмотрении различных возможностей инфицирования FeLV. Вполне возможно, что для здоровой кошки существует риск заражения через поврежденную кожу, на которой находятся экскременты блох, после укусов блохами или во время драки с другими кошками. Другим результатом нашего исследования является обнаружение возможности прямой передачи FeLV блохами во время укусов. Вирус лейкемии кошек может проникнуть в пищеварительный тракт блох и выделиться с экскрементами; возможна также прямая передача вируса, когда блоха питается кровью кошки.

Остается неясным, имеет ли такой путь инфицирования клиническое значение in vivo, и для ответа на этот вопрос необходимы дальнейшие исследования. В силу того, что давно известна опасность передачи различных заболеваний при укусах блох человеку и домашним животным, следует говорить о важности профилактических мер против заражения домашних животных блохами.

Читайте также: