Кишечная инфекция микробиологическое обследование
Первым этапом микробиологической диагностики инфекционных болезней является выбор материала для исследования, обусловленный патогенезом заболевания.
Различают следующие методы микробиологической диагностики бактериальных инфекций: бактериоскопический, бактериологический, биологический, серологический, аллергический.
Бактериоскопический, бактериологический и биологический методы направлены на обнаружение возбудителя в исследуемом материале. Бактериоскопический метод заключается в приготовлении мазка из исследуемого материала, окраске его (иногда изучают возбудителя в живом состоянии) и микроскопии. Данный метод находит ограниченное применение, так как может быть использован лишь при наличии каких-либо морфологических или тинкториальных особенностей у возбудителя и достаточном содержании возбудителя в исследуемом материале. Чаще всего бактериоскопический метод применяют как ориентировочный. Основным методом диагностики инфекционных заболеваний является бактериологический метод. Его применяют практически при всех бактериальных инфекциях для установления точного диагноза и нередко для назначения лечения, несмотря на продолжительность исследования – от 3 до 5 дней (иногда до 2 мес). Бактериологический метод включает посев исследуемого материала на питательные среды, выделение чистой культуры и ее идентификацию. В том случае, если в исследуемом материале предполагается содержание возбудителя в достаточном количестве, посев материала производят на плотные питательные среды (для получения изолированных колоний). При незначительном содержании микроорганизмов исследуемый материал прежде всего засевают на жидкие питательные среды – среды обогащения. Идентификацию выделенной чистой культуры производят по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным и токсигенным свойствам (в зависимости от вида возбудителя). Определение перечисленных свойств позволяет установить вид возбудителя. С эпидемиологической целью производят внутривидовую идентификацию (эпидемиологическое маркирование) выделенной культуры: определяют ее фаговар, биовар и т. д. Кроме того, для назначения рациональной химиотерапии, как правило, определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам. При заболеваниях, вызванных условно-патогенными бактериями, необходимо определять количество микроорганизмов в исследуемом материале.
Биологический метод направлен на обнаружение в исследуемом материале возбудителя или его токсина. Метод заключается в заражении исследуемым материалом лабораторных животных с последующим выделением чистой культуры возбудителя и ее идентификацией или определением природы токсина. Однако постановка микробиологического диагноза инфекционного заболевания возможна не только с помощью выделения и идентификации возбудителя, но и при обнаружении специфических антител к нему. Для этого используют серологический метод, заключающийся в постановке реакций иммунитета. Антитела к возбудителю заболевания появляются, как правило, к концу 1-й недели заболевания, с этого времени и используют названный метод. В некоторых случаях серологический метод может быть направлен на выявление специфического антигена непосредственно в исследуемом материале. В частности, для экспресс-диагностики инфекционного заболевания применяют реакцию иммунофлюоресценции, позволяющую быстро (в течение нескольких часов) выявить возбудителя в исследуемом материале.
И, наконец, аллергический метод направлен на выявление повышенной чувствительности организма к специфическому аллергену, которым является возбудитель заболевания. Примером этого метода является постановка кожно-аллергических проб. В основе метода лежит феномен гиперчувствительности замедленного типа. Применяют также молекулярно-генетические методы диагностики: ПЦР, гибридизация ДНК и др.
Глава 10
ВОЗБУДИТЕЛИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ
Возбудители бактериальных кишечных инфекций
Возбудители эшерихиозов
Эшерихиозы – заболевания, возбудителями которых является Escherichia coli. Различают энтеральные (кишечные, эпидемические) эшерихиозы – острые инфекционные болезни, характеризующиеся преимущественным поражением пищеварительного тракта, возбудителями которых являются диареегенные штаммы Е. coli, и парентеральные эшерихиозы, протекающие с поражением любых органов и вызываемые условно-патогенными штаммами Е. coli. Кишечная палочка была открыта Т. Эшерихом (1885). Значение Е. coli. Кишечная палочка – нормальный представитель микрофлоры толстой кишки; выполняет ряд полезных функций, в том числе антагониста патогенных кишечных бактерий, гнилостных бактерий, грибов рода Candida, принимает участие в синтезе витаминов группы В, Е, К2, частично расщепляет клетчатку. В толстом кишечнике обитают Е. coli, относящиеся к серогруппам О2, О7, О9 и др. Е. coli широко используется в научных и практических целях, ; являясь универсальной генетической моделью, объектом, широко применяемым в генетической инженерии и биотехнологии; ее также используют как санитарно-показательный микроорганизм для виявлення фекального загрязнения объектов окружающей среды. Однако Е. coli может причинить и вред человеку. Условно-патогенные штаммы, обитающие в толстой кишке, при ослаблении иммунной системы организма могут вызвать различные гнойно-воспалительные заболевания за пределами пищеварительного тракта: циститы, отиты, менингиты и даже колисепсис. Эти заболевания называют парентеральными эшерихиозами. Существуют также и безусловно патогенные штаммы Е. coli -диареегенные, или энтеропатогенные, кишечные палочки (ЭПКП), которые, попадая в организм извне, вызывают вспышки заболеваний, именуемых энтеральными (кишечными, эпидемическими) эшерихиозами.
Представители более чем 80 серогрупп Е. coli являются энтеропатогенными (например, О55; Olll; O15). От ЭПКП чаще страдают грудные дети, у которых иммунная система еще не сформировалась, не вырабатываются собственные иммуноглобулины, защищающие от грамотрицательных бактерий, а кислотность желудочного сока низкая. У детей развивается колиэнтерит. Но ЭПКП могут поражать и взрослых, причем эшерихиоз может протекать, например, по типу холеры или дизентерии. Кроме того, Е. coli может быть причиной пищевой ток-сикоинфекции.
Таксономия. Е. coli – основной представитель рода Escherichia, семейства Enterobacteriaceae, входящего в отдел Gracilicutes.
Морфология и тинкториальные свойства. Е. сої і – мелкие грамотрицательные палочки длиной 2-3 мкм, шириной 0,5-0,7 мкм с закругленными концами, в мазках располагаются беспорядочно; не образуют спор, некоторые штаммы имеют микрокапсулу; перитрихи; кроме жгутиков, иногда обнаруживаются пили.
Культивирование. Кишечная палочка – факультативный анаэроб; не требовательна к питательным средам, хорошо растет на простых питательных средах при температуре 37ºС и рН среды 7,2.7,4, вызывая диффузное помутнение жидкой среды и образуя обычные колонии на плотных средах. Для диагностики эшерихиозов широко используют дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина и др.
Ферментативная активность. Е. coli обладает высокой ферментативной активностью. Кишечная палочка – представитель семейства Enterobacteriaceae, расщепляющий в течение 24 ч лактозу.
Антигенная структура. Кишечная палочка обладает соматическим (О), жгутиковым (Н) и поверхностным (К) антигенами. Каждый из антигенов неоднороден: О-антиген насчитывает более 170 вариантов, К-антиген – более 100, Н-антиген – более 50. Строение О-антигена определяет принадлежность к серогруппе. Штамм, имеющий свой набор антигенов, свою антигенную формулу, называется серологическим вариантом Е. coli. Например, штамм О55:К5:Н21 относится к серогруппе О55.
Факторы патогенности. Е. coli образует эндотоксин, оказывает нейротропное, пирогенное действие (ЭПКП). ЭПКП продуцирует экзотоксин, который, адсорбируясь на эпителии тонкой кишки, вызывает гиперсекрецию воды и хлоридов в просвет тонкой кишки и нарушает обратное всасывание натрия, что приводит к усилению перистальтики, поносу и обезвоживанию. У некоторых диареегенных эшерихий, как и у возбудителей дизентерии, обнаружен инвазивный фактор, способствующий проникновению бактерий внутрь клеток. Патогенность ЭПКП также может проявляться в нефротоксическом действии, возникновении геморрагии. К факторам патогенности относятся также пили и белки, способствующие адгезии, и микрокапсула, препятствующая фагоцитозу. Условнопатогенные и диареегенные кишечные палочки отличаются антигенной структурой и набором факторов патогенности.
Резистентность. Среди других энтеробактерий Е. coli отличается более высокой резистентностью к действию различных факторов окружающей среды.
Эпидемиология энтеральных эшерихиозов (парентеральные эше-рихиозы – см. раздел 13.1.7). Источником энтеральных эшерихиозов являются больные люди и животные. Механизм передачи инфекции фекально-оральный, основные пути передачи – пищевой, контактно-бытовой. Заболевание чаще носит характер вспышек.
Патогенез. Входные ворота инфекции – полость рта. Е. coli, попадая в тонкую кишку и обладая тропизмом к клеткам ее эпителия, адсорбируется на них с помощью пилей и белков наружной мембраны. Бактерии размножаются, погибают, освобождая эндотоксин, который усиливает перистальтику кишечника, вызывает диарею, повышение температуры, признаки общей интоксикации. Кроме того, кишечная палочка выделяет экзотоксин, обусловливающий более тяжелую диарею, рвоту и значительное нарушение водно-солевого обмена. ЭПКП, образующие другие факторы патогенности, оказывают соответствующее действие на организм, что и определяет клиническую картину болезни.
Клиническая картина. Инкубационный период продолжается от 2 до 6 дней. Заболевание начинается остро с повышения температуры тела, поноса, рвоты. Развивается обезвоживание, могут появиться кровь в испражнениях, признаки поражения почек. Формы энтеральных эшерихиозов могут быть различные – от бессимптомной до токсико-септической. Колиэнтериты являются одной из причин ранней детской смертности.
Иммунитет после перенесенного заболевания непрочный и непродолжительный.
Микробиологическая диагностика. Основной материал для исследования – испражнения. Диагностика осуществляется с помощью бактериологического метода, при котором не только определяют род и вид выделенной чистой культуры, но и устанавливают принадлежность ее к серогруппе; внутривидовая идентификация заключается в определении серовара; обязательно определение антибиотикограммы.
Лечение. Для лечения заболеваний, вызываемых Е. coli, используют антибиотики.
Профилактика. Проведение санитарно-гигиенических мероприятий.
Возбудители дизентерии
Бактериальная дизентерия, или шигеллез, – инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода Shigella, протекающее с преимущественным поражением толстой кишки. Название рода связано с именем К.Шиги, открывшего одного из возбудителей дизентерии. Таксономия и классификация. Возбудители дизентерии относятся к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду Shigella. Современная международная классификация приведена в
Морфология и тинкториальные свойства. Шигеллы – грамот-рицательные палочки с закругленными концами, длиной 2.3 мкм, толщиной 0,5-7 мкм; не образуют спор, не имеют жгутиков, неподвижны. У многих штаммов обнаруживают ворсинки общего типа и половые пили. Некоторые шигеллы обладают микрокапсулой.
Культивирование. Дизентерийные палочки – факультативные анаэробы. Они нетребовательны к питательным средам, хорошо растут при температуре 37ºС и рН среды 7,2.7,4. На плотных средах образуют мелкие прозрачные колонии, в жидких средах – диффузное помутнение. В качестве среды обогащения для культивирования шигелл чаще всего используют селенитовый бульон.
Ферментативная активность. Шигеллы обладают меньшей ферментативной активностью, чем другие энтеробактерий. Углеводы они сбраживают с образованием кислоты. Важным признаком, позволяющим дифференцировать шигеллы, является их отношение к манниту: S. dysenteriae не ферментируют маннит, представители групп В, С, D маннитпозитивны. Наиболее биохимически активны S. sonnei, которые медленно (в течение 2 сут) могут сбраживать лактозу. На основании отношения S. sonnei к рамнозе, ксилозе и мальтозе различают 7 биохимических вариантов ее.
Антигенная структура. Шигеллы имеют О-антиген, его неоднородность позволяет выделять внутри групп серовары и подсеро-вары; у некоторых представителей рода обнаруживают К-антиген. Факторы патогенности. Все дизентерийные палочки образуют эндотоксин, оказывающий энтеротропное, нейротропное, пиро-генное действие. Кроме того, S.dysenteriae (серовар I) – шигеллы Григорьева.Шиги – выделяют экзотоксин, оказывающий энтеротоксическое, нейротоксическое, цитотоксическое и нефро-токсическое действие на организм, что соответственно нарушает водно-солевой обмен и деятельность ЦНС, приводит к гибели эпителиальных клеток толстой кишки, поражению почечных канальцев. С образованием экзотоксина связано более тяжелое течение дизентерии, вызванной данным возбудителем. Экзотоксин могут выделять и другие виды шигелл. Обнаружен фактор проницаемости RF, в результате действия которого поражаются кровеносные сосуды. К факторам патогенности относятся также инвазивный белок, способствующий их проникновению внутрь эпителиальных клеток, а также пили и белки наружной мембраны, ответственные за адгезию, и микрокапсула.
Резистентность. Шигеллы обладают невысокой устойчивостью к действию различных факторов. Большей резистентностью обладают S. sonnei, которые в водопроводной воде сохраняются до 2½ мес, в воде открытых водоемов выживают до 1'/2 мес- S. sonnei могут не только достаточно долго сохраняться, но и размножаться в продуктах, особенно молочных.
Эпидемиология. Дизентерия – антропонозная инфекция: источником являются больные люди и носители. Механизм передачи инфекций – фекально-оральный. Пути передачи могут быть различные – при дизентерии Зонне преобладает пищевой путь, при дизентерии Флекснера – водный, для дизентерии Григорьева.Шиги характерен контактно-бытовой путь. Дизентерия встречается во многих странах мира. В последние годы наблюдается резкий подъем заболеваемости этой инфекцией. Болеют люди всех возрастов, но наиболее подвержены дизентерии дети от 1 года до 3 лет. Количество больных увеличивается в июле – сентябре. Различные виды шигелл по отдельным регионам распространены неравномерно.
Патогенез. Шигеллы через рот попадают в желудочно-кишечный тракт и достигают толстой кишки. Обладая тропизмом к ее эпителию, с помощью пилей и белков наружной мембраны возбудители прикрепляются к клеткам. Благодаря инвазивному фактору они проникают внутрь клеток, размножаются там, в результате чего клетки погибают. В стенке кишечника образуются изъязвления, на месте которых затем формируются рубцы. Эндотоксин, освобождающийся при разрушении бактерий вызывает общую интоксикацию, усиление перистальтики кишечника, понос. Кровь из образовавшихся язвочек попадает в испражнения. В результате действия экзотоксина наблюдается более выраженное нарушение водно-солевого обмена, деятельности ЦНС, поражение почек.
Клиническая картина. Инкубационный период длится от 1 до 5 дней. Заболевание начинается остро с повышения температуры тела до 38-39ºС, появляются боль в животе, понос. В стуле обнаруживают примесь крови, слизь. Наиболее тяжело протекает дизентерия Григорьева-Шиги.
Иммунитет. После перенесенного заболевания иммунитет не только видо-, но и вариантоспецифичен. Он непродолжителен и непрочен. Нередко заболевание переходит в хроническую форму.
Микробиологическая диагностика. В качестве исследуемого материала берут испражнения больного. Основой диагностики является бактериологический метод, позволяющий идентифицировать возбудителя, определить его чувствительность к антибиотикам, провести внутривидовую идентификацию (определить биохимический вариант, серовар или колициногеновар). При затяжном течении дизентерии можно использовать как вспомогательный серологический метод, заключающийся в постановке РА, РНГА (по нарастанию титра антител при повторной постановке реакции можно подтвердить диагноз).
Лечение. Больных тяжелыми формами дизентерии Григорьева.Шиги и Флекснера лечат антибиотиками широкого спектра действия с обязательным учетом антибиотикограммы, так как среди шигелл нередко встречаются не только антибиотикоустойчивые, но и антибиотикозависимые формы. При легких формах дизентерии антибиотики не используют, поскольку их применение приводит к дисбактериозу, что утяжеляет патологический процесс, и нарушению восстановительных процессов в слизистой оболочке толстой кишки.
Профилактика. Единственный препарат, который может быть использован в очагах инфекции с профилактической целью, – дизентерийный бактериофаг. Основную роль играет неспецифическая профилактика.
Кишечные инфекции – большая группа заболеваний, вызываемых патогенными или условно-патогенными бактериями, вирусами и простейшими. Ведущим симптомом таких патологий является диарея. Такие заболевания очень широко распространены в мире, включая развитые страны.
Все кишечные инфекции лечатся одинаково, поэтому выявление конкретного возбудителя важно не лечащему врачу, а ученым-эпидемиологам, изучающим пути распространения, способы передачи, проявления болезни в каждом новом случае, эффективность лечения и другие характеристики бактерии или вируса-возбудителя. Эта информация крайне важна, учитывая широкое распространение кишечных инфекций на планете и их высокую заразность, поскольку бактерии и вирусы изменяются. Кроме того, возбудителя устанавливают для понимания, какие профилактические мероприятия нужно провести, чтобы предотвратить заражение других людей.
Одним из способов выявления инфекционного агента является бактериологический анализ кала. Он проводится при любых обращениях к врачу с жалобами на диарею. Это самый универсальный способ выявления причины кишечной инфекции, не требующий сложной аппаратуры.
Бактериологический анализ кала основан на изучении физиологических свойств возбудителя, выявленного в биоматериале. Он включает культивирование, выделение чистых культур, идентификацию и типирование возбудителей.
Классификация кишечных инфекций
Перечислим заболевания, которые относятся к группе кишечных инфекций.
1. Вызванные бактериями:
- Холера.
- Ботулизм.
- Брюшной тиф и паратиф (сальмонеллез).
- Шигиллез (дизентерия).
- Эшерихиозы (колиинфекция).
- Другие бактериальные инфекции – кампилобактериоз, иерсиниоз.
2. Вызванные простейшими:
- Амебиаз.
- Лямблиоз и др.
3. Вызванные вирусами:
- Ротавирусом.
- Аденовирусом.
- Норовирусом и др.
4. Вызванные условно-патогенными микроорганизмами:
- Стафилококки (есть условно патогенные и патогенные, например, золотистый стафилококк).
- Клебсиеллы.
- Цитробактер (есть патогенные и условно-патогенные штаммы).
- Кишечная палочка.
- Протей и др.
5. Кишечные инфекции невыясненной этиологии.
6. Смешанные кишечные инфекции.
В 40% случаев возбудителем кишечной инфекции являются вирусы, в 20% - бактерии, в 40% возбудитель не удается установить.
По данным ВОЗ острые кишечные инфекции являются причиной 30 % смертельных случаев у детей до 5 лет.
Как правильно сдать анализ
Подготовка к анализу кала на бактериологическое исследование включает особые правила:
- Использование специального контейнера для сбора кала. Врач может выдать специальную пробирку с питательной средой и стерильную ректальную петлю.
- Подготовка судна – обработать его дезинфицирующим раствором, несколько раз сполоснуть проточной водой, обдать кипятком.
- Нельзя касаться ложечки, внутренних стенок контейнера и крышки.
- Нельзя сдавать анализ после приема антибиотиков.
- Проведение тщательного туалета анального отверстия.
Проба должна попасть в лабораторию в максимально короткие сроки. Допускается хранение материала 2 часа при комнатной температуре и 3 часа при температуре 2-8 °С. Для выявления некоторых возбудителей необходим посев на питательную среду сразу же после взятия биоматериала.
Этапы бактериологического анализа кала
1 день. Посев материала на дифференциально-диагностические среды.
Это специальные питательные среды, применяемые для выявления групп бактерий, отличающихся по способности утилизировать то или иное вещество. Например, часто для выращивания возбудителей кишечных инфекций в питательную среду добавляют лактозу. Некоторые бактерии (кишечная палочка) ее расщепляют. Тогда на поверхности среды вырастают окрашенные колонии микроорганизмов. Некоторые микроорганизмы лактозу не расщепляют (сальмонеллы). Тогда вырастают неокрашенные колонии.
2 день. Выросшие колонии просматривают под микроскопом и описывают. Окрашивают по Граму и пересевают на другие специфические среды для накопления чистой культуры возбудителя.
3 день. С бактериями чистых культур проводят реакции агглютинации. Пересевают культуры на другие среды (Гисса) для выяснения ферментативной активности.
4 день. Оценивают результаты реакции агглютинации, рост на средах Гисса. На основании полученной информации дают окончательный ответ о виде возбудителя, присутствующего в кале.
Расшифровка результата
Стандартный анализ кала на бактериологическое исследование включает выявление нескольких групп бактерий. Особое внимание уделяется кишечной палочке – отдельно сообщается о ее колониях с разными ферментативными свойствами. Большинство этих бактерий относится к группе условно-патогенных. То есть они обитают в кишечнике в качестве сапрофитов, но при определенных условиях становятся патогенными. Стандартное исследование включает и бактериологический анализ кала на дисбактериоз. Какие бактерии могут быть обнаружены в пробе? Об этом можно узнать из приведенного ниже (для примера) результата анализа.
Кишечная палочка, или Escherichia coli (E. coli)
Эти микроорганизмы заселяют толстый кишечник ребенка сразу после рождения. Здесь они преобладают среди факультативно-анаэробных бактерий. Кишечные палочки выполняют множество полезных функций в организме человека. Они способствуют выработке иммунитета к патогенным разновидностям бактерии, а также вырабатывают вещества, сдерживающие рост других микроорганизмов.
Бактерии вида E. coli бывают патогенные и условно-патогенные. Под микроскопом одни и другие выглядят одинаково. Их различают по строению антигенов, расположенных на поверхности бактерий. Для этого проводят серологическое исследование. Условно-патогенные кишечные палочки обитают в толстом кишечнике, но на фоне иммунодефицита могут вызвать воспаления и в других органах, например, в мочевыводящих. Патогенные представители E. coli называют диареегенными. Они относятся к транзиторным бактериям, то есть не локализуются постоянно в организме. При попадании в кишечный тракт они вызывают болезни под общим названием эшерихиозы, главным проявлением которых является диарея.
Расшифровка результатов определения количества кишечной палочки
Стандартный бактериологический анализ кала на кишечную группу инфекций включает такие подсчеты количества кишечных палочек:
- Общее количество E. coli.
- Палочек типичных.
- Со слабовыраженными ферментативными свойствами.
- Лактозонегативных.
- Гемолитических.
Общее количество эшерихии коли в 1 г кала у детей колеблется в пределах от 400 млн до 1 млрд, а у взрослых – 300-400 млн. Чрезмерное размножение бактерий в кишечнике приводит к дисбактериозу.
Типичные (классические) кишечные палочки полезны для организма. Их нормальное количество в кале должно быть в интервале 10 7 -10 8 . Снижение свидетельствует об интоксикации, приводящей к гибели полезной микрофлоры в толстом кишечнике, а также о заселении кишечника паразитами – глистами или простейшими. Другие причины – высокая чувствительность к аллергенам, поражение печени, почек, поджелудочной и щитовидной желез.
Высокое содержание в кале этих бактерий говорит об их чрезмерном размножении, что может привести к появлению гнойных воспалений разной локализации.
Разновидности кишечной палочки, не ферментирующие лактозу (лактозонегативные), являются патогенными. Они поражают клетки толстого кишечника, вызывая диарею. Количество данных бактерий в кале не должно превышать 10 5 . Если у больного с диареей их обнаружено больше, например 10 6 или 10 7 , значит, именно эти микроорганизмы явились причиной болезни. Неспособность использовать лактозу и некоторые другие свойства роднят их с шигеллами – возбудителями дизентерии.
Гемолитические кишечные палочки являются патогенными, локализуются, в основном, в слепой кишке. Вызывают геморрагический колит с симптомами общей интоксикации (тошнота, рвота). В норме в кале отсутствуют.
Условно-патогенные микроорганизмы, способные вызвать кишечную инфекцию
Все чаще бактерии, постоянно обитающие в толстом кишечнике человека, вызывают инфекции различной локализации – пищеварительного тракта, дыхательной или мочеполовой системы. К этому приводят ухудшающаяся экологическая обстановка, бесконтрольный прием антибиотиков и других препаратов, постоянное присутствие бактерий в окружении человека. Заболевают, как правило, новорожденные и дети первых 6 месяцев жизни.
Можно выполнить бактериологический анализ кала в "Инвитро". Это сеть лабораторий, филиалы которых есть во всех крупных городах. Пациентам нравится то, что результаты анализа можно получить онлайн, то есть не нужно за ними ехать в лабораторию.
Стафилококки
Существует три вида бактерий рода Staphylococcus, которые способны вызвать кишечную инфекцию:
- Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus).
- Эпидермальный.
- Сапрофитный.
Золотистый стафилококк является самым патогенным из них, то есть при попадании в организм всегда вызывает развитие болезни. Поэтому в результатах анализа он обычно прописывается отельной строкой. В норме золотистого стафилококка в кале быть не должно. На картинке представлен вид чистой культуры золотистого стафилококка под микроскопом.
Эпидермальный вид также является патогенным, но он менее агрессивен, чем золотистый, то есть может присутствовать в организме, не повреждая его. Сапрофитный вид является обычным обитателем толстого кишечника. Суммарно количество эпидермального и сапрофитного стафилококков не должно превышать 10 4 .
Патогенные микроорганизмы, вызывающие кишечные инфекции
Бактериологический анализ кала на патогенную кишечную группу включает определение бактерий рода Salmonella и рода Shigella. Они являются патогенными, то есть в случае попадания в кишечник вызывают патологии – сальмонеллез, брюшной тиф, дизентерию. В норме отсутствуют в организме, поэтому не выделяются с калом.
Реже в анализах кала обнаруживают другие патогенные микроорганизмы, способные вызвать кишечные инфекции.
Вирусы при анализе кала
У детей первого года жизни возбудителями кишечных инфекций могут быть различные вирусы. При анализе кала микроскопическими и бактериологическими методами вирусы не выявляются.
Обнаружение в кале возбудителей любых кишечных инфекций требует госпитализации детей до 3-месячного возраста. Желательна госпитализация и детей до года.
При установлении дизентерии, сальмонеллеза, стафилококковой инфекции, пищевых токсикоинфекций, эшерихиоза у взрослых и детей старше года назначают лечение на дому. Если течение болезни тяжелое или существует высокая степень риска распространения болезни, больных госпитализируют в инфекционную больницу.
Цель: На основе знаний свойств возбудителей бактериальных кишечных инфекций, их морфофизиологических, биохимических и серологических свойств, эпидемиологии и особенностей патогенеза вызываемых ими заболеваний уметь обосновать тактику микробиологической диагностики и профилактику вызываемых ими заболеваний.
1. Особенности возбудителей бактериальных кишечных инфекций, определяющие их роль в инфекционной патологии человека.
2. Морфофизиологические и биохимические свойства, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета, вызываемых ими заболеваний.
3. Материал и методы микробиологической диагностики бактериальных кишечных инфекций.
4. Неспецифическую профилактику бактериальных кишечных инфекций.
1. Отобрать на средах первичного посева характерные для бактериальных кишечных инфекций колонии.
2. Изучить морфо-тинкториальные свойства и проверить чистоту выделенных культур.
4. Учесть и оценить результаты РА с целью серологической идентификации культуры.
5. Заполнить бланки-направления и бланки-ответы из бак. лаборатории.
1. Классификация и морфофизиологические свойства возбудителей бактериальных кишечных инфекций.
2. Факторы вирулентности возбудителей бактериальных кишечных инфекций.
3. Особенности эпидемиологии и патогенеза заболеваний, вызываемых возбудителями бактериальных кишечных инфекций.
4. Материалы и методы микробиологической диагностики.
5. Оценка чувствительности выделенных штаммов к антибиотикам.
Задания, выполняемые в ходе занятия:
Задание 1. Провести микроскопию Грам отрицательных бактериальных культур. Окраска по методу Грама.
Escherichia coli Shigella sonnei Salmonella enterica
subsp.Typhimurium Proteus vulgaris Klebsiella pneumoniae
Задание 2. Задача. Бактериологическая диагностика колиэнтеритов.
В бактериологическую лабораторию поступил материал (испражнения) от больного с подозрением на острый колит. В анамнезе: учащенный стул с примесью слизи и, часто, тенезмами, схваткообразными болями в животе. Были проведены следующие лабораторные тесты:
1). Посев исследуемого материала на среду Эндо (питательная основа, сульфит натрия и фуксин основной - подавляют рост грамположительных микроорганизмов, a-D-лактоза):
Оцените результат. Опишите, выявленные колонии:_________________________
Объясните причину окраски колоний на среде Эндо:_________________________
2). Провели тест на каталазу
| Контроль | Опыт |
3). Определяли биохимические свойства выделенной культуры:
| Подвиж- ность (0,3% агара) | Среда Олькеницкого | Ман- нит | Цитрат Сим- монса | Мало- нат | Фенил-аланин | Жела-тина | Лизин |
| Глю- коза | лак- тоза | моче- вина | H2S |
Сравните полученные данные с таблицей и определите род микроорганизма-возбудителя заболевания.
Биохимические свойства грамотрицательных бактерий
| Семей- ство | Род микроба | Подвиж- ность (0,3% агара) | Среда Олькеницкого | Ман- нит | Цитрат Симмонса | Малонат | Фенилаланин | Желатина | Лизин | |||
| Глю- коза | лак- тоза | моче- вина | H2S | |||||||||
| Ente- robac- teria- ceae | Escherichia | + | кг | кг | - | - | к | - | - | - | - | +/х |
| Citrobacter | + | кг | кг | - | +/- | к | + | - | - | - | - | |
| Klebsiella | - | кг | к+/- | (+) | - | к | + | + | - | - | + | |
| Enterobacter | +/- | кг | кг+/- | +/- | - | к | + | + | - | + | +/- | |
| Hafnia | +/- | +/- | +/- | - | - | к | х | х | - | - | + | |
| Serratia | + | к | к+/- | +/- | - | к | + | - | - | + | + | |
| Arisona | + | кг | х | - | + | к | + | + | - | (+) | + | |
| Shigella | - | к | - | - | - | к | - | - | - | - | + | |
| Salmonellа | +/- | кг | - | - | + | кг | + | - | - | - | + | |
| Pro- teus | Proteus | + | кг | - | + | +/- | к | +/- | - | + | + | - |
| Providencia | +/- | к+/- | - | - | - | - | + | - | + | - | - | |
| Pseu- domo- daceae | Ps. aeruginosa | + | к | - | + | - | - | + | + | + | - | + |
4). Провели серологическую идентификацию чистой культуры. Оцените результат РА на стекле с агглютинирующими сыворотками:
| Агглютинация |
| Колисыворотка 0111:В4 |
| Колисыворотка 015 |
| Колисыворотка 0112 |
| Колисыворотка 0155 Н7 |
Возбудители Esherichia coli четырех подгрупп:
- энтеропатогенные (ЭПЭ), серотипы 026:В6, 055:В5, 086:В7, 0111:В4, 0124—0128;
- энтеротоксигенные (ЭТЭ), серотипы 06-09, 015, 020;
- энтероинвазивные (ЭИЭ), серотипы 028, 032, 0112, 0115, 0124
- энтерогеморрагические (ЭГЭ), серотипы 0155 Н7 и др., выделяющие цитотоксины.
5). Определили чувствительность к антибиотикам:
имипенем ципрофлоксацин цефотенам
Задание 3. Задача. Бактериологическая диагностика дизентерии.
В бактериологическую лабораторию поступил материал от больного с подозрением на дизентерию. В анамнезе: повышение температуры тела до 38-39°С, озноб, головная боль, тошнота, рвота. Больного беспокоят режущие схваткообразные боли в левой подвздошной области. Частый жидкий стул, без патологических примесей, с течением заболевания с большим количеством слизи с прожилками крови, а иногда и примеси гноя.
1). Какой материал можно взять для исследования:
Были проведены следующие лабораторные тесты:
2). Посев на среду Плоскирева (предназначена для выделения бактерий родов Shigella и Salmonella в состав среды входит лактоза).
Определите какие колонии являются подозрительными._______________________________
2). Посев на среду Эндо и среду с глюкозой:________________________________
3). Определяли биохимические свойства выделенной культуры:
| Подвиж- ность (0,3% агара) | Среда Олькеницкого | Ман- нит | Цитрат Сим- монса | Мало- нат | Фенил-аланин | Жела-тина | Лизин |
| Глю- коза | лак- тоза | моче- вина | H2S |
Сравните полученные данные с таблицей (см. задача 1) и определите род микроорганизма-возбудителя заболевания.
4). Провели серию серологических реакций для идентификацию чистой культуры. Оцените результат РА на стекле с агглютинирующими сыворотками:
| Агглютинация |
| Смесь агглютинирующих сывороток к Shigella sonnei и Shigella flexneri |
| Смесь агглютинирующих сывороток к другим видам шигелл |
| Контроль физ.р-р |
| Агглютинация |
| Агглютинирующая сыворотка к Shigella sonnei |
| Агглютинирующая сыворотка к Shigella flexneri |
| Контроль физ.р-р |
Задание 4. Задача. Бактериологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.
В бактериологическую лабораторию поступил материал от больного с подозрением на дизентерию. В анамнезе: повышение температуры до 38-39°С, выраженная слабость, анорексия, головная боль, диарея. Язык утолщен, обложен серо-коричневатым налетом, с отпечатками зубов по краям. Увеличены печень и селезенка. На коже верхних отделов живота и нижних отделов грудной клетки обнаружена сыпь, число ее элементов 5-6, по характеру розеолезная.
1). Укажите какой материал можно взять на исследование:
2). Оцените результат посева на Среду Эндо, среду с глюкозой и среду Вильсона-Блера:
Среда Эндо _______________________________________
Среда с глюкозой и 10% желчи________________________________________
Среда Вильсона- Блера__________________________________
3). Определяли биохимические свойства выделенной культуры:
| Подвиж- ность (0,3% агара) | Среда Олькеницкого | Ман- нит | Цитрат Сим- монса | Мало- нат | Фенил-аланин | Жела-тина | Лизин |
| Глю- коза | лак- тоза | моче- вина | H2S |
Сравните полученные данные с таблицей (см. задача 1) и определите род микроорганизма-возбудителя заболевания.
4).С целью серодиагностики поставлена реакция Видаля. Реакция Видаля — реакция агглютинации, применяемая для диагностики брюшного тифа и некоторых тифо-паратифозных заболеваний. К различным разведениям сыворотки крови больного добавляют смыв культур возбудителя (брюшного тифа, паратифов) или диагностикумы — стандартные растворы антигенов. После выдерживания в термостате наступает агглютинация в виде зерен, хлопьев, выпадающих в осадок.
| Диагностикум | Разведения сыворотки | Контроль | |||
| 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | Диаг. | Сыв. |
| Брюшнотифозный О-монодиагностикум | |||||
| Брюшнотифозный Н-монодиагностикум | |||||
| Паратифозный А ОН-диагностикум | |||||
| Паратифозный В ОН-диагностикум |
5).Тест на фаготипирование по методу Фишера
Какой тест нужно провести, чтобы назначит лечение пациента?___________________________
6). Через месяц после перенесенного заболевания у пациента взяли кровь для выявления Vi-антигена. (Наряду с другими антигенами возбудитель брюшного тифа содержит Vi-антиген, который обеспечивает устойчивость возбудителя к фагоцитозу (способности специализированных клеток организма, фагоцитов, поглощать и переваривать чужеродные частицы, в том числе и микроорганизмы), способствует хронизации инфекции и брюшнотифозному бактерионосительству.)
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).
| Титр АГ | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 |
| Результат РНГА |
Вопросы для самоконтроля:
1. Обоснуйте выбор сред для первичного посева испражнений с целью диагностики бактериальной дизентерии.
2. Назовите виды шигелл, имеющие наибольшее эпидемиологическое значение на современном этапе.
4. Обоснуйте выбор методов микробиологической диагностики острой и хронической бактериальной дизентерии.
5. Назовите время выдачи положительного ответа из бак. лаборатории при подозрении на бактериальную дизентерию.
6. Какие свойства лежат в основе дифференциации и идентификации шигелл.
7. Меры неспецифической профилактики бактериальной дизентерии.
2. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2001. – С. 357-360, 365, 369-371.
Читайте также: