Губкообразная энцефалопатия крс отбор проб
Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота (ГЭ КРС) -медленно развивающаяся инфекционная прионная трансмиссивная болезнь взрослого крупного рогатого скота, характеризующаяся длительным, до 2.5-8 лет, инкубационным периодом и проявляющаяся поражением центральной нервной системы со 100% летальностью.
Историческая справка.
Практически почти одновременно данную болезнь установили в Ирландии.
В последующие 10 лет произошло распространение ГЭ КРС на другие страны — Франция, Португалия, Швейцария, Германия, Нидерланды, Италия, Дания, Словакия, Финляндия и др. В результате завоза инфицированного скота имели место случае заболевания ГЭ КРС в Канаде, Израиле,Омане, Японии, Австралия.
На сегодняшний день установлено, что ГЭ КРС появилась в результате экс-позирования на крупном рогатом скоте скрейпи (скрепи) — подобного агента (возбудителя скрейпи овец), находившегося в мясо-костной муке, которая и входила в рацион крупного рогатого скота.
В России болезнь не регистрировалась.
Экономический ущерб. ГЭ КРС нанесла европейским странам громадный экономический ущерб, ввиду того, что было уничтожено около 4миллионов голов крупного рогатого скота. Только одна Великобритания понесла экономический ущерб в сумме 7миллиардов фунтов стерлингов. В результате ГЭ КРС, произошло разорение большого числа фермеров, сократился рынок мясной продукции. Болезнь несла дополнительно социальную напряженность, ввиду того, что от нее в мире умерло около 200 человек и около 70 тысяч человек по этой причине могли заболеть болезнью Крейтцфельда -Якоба.
Сам возбудитель представлен только белком без нуклеиновой кислоты и поэтому выдерживает кипячение, многократное замораживание и оттаивание, не гибнет при температуре 115° С в течении 30минут, при 90° С в течении 1часа. Автоклавированием (18 минут при 134-138° С или при при том же режиме 6 циклов по 3 минуты). Возбудитель выдерживает несколько месяцев действие 12%-го формалина и рН от 2 до 10,5. В 20%-ном растворе формалина инфекционность не утрачивается 18 часов при 37° С.
В качестве дезинфицирующего средства используют 8%-й раствор гидрооксида натрия, с воздействием на возбудителя в течении 1 часа при температуре + 20°С.Относительно эффективен 2%-й гипохлорит натрия при воздействии в течение 2 часов при температуре +20°С.
Эпизоотологические данные. В естественных условиях к ГЭ КРС восприимчив крупный рогатый скот, особенно в 4-х летнем возрасте, а также парнокопытные шести видов (антилопа южно-африканская, куду, и ньяла, сернобык, аравийский орикса и др.) и кошачьи 4 видов. Экспериментально можно заразить овец, свиней, норок, крыс, мышей, хомяков и обезьян. Болезни в большей степени подвержен молочный скот. Заболевают ГЭ КРС в основном коровы, реже племенные быки. При употребление продуктов убоя больных ГЭ КРС могут заболеть люди болезнью Крейтцфельда-Якоба. При этом особенно опасны в употреблении головной и спинной мозг убитых животных. Мясо и молоко от больных животных в принципе не являются опасными, ввиду того, что прионы в них содержатся в незначительных количествах.
Источником возбудителя инфекции являются больные и находящиеся в инкубационном периоде животные. Факторами передачи возбудителя инфекции являются продукты убоя овец, больных скрейпи, и крупного рогатого скота больного ГЭ, в том числе находящихся в инкубационном периоде заболевания.
Возбудитель болезни передается от больного животного здоровому алиментарным путем, при поедании зараженного корма(мясо -костная мука) Возможна (до 10-20%) вертикальная передача, но она существенно не влияет на распространение эпизоотии.
В Великобритании распространению болезни способствовали следующие причины:
- Увеличение поголовья овец и возросшие объемы переработки (включая головы) на мясокостную муку.
- Изменение с середины 70-х годов 20века на утильзаводах страны режимов стерилизации сырья животного происхождения (замена термообработки сушкой с органическими растворителями).
- Увеличение производства молока, требовавшего более раннего отъема телят и интенсивного их откорма с использованием мясокостной муки.
В итоге все это привело к более массовому применению в пищевой цепи мясокостной муки, которая оказалась контаминированной прионами.
Патогенез. Патогенез недостаточно изучен. Предполагается, что патогенный прион, попав в организм, обычно алиментарным путем в начале реплицируется в селезенке и других органах системы мононуклеарных фагоцитов (лимфоидных органах), а затем и мозгу.
При попадании инфекционного прионного белка в здоровый организм животного в результате соединения одной молекулы инфекционного прионного белка PrPsrc одной молекулой клеточного (нормального) прионного белка PrPc в молекуле последнего происходят пространственные изменения: две из четырех спирально завитых структур в молекуле клеточного прионного белка вытягиваются и т.д. Под действием приона, излюбленным местом локализации которого является головной мозг, у животного развивается энцефалопатия т.е. в мозжечке, стволовой части головного мозга происходит какуолизация нейронов и серого мозгового вещества, имеет место пролиферация астроцитов. При этом воспалительной реакции нет. В мозгу больной ГЭ КРС накапливается около миллиона инфекционных единиц на грамм, в то время как в мышцах и молоке не обнаруживают инфекционных частиц. В костях (за исключением черепа и позвонков, в которых могут присутствовать остатки мозга) и коже КРС, больного ГЭ, возбудителя болезни нет. Это является очень важным, поскольку они используются для приготовления желатина и коллагена. Патоморфологические изменения в головном мозге приводят к развитию соответствующих симптомов болезни, сопровождающихся нервным синдромом.
Течение и симптомы болезни. Инкубационный период составляет от 2,5 до 8 лет, в отдельных случаях он может растягиваться до 25-30лет. Чаще болеют животные в возрасте от 2-х лет. Течение болезни прогрессирующее, без ремиссий. Болезнь протекает без повышения температуры тела животного, при сохраняющемся аппетите. Несмотря на нормальный аппетит, у коров снижается молочная продуктивность. Клиническое проявление болезни наблюдается у животных старше 2 лет и характеризуется признаками поражения центральной нервной системы. При ГЭ выявляем три типа нервных явлений.
Первый тип нервных явлений сопровождается развитием у животных чувства страха, нервозности, особенно когда животное входит в помещение, боязнь дверных проемов, агрессивности (которая является лишь следствием нервного состояния животного), скрежета зубами, беспокойства, боязливости, перемены иерархического места в стаде, стремления отделится от остальных животных стада, возбудимости, дрожания отдельных участков тела или всего тела, нераспознавания препятствий, ляганием при нормальном к ним обращении, атаксии задних конечностей (корова поднимается с пола как лошадь), частых движений ушами, облизывание носа, почесывание головы ногой, и о различные предметы. Вышеперечисленные симптомы встречаются у 98% больных животных.
При третьем типе нервных явлений происходит нарушение чувствительности, когда у больных животных отмечаем гиперстезию при шуме, прикосновении и свете.
Продолжительность болезни от нескольких недель до 12 месяцев и больше. Болезнь всегда заканчивается смертью животного.
Патологоанатомические изменения. При вскрытии павших животных характерные патологоанатомические изменения либо отсутствуют, либо слабо выражены. Отмечаем признаки истощения, может быть отек головного мозга. При проведении гистологического исследования в головном и спинном мозге обнаруживают вакуолизацию нейронов, срез ткани мозга имеет вид губки (спонгиоз) и некоторые другие изменения, свойственные губкообразной энцефалопатии (гиперплазия и пролиферация астроцитов, формирование амилоидных бляшек).
Диагноз. Диагноз на ГЭ КРС ставится комплексно с учетом:
- эпизоотологических данных;
- характерных клинических признаков болезни;
- патогистологических исследований.
Прижизненная лабораторная диагностика не разработана. Из-за отсутствия у животных иммунного ответа антитела при ГЭ КРС не вырабатываются, из-за чего серологическая диагностика не осуществима.
В лабораторию посылают головной мозг погибших или вынужденно убитых животных.
Основные методы исследования:
- гистопатологический метод (обнаружение губчатого перерождения нейронов с образованием вакуолей, в основном в сером веществе продолговатого и среднего отделов мозга) ;
- выявление скрепиподобных миофибрилл при негативном контрастировании (электронная микроскопия + гистология) ;
- иммунногистохимические методы (определение прионного белка методом иммунноблот-тинга, метод флуоресцирующих зондов в иммуноблоттинге) ;
- иммуноферментный метод;
- биопроба на белых мышах при заражении их гомогенатом мозга;
Дифференциальная диагностика.
ГЭ КРС необходимо в первую очередь дифференцировать от следующих групп заболеваний:
- болезней, проявляющихся нервными явлениями (бешенство, болезнь Ауески, листериоз, нервная форма инфекционного ринотрахеита, злокачественная катаральная горячка, энцефалиты различного происхождения);
- неконтагиозные токсикоинфекции (столбняк, ботулизм);
- метаболические заболевания (кетоз, гипокальцемия, гипомагнезия, пастбищная тетания и др.);
- отравления (свинец, мышьяк, ртуть, ФОСы, карбаматы).
Иммунитет.
Иммунитет при ГЭ КРС не формируется.
Специфическая профилактика.
При ГЭ КРС не вырабатывается ни клеточного, ни гуморального иммунитета, поэтому до сегодняшнего дня в мире не создано никакой вакцины. В этом направлении проводятся исследования.
Лечение.
Лечение неэффективно, так как оно начинается при появлении клинических признаков, когда в головном мозге развились необратимые патоморфологические изменения. Прогноз при заболевании неблагоприятный.
Профилактика.
Основой профилактики для благополучных стран являются:
- недопущение завоза из неблагополучных зон или стран племенного скота, мяса, консервов, субпродуктов и полуфабрикатов, мясокостной муки, спермы, эмбрионов, технического жира, кишечного сырья и других продуктов и кормов животного происхождения от жвачных;
- тщательный контроль за закупками племенного скота и биологических тканей, особенно из неблагополучных стран;
- запрет скармливания жвачным животным мясокостной и костной муки от крупного рогатого скота и овец;
- запрет на использование кормов и кормовых добавок любого неизвестного происхождения;
- тщательная диагностика при любом подозрительном случае и лабораторный мониторинг проб мозга убойного крупного рогатого скота, особенно от животных старше 3 лет.
Меры борьбы.
В неблагополучных странах запрещено добавлять животные белки в корм жвачным, биоткани — в рацион животных, использовать бычьи субпродукты в биологической и пищевой промышленности и так далее. Проводят диагностику ГЭ КРС больных животных и уничтожение туш.
Применяют жесткие методы стерилизации и дезинфекции.
Патологический материал, посуду, инструменты, спецодежду обеззараживают одним из следующих методов: автоклавированием при избыточном давлении (134°С) не менее 20минут; выдерживанием в течение 12 часов в одном из растворов-4%-ном гидроксида натрия, 2%-ном гипохлорите натрия, 5%-ном хлорной извести; сжиганием в упакованном виде одноразового инструментария и посуды.
Проведение подобных строгих мер в Великобритании позволили в свое время резко снизить заболеваемость и оздоровить ряд районов страны от ГЭ КРС.
Диагностика губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота.
Установление диагноза на губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота включает:
- изучение клинических признаков;
- изучение эпизоотологической ситуации;
- проведение патогистологических исследований;
- проведение электронно-микроскопического исследования;
- проведение иммунохимических исследований (иммуноблотинг);
- проведение биопробы на лабораторных животных.
Для диагностических исследований в специализированную лабораторию по изучению губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота посылают:
-мозг крупного рогатого скота после исследования на бешенство и другие вирусные инфекции после неподтверждения диагноза;
-мозг крупного рогатого скота из мясокомбинатов (0,01% от забитых животных старше 3-х лет).
Порядок отбора проб мозга для диагностических исследований.
Диагностика губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота проводится только после гибели или вынужденного убоя животных. В этой связи важным условием является правильный отбор проб, их фиксация, транспортировка и хранение.
Патологический материал (головной мозг) берут от животных с клиническими признаками поражения центральной нервной системы). При этом мозг для гистологических, электронно-микроскопических и иммунохимических исследований необходимо брать у животных сразу после их убоя или гибели до наступления лизиса тканей или размножения другой сопутствующей микрофлоры.
Животных с клиническими признаками губкообразной энцефалопатии умерщвляют различными способами: введением избыточной дозы барбитурата - 23 г барбамила (в растворе), внутримышечным введением 1-2 г гемоспоридина (в растворе), 20-30 мл 25% раствора сернокислой магнезии транстаракально в области сердца.
Голову отделяют от шеи по атланто-затылочному сочленению. Труп животного сбрасывают в забетонированную яму Беккари глубиной не менее 3-х метров и засыпают хлорной известью. Наиболее эффективным способом утилизации трупов является их сжигание. Отделенную от трупа голову упаковывают в металлическую пленку, помещают в металлический контейнер, желательно со льдом, транспортируют при температуре +2 +15оС в ветеринарную лабораторию или специализированную лабораторию по изучению губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота. Работу выполняют с соблюдением Санитарных правил 1.2.011 от 04.05.1994 г. РФ "Безопасность работы с микроорганизмами 1 и 2 групп патогенности". При проведении работ по отделению, упаковке и транспортировке головы, а также при закапывании или сжигании трупа животного необходимо исключить травмирование рук и попадание брызг крови на кожу. Чтобы избежать этого, надевают халат, прорезиненный фартук, анатомические перчатки из плотной резины, резиновые сапоги, водонепроницаемый капюшон и защитную маску из оргстекла, закрывающую лицо от брызг крови. По окончании работ инструменты, которыми проводили отделение головы, укладываются стерилизатор с 2% раствором гипохлорита натрия не менее чем на 1 час (инструменты должны быть погружены в раствор полностью). Сапоги, фартук, капюшон, маску и перчатки также обрабатывают с 2% раствором гипохлорита натрия. Халаты обрабатывают автоклавированием при 134-138оС в течение 20-30 минут. Горючие отходы сжигают.
Голова должна быть доставлена в исследовательскую лабораторию в течение 12-36 часов, поскольку в результате размножения микроорганизмов в тканях мозга или автолиза мозг становится непригодным для гистологического исследования. Замороженный при транспортировке или при хранении в холодильнике мозг также непригоден для проведения анализа, т.к. в результате замораживания возникают артефакты, мешающие диагностике. При длительной транспортировке или в жаркую погоду целесообразно в контейнер положить лед.
Сразу после доставки в исследовательскую лабораторию с дорсальной части головы крупного рогатого скота удаляют кожу. Имеется два способа извлечения головного мозга из черепной коробки (Рис.1). При первом способе голову зажимают в тиски, а при втором - проводят ручную фиксацию на столе на листе бумаги, который ложится для предотвращения скольжения. После фиксации осторожно, чтобы не повредить мозг, распиливают лобную кость с помощью анатомической пилы. Затем производят надрезы лобной кости с каждой стороны от точек, находящихся на оси глазных ям, продлевая их каудально до наружных слуховых проходов. Продлевают эти разрезы каудально до большого затылочного отверстия также осторожно, чтобы исключить повреждение мозга. Делают сагитальный разрез посредине лобной и затылочной костей до большого затылочного отверстия. Затем разделяют и удаляют распиленные левую и правую части черепной коробки. Рассекают и снимают твердую мозговую оболочку. Затем необходимо перевернуть голову, чтобы под действием силы тяжести мозг отделился от основания черепа. Продолжить работу, продвигаясь от каудального надреза вперед; для перерезания нервов вентральной стороны черепа использовать скальпель. После извлечения мозга его целиком необходимо поместить в фиксирующий раствор или путем фиксации несплошных разрезов мозга на пластины (Рис.2,3).
Рисунок 1. Схема распилов черепа крупного рогатого скота
Рисунок 2. Схема участков головного мозга животных
Рисунок 3. Схема разрезов головного мозга
Примечание: Ромбовидный мозг:
I - срез продолговатого мозга на уровне верхнего отдела;
II - срез стволовой части на границе продолговатого мозга и варолиевого моста;
III - срез варолиевого моста на кровне начала верхних ножек мозжечка. Средний мозг:
IV - срез четверохолмия на уровне появления красных ядер. Промежуточный мозг:
V - срез в области эпиталамуса на уровне раскрытия сильвиева водопровода в III желудочек мозга;
VI - срез в области таламуса на уровне эпителиальных бугров и залегающих в них ядер;
VII - срез в области гипоталамуса на уровневые воронки. Концевой мозг:
VIII - срез бокового желудочка на уровне головки хвостатого ядра;
IX, Х- срезы полушарий большого мозга в области моторных полей туловища, грудных и тазовых конечностей.
Для фиксации мозга целиком готовят фиксирующий раствор по следующей прописи:
Растворить соли в воде, добавить формалин и размешать, При этом рН раствора должен быть нейтральным, около 7,0.
Фиксация мозга путем использования несплошных поперечных разрезов.
Учитывая особенность проявления губкообразной энцефалопатии (отечность и расплавление нейроглии), фиксация мозга должна быть экстренная и жесткая, позволяющая исключить артрефакты и обеспечить максимально достоверную диагностику.
Для достижения этого на извлеченном головном мозге необходимо сделать несплошные поперечные разрезы в виде пластин толщиной 5-8 мм. Более толстые пластины делать нельзя, т.к. формалин проникает и фиксирует ткани только на толщину не более 8 мм. Между пластинами ткани проложить гигроскопический материал (вату, марлю, фильтровальную бумагу)
Для фиксации головного мозга, разрезанного на прордольные полосы рекомендуется использовать 15-20% раствор нейтрального формалина (150-200 мл формалина и 800 - 850 мл воды, параформа - соответсвенно в 2,5 раза меньше. Срок фиксации - 3-4 суток.
Зафиксированный мозг помещают в ударопрочную емкость, при этом объем фиксирующего раствора должен быть в 10 раз больше объема мозга. В таком виде материал должен храниться не менее 2 недель, после чего его необходимо доставить в диагностическую лабораторию.
Патогномоничными для губкоообразной энцефалопатии крупного рогатого скота являются следующие критерии (рис.4-7):
- диффузная вакуолизация и расплавление нейроглии (в виде множественных разной формы и величины сот) (рис.4, 5):
- каогуляция цитоплазмы в нейронах, проявляющаяся в виде плотного сгустка с повышенной оксифильностью (красного цвета);
- наличие пикноза, рексиса и частичного лизиса ядер нейронов, иногда криброза цитоплазмы (множественные мелкие вакуоли)(рис.6);
- гипертрофия эндотелия кровеносных сосудов я вялениями кариопикноза и репсиса);
- наличие периваскулярных круглоклеточных астроцитных и макрофагальных элементов типа негнойного энцефалита (напоминающие "висна" у овец);
- явления вакуолизации нейронов (перстневидные клетки) встречаются редко и слабо выражены, тогда как у "скрепи" овец это более выражено;
- наличие вокруг нейронов явлений отека и вакуолизации.
Подтвержденным на для губкоообразную энцефалопатию крупного рогатого скота диагноз следует считать только на основании комплексного анализа эпизоотологических, клинико-анатомических и патогистологических исследований. При этом следует сравнивать гистопрепараты отделов головного мозга, полученных от заведомо здоровых животных (контроль).
Сомнительным считается диагноз при наличии ассиметричных признаков вакуолизации в нейроглии или в нейронном околоядерном пространстве.
Отрицательный диагноз ставится в случае отсутствия гистологических изменений в основных участках головного мозга, необходимых для диагностики, а при подозрении и остальных участков мозга.
Примечание: В настоящее время в странах мира применяются следующие методы иммунологической диагностики губкообразной энцефалопатии:
-иммуногистохимический метод выявления патологических PrP sc- белков в обычных фиксированных в формалине срезах;
-биопроба (заражение подозрительнам материалом хомяков и мышей).
Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота (ГЭ КРС, BSE) впервые в мире была зарегистрирована в Великобритании, в 1986 году. В 1988 г. было доказано, что причиной возникновения ГЭ КРС является кормление крупного рогатого скота мясокостной мукой, полученной из тканей жвачных животных.
В результате экспорта из Великобритании кормов животного происхождения и инфицированных животных в инкубационной фазе развития, преимущественно в течение 1980-х, до выявления причины возникновения ГЭ КРС, болезнь появилась в странах Западной и Центральной Европы, а затем в Японии, Канаде и США. Регионы и страны, в которых появилось это заболевание, понесли большие экономические потери, связанные с уменьшение сбыта говядины и живого КРС, а также затратами на проведение мероприятий по борьбе с ней.
Особенностью ГЭ КРС является длительный инкубационный период, в среднем 4-7 лет. Заражение через инфицированный корм происходит наиболее часто в течение первого года жизни животного по следующей причине. Важным фактором экономической эффективности в молочном животноводстве является сокращение времени откорма коровы от рождения до первой лактации. Наиболее эффективный способ сократить это время – кормление животного концентратами с высоким содержанием белка. Самый дешевый корм с высоким содержанием белка – мясо-костная мука, которую в Великобритании и других европейских странах широко применяли для откорма сельскохозяйственных животных в 70-80-е годы 20 века. При ретроспективном исследовании развития эпизоотической ситуации по этой болезни было установлено, что самая ранняя дата рождения инфицированного агентом ГЭ КРС животного – 1974 г.
В середине 90-х годов прошлого столетия у людей был выявлен новый варианта болезни Крейтцфельдта-Якоба (вБКЯ), и было доказано, что причиной его возникновения является заражение человека возбудителем ГЭ КРС через продукты питания из тканей крупного рогатого скота, инфицированного агентом губкообразной энцефалопатии.
Патогенез, особенности инфекционного агента ГЭ КРС и других прионных болезней
Прионные болезни - летальные нейродегенеративные болезни, выявленные у млекопитающих животных нескольких семейств. Наиболее известны прионные болезни у животных, принадлежащих к семействам: полорогих, оленевых, кошачьих, куньих и приматов. Прионные болезни известны и у человека. В основе их лежат генетические, инфекционные или спорадические механизмы. Одни прионные болезни животных и человека известны давно, другие, например, губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота (ГЭ КРС, BSE) и ставшие следствием заражения агентом ГЭ КРС прионные болезни у зоопарковых животных семейств кошачьих и полорогих, - появились в 80-е годы прошлого века.
Инфекционным агентом ГЭ КРС является прион, или патогенная инфекционная изоформа прионного белка PrPBSE. Нормальная форма прионного белка (PrPC) является белком клеточной поверхности не только нейронов, но и других клеток. Клеточный прионный белок известен у всех животных, начиная от нематод до позвоночных. Прион уникален среди всех прочих инфекционных агентов и отличается от них по структуре, способу репликации, возникновению и протеканию инфекционного процесса.
Клинические признаки
Поскольку появившиеся клинические признаки связаны, в основном, с отклонением в поведении, то они могут быть обнаружены только при постоянном наблюдением за животными. В начале заболевания клинические признаки ГЭ КРС нехарактерны и могут быть замечены преимущественно человеком, постоянно ухаживающим за этими животными и хорошо знающим их нормальное поведение.
Наиболее частыми клиническими признаками ГЭ КРС являются следующие:
1. облизывание ноздрей и носового зеркальца;
2. агрессивное поведение;
3. боязнь входа в ворота;
4. боязнь мнимых препятствий;
5. преодоление кажущихся препятствий сильным прыжком;
6. поднятие хвоста при беге;
7. чесание уха задней ногой;
8. широко расставленные ноги в покое;
9. гиперчувствительность к звуку, свету, прикосновениям, проявляющаяся в виде судорог или гиперсаливации;
10. подкашивание задних конечностей вследствие атаксии;
11. выгибание дугой спинного отдела позвоночника;
12. лягание при легком касании задней конечности
13. атаксия задних конечностей, вставание по лошадиному;
14. животные не могут встать в терминальной фазе болезни.
Иногда ранние клинические признаки ГЭ КРС могут быть похожими на таковые при метаболических или других инфекционных болезнях, поэтому единственным надежным способом диагностики ГЭ КРС являются лабораторные диагностические исследования, основанные на выявлении инфекционного агента этой болезни иммунологическими методами.
Лабораторная диагностика
Диагностическому исследованию подлежат все животные, проявившие клинические признаки губкообразной энцефалопатии. Также проводится мониторинг ГЭ КРС у животных групп риска, преимущественно вынужденно убитых по каким-либо причинам, а также павших, основанный на выявлении лабораторными методами агента губкообразной энцефалопатии у животных возрастом от 30 месяцев.
У животных групп риска: имевших клинические признаки губкообразной энцефалопатии, вынужденно убитых или павших, а также здоровых животных, ввезенных из стран, неблагополучных по губкообразной энцефалопатии и выбракованных по возрасту, берут пробу стволовой части мозга, замораживают и направляют в диагностическую лабораторию.
Для диагностических целей используют стволовую часть мозга КРС в области задвижки (obex), поскольку именно в данном месте происходит наибольшее накопление PrPSc и видимые патологические изменения. После отделения головы образец продолговатого мозга (включая область задвижки) извлекают через затылочное отверстие специальной ложечкой или другим аналогичным инструментом. Прижизненных методов диагностики губкообразной энцефалопатии не существует.
Исторически первым методом диагностики ГЭ КРС является гистологический метод, основанный на выявлении вакуолизации нейронов и их отростков в некоторых отделах стволовой части мозга КРС. На рисунке – снимки гистологических срезов отрицательного и положительного по ГЭ КРС животных.
А. Скопление нейронов в стволовой части мозга КРС,
отрицательного по ГЭ, вакуолизация отсутствует
Б. Область тракта тройничного нерва в стволовой части мозга КРС,
отрицательного по ГЭ, вакуолизация отсутствует
В. Единичная вакуоль в перикарионе нейрона,
препарат мозга КРС, больного ГЭ
Г. Область тракта тройничного нерва в стволовой части мозга КРС,
4 положительного по ГЭ, множественная вакуолизация
Блоки ткани мозга крупного рогатого скота, положительного по ГЭ КРС, были получены из Центральной научной ветеринарной лаборатории Республики Ирландии.
В Российской Федерации лабораторное диагностическое исследование на губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота в целях мониторинга эпизоотической ситуации в настоящее время проводят иммуноферментным методом в соответствии с инструкцией к диагностическому набору: IDEXX HerdChek* Bovine Spongiform Encephalopathy (BSE)-Scrapie Antigen Test Kit.. Если возбудитель не выявлен, соответствующее животное признают неинфицированным.
Если в результате лабораторного диагностического исследования экспресс-методом получен положительный результат, то проводят исследование референтным методом. в настоящее время это иммуногистохимический метод или иммуноблоттинг.
На рисунке – снимки гистологических срезов, окрашенных с применением иммуногистохимического метода.
 А. Препарат мозга КРС, не содержащий PrPBSE, скопление нейронов, увеличение х312 |  Б. Препарат мозга КРС, не содержащий PrPBSE, отростки нейронов, увеличение х312 |
 Нейрон в препарате мозга КРС, позитивного по ГЭ, начальная фаза накопления PrPBSE, скопления патогенного прионного белка окрашены продуктом окисления диаминобензидина в коричневый цвет, увеличение х625 |  Начальная фаза накопления PrPBSE в области расположения отростков нейронов, скопления патогенного прионного белка окрашены продуктом окисления диаминобензидина в коричневый цвет, увеличение х625 |
 Препарат мозга КРС с большим накоплением PrPBSE на поздней фазе развития болезни, присутствует вакуолизация нйеронов. Скопления PrPBSE , в нейронах и их отростках окрашены продуктом окисления аминоэтилкарбазола в красный цвет, увеличение х312 |  Препарат мозга КРС, область отростков нейронов с большим накоплением PrPBSE на поздней фазе развития болезни. Скопления PrPBSE окрашены продуктом окисления аминоэтилкарбазола в красный цвет, увеличение х312 |
Профилактика
Фармакологические и иммунологические средства профилактики ГЭ КРС до настоящего времени не созданы в связи с особенностями инфекционного агента этой болезни, прежде всего, с отсутствием каких-либо вспомогательных факторов превращения клеточного прионного белка в патогенную изоформу.
Профилактика ГЭ КРС основана на выполнении контролируемого как санитарно-карантинными, так и лабораторными методами запрета на кормление крупного рогатого скота мясокостной мукой и другими кормами из тканей жвачных животных.
Противоэпизоотические меры при выявлении губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота
При получении от диагностической лаборатории заключения о положительном диагнозе на ГЭ КРС необходимо проведение следующих мероприятий:
-
на основании сведений о регистрации животных проводят выявление всех животных, которых в течение первого года жизни кормили теми же кормами, как и заболевшее ГЭ КРС животное;
если сведений о происхождении корма нет, или надежность таких сведений сомнительна, проводят выявление всех животных, рожденных в течение года до и года после рождения заболевшего животного, которых кормили потенциально инфицированным кормом;
также на основании сведений о регистрации необходимо выявить потомство заболевшей ГЭ коровы, рожденное в последние 2 года перед заболеванием;
необходимо выявить всех потенциально инфицированных животных, как в стаде происхождения, так и проданных в другие животноводческие предприятия;
С целью предотвращения контаминации мясной продукции материалами специфичного риска при выделке туш подлежат отчуждению и уничтожению сжиганием или захоронением как биологические отходы 1 категории риска:
-
миндалины и дистальный отдел тонкого кишечника у крупного рогатого скота всех возрастов;
Из неблагополучного предприятия приостанавливают вывоз кормов.
В неблагополучном предприятии берут пробы кормов и направляют на лабораторное исследование, на наличие генома жвачных животных.
Если в результате исследования корма выявлен геном жвачных, то в отношении всех животных, получавших этот корм, проводят меры как против потенциально инфицированных.
С целью выявления источника заражения необходимо определить происхождение кормов в неблагополучном по ГЭ КРС животноводческом предприятии за период от 2 лет до рождения заболевшего животного до 1 года после его рождения, и определить все предприятия, продукция которых потенциально могла содержать белок жвачных. Провести лабораторные исследования кормов на белок теплокровных в данном животноводческом предприятии и в предприятиях кормовой промышленности – поставщиках кормов или сырья для производства смешанных кормов;
Условия для отмены ограничений, связанных с возникновением ГЭ КРС
Ограничения, связанные с возникновением ГЭ КРС, отменяют при выполнении следующих условий:
- все потенциально инфицированные животные, получавшие тот же самый корм, что и животное, заболевшее ГЭ КРС, установлены, направлены на санитарный убой, стволовая часть мозга исследована в лаборатории на ГЭ КРС, туши потенциально инфицированных ГЭ КРС животных уничтожены сжиганием или захоронены.
В этом случае ограничения на продажу КРС или направление на убой клинически здоровых животных с целью реализации продукции отменяют как в животноводческом предприятии, в котором было выращено заболевшее ГЭ КРС животное, так и в животноводческих предприятиях, в которые были проданы потенциально инфицированные животные.
Если в результате расследования по кормовой цепи:
-
найдено предприятие кормовой отрасли - источник кормов, содержащих белок теплокровных, то животные групп риска ГЭ КРС, получавшие корм, содержащий белок теплокровных, подлежат лабораторному диагностическому исследованию на ГЭ КРС, а в отношении животных направленных на убой по показаниям, допускающим производство мяса и мясной продукции для потребления человеком, выполняют меры по удалению материалов специфичного риска.
На мясокомбинате или бойне в цехе выделки туш КРС, направленного на вынужденный убой по показаниям, допускающим производство мяса и мясной продукции для потребления человеком:
-
должны быть удалены и направлены на уничтожение сжиганием или захоронением материалы специфичного риска ГЭ КРС;
пробы стволовой части мозга таких животных должны быть направлена на лабораторное диагностическое исследование;
Условием для завершения ограничительных мер является окончание жизненного цикла всех животных групп риска на санитарной или обычной бойне.
Читайте также: