Методы определения источника инфекции

Понятие об эпидемическом процессе.

Тема. Учение об эпидемическом процессе, его закономерности.

ЛЕКЦИЯ № 2

Прививочный кабинет.

Календарь прививок.

Вывод. Дезинфекция, дезинсекция, дератизация и вакцинация играют главную роль в прерывании эпидемического процесса, как на путях передачи инфекции, так и в восприимчивом организме.

2. Что такое дезинсекция и дератизация?

3. Перечислите виды иммунитета.

4. Перечислите виды иммунологических препаратов.

5. Расскажите об организации иммунопрофилактики.

Актуальность темы: Предметом изучения эпидемиологии с самого начала ее формирования в отличие от клинической медицины стала заболеваемость, отражающая популяционный уровень организации жизни, а не болезнь, отражающая организменный уровень. Таким образом, основная цель эпидемиологии – общественная профилактика.

Используя знание законов течения эпидпроцесса и механизмы по прерыванию его звеньев, можно успешно решать задачи по ликвидации очагов инфекционных болезней

Литература: Д.И.Дранкин. Учебник Эпидемиология.

В.А.Кипайкин. Уч-к Эпидемиология.

Вопросы:

1. Понятие об эпидемическом процессе.

2. Источники возбудителей инфекции.

3. Механизм передачи инфекции.

4. Проявления и закономерности эпидемического процесса

Эпидемический процесс – это возникновение и распространение инфекционных болезней среди людей

Эпидемический процесс – это непрерывная цепь следующих друг за другом, возникающих непосредственно одно из другого специфических инфекционных состояний (больные, носители) или эпидемических очагов.

Эпидемический очаг – это место пребывания источника инфекции с окружающей его территорией в тех пределах, в которых он способен в данной конкретной обстановке при данной инфекции передать заразное начало окружающим людям. Следовательно, эпидроцесс можно определить и как цепь следующих друг за другом эпидемических очагов.

Эпидемический процессобусловливается непрерывностью трех его составных элементов (звеньев): 1) источника возбудителя инфекции, 2) механизма передачи инфекции, 3) восприимчивого организма.

В эпидемиологии инфекция – внедрение и размножение микроорганизмов в макроорганизме с последующим развитием носительства возбудителей или выраженной болезни.

Источник инфекции (инвазии)– зараженный человек или животное, организм которого является естественной средой обитания патогенных микроорганизмов (возбудителей инвазии), откуда они выделяются и могут заражать восприимчивого человека или животное.

В зависимости от того, кто является источником инфекции, инфекционные болезни делят на:

Антропонозы – источником инфекции является зараженный человек. Форма течения болезни имеет определенное эпидемиологическое значение для носительства.

Носитель - (носитель возбудителя инфекции) человек или животное, в организме которого паразитируют патогенные микроорганизмы, но они не вызывают клинических проявлений болезни. Патогенный возбудитель размножается и выделяется из организма носителя. Различают три категории носительства: а) носительство в инкубационном периоде, б) носительство у переболевших и реконвалесцентов, в) здоровое (транзиторное) носительство.

Антропозоонозы– инфекции, при которых источниками могут быть люди и животные (чума, туберкулез, сальмонеллез, крымская геморрагическая лихорадка, желтая лихорадка).

Зоонозы.. Для облигатных (строгих) зоонозов характерно заражение человека от животных: сельскохозяйственные и домашние животные, дикие животные, грызуны, птицы, членистоногие.

Сапронозы– резервуаром возбудителя являются различные объекты окружающей среды – вода, почва, растительность и др. субстраты.

Все болезни разделены на 4 группы: кишечные, дыхательных путей, кровяные, наружных покровов.

В зависимости от возбудителейразличают болезни: вирусные, микробные, протозойные, микотические, гельминтозы.

Интенсивность распространения инфекции может быть различна, что и характеризуется различными терминами.

Спорадической заболеваемостью (спорадией)принято называть обычный для данной территории уровень заболеваемости соответствующей болезнью, причем четкой связи между отдельными заболеваниями установит, как правило, не удается.

Эпидемиейназывается такой уровень заболеваемости, который в несколько раз превосходит уровень спорадической заболеваемости, причем это явление распространяется на значительную территорию (большой город, область, район, государство). Эпидемия имеет эпицентр.

Пандемия (буквально – явление, охватившее весь народ) – особо значительная эпидемия, как по интенсивности заболевания, так и по территории, на которой она распространилась. Например: грипп, холера, чума,

Эндемичные заболевания (эндемос - местный), когда инфекционные болезни более или менее постоянно регистрируются среди населения на определенной территории, но не имеют тенденции к распространению за ее пределы.

Экзотическиминазывают инфекционные болезни, не свойственные населению данной территории.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник инфекции (син.: источник возбудителя инфекции, источник заражения) — зараженный человек или животное, организм которых является естественной средой обитания и накопления патогенных микроорганизмов, откуда они могут тем или иным путем попадать в организм восприимчивого человека (животного) и заражать его.

Общебиологическая роль Источника инфекции состоит в том, что он является обязательным исходным компонентом (звеном) эпидемического процесса (см.), непрерывно протекающего во времени и пространстве. Заражение восприимчивых людей (животных) обычно осуществляется с частотой, достаточной для обеспечения непрерывности эпидемического процесса, что является непременным условием сохранения возбудителя той или иной инфекционной болезни в природе как биол. вида.

Эпидемиологическая значимость (опасность) Источника инфекции определяется длительностью периода, в течение к-рого возбудитель болезни выделяется из зараженного организма, регулярностью и массивностью выделения возбудителей и проф. принадлежностью выделителей. Это определяет частоту случаев заболеваний среди общавшихся с ними восприимчивых лиц и в конечном итоге — интенсивность развития эпид. процесса.

Эпидемиол. значение И. и. при каждой инфекционной болезни также зависит от формы течения болезни (клинически типичной, атипичной, бессимптомной, в т. ч. носительства) и периода болезни (инкубационного, разгара болезни, реконвалесценции). Общеизвестно, что тяжелобольные, напр, при дизентерии, наиболее опасны для окружающих, однако они легко выявляются и госпитализируются. В то же время больные легкими, атипичными, бессимптомными формами болезни в ряде случаев могут не выявляться и тем самым представлять значительно большую эпид. опасность.

Эпидемическая опасность инфекционных больных как источников возбудителей инфекции зависит не только от формы и периода инфекционного процесса, но и от степени устойчивости выделяемых патогенных микроорганизмов в окружающей среде.

В зависимости от сроков выделения патогенных микроорганизмов из зараженного организма различают И. и. с продолжительным (напр., больные бактериальной дизентерией) или коротким (больные корью) заразным периодом. Очевидно, что эпид, опасность И. и. с продолжительным заразным периодом значительно выше.

Можно дифференцировать основные и второстепенные И. и. Основные — это источники, обеспечивающие существование возбудителя инфекции в природе как вида, и в частности его сохранение в межэпид. период, с чем ассоциируется понятие о резервуаре инфекции. В то же время эпидемиол, роль второстепенных И. и. может быть достаточно выраженной. Так, хотя основными И. и. при бешенстве являются волки и лисицы, чаще всего человек заражается от второстепенных источников — собак. Сурки, суслики и песчанки являются основными И. и., обеспечивающими существование возбудителя чумы в природных очагах, однако в развитии эпид, вспышек чумы велика роль второстепенных источников— домовых мышей. При антропонозах (см.) к основным И. и. можно отнести, напр., при дизентерии хронических больных, при брюшном тифе — длительных носителей и т. д.

При зоонозах (см.), опасных для человека, И. и. являются некоторые животные и лишь в редких случаях— человек. Для зоонозных инфекционных болезней определены виды животных, которые могут быть источниками их возбудителей: крупный и мелкий рогатый скот — при бруцеллезе, туберкулезе, ящуре, сибирской язве, сальмонеллезах; лошади, ослы, верблюды — при сапе, чесотке, сибирской язве; лисицы, волки, собаки— при бешенстве; грызуны — при ряде зоонозов, из которых наиболее известны чума, псевдотуберкулез, туляремия, риккетсиозы, клещевой возвратный тиф, энцефалиты, лейшманиозы. Степень опасности животных как И. и. для человека зависит, естественно, от характера общения с ними людей в процессе хозяйственной деятельности, в быту и др.

Значение Источника инфекции при различных инфекционных болезнях изложено в статьях, посвященных отдельным нозологическим формам.

Библиография: Беляков В. Д. Эпидемический процесс, с. 50, Л., 1964; Громашевский Л. В. Общая эпидемиология, с. 46, М., 1965; Многотомное руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней, под ред. Н.Н. Жукова-Вережникова, т. 5, с. 103, М., 1965; Общая и частная эпидемиология, под ред. И. И. Елкина, т. 1, с. 66, М., 1973.

Инфекционные болезни — это заболевания, вызванные проникновением в организм бактерий, грибков или вирусов. Самая важная часть диагностики инфекций — это определение возбудителя и его концентрации. Для этих целей используются разнообразные лабораторные методы, которые позволяют выяснить, чем именно и как давно атакован организм, а в некоторых случаях — спрогнозировать эффективность лечения тем или иным препаратом.

Особенности диагностики инфекционных заболеваний

В клинической практике данный тип заболеваний встречается очень часто. Именно они, по данным Всемирной организации здравоохранения, становятся причиной 26% всех смертей. В список самых распространенных инфекционных заболеваний входят инфекционная пневмония и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, гепатит, ВИЧ, туберкулез, малярия, воспаления органов половой системы и мочевыводящих путей, гистоплазмоз, ротавирусные инфекционные заболевания, ветряная оспа, герпес, вирус папилломы человека и еще несколько десятков болезней. Хотя бы раз в жизни каждый из нас сталкивается с инфекционными заболеваниями и необходимостью быстрой постановки диагноза.

Все инфекционные болезни делятся на пять типов — прионные, вирусные, бактериальные, протозойные и грибковые поражения. Далее будут рассмотрены последние четыре типа как наиболее распространенные. Разные возбудители иногда могут вызывать одно и то же заболевание. В частности, пневмония может быть результатом как вирусной, так и бактериальной инфекции. Лечение зависит не от проявлений, а от возбудителя болезни. Противовирусные препараты бесполезны в борьбе с бактериями и грибками, антибиотики не действуют на вирусы. Поэтому основная задача лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — выявление типа возбудителя.

Способы лабораторной диагностики инфекционных болезней можно разделить на два типа: неспецифические и специфические методы.

К неспецифическим относятся общий анализ крови и исследование соотношения ее белковых фракций, печеночные пробы, общий анализ мочи и кала. Эти методы не дают информации о виде возбудителя, но позволяют узнать, в какой мере болезнь затронула органы и системы организма, что именно в их работе нарушено и насколько далеко зашел процесс.

Специфические — вирусологический и бактериологический методы, микроскопическое исследование возбудителей, анализы на антигены и антитела — направлены непосредственно на обнаружение возбудителя.

Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции:

Бактериоскопический . Исследуется окрашенный специальным образом мазок.

Бактериологический . Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней.

Биологический . Направлен на определение патогенности микроорганизмов.

Серологический . Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни.

Чаще всего для исследований используют кровь или сыворотку крови, реже — слюну, мочу, кал, клетки эпителия (мазок и соскоб) и другой биоматериал.

В лабораторной диагностике вирусных заболеваний используются:

Вирусологическое исследование . Световая и электронная микроскопия дает возможность выявить наличие вирусных включений и сами вирусы и идентифицировать их.

Серологическое исследование для обнаружения антител и антигенов. Этот метод дает возможность быстро выявить агрессора, как и в случае с бактериальными инфекциями. Для диагностики используются разнообразные способы исследования материала — реакции гемадсорбции, гемагглютинации или метод непрямой иммунофлюоресценции. Имунноблоттинг, в частности, позволяет выявлять антитела сразу к нескольким инфекциям и считается современным и точным диагностическим методом.

Молекулярно-генетические методы . Последнее слово в лабораторной диагностике. Позволяют обнаружить вирус даже тогда, когда его концентрация ничтожно мала — то есть на самых ранних стадиях. Самым известным из этих методов является ПЦР, при которой фрагмент вируса многократно копируется до тех пор, пока специалист не получит достаточно материала для определения типа вируса и его изначальной концентрации.

Для выявления вирусов обычно требуется сделать анализ крови.

Так называют инфекции, вызванные простейшими паразитами, например, амебами. Малярия, амёбиаз, токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз, сонная болезнь — вот неполный список самых распространенных протозойных инфекций. Лабораторная диагностика таких заболеваний включает в себя следующие методы:

Микроскопический . Простейшие паразиты выявляются путем исследования под микроскопом окрашенных образцов биоматериала. Самый простой и надежный метод для многих возбудителей.

Культуральный . Посев биоматериала в питательную следу для дальнейшего исследования размножившихся простейших. У этого метода есть существенный недостаток: результатов нужно ждать долго, сам процесс может занять не менее 5-6-ти дней.

Серологический . Используют редко ввиду малой информативности.

Аллергический . Также не является распространенным. Кожные аллергопробы делают для того, чтобы подтвердить лейшманиоз и токсоплазмоз. Это вспомогательный диагностический метод.

В качестве биоматериала для исследований в основном используется кровь, иногда — – кал или моча.

Микроскопическое исследование . Препарат окрашивается и рассматривается под мощным микроскопом. Посредством иммунофлюоресцентной микроскопии исследуется проба, помеченная флюоресцеинами — специальным красителем. Наиболее быстрый способ выявления грибка по сравнению с другими методами.

Культуральный . Происходит посев пробы на питательную среду и дальнейшее исследование полученной в результате колонии грибков.

Серологический . Используется для выявления грибковых поражений, однако для микозов он считается не особенно точным.

Гибридизация нуклеиновых кислот . Самый современный способ выявления грибковых инфекций, его применяют для идентификации основных возбудителей системных микозов. Из культуры извлекается РНК и вносится особым способом помеченная молекула ДНК. Если в пробе наличествует один из основных патогенных грибков, ДНК объединится с его РНК, создав легко различимую структуру. Несомненным преимуществом метода является возможность определить инфекцию на самых ранних стадиях.

Биоматериалом для исследований являются клетки кожи, волос и ногтей, клетки слизистых оболочек (мазок или соскоб), мокрота, моча, секрет простаты, сперма, грудное молоко.

Современные методики диагностики инфекций позволяет выявить их на начальном этапе, Чем раньше болезнь будет обнаружена, тем проще ее вылечить. Поэтому сдавать анализы на инфекции желательно регулярно, даже если вы ни на что не жалуетесь и не замечаете никаких перемен в самочувствии.

Пе­ред сда­чей био­ма­те­ри­а­ла для ис­сле­до­ва­ний иног­да тре­бу­ет­ся опре­де­лен­ная под­го­тов­ка. Так, кровь обыч­но сда­ют с ут­ра, на­то­щак, а пе­ред за­бо­ром маз­ка не ре­ко­мен­ду­ет­ся при­ни­мать душ. Эти тре­бо­ва­ния очень важ­ны: они обес­пе­чи­ва­ют точ­ность ре­зуль­та­та, по­это­му узнай­те у вра­ча за­ра­нее о под­го­то­ви­тель­ных ме­рах и точ­но сле­дуй­те всем его ре­ко­мен­да­ци­ям.

На нашем языке постоянно обитает больше 600 видов известных микроорганизмов, но у нас больше шансов подхватить инфекцию в общественном транспорте. Что является источником инфекционного заболевания? Как действует механизм заражения?

Патогенность организмов

Заражение болезнетворными микроорганизмами называется инфекцией. Термин появился ещё в 1546 году благодаря Джироламо Фракасторо. В настоящее время науке известно приблизительно 1400 микроорганизмов, они окружают нас повсюду, однако инфекции не развиваются в нас ежесекундно.

Условно-патогенные микроорганизмы (кишечная палочка, гриб кандида) не вызывают у здорового человека никаких реакций. Они могут обитать в окружающей среде, быть частью микрофлоры нашего организма. Но при определенных условиях, например при слабом иммунитете, они становятся патогенными, то есть вредными.

Источник инфекций

Инфекционное заболевание может быть вызвано проникновением в организм патогенных грибков, вирусов, простейших, бактерий, прионов. Источником возбудителей инфекции является среда, которая способствует их развитию. Такой средой зачастую выступает человек или животное.

Попадая в благоприятные условия, микроорганизмы активно размножаются, а затем покидают источник, оказываясь во внешней среде. Там болезнетворные микроорганизмы, как правило, не размножаются. Их количество постепенно уменьшается вплоть до полного исчезновения, а различные неблагоприятные факторы только ускоряют этот процесс.

Окружающая среда как передатчик

Важно понимать, что окружающая среда - это не источник инфекции. Она всегда выступает лишь посредником для передачи микроорганизмов. Недостаточная влажность, отсутствие питательных веществ и несоответствующая температура внешней среды являются неблагоприятными условиями для их развития.

Воздух, предметы быта, вода, почва сначала сами подвергаются заражению, а уже потом транспортируют паразитов в тело хозяина. Если микроорганизмы находятся в этих средах слишком долго, они погибают. Хотя некоторые обладают особой стойкостью и могут сохраняться даже в неблагоприятных условиях на протяжении многих лет.

Сильной устойчивостью обладает возбудитель сибирской язвы. В почве он сохраняется несколько десятков лет, а при кипячении погибает только через час. Он также абсолютно равнодушен к дезинфицирующим препаратам. Возбудитель холеры Эль-Тор способен сохраняться в почве, песке, продуктах и фекалиях, а прогревание водоема до 17 градусов позволяет палочкам размножаться.

Источники инфекции: виды

Инфекции делятся на несколько типов, в соответствии с тем, в каких организмах они размножаются и кому могут передаваться. Исходя из этих данных, выделяют антропонозы, зооантропонозы и зоонозы.

Зооантронозы или антропозоонозы вызывают болезни, при которых источником инфекции является человек или животное. У людей заражение чаще всего происходит через животных, в особенности через грызунов. К зоонозным инфекциям относится бешенство, сап, туберкулез, лептоспироз, сибирская язва, бруцеллез, трипаносомоз.

Антропонозной болезнь является в том случае, когда источник инфекции – человек, и передаваться она может только другим людям. Сюда относится возвратный, сыпной и брюшной тиф, ветряная оспа, гонорея, грипп, сифилис, коклюш, холера, корь и полиомиелит.

Зоонозами называют инфекционные болезни, для которых благоприятной средой является организм животного. При определенных условиях заболевание может передаваться людям, но от человека к человеку - нет. Исключение составляют чума и желтая лихорадка, способные циркулировать среди людей.

Выявление инфекции

Зараженный человек или животное может стать причиной широкого распространения заболевания в пределах одного, нескольких населенных пунктов, а иногда и нескольких стран. Опасные заболевания и их распространения изучают эпидемиологи.

При обнаружении хотя бы одного случая инфекции врачи выясняют все подробности заражения. Происходит выявление источника инфекции, определение её вида и способов распространения. Для этого чаще всего применяется эпидемиологический анамнез, который заключается в опросе больного о недавних действиях, контактах с людьми и животными, дате проявления симптомов.

Полная информация о заразившемся является крайне полезной. С её помощью удается выяснить путь передачи инфекции, возможный первоисточник, а также потенциальный масштаб (станет ли случай единичным или массовым).

Первоначальный источник инфекции выявить не всегда легко, их может быть сразу несколько. Особенно это трудно сделать при антропозоонозных заболеваниях. В таком случае главной задачей эпидемиологов является определение всех потенциальных источников и путей передач.

Способы передачи

Существует несколько механизмов передачи инфекции. Фекально-оральный характерен для всех кишечных болезней. Вредоносные микробы в избытке находятся в кале или рвотных массах, в здоровый организм они попадают с водой или контактно-бытовым способом. Так происходит, когда источник инфекции (больной человек) плохо моет руки после туалета.

Респираторный, или воздушно-капельный действует при вирусных инфекциях, которые поражают дыхательные пути. Перенос микроорганизмов происходит при чихании или кашле вблизи незараженных объектов.

Трансмиссивный подразумевает передачу инфекции через кровь. Произойти это может при укусе переносчиком, например блохой, клещом, малярийным комаром, вшами. Контактным путем переносятся возбудители, которые располагаются на коже или слизистых. Проникают в организм через раны на теле или во время прикосновения к больному.

Половым путем передаются в основном венерические заболевания, как правило, непосредственно при половом контакте. Вертикальный механизм передачи представляет заражение плода от матери во время беременности.

Специфичность передачи инфекции

Для каждого вида микроорганизмов характерен свой механизм, благодаря которому вирусы или бактерии попадают в организм хозяина. Как правило, таких механизмов несколько, а определенные факторы внешней среды иногда могут поспособствовать передаче паразитов.

В то же время способ, который подходит одним микробам, совершенно не способствует переносу других. Например, многие возбудители респираторных инфекций абсолютно бессильны перед желудочным соком. Попадая в кишечно-желудочный тракт, они гибнут и не вызывают развития заболевания.

Некоторые механизмы попадания вредоносных микробов в организм могут, наоборот, ускорить развитие болезни. Так, попадание возбудителя сифилиса в кровоток при помощи зараженной медицинской иглы вызывает осложнения. Болезнь протекает интенсивнее.

Заключение

Инфекция представляет собой совокупность биологических процессов, возникающих и развивающихся в организме при внедрении в него патогенной микрофлоры. Недуг может поразить как человека, так и животного. Основными механизмами передачи является контактный, половой, воздушно-капельный, фекально-ротовой, вертикальный пути.

Источник инфекции – это среда, благоприятная для размножения и распространения микробов. Подходящими условиями зачастую обладают люди и животные. Окружающая среда, как правило, выступает в роли посредника.

Она обычно не обладает условиями для жизнедеятельности патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Продолжительное пребывание во внешней среде способствует их вымиранию. В отдельных случаях микроорганизмы способны сохраняться в почве, воде, песке от нескольких дне до десятилетий.

Диагностика инфекционных заболеваний является одной из самых сложных проблем в клинической медицине. Лабораторные методы исследования при ряде нозологических форм играют ведущую, а в целом ряде клинических ситуаций решающую роль не только в диагностике, но и в определении конечного исхода заболевания.

Диагностика инфекционных заболеваний почти всегда предусматривает использование комплекса лабораторных методов.

1. бактериологические;
2. серологические;
3. метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения ДНК или РНК возбудителя инфекционного заболевания в исследуемом материале.

У одних пациентов для диагностики этиологии инфекционно-воспалительного процесса достаточно провести бактериологическое исследование, в других клинических ситуациях решающее значение имеют данные серологических исследований, в третьих, предоставить полезную информацию может только метод ПЦР. Однако наиболее часто в клинической практике врачу-клиницисту необходимо использовать данные различных методов лабораторных исследований.

Бактериологические методы исследования

Бактериологические исследования наиболее часто проводят при подозрении на гнойно-воспалительные заболевания (составляют 40-60% в структуре хирургических заболеваний) с целью их диагностики, изучения этиологической структуры, определения чувствительности возбудителей к антибактериальным препаратам. Результаты бактериологических анализов способствуют выбору наиболее эффективного препарата для антибактериальной терапии, своевременному проведению мероприятий для профилактики внутрибольничных инфекций.

Возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний являются истинно-патогенные бактерии, но наиболее часто условно-патогенные микроорганизмы, входящие в состав естественной микрофлоры человека или попадающие в организм извне. Истинно-патогенные бактерии в большинстве случаев способствуют развитию инфекционного заболевания у любого здорового человека. Условно-патогенные микроорганизмы вызывают заболевания преимущественно у людей с нарушенным иммунитетом.

Бактериологические исследования при заболеваниях, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, направлены на выделение всех микроорганизмов, находящихся в патологическом материале, что существенно отличает их от аналогичных исследований при заболеваниях, вызванных истинно патогенными микроорганизмами, когда проводится поиск определенного возбудителя.

Для получения адекватных результатов бактериологического исследования при гнойно-воспалительных заболеваниях особенно важно соблюдать ряд требований при взятии биоматериала для анализа, его транспортировки в лабораторию, проведения исследования и оценки его результатов.

Для идентификации вида возбудителя гнойно-воспалительных заболеваний и определения чувствительности к антибактериальным препаратам бактериологические лаборатории используют комплекс методов. Они включают:

• микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия) из доставленного биоматериала;
• выращивание культуры микроорганизмов (культивирование);
• идентификацию бактерий;
• определение чувствительности к антимикробным препаратам и оценку результатов исследования.

Доставленный в бактериологическую лабораторию биоматериал первоначально подвергается микроскопическому исследованию.

Микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия), окрашенного по Граму или другими красителями, проводят при исследовании мокроты, гноя, отделяемого из ран, слизистых оболочек (мазок из цервикального канала, зева, носа, глаза и т.д.). Результаты микроскопии позволяют ориентировочно судить о характере микрофлоры, ее количественном содержании и соотношении различных видом микроорганизмов в биологическом материале, а также дает предварительную информации об обнаружении этиологически значимого инфекционного агента в данном биоматериале, что позволяет врачу сразу начать лечение (эмпирическое). Иногда микроскопия позволяет выявить микроорганизмы, плохо растущие на питательных средах. На основании данных микроскопии проводят выбор питательных сред для выращивания микробов, обнаруженных в мазке.

Культивирование микроорганизмов. Посев исследуемого биоматериала на питательные среды производят с целью выделения чистых культур микроорганизмов, установления их вида и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. Для этих целей используют различные питательные среды, позволяющие выделить наибольшее количество видов микроорганизмов. Оптимальными являются питательные среды, содержащие кровь животного или человека, а также сахарный бульон, среды для анаэробов. Одновременно производят посев на дифференциально-диагностические и селективные (предназначенные для определенного вида микроорганизмов) среды. Посев осуществляют на стерильные чашки Петри, в которые предварительно заливают питательную среду для роста микроорганизмов.

Микроскопия мазков, окрашенных по Граму

1 - стрептококки; 2 - стафилококки; 3 - диплобактерии Фридленда; 4 - пневмококки

Чашки Петри с посевами инкубируют в термостате при определенных температурных, а для ряда микроорганизмов газовых (например, для выращивания анаэробов создают условия с низким содержанием кислорода) режимах в течение 18-24 ч. Затем чашки Петри просматривают. Количественную обсемененность доставленного биоматериала микрофлорой определяют по числу колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл или 1 мг исследуемого образца. При просмотре чашек Петри выявляют некоторые особенности изменения цвета среды, ее просветления в процессе роста культуры. Многие группы бактерий образуют характерные формы колоний, выделяют пигменты, которые окрашивают колонии или среду вокруг них. Из каждой колонии делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Оценивают однородность бактерий, форму и размер, наличие спор или других включений, капсулы, расположение бактерий, отношение к окраске по Граму. Вся эта информация служит важнейшей составляющей для выбора сред и получения в дальнейшем чистой культуры каждого микроорганизма.

Колонии отсевают на плотные, жидкие, полужидкие питательные среды, оптимальные для культивирования определенного вида бактерий.

Выделенные чистые культуры микроорганизмов подвергают дальнейшему изучению в диагностических тестах, основанных на морфологических, ферментативных, биологических свойствах и антигенных особенностях, характеризующих бактерий соответствующего вида или варианта.

Определение чувствительности к антибактериальным препаратам. Чувствительность к антимикробным препаратам изучают у выделенных чистых культур микроорганизмов имеющих этиологическое значение для данного заболевания. Поэтому в направлении на бактериологические анализы требуется указать диагноз заболевания у больного. Определение чувствительности бактерий к спектру антибиотиков помогает лечащему врачу правильно выбрать препарат для лечения больного.

Оценка результатов исследования. Принадлежность условно-патогенных микроорганизмов к естественной микрофлоре организма человека создает ряд трудностей при оценке их этиологической роли в развитии гнойно-воспалительных заболеваний. Условно-патогенные микроорганизмы могут представлять нормальную микрофлору исследуемых жидкостей и тканей или контаминировать их из окружающей среды. Поэтому для правильной оценки результатов бактериологических исследований необходимо знать состав естественной микрофлоры изучаемого образца. В тех случаях, когда исследуемый биоматериал в норме стерилен, как, например, спинномозговая жидкость, экссудаты, все выделенные из него микроорганизмы могут считаться возбудителями заболевания. В тех случаях, когда исследуемый материал имеет собственную микрофлору, как, например, отделяемое влагалища, кал, мокрота, нужно учитывать изменения ее качественного и количественного состава, появление несвойственных ему видов бактерий, количественную обсемененность биоматериала. Так, например, при бактериологическом исследовании мочи степень бактериурии (число бактерий в 1 мл мочи), равная и выше 10 5 , свидетельствует об инфекции мочевых путей. Более низкая степень бактериурии встречается у здоровых людей и является следствием загрязнения мочи естественной микрофлорой мочевых путей.

Установить этиологическую роль условно-патогенной микрофлоры помогают также нарастание количества и повторность выделения бактерий одного вида от больного в процессе заболевания.

Врач-клиницист должен знать, что положительный результат бактериологического исследования в отношении биологического материала, полученного из в норме стерильного очага (кровь, плевральная жидкость, спинномозговая жидкость, пунктат органа или ткани), всегда тревожный результат, требующий немедленных действий по оказанию медицинской помощи.

Серологические методы исследования

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела. Серологические реакции используются в двух направлениях.

С внедрением в практику лабораторий метода иммуноферментного анализа (ИФА) стало возможным определять в крови больных антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов (IgM и IgG), что существенным образом повысило информативность серологических методов диагностики. При первичном иммунном ответе, когда иммунная система человека взаимодействует с инфекционным агентов в первый раз, синтезируются преимущественно антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М. Лишь позднее, на 8-12 день после попадания антигена в организм, в крови начинают накапливаться антитела иммуноглобулинов класса G. При иммунном ответе на инфекционные агенты вырабатываются также и антитела класса А (IgA), которые играют важную роль в защите от инфекционных агентов кожи и слизистых оболочек.

2. Установление родовой и видовой принадлежности микроба или вируса. В этом случае неизвестным компонентом реакции является антиген. Такое исследование требует постановки реакции с заведомо известными иммунными сыворотками.

Серологические исследования не обладают 100 % чувствительностью и специфич-ностью в отношении диагностики инфекционных заболеваний, могут давать перекрестные реакции с антителами, направленными к антигенам других возбудителей. В связи с этим оценивать результаты серологических исследований необходимо с большой осторожностью и учетом клинической картины заболевания. Именно этим обусловлено использование для диагностики одной инфекции множества тестов, а также применение метода Western-blot для подтверждения результатов скрининговых методов.

В последние годы прогресс в области серологических исследований связан с разработкой тест-систем для определения авидности специфических антител к возбудителям различных инфекционных заболеваний.

Авидность - характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами. В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-антитела, а несколько позже и специфические IgG-антитела. IgG-антитела обладают поначалу низкой авидностью, то есть достаточно слабо связывают антиген. Затем развитие иммунного процесса постепенно (это могут быть недели или месяцы) идет в сторону синтеза лимфоцитами высокоспецифичных (высокоавидных) IgG-антител, более прочно связывающихся с соответствующими антигенами. На основании этих закономерностей иммунного ответа организма в настоящее время разработаны тест-системы для определения авидности специфических IgG-антител при различных инфекционных заболеваниях. Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование и тем самым с помощью серологических методов установить период инфицирования пациента. В клинической практике наиболее широкое распространение нашло определение авидности антител класса IgG при токсоплазмозе и цитомегаловирусной инфекции, что дает дополнительную информацию, полезную в диагностическом и прогностическом плане при подозрении на эти инфекции, в особенности при беременности или планировании беременности.

Метод полимеразной цепной реакции

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать. Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеотидов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, то есть одной бактерии или вирусной частицы. Введение в реакцию дополнительного этапа - синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы - позволило тестировать РНК-вирусы, например, вирус гепатита С. ПЦР - это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

В ПЦР может быть использован различный биологический материал - сыворотка или плазма крови, соскоб из уретры, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость и т.д. В первую очередь ЦПР применяют для диагностики инфекционных болезней, таких как вирусные гепатиты В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (гонорея, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная инфекции), туберкулез, ВИЧ-инфекция и т.д.

Преимущество ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний перед другими методами исследований заключается в следующем:

• возбудитель инфекции может быть обнаружен в любой биологической среде организма, в т.ч. и материале, получаемом при биопсии;
• возможна диагностика инфекционных болезней на самых ранних стадиях заболевания;
• возможность количественной оценки результатов исследований (сколько вирусов или бактерий содержится в исследуемом материале);
• высокая чувствительность метода; например чувствительность ПЦР для выявления ДНК вируса гепатита В в крови составляет 0,001 пг/мл (приблизительно 4,0 . 10 2 копий/мл), в то время как метода гибридизации ДНК с использованием разветвленных зондов - 2,1 пг/мл (приблизительно 7,0 . 10 5 копий/мл).