Для идентификации клещевого энцефалита

Клещевой вирусный энцефалит – острое инфекционное вирусное заболевание, с преимущественным поражением центральной нервной системы. Последствия заболевания: от полного выздоровления до нарушений здоровья, приводящих к инвалидности и смерти.

Как можно заразиться?

Возбудитель болезни (арбовирус) передается человеку в первые минуты присасывания зараженного вирусом клеща вместе с обезболивающей слюной

- при посещении эндемичных по КВЭ территорий в лесах, лесопарках, на индивидуальных садово-огородных участках,

- при заносе клещей животными (собаками, кошками) или людьми – на одежде, с цветами, ветками и т. д. (заражение людей, не посещающих лес),

а также, при употреблении в пищу сырого молока коз (чаще всего), овец, коров, буйволов, у которых в период массового нападения клещей вирус может находиться в молоке. Поэтому в неблагополучных территориях по клещевому энцефалиту необходимо употреблять этот продукт только после кипячения. Следует подчеркнуть, что заразным является не только сырое молоко, но и продукты, приготовленные из него: творог, сметана и т.д.,

при втирании в кожу вируса при раздавливании клеща или расчесывании места укуса.

В настоящее время заболевание клещевым энцефалитом регистрируется на многих территориях России, где имеются основные его переносчики – клещи. Наиболее неблагополучными регионами по заболеваемости являются Северо-Западный, Уральский, Сибирский и Дальне-Восточный регионы, а из прилегающих к Московской области - Тверская и Ярославская области. Территория Москвы и Московской области (кроме Дмитровского и Талдомского районов) является благополучной по КВЭ.

Какие основные признаки болезни?

Для заболевания характерна весенне-осенняя сезонность, связанная с периодом наибольшей активности клещей. Инкубационный (скрытый) период длится чаще 10-14 дней, с колебаниями от 1 до 60 дней.

Болезнь начинается остро, сопровождается ознобом, сильной головной болью, резким подъемом температуры до 38-39 градусов, тошнотой, рвотой. Беспокоят мышечные боли, которые наиболее часто локализуются в области шеи и плеч, грудного и поясничного отдела спины, конечностей. Внешний вид больного характерен – лицо гиперемировано, гиперемия нередко распространяется на туловище.

Кто подвержен заражению?

К заражению клещевым энцефалитом восприимчивы все люди, независимо от возраста и пола.

Наибольшему риску подвержены лица, деятельность которых связана с пребыванием в лесу – работники леспромхозов, геологоразведочных партий, строители автомобильных и железных дорог, нефте- и газопроводов, линий электропередач, топографы, охотники, туристы. Горожане заражаются в пригородных лесах, лесопарках, на садово-огородных участках.

Как можно защититься от клещевого вирусного энцефалита?

Заболевание клещевым энцефалитом можно предупредить с помощью неспецифической и специфической профилактики.

Неспецифическая профилактика включает применение специальных защитных костюмов (для организованных контингентов) или приспособленной одежды, которая не должна допускать заползания клещей через воротник и обшлага. Рубашка должна иметь длинные рукава, которые у запястий укрепляют резинкой. Заправляют рубашку в брюки, концы брюк - в носки и сапоги. Голову и шею закрывают косынкой.

Для защиты от клещей используют отпугивающие средства – репелленты, которыми обрабатывают открытые участки тела и одежду.

Перед использованием препаратов следует ознакомиться с инструкцией.

Каждый человек, находясь в природном очаге клещевого энцефалита в сезон активности насекомых, должен периодически осматривать свою одежду и тело самостоятельно или при помощи других людей, а выявленных клещей снимать.

Меры специфической профилактики клещевого вирусного энцефалита включают:

- профилактические прививки против клещевого энцефалита проводятся лицам отдельных профессий, работающим в эндемичных очагах или выезжающих в них (командированные, студенты строительных отрядов, туристы, лица, выезжающие на отдых, на садово-огородные участки);

- серопрофилактику (непривитым лицам, обратившимся в связи с присасыванием клеща на эндемичной по клещевому вирусному энцефалиту территории, проводится только в ЛПО).

Все люди, выезжающие на работу или отдых в неблагополучные территории, должны быть обязательно привиты.

Где и как можно сделать прививку от клещевого вирусного энцефалита?

В Российской Федерации зарегистрированы несколько вакцин против клещевого вирусного энцефалита. Прививку от клещевого энцефалита можно сделать в прививочных пунктах на базах поликлиник, медсанчастей, здравпунктов учебных заведений после консультации врача.

Следует запомнить, что завершить весь прививочный курс против клещевого энцефалита необходимо за 2 недели до выезда в неблагополучную территорию.

Что делать и куда обращаться, если Вы не привиты и находились на опасной неблагополучной по клещевому энцефалиту территории и произошло присасывание клеща?

Не привитым лицам проводится серопрофилактика – введение человеческого иммуноглобулина против клещевого энцефалита в течение 96 часов после присасывания клещей и обращения в медицинские организации по показаниям.

Лучше это сделать у врача в травматологическом пункте в поликлинике по месту жительства или любом травматологическом пункте

Снимать его следует очень осторожно, чтобы не оборвать хоботок, который глубоко и сильно укрепляется на весь период присасывания.

При удалении клеща необходимо соблюдать следующие рекомендации:

- захватить клеща пинцетом или обернутыми чистой марлей пальцами как можно ближе к его ротовому аппарату и держа строго перпендикулярно поверхности укуса повернуть тело клеща вокруг оси, извлечь его из кожных покровов,

- место укуса продезинфицировать любым пригодным для этих целей средством (70% спирт, 5% йод, одеколон),

- после извлечения клеща необходимо тщательно вымыть руки с мылом,

- если осталась черная точка (отрыв головки или хоботка) обработать 5% йодом и оставить до естественной элиминации.

Клещевой энцефалит – заболевание вирусной природы, которое обладает тяжелыми формами и может провоцировать паралич и даже летальный исход. Такая болезнь поражает центральную нервную систему человека, провоцирует воспалительные процессы в веществе головного мозга – это может привести к проблемам с работой любого его отдела. Важно своевременно провести лечение, диагностику, профилактику клещевого энцефалита.

Почему происходит поражение

Чаще всего эпидемию клещевого энцефалита диагностируют в весеннее и осеннее время. Это связывают с активностью клеща – именно эти насекомые, живущие в лесах и полях, являются главным источником болезни. Важно помнить, что в разных областях страны уровень заболеваемости клещевым энцефалитом значительно отличается.

Клещевой энцефалит - это типичный тип заболевания, при котором вирус воздействует на само вещество головного либо спинного мозга. При таком состоянии никаких дополнительных инфекционных патологий и воспалений не выявляется.

Основные симптомы заболевания

Чтобы предотвратить возможные осложнения заболевания, важно рассмотреть лечение, симптомы и диагностику клещевого энцефалита. При поражении вирусом симптомы заболевания возникают почти сразу же. Так, к примеру, если укус был получен в утреннее время, то уже вечером у пациента возникнут первые симптомы интоксикации организма и значительно ухудшится общее самочувствие.

Симптомы при клещевом энцефалите и боррелиозе бывают следующие:

• чувство тошноты и частые позывы к рвоте – такое состояние возникает вне зависимости от того, как давно и в каком количестве человека употреблял пищу;
• стремительное повышение температуры тела до высоких отметок, при этом даже при приеме жаропонижающих средств состояние пациента не улучшается;
• сильные боли в голове – они отличаются своей интенсивностью и проходят на фоне пульсации и чувства сдавливания черепа;
• краснота кожных покровов в области лица и шеи.

Опасные симптомы

Уже по прошествии нескольких часов начинают возникать и другие признаки поражения энцефалитом:

• проблемы с артериальным давлением;
• воспалительный процесс и отечность на месте укуса (краснота, припухлость и сильная боль при касании);
• проблемы с сердечным ритмом – брадикардия, аритмия, сильная и частая одышка, а также боли в грудине;
• ригидность мышц затылка – мышцы в этой области сильно напряжены, больной не может нормально удерживать голову в одном положении, она при этом постоянно запрокинута назад;
• боязнь света.

Если клещевой энцефалит был определен в самом начале своего развития, то лечащие врачи почти всегда ставят положительный прогноз. В противном случае человека либо ждет летальный исход, либо инвалидность. Симптомы поражения могут сильно отличаться в зависимости от того, в какой форме развивается патологический процесс.

Начальный этап развития болезни отличается развитием проблем с нервной системой (отмечается боль в голове, чувство головокружения, эмоциональное перенапряжение) и, как правило, заканчивается восстановлением здоровья человека без осложнений или же летальным исходом. Следующая стадия развития заболевания может включать в себя эпилептические припадки, параличи, чувство онемения в области шеи и лица, а также сильное повышение температуры тела до 39-40 градусов. При проведении диагностики энцефалита в лаборатории врач выявляет степень неврологических расстройств и определяет вид поражения. Чтобы избежать осложнений, важно провести диагностику симптомов и лечение клещевого энцефалита и боррелиоза, пока заболевания не успели перейти в опасные формы.

Основные разновидности патологии

При диагностике клещевого энцефалита врач может выявить следующие его виды:

1. Лихорадочный. В этом случае у пациента присутствуют симптомы интоксикации организма ядами и опасными химическими веществами, выздоровление при своевременном и правильном лечении наступает довольно быстро.
2. Менингеальный вид. Проходит совместно с лихорадкой и другими симптомами менингококковой инфекции, даже в ликворе находится менингококковый элемент и белок. У больного при таком виде поражения часто проявляются психические расстройства обратимой формы – сильное возбуждение, галлюцинации, помешательство. Заболевание излечимо, но у человека даже после прохождения курса лечения могут остаться хронические парезы мышц лица.
3. Менингоэнцефалитический. Клещевой энцефалит провоцирует проблемы с мимикой у человека (начинают опускаться веки, уголки глаз, изменяется симметрия лица, возникают выраженные проблемы), изменяется тембр голоса, проявляются нарушения в речевом аппарате. Для менингоэнцефалитического вида энцефалита характерна гипертония, при которой сильно повышается температура тела. Первая волна поражения продолжается в течение 14 дней и проходит совместно с симптомами интоксикации организма. Вторая волна поражения наступает через несколько дней после окончания первой и проходит с признаками менингита, продолжается на протяжении 3 недель. Прогноз заболевания остается благоприятный.
4. Полиомиелитический вид клещевого энцефалита. В первые несколько дней развития заболевания пациент отмечает только усталость и болевой синдром в мышцах. После этого у него начинаются проблемы с двигательной системой, регулярно дергаются мышцы, появляются парезы в плечевом и шейном отделе позвоночника, голова начинает свисать на грудь. Такая разновидность клещевого энцефалита может как обладать благоприятным прогнозом, так и нет. По прошествии 2-3 недель после выздоровления человека у него появляется выраженная атрофия мышц – она может быть обратимой и необратимой формы. Если болезнь обратима, то в скором времени пациент выздоравливает. При необратимой форме у пациента, как правило, возникает инвалидность.
5. Полирадикулоневритический – вирусная инфекция распространяется на корешки периферийных и фронтальных нервов. Конечности в этом случае теряют свою чувствительность и перестают реагировать на раздражители извне.

Описание боррелиоза

Боррелиоз (по-другому болезнь Лайма) у человека появляется после попадания в организм бактерий боррелия. В первые несколько секунд с бактериями пытается бороться иммунная система человека, по этой причине патологические микроорганизмы быстро перемещаются туда, где активность иммунитета снижена либо не такая эффективная: сухожилия, нервные ткани и сердце. По причине этого у боррелиоза, в отличие от энцефалита, чаще всего не возникает острая стадия. Заболевание сразу же изменяется до хронической формы.

Главным симптомом патологии является мигрирующая кольцевидная эритема – пятно насыщенного красного цвета в области укуса, которое со временем увеличивает размер и формирует кольцо. Кожа в пораженном месте начинает сильно шелушиться, вскоре развивается некроз. Также у больного могут возникнуть вторичные эритемы на других участках тела, которые провоцируют аллергическую реакцию. В то же время существуют формы боррелиоза, проходящие без эритемы, но сопровождающиеся лихорадкой и интоксикацией организма токсинами. Часто заболевание Лайма почти не отличить от клещевого энцефалита.

По прошествии месяца у больного начинают возникать первые симптомы поражения нервной системы: проблемы с речевым аппаратом, частичный паралич рук и ног, сильные изменения в настроении в течение всего дня. У некоторых пациентов начинается менингит, приводящий к проблемам с сердечным ритмом. Если продолжать не обращать внимание на заболевание, то уже через один год пациент рискует лишиться слуха, получить проблемы с речью и нервной системой.

Боррелиоз почти во всех случаях вылечивается, главное – не допустить перехода поражения в хроническую либо диссеминированную стадию. При лечении врач назначает пациенту прием антибиотиков в течение 2-4 недель, они помогают полностью устранить инфекцию из организма и обеспечить выздоровление пациенту. Чтобы не допустить осложнений, важно своевременно провести диагностику симптомов и лечение клещевого энцефалита и боррелиоза.

Сдача анализов

Только диагностика клещевого энцефалита в лаборатории может выявить форму заболевания и определить, какие методы лучше всего использовать при лечении. Для выявления формы заболевания у больного берется анализ крови. Отдельно берут на анализ клеща, снимаемого с тела после укуса. Выявить наличие либо отсутствие заболевания у пациента можно с помощью различных диагностических методов.

Основные методы диагностики клещевого энцефалита:

1. Иммуноанализ. Как и при боррелиозе, иммунный анализ на клещевой энцефалит помогает определить, есть ли в крови у больного специфические антитела к вирусу. Они могут быть нескольких видов: IgG и IgM. Первыми на инфекцию реагируют иммуноглобулины М, которые и указывают на наличие поражения в организме. После начинает активироваться группа G, которая продолжает сохраняться в организме в течение многих лет. Наличие либо отсутствие таких антител определяют совместно с другими симптомам поражения.
2. ИФА-диагностика клещевого энцефалита отличается особой чувствительностью. Она помогает выявить заболевание на раннем сроке его прогрессирования. При лабораторной диагностике клещевого энцефалита в клинике антитела IgM можно определить в организме человека уже на 4-й день после появления первых симптомов поражения. Если следовать статистике, то анализ крови при острой форме заболевания в 96 % всех случаев показывает положительный результат.
3. ПЦР-диагностика клещевого энцефалита. Главной целью такого обследования является определение одного важного момента: есть ли у клеща ДНК вирус клещевого энцефалита. При ПЦР-обследовании можно воспользоваться даже фрагментом клеща, если устранить его сразу из кожи не получилось. Сразу же после удаления клеща его важно отнести в ближайшую лабораторию.

Когда делать анализ

Антитела к вирусу возникают в крови больного на 11-14-й день после поражения. Сдавать анализ на клещевой энцефалит раньше указанного отрезка времени не имеет смысла, так как результат обследования будет всегда отрицательным. Уже в конце месяца в организме человека достигается пик концентрации антител, который будет сохраняться на высокой отметке в течение 6 месяцев.

Клеща в лабораторию важно отнести сразу же после удаления. Если анализ выявит, что насекомое является носителем клещевого энцефалита, то за состоянием больного будет внимательно наблюдать лечащий врач, а по прошествии нескольких недель назначит анализ на энцефалит. В качестве мер профилактики можно начать использовать стартовое этиотропное лечение. К примеру, пациенту назначают вливание "Ацикловира" 3 раза в день, а также внутримышечное введение рекомбинантных интерферонов.

Подготовка к проведению процедуры

Специальной подготовки перед проведением анализа крови на выявление клещевого энцефалита проходить не нужно. Специалисты рекомендуют не употреблять пищу в течение 4 часов перед сдачей анализа. Если говорить об обследовании энцефалитного клеща, то вытаскивать и доставлять его на анализ нужно также в короткие сроки.

При проведении анализа кровь берется из локтевой вены. Результаты лабораторного исследования на количество антител в организме будут готовы через 4 дня.

Результаты обследования

Такое состояние может возникнуть в результате перенесенной ранее инфекции, недавно проведенной вакцинации либо экстренно введенного препарата. Если титр выдает значение меньше 100, то это указывает на отсутствие реакции иммунной системы. В этом случае при попадании клещевого энцефалита в организм человек неизбежно заболеет. Наилучшими значениями для организма здорового человека считаются 200-400.

Важно помнить, что если в организме человека присутствуют иммуноглобулины IgG, но при этом нет IgM, то результаты исследования положительны, что в большинстве случаев указывает на наличие стойкой защиты. Если же при проведении диагностики выявляется сразу два показателя иммуноглобулинов, то это говорит о поражении организма человека энцефалитом. Чтобы уточнить состояние, специалист назначает повторный лабораторный анализ через 7 дней.

В конце обследования врач выявляет, есть ли в клеще ДНК возбудитель энцефалита. Если в насекомом находят заражение, то больному сразу же вводят специфический иммуноглобулин, который помогает подавить вирус, пресекая его развитие и распространение на начальной стадии. Такой способ помогает спасти здоровье и жизнь человека в 60 % случаев.

Более стойкую и действенную защиту приносит вакцинация. Но это совсем не значит, что зараженный клещом человек полностью лишился своего здоровья. В том случае, если результаты ПЦР-диагностики оказались благоприятными, особую роль играет оперативная диагностика и внимательное наблюдение за организмом человека, а также любым изменениям в нем. После того, как инкубационный период боррелиоза либо энцефалита будет окончен, человеку важно сдать анализы повторно даже в тогда, когда симптомы заболевания больше не проявляют себя.

Особенности вакцинации

Если клещевой энцефалит был диагностирован на первой волне, то восстановить организм человека и подавить развитие инфекции можно с помощью противоэнцефалитной иммуноглобулинотерапии. Для эффективного лечения пациенту вводят инактивированную вакцину и рибонуклеиновую кислоту.

Важно помнить, что такая вакцина может быть проведена лишь в целях профилактики – она помогает защитить организм человека от заражения вирусными инфекциями, снижает интоксикацию и воспалительный процесс. Проводить вакцинацию врачи рекомендуют осенью и весной – пик заболеваемости людей клещевым энцефалитом.

Клещевой энцефалит: диагностика и лечение в клинике

Пациент с выявленным клещевым энцефалитом должен внимательно следить за своим состоянием, не перенапрягаться, следовать постельному режиму на протяжении всего течения заболевания – это поможет значительно облегчить самочувствие зараженного. Помимо этого, дополнительно врачи назначают:

• антибактериальные лекарственные средства (антибиотики) – в особенности они важны при менингеальном энцефалите ("Ванкомицин");
• противовирусные препараты ("Ацикловир", "Циклоферон", "Виферон");
• витамины С и В;
• иммуностимулирующие препараты ("Амиксин", "Тималин").

Чтобы добиться максимального эффекта от лечения, важно проводить симптоматическую терапию, к примеру, при высокой температуре тела важно применять жаропонижающие препараты, при появлении сильной боли и усталости – нестероидные противовоспалительные препараты либо анальгетики. Лишь по прошествии 3 недель, когда состояние пациента полностью восстановиться, врач может выписать его на лечение в домашних условиях. Период восстановления организма продолжается долго – больной должен раз в несколько месяцев ходить на прием к терапевту, один раз в месяц проводить консультацию с неврологом. Хорошего эффекта можно добиться от грязелечения и санаторной терапии.

Важно помнить, что все народные методы устранения впившегося клеща (капание масла либо вытаскивание нитью) не принесут никакого результата – заражение клещевым энцефалитом происходит при прокусывании кожи инфицированным насекомым.

Вирус КЭ патогенен для ряда лабораторных и диких животных. Наибольшей чувствительностью обладают новорожденные и молодые белые мыши. После заражения в мозг, интраперитонеально, внутримышечно у этих животных развивается энцефалит, заканчивающийся гибелью животных. Из сельскохозяйственных животных наиболее восприимчивы к вирусу КЭ козы, менее восприимчивы овцы и коровы, и слабо восприимчивы лошади. Вирус КЭ обладает цитопатогенным действием (ЦПД), вызывая цитопатические изменения в первичных и перевиваемых культурах клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ и ПЭС) и размножается без выраженного ЦПД во многих других клеточных культурах. В мозге инфицированных мышей и культуральной жидкости зараженных культур происходит накопление вируса КЭ и специфических вирусных антигенов: комплементсвязывающих, гемагглютинирующих, преципитирующих и др.

Вирус КЭ длительное время сохраняется при низких температурах (оптимальный режим -60 град. С и ниже), хорошо переносит лиофилизацию, в высушенном состоянии сохраняется много лет, но быстро инактивируется при комнатной температуре. Кипячение убивает его через 2 минуты, а в горячем молоке при 60 град. С погибает через 20 минут.

Инактивирующим действием обладают также формалин, фенол, спирт и другие дезинфицирующие вещества, ультрафиолетовое излучение.

Реакция нейтрализации основана на способности специфических иммунных сывороток гасить инфекционное действие вирусов. Применяется в двух направлениях:

1) для типирования выделенных вирусов;

2) для титрования антител в сыворотках переболевших.

Постановка реакции:

1. На лабораторных животных. Критерием наличия вируса

служит гибель лабораторных животных. Высчитывается LD50

- предельное разведение вирусной суспензии, которое

вызывало гибель 50% зараженных животных. Для

идентификации вируса клещевого энцефалита проводят

внутримозговое заражение белых мышей.

2. В тканевых культурах. Учет результатов проводят

- по цитопатическому действию (ЦПД)

- по методу цветной пробы, основанной на изменении цвета

индикатора среды в результате дегенерации клеток;

3. В Курином эмбрионе. Учет результатов проводится по

появлению оспин по хорионаллантоисной оболочке.

РТГА

Эта реакция применяется в вирусологической практике:

- для определения типа вируса (на стекле);

- для обнаружения в сыворотке больных (развернутая).

При постановке ориентировочной реакции торможения гемагглютинации на стекло наносят по 1 капле типоспецифических иммунных сывороток, затем добавляют по 1 капле испытуемого материала и 1 капле 5% взвеси эритроцитов.

Учет результатов: тип вируса определяют по той сыворотке, с которой реакция не произошла, так как иммунная сыворотка, специфическая для выделенного вируса, подавляет его гемагглютинирующую активность, и эритроциты не агглютинируются.

РИФ

В качестве метки используются светящиеся флюорохром-ные красители (изотиоционатфлюорисцеина и др.).

Существуют различные модификации РИФ. Для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний — для выявления микробов или их антигенов в исследуемом материале применяется РИФ по Кунсу.

Выделяют два метода РИФ по Кунсу: прямой и непрямой.

Компоненты прямой РИФ:

1) исследуемый материал (испражнение, отделяемое носоглоткой и др.);

2) меченая специфическая иммунная сыворотка, содержащая АТ-ла к искомому антигену;

3) изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала обрабатывают меченойантисывороткой.

Происходит реакция АГ-АТ. При люминесцентном микроскопическом исследовании в том участке, где локализуются комплексы АГ-АТ, обнаруживают флюоресценцию — свечение.

Компоненты непрямой РИФ:

1) исследуемый материал;

2) специфическая антисыворотка;

3) антиглобулиновая сыворотка (АТ-ла против иммуноглобулина), меченая флюорихромом;

4) Изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала сначала обрабатывают иммунной сывороткой к искомому антигену, а затем — меченой антиглобулиновой сывороткой.

Светящиеся комплексы АГ-АТ — меченые АТ обнаруживаются при помощи люминесцентного микроскопа.

Преимущество непрямого метода состоит в том, что нет необходимости приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток, а применяется лишь одна флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка.

Также выделяют 4-компонентную разновидность непрямой РИФ, когда дополнительно вводится комплемент (сыворотка морской свинки). При положительной реакции образуется комплекс АГ-АТ — меченые — АТ-комплемент.

Реакция относится к серологическим реакциям с участием меченых антигенов или антител.

Проводится прямым и непрямым методами.

При прямом методе обнаруживают антиген в материале от больного. Используется диагностическая флюоресцирующая сыворотка, которая содержит иммуноглобулины, выделенные из иммунных сывороток и меченные флюорохромами.

Специфический антиген обнаруживается в виде ярко-зеленых люминесцирующих конгломератов, а фон препарата окрашивается в оранжево-красный цвет.

Компоненты реакции прямой иммунофлюоресценции:

Для поиска антигена при экспресс-диагностике:

1) исследуемый материал;

2) специфическая люминесцентная сыворотка;

3) люминесцентный микроскоп.

При диагностике гриппа проводят дифференциацию от возбудителей парагриппа и аденовирусной инфекции. Носоглоточный мазок обрабатывают флюоресцирующей гриппозной сывороткой или гриппозным иммуноглобулином.

Компоненты реакции непрямой иммунофлюоресценции

Для поиска антигена при экспресс-диагностике:

1) исследуемый материал (антиген);

2) специфическая сыворотка;

3) антиглобулиновая люминесцентная сыворотка

4) люминесцентный микроскоп.

Сывороточные антитела адсорбируются на антигене.

Используется антиглобулиновая сыворотка с антителами, меченными флюорохромами. Образуется комплекс антиген+антитело (I) + антиглобулиновая сыворотка (II), который светится.

50)ИФА(конкурентный способ)-опр-ие АГ гепатита В

Предназначена для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (НВз Ад) в сыворотках и плазме крови при диагностике вирусного гепатита В и определения носительства НВ5 Ад.

1) исследуемый материал сыворотка или плазма крови;

2) антитела к НВз Ад, адсорбированные на поверхности лунки полистироловогомикропланшета;

3) коньюгат — мышиные моноклониальные антитела к НВз Ад, меченые пероксидазой,

4) ортофенилендиамин (ОФД) -субстрат;

5) фосфатно-солевой буфер;

6) контрольные сыворотки:

— положительная (сыворотка с НВе Ад);

— отрицательная (сыворотка без НВз Ад). Ход работы

1) Внесение контрольных и исследуемых сывороток.

2) Инкубация 1 час при 37 «С.

3) Отмывание лунок.

4) Внесение конъюгата.

5) Инкубация 1 час при 37 «С.

6) Отмывание лунок.

7) Внесение ОФД. При наличии НВз Ад раствор а лунках желтеет.

Учёт ИФА проводят по оптической плотности с помощью фотометра. Степень оптической плотности будет обратно пропорциональной концентрации исследуемых НВз Ад.

Реакция протекает в три фазы:

1) НВз Ад исследуемой сыворотки (плазмы) связывается с гомологичными АТ, адсорбированными на поверхности лунки. Образуется ИК АГ-АТ. (НВз Ад — агл\ НВз АТ).

2) Антитела НВз Ад, меченые пероксидазой, связываются с оставшимися свободными детерминантами НВз Ад комплекса АГ-АТ. Образуется комплекс АТ-АГ-меченые АТ <ап!1 НВз АТ-НВз Ад-ап(1 НВз АТ, меченые пероксидазой).

3) ОФД взаимодействуют (с пероксидазой) комплекса АТ-АГ-АТ и происходит жёлтое окрашивание.

Является основной тестовой реакцией диагностики ВИЧ-инфекции.

Цель: серологическая диагностика ВИЧ-инфекции — обнаружение антител к антигенам ВИЧ, Компоненты:

1) исследуемый материал — сыворотка крови;

2) синтетические пептиды, имитирующие 2-х антигенов ВИЧ: др 120 и др 41, адсорбированные на поверхности полистироловой лунки;

3) антиглобулиновая сыворотка, меченная пероксидазой, полученная путём иммунизации кроликов глобулинами человека (АТкАТ-м);

5) фосфатно-солевой буфер;

6) контрольные сыворотки:

1) Внесение контрольных и исследуемых сывороток. 2> Инкубация 30 минут при 37 «С.

4) Внесение антиглобулиновой сыворотки, меченой ферментом.

5) Инкубация 30 минут при 37 «С.

7) Внесение ОФД. Механизм

Реакция протекает в 3 фазы:

1) Антитела к ВИЧ исследуемой сыворотки связываются с гомологичными антигенами (др 120 и др 41), и на поверхности сорбента образуется ИК АГ-АТ <АТ к ВИЧ — АГ ВИЧ).

2) Образование ИК АГ-АТ-АТ, меченое пероксидазой, т.к. АТ исследуемой сыворотки являются антигенами для антиглобулиновой сыворотки.

3) ОФД взаимодействует с пероксидазой комплекса АГ-АТ-АТ, и происходит жёлтое окрашивание раствора лунки. Степень ферментативной активности прямо пропорциональна концентрации исследуемых АТ.

51)ИФА(непрямой способ)-д. СПИДа

При ИФА в качестве метки применяют ферменты.

Непрямой тип
Является основной тестовой реакцией диагностики ВИЧ-инфекции.
Цель: серологическая диагностика ВИЧ-инфекции — обнаружение антител к антигенам ВИЧ, Компоненты:
1) исследуемый материал — сыворотка крови;
2) синтетические пептиды, имитирующие 2-х антигенов ВИЧ: др 120 и др 41, адсорбированные на поверхности полистироловой лунки;
3) антиглобулиновая сыворотка, меченная пероксидазой, полученная путём иммунизации кроликов глобулинами человека (АТкАТ-м);
4) ОФД;
5) фосфатно-солевой буфер;
6) контрольные сыворотки:
- положительная;
- отрицательная.
Ход работы
1) Внесение контрольных и исследуемых сывороток. 2> Инкубация 30 минут при 37 «С.
3) Отмывание.
4) Внесение антиглобулиновой сыворотки, меченой ферментом.
5) Инкубация 30 минут при 37 «С.
6) Отмывание.
7) Внесение ОФД. Механизм

Реакция протекает в 3 фазы:
1) Антитела к ВИЧ исследуемой сыворотки связываются с гомологичными антигенами (др 120 и др 41), и на поверхности сорбента образуется ИК АГ-АТ <АТ к ВИЧ — АГ ВИЧ).
2) Образование ИК АГ-АТ-АТ, меченое пероксидазой, т.к. АТ исследуемой сыворотки являются антигенами для антиглобулиновой сыворотки.
3) ОФД взаимодействует с пероксидазой комплекса АГ-АТ-АТ, и происходит жёлтое окрашивание раствора лунки. Степень ферментативной активности прямо пропорциональна концентрации исследуемых АТ.

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).