Вакцина против орнитоза птиц

Министерство аграрной политики Украины

Харьковская государственная зооветеринарная академия

Кафедра эпизоотологии и ветеринарного менеджмента

Диагностика и лечение орнитоза птиц

Студент 3 курса 9 группы ФВМ

1. Определение болезни

2. Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб

3. Возбудитель болезни

6. Течение и клиническое проявление.

7. Патологоанатомические признаки

8. Диагностика и дифференциальная диагностика

9. Иммунитет, специфическая профилактика

1. Определение болезни

Орнитоз птиц (лат., англ. — Ornitosis, Chlamidiosis; пситтакоз, хламидиоз птиц, заразная пневмония, пневмотиф) — контагиозная болезнь диких и сельскохозяйственных птиц, а также млекопитающих и человека, протекающая в виде воспаления респираторных органов.

2. Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб

Заболевание имеет широкое распространение во всех странах с развитым птицеводством. Оно опасно для человека, у которого протекает в виде пневмонии. Особую опасность для человека представляет уход за больной птицей, кроме того, заражение может произойти при убое и разделке тушек.

3. Возбудитель болезни

Возбудитель — CMamidophilapsittaci (см. Хламидиозы, Общая характеристика), хорошо размножается в культурах ткани, а также в 6. 10-дневных куриных эмбрионах. После их гибели хламидии микроскопически обнаруживаются в коже эмбриона, желточной, хорион-аллантоисной и амниотической оболочках.

В крови переболевших животных и птиц обнаруживают специфические антитела.

Устойчивость возбудителя орнитоза, как и всех хламидии, к действию физико-химических факторов невысокая. При нагревании до 70 °С он погибает через 10 мин, в водопроводной воде (17. 19°С) сохранялся 17сут, УФ-лучи вызывают его гибель через 3 мин. Возбудитель погибает под действием 5%-ных растворов лизола, карболовой кислоты в течение 30 мин, от действия 2%-ного раствора хлорамина — через 3 ч.

В настоящее время насчитывается 125 видов птиц, у которых отмечено заболевание орнитозом. В естественных условиях орнитозом болеют куры, утки, индейки, гуси, фазаны, голуби. Наиболее восприимчивы птицы из семейства попугаев. Молодняк более чувствителен к заражению, чем взрослые птицы, и смертность среди него более высокая. Из лабораторных животных легко заражаются белые мыши, кролики, хомяки. У многих птиц заболевание протекает бессимптомно.

Источник возбудителя инфекции — больная птица, выделяющая вирус при чиханьи, кашле, с фекалиями. Экскреты и носовая слизь загрязняют оперение и окружающие предметы. Заражение птицы в естественных условиях происходит в основном воздушно-капельным путем. Заражение также может произойти при склевывании инфицированных выделениями больных корма и подстилки.

Птицы, переболевшие орнитозом, обычно длительное время остаются хламидионосителями. Так, при обследовании в РСК свободно живущих городских голубей (сизарей) было выявлено свыше 80 % реагирующих.

В плохих условиях содержания, при скученности птиц и неполноценном кормлении латентная инфекция переходит в генерализованную, сопровождающуюся рассеиванием возбудителя во внешнюю среду. От ла-тентно-инфицированных взрослых птиц могут заражаться в гнездах птенцы.

Попавшие с воздухом в легкие и воздухоносные мешки хламидии размножаются в клетках этих органов, разносятся кровью по всему организму и вторично локализуются в дыхательных путях, паренхиматозных и половых органах, в которых вызывают воспалительные и дегенеративные процессы. Латентная инфекция может перейти в явную форму при воздействии стресс-факторов, а также при снижении резистентности. В целом характер поражений при орнитозе генерализованный, вызывающий системные изменения в виде пневмоний, поражений трахеи, глаз, гепатита, нефрита, аэросаккулита, энцефалита и др.

6. Течение и клиническое проявление

Болеют утки всех возрастов, но более восприимчивы З. 30-суточные утята; летальность до 30 %. У больных утят наблюдают слабость, расстройство движения, кахексию, анорексию и диарею. Фекалии водянистые, зеленоватого цвета. Отмечают также серозный или серозно-гнойный конъюнктивит и катаральный ринит, чиханье, кашель, иногда затрудненное дыхание. На перьях вокруг глаз находят корочки засохшего экссудата. При прогрессировании болезни быстро наступает гибель.

У взрослых голубей преобладают субклинические и латентные формы, у гнездовых голубей течение чаще острое. Общие симптомы у больных голубей: потеря аппетита, жажда, нарушение пищеварения, разжиженный помет, синюшность кожи, неспособность к полету, параличи крыльев и ног. У взрослых голубей снижается оплодотворяемость, они нерегулярно откладывают яйца. Скрытая форма у молодых гнездовых голубей может проявляться внезапной гибелью в возрасте 2. 4 нед. Латентно инфицированные голуби, выпускаемые в полет, в плохую погоду нередко возвращаются в голубятню с запозданием или не возвращаются совсем. Хроническая форма часто встречается у молодых, редко — у взрослых голубей и характеризуется воспалением кишечника, слизистых оболочек глаз, катаром носовой полости, бронхиальным катаром, воспалением легких.

Воспаление глаза может быть одно- и двусторонним. Слизистая оболочка покрасневшая и отечная, отмечают истечение секрета, светобоязнь. В дальнейшем возникает серозное, позднее — слизисто-гнойное воспаление. Перья вокруг глаза выпачканы секретом, часто склеены. Происходит также деформация век. В тяжелых, запущенных случаях глазное яблоко полностью атрофируется, птица слепнет. При воспалении слизистых оболочек носа возникает типичный катар и появляются симптомы заразного насморка. Вначале серозный, позднее серозно-фибринозный экссудат выделяется на поверхность клюва. Больные голуби часто чихают, трясут головой, восковица принимает серый цвет за счет экссудата, она как бы припудрена. Если заклеивается носовое отверстие, то голуби дышат с открытым клювом. При бронхиальном катаре и воспалении воздухоносных мешков отмечают затрудненное дыхание с различными звуками (хрипящий насморк). Такие голуби безучастны, истощены вследствие отказа от корма, дрожат и погибают.

Заболевание протекает тяжело у ослабленных голубей, при внезапном понижении температуры. Гнездовые голуби болеют намного тяжелее и чаще гибнут. Летальность в среднем составляет около 50 %.

Орнитоз (пситтакоз) у попугаев протекает остро или хронически. При остром течении болезни наблюдают общую слабость, сонливость, отсутствие аппетита, диарею. При прогрессировании болезни развивается истощение. Больные птицы погибают с явлениями паралича и судорог. Чаще у попутаевых инфекция протекает хронически, без выраженных клинических признаков.

Куры разных возрастов устойчивы к естественному и экспериментальному заражению С. psittaci. Эпизоотии или энзоотии хламидиоза у кур и цыплят не наблюдали. Болезнь обычно протекает скрыто и скоротечно. В острых случаях у отдельных цыплят могут быть фибринозный пери- и эпикардит и увеличение печени.

У индеек при заболевании, вызванном токсигенными штаммами, развиваются кахексия, анорексия, гипертермия. Испражнения желати-нозной консистенции, желто-зеленого цвета. Яйценоскость уменьшена. У некоторых птиц отмечают хрипы и измененный голос. Летальность достигает 10. 30 %. При заражении птиц слаботоксигенными штаммами перечисленные выше клинические признаки наблюдают у небольшого процента заболевших. У большинства же птиц отмечают скоропроходящие слабые признаки заболевания. Летальность низкая — 0,1..-4 %.

7. Патологоанатомические признаки

Патологоанатомические изменения при орнитозе

Гистологические изменения в органах характеризуются экссудативны-ми, альтернативными и продуктивными процессами.

8. Диагностика и дифференциальная диагностика

Диагностику осуществляют с учетом эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и подтверждают результатами лабораторных исследований.

При положительных результатах названных выше исследований диагноз считается установленным.

Для массовых исследований птицы на орнитоз применяют также аллергическое исследование с орнитозным аллергеном.

9. Иммунитет, специфическая профилактика

После переболевания у птицы вырабатывается нестерильный иммунитет. Были проведены испытания различных вакцин против орнитоза, но широкого распространения они не получили.

Для предупреждения заноса орнитозной инфекции в птицеводческие хозяйства необходимо проводить мероприятия по уничтожению дикой птицы, залетающей на территорию хозяйства, вентиляционные отверстия и окна необходимо закрывать мелкоячеистой сеткой.

В птицеводческих хозяйствах регулярно проводят текущую дезинфекцию в присутствии птицы аэрозолями дезинфекционных средств согласно инструкции по проведению аэрозольной дезинфекции птицеводческих помещений в присутствии птицы. Важным звеном в профилактике болезни является недопущение запыленности воздуха птичников и соблюдение параметров микроклимата.

Мероприятия по защите от орнитоза (пситтакоза) при продаже птицы сводятся к ветеринарному надзору за ее состоянием и соблюдением сроков карантина.

В промышленном птицеводстве лечение не проводят. Прежде чем начать лечение домашней птицы, необходимо учесть ее ценность и степень развития процесса, в запущенных случаях лечение неэффективно.

Для лечения больной птицы применяют антибиотики широкого спектра действия, в особенности тетрациклин, окситетрациклин, байтрил, кол-мик-Е, эриприм и другие и их комбинации. Пенициллин и стрептомицин не действуют на возбудитель, и поэтому их применять нежелательно. Лечение не всегда дает хорошие результаты. Иногда голуби, подвергшиеся длительному лечению, по-прежнему вьщеляют возбудитель и загрязняют окружающую среду.

Для лечения и медикаментозной профилактики при добавлении препаратов к питьевой воде целесообразно применять водорастворимые антибиотики вместе с витаминами.

Лечение считается успешным в том случае, если спустя 10 дней после начала применения препарата обнаруживается 10. 20 % вылеченных птиц.

В птицеводческих хозяйствах после подтверждения диагноза больная птица подлежит уничтожению независимо от ее ценности.

Очистку и дезинфекцию помещения проводят под руководством ветеринарного врача. Предметы ухода, корм, подстилку, насесты, которые находились в контакте с птицей, подвергают тщательной дезинфекции. Почву обрабатывают ежедневно дезинфицирующими препаратами. Здоровая птица хозяйства и птица, находившаяся в контакте с больными, должна пройти курс антибиотикотерапии.

Для дезинфекции применяют формалин-ксилонафтовую смесь в соотношении 3:1. Можно также использовать аэрозоль раствора формальдегида, крезола. Остатки корма, подстилки, малоценные предметы ухода подлежат сжиганию, или их закапывают на глубину не менее 0,5 м.

13. Меры по охране людей

Уход за помещением, где находится больная птица, проводят в защитной одежде и маске; персонал должен пройти специальную подготовку и получить инструктаж от ветеринарного врача. Защитную одежду обслуживающего персонала и ветеринарного врача заменяют через 3 дня.

Во всех случаях, когда зарегистрировано заболевание птицы орнитозом, необходимо проверить по РСК сыворотку крови людей, находившихся в контактах с птицей.

Нередки случаи заболевания орнитозом детей, которые подбирают на улице больных голубей и ухаживают за ними. В случае заболевания людей тяжелой формой гриппа и одновременно птицы с подозрением на орнитоз владелец должен немедленно сообщить об этом медицинскому работнику.

Список используемой литературы

1. Бакулов И.А. Эпизоотология с микробиологией Москва: "Агропромиздат", 1987. - 415с.

2. Инфекционные болезни животных / Б. Ф. Бессарабов, А. А., Е. С. Воронин и др.; Под ред. А. А. Сидорчука. — М.: КолосС, 2007. — 671 с

3. Алтухов Н.Н. Краткий справочник ветеринарного врачаМосква: "Агропромиздат", 1990. - 574с

6. Справочник ветеринарного врача/ П.П. Достоевский, Н.А. Судаков, В.А. Атамась и др. – К.: Урожай, 1990. – 784с.

Изобретение касается специфической профилактики и терапии хламидиоза (орнитоза) птиц. Вакцина содержит в качестве антигена штамм Chlamydia psittaci var. avis "ДЖ-87" ВГНКИ 23-ДЕП, выращенный на монослое первичной культуры кле-ток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) с титром не ниже 10 -7,0 ТЦД_50/мл.. Вакцина также содержит инактиватор-фенол и адъювант - поливинилпирролидон. Вакцина специфична, высокоиммуногенна и имеет низкую реактивность. 6 табл.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и вирусологии, в частности к производству вакцин, применяемых для специфической профилактики и терапии сельскохозяйственных животных, например птиц от заболевания хламидиозом.

Известна вакцина против энзоотического аборта овец инактивированная изготовленная из зараженных хламидиями куриных эмбрионов (Franc et al. Am. J. Vet. Pec. , Vol. 29, p. 1441, 1968). Недостатком данной вакцины являются ее высокая стоимость, ее изготовление требует больших затрат времени, высокое содержание баластных белков, снижающее ее иммуногенность и повышающее реактогенность. Эта вакцина не содержит специфического антигена и поэтому неиммуногенна для птиц. Данная вакцина выбрана нами в качестве прототипа.

Наиболее близким по технической сущности является патент США N 4386065 A 61 K 39/118, 1983. "Вакцина против энзоотического аборта овец", которая включает в себя смеси водной суспензии, инактивированных формалином хламидийных элементарных телец, полученных из организмов chlamydia SP в пределах от 2 10 6 до 10 9 ELD _50/мл, размноженных в клеточной культуре и равного количества масляного адъюванта представляющего собой смесь светлого минерального масла и ланолина.

Недостатком этой вакцины является то, что штамм хламидий, как продуцент, не обладает цитопатическим действием. Вследствие этого для контроля накопления хламидий необходимо ежедневно готовить мазки, производить их окраску и подсчет зараженных клеток, а при сборе сырья требуется инфицированный монослой отделить от ростовой поверхности с помощью трипсина с верстном. Для создания нужной концентрации хламидий в вакцине культуральную суспензию подвергают центрифугированию. К тому же один стационарный монослой используется как посевной материал только для пяти чистых монослоев или их эквивалентов. Все эти операции усложняют технологический процесс производства и снижают производительность при изготовлении вакцины, что делает ее дороже. К тому же вакцина профилактирует только энзоотические аборты хламидиозной природы у овец и не профилактирует хламидиоз птиц.

Поставленная задача достигнута благодаря тому, что вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза (орнитоза) птиц в качестве антигена, содержит штамм CHLAMYDIA PSITTACI (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП, выращенный на монослое первичной культуры клеток фибробластов эмбрионов кур с титром не ниже 10 -7 ТЦД_50/мл,в качестве адъюванта - поливинилпирролидон, а также фенол при следующих процентных соотношениях: 1. Суспензия клеток ФЭК (фибробластов эмбрионов кур), инфицированных хламидиями штамма chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП с титром не ниже 10 -7,0 ТЦД_50/мл - 99-99,5.

3. Полифинилпирролидон - 0,4-0,6.

Существенным отличием данной вакцины от ее прототипа является то, что в качестве антигена берут штамм chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87", депонированный в коллекцию ВГНКИ ветпрепаратов, N 23 ДЭП. Выращивание его ведется на монослое первичной культуры ФЭК.

Штамм chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23 - ДЭП выделен в 1987 году из печени и селезенки больного орнитозом индюшонка птицефабрики "Мрзытайская" Джамбулской области. Выделение производилось на развивающихся 6-7-дневных куриных эмбрионах путем их заражения в полость желточного мешка. Затем штамм был адаптирован к первичной культуре клеток ФЭК. Штамм прошел 52 пассажа в культуре клеток ФЭК в условиях роллера и в результате приобрел способность оказывать высокое цитопатогенное действие на монослой культуры клеток ФЭК. Наряду с этим устойчиво повысилась его иммуногенная активность и снизилась реактогенность.

Штамм chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП входит в коллекцию ВГНКИ ветпрепаратов и хранится в музее живых культур СКЗНИВИ.

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ. Элементарные (зрелые) тельца хламидий округлой формы, диаметром 180 - 200 нм, (инициальные-промежуточные формы - до 500 - 600 нм) окрашиваются по методу Романовского-Гимза в темно-синий цвет. При окраске акредином оранжевым хламидии приобретают оранжевый и желто-зеленый цвет. Расположены хламидии в цитоплазме клеток и в межклеточном пространстве в виде одиночных форм или скоплений.

КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА. Хламидии культивируются в желточных оболочках 6-7 дневных куриных эмбрионов. Штамм "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП адаптирован к культуре клеток ФЭК, вызывает образование цитоплазматических включений через 48 часов культивирования, проявляет цитопатическое действие.

ПАТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА. Штамм патогенен для индюшат, морских свинок и белых мышей - вызывает у них заболевание и гибель. В мазках-отпечатках из органов (печень, селезенка, мозг) павших и больных животных обнаружены цитоплазматические включения и элементарные частицы хламидий при парентеральном (для птиц), интраназальном, внутрибрюшинном, внутримозговом (для мышей) и внутрибрюшинном (для морских свинок) заражении.

АДАПТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА. Штамм chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП - возбудитель хламидиоза (орнитоза) птиц адаптирован к 6-7 дневным куриным эмбрионам и культуре клеток ФЭК, при этом сохраняет патогенность и иммуногенность. Титр хламидий выращенных на куриных эмбрионах составляет 10 -6 - 10 -7 ЭЛД_50/0,3мл на культуре клеток ФЭК - 10 -7 - 10 -8 ТЦД_50/мл.

АНТИГЕННЫЕ СВОЙСТВА. В постановке перекрестной реакции связывания комплемента (РСК) с гомологичным антигенами установлено высокое антигенное родство к гомологичному антигену в титре 1:80 - 1:160. Антигенное родство к другим антигенам хламидий стоит на четыре разведения дальше.

ТАКСОНОМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. Согласно решению Юридической комиссии Международной Ассоциации Микробиологических обществ (МАМО), с 1 января 1980 года определение рассматриваемых микроорганизмов, как Chlamydia, стало обязательным. В соответствии с "The Shorter Bergey's manual of determinative" (1980), хламидии отнесены к царств Procaryotae, отделу 2 прокариотов, индифферентных к свету, т.е. "скотобактериям", классу 2 Rickettsia. В класс Rickettsia включены порядки 1 Rickettsiales и 2 Chlamydiales. Семейство Chlamydia, род Chlamydia, в который включает четыре вида: Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia pecorum. Все виды хламидий гетерогенны.

ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА. В опыт было взято 48 индюшат 3-недельного возраста весом 250-300 граммов. 24 индюшонка было завакцинировано культуральной инактивированной вакциной, изготовленной из штамма chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП, подкожно в дозе 0,5 мл. Остальные 24 индюшонка составило контрольную (не вакцинированную группу.

Через 14 дней после введения вакцины приготовленной из подтитрованного контрольного штамма chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП с титром 10 -7,0 ТЦД_50/мл заразили 12 опытных и 12 контрольных индюшат подкожно в дозе 1 мл. Затем, через 20 дней после введения вакцины, также заразили 12 вакцинированных и 12 не вакцинированных индюшат. Результаты представлены в табл. 1.

Примечание в графах 4,5 числитель обозначает число павших индюшат, знаменатель - число выживших.

Таким образом, как видно из описания и таблицы, штамм chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП специфичен по отношению к птицам и обладает высокими иммуногенными свойствами, что позволяет осуществить поставленную задачу.

Вторым существенным отличием является то, что в качестве адъюванта в вакцину вводят поливинилпирролидон (ПВП). Поливинилпиролидон-белый порошок, хорошо растворимый в воде, применяется как пролонгатор лекарственных средств. Ему присуще дезинтоксическое и противовоспалительное действие. В нашем препарате ПВП существенно повышает иммуногенность вакцины за счет того, что связывает (адсорбирует) антипенные белки.

Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый состав вакцины отличается от известного введением новых компонентов, а именно нового штамма chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП с титром не менее 10 -7,0 ТЦД_50/мл и поливинилпирролидона в качестве адъюванта, а также соотношением компонентов.

Таким образом, заявляемое технологическое решение является новым. Введение в качестве адъюванта поливинилпирролидона существенно повышает иммуногенноть вакцины. По сравнению с вакциной, содержащей в качестве адъюванта вазелиновое масло. Для доказательства был проведен следующий опыт восьми голубят вводилась культуральная инактивированная вакцина, изготовленная из штамма chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП, содержащая в качестве адъюванта вазелиновое масло, и восьми - вакцина, содержащая в качестве адъюванта поливинилпирролидон. Вакцина вводилась подкожно, трехкратно с интервалом 7 дней в дозе 0,2 мл. Иммуногенность вакцины оценивалась по результатам РСК (с сывороткой крови опытных голубей, взятой через 20 дней после последнего введения вакцины). Результаты представлены в таблице 2.

Из таблицы следует, что иммуногенность вакцины с поливинилпирролидоном, используемым в качестве адъюванта, значительно выше, чем вакцины с вазелиновым маслом использованным в качестве адъюванта.

Таким образом, данный состав компонентов придает вакцине новые свойства, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технологического решения критерию "изобретательский уровень".

Пример 1. (Оптимальный вариант).

Приготовление культуры клеток ФЭК, заражение ее хламидиями производили по общепринятой методике (Л.П.Дьяконов и др. Культивирование клеток и тканей животных. Часть 1, Ставрополь, 1986). Затем суспензию клеток ФЭК, инфицированных хламидиями штамма Chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП, подвергали контрольным высевам на бактериальную и грибковую контаминацию. После этого чистую, не контаминированную, суспензию брали для определения титра ТЦД_50/мл. Титр определяли по общепринятой методике и подсчитывали по методу Рида и Менча. В данном примере он равен 10 -7,0 ТЦД_50/мл.

Затем смешивали компоненты в следующих соотношениях суспензии клеток ФЭК, инфицированных хламидиями - 99,1%, фенол - 0,35 мас.%, поливинилпирролидона - 0,55 мас.%. Полученную смесь выдерживали в течение 96 часов при температуре +10 o C.

Далее проводили выборочный контроль на иммуногенность. Для этого брали восемь голубей и вводили им вакцину по следующей схеме: 1-е введение - подкожно 0,2 мл; 2-е введение - подкожно через 7 суток 0,2 мл; 3-е введение - подкожно через 14 суток 0,2 мл.

Контролем служили четыре голубя, которым вакцина не вводилась. Через три недели после последнего введения вакцины определяли уровень накопления антител в сыворотке крови голубей в реакции связывания комплемента (РСК). Результат: четыре креста в разведении 1:5, четыре - в разведении 1:10, два - в разведении 1:20.

Аналогично делали для титра 7,5; 7,75; 6,5; 6,0; 5,5 ТЦД_50/мл. Сведения приведены в табл. 3.

Таким образом, титр хламидийного штамма от 7,0 и ниже обеспечивает высокое накопление антител в сыворотке крови голубей. Вакцина с качествами, приведенными в примерах 1, 4, 5, считается пригодной для применения на птице. В целях экономии штаммного материала при получении титра выше 7,8 ТЦД_50/мл суспензия разводится питательной средой ГЛА до титра, приведенного в примерах 1, 4, 5. Титр штамма ниже 6,5 ТЦД_50/мл (пр.6) не обеспечивает нужного накопления хламидий ниже применяется для иммунизации птиц.

В данном опыте отчетливо видна зависимость титра антител в сыворотке крови голубей от титра штамма chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП. Этот тест взят нами в качестве контроля иммуногенности вакцины при ее изготовлении.

Пример N 7. Приготовление культуры клеток ФЭК, заражение ее хламидиями, выращивание и накопление их производили по общепринятой методике. Затем суспензию клеток ФЭК инфицированных хламидиями штамма chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП, подвергали контрольным высевам для проверки на бактериальную и грибковую контаминацию и одновременно определяли усредненный титр ТЦД_50/мл, который в данном примере равен 10 -7,2 ТЦД_50/мл. Чистую, неконтаминированную бактериальной и грибковой флорой клеточную хламидийную суспензию, объединяли в общую стерильную емкость и проводили инактивацию хламидий фенолом. Для этого в емкости смешивали компоненты в следующем соотношении: суспензии клеток ФЭК, инфицированных хламидиями, брали 99,2 мас. %, а инактиватор (фенола) добавляли 0,4 мас.%. Полученную смесь выдерживали в течение 98 часов при температуре +10 o C. Затем добавляли 0,4 мас. % адъюванта (поливинилпирролидона). Затем проводили выборочный контроль на полноту инактивации. Для этого 10 развивающимся куриным эмбрионам 7-суточной инкубации стерильно вводили в полость желточного мешка 0,3 мл вакцины и инкубировали их при 37,0-37,5 o в течение 12 суток. В качестве контроля использовали 10 эмбрионов, которым вводили не инактивированную клеточную взвесь, содержащую хламидий штамма "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП. Условия инкубации такие же. Опытные эмбрионы оставались живыми в течение 12 суток. В мазках-отпечатках, изготовленных из оболочек желточного мешка, окрашенных по методу Романовского-Гимза, хламидии не обнаруживались. Контрольные эмбрионы пали на 5-7 сутки. Этот результат соответствует установленному контролю вакцины на полноту инактивации.

Аналогично делали для следующих количеств фенола: 0,3 мас.%; 0,2 мас.%; 0,5 мас.%; 0,6 мас.%. Результаты приведены в таблице 4.

Исходя из данных приведенных в таблице, видно, что количество инактиватора в интервале от 0,3 мас.% до 0,5 мас.% обеспечивает полноту инактивации хламидий в суспензии. Свыше 0,5 мас.% фенол не добавляют с целью его экономии, т.к. качества вакцины этого не улучшает. Концентрацию инактиватора ниже 0,3 мас. % не допускают, т.к. это не обеспечивает полной инактивации хламидий.

Пример N 12. Приготовление культуры ФЭК, заражение ее хламидиями, их выращивание и накопление производили по общепринятой методике. Затем суспензию клеток ФЭК, инфицированных хламидиями штамма chlamydia psittasi (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП, подвергали контрольным высевам для проверки на бактериальную и грибковую контаминацию. Если тест оказывался отрицательным, то выборочно определяли титр ТЦД_50/мл, который в этом примере равен 7,3 ТЦД_50/мл. Затем смешивали компоненты в следующих соотношениях: суспензия клеток, инфицированных хламидиями, брали 99,3 мас.%, фенола-0,3 мас.% (смесь выдерживали 10 часов при -6 o C). Поливинилпирролидона вводили 0,4 мас.%. Процесс вели следующим образом: навеску адъюванта и инактивированную суспензию клеток содержащую антиген штамм хламидий "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП и составляли при комнатной температуре до его полного растворения - 24 часа. Затем проводили контроль на иммуногенность, так же как в примере N1. Результат следующий: в разведении 1:5 - ++++; в разведении 1:10 - ++++; в разведении 1: 20 - ++. Аналогично делали для 0,3 мас.%. Результаты приведены в таблице 5.

Как указано в таблице содержание адъюванта в интервале значений от 0,4 мас. % до 0,6 мас. % обеспечивает иммуногенность вакцины в соответствии с установленным контролем. Количество адъюванта, превышающее 0,6 мас.%, не применяется с целью его экономии. Существенного улучшения качества вакцины при увеличении содержания в ней адъюванта свыше 0,6 мас.% не происходит.

Содержание адъюванта ниже 0,4 мас.% не допускается, т.к. иммуногенность такой вакцины ниже установленного контроля вакцины и она не вызывает надежного иммунного ответа у птицы.

Пример 17. Приготовление культуры клеток ФЭК, заражение ее хламидиями их выращивание и накопление производили по общепринятой методике. Затем суспензию клеток ФЭК, инфицированных хламидиями штамма chlamydia psittasi (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП, подвергали контрольным высевам для проверки на бактериальную и грибковую контаминацию. При отрицательном результате теста определяли средней титр ТЦД_50/мл, который в этом примере равен 7,4 ТЦД_50/мл. Затем смешивали компоненты в следующих соотношениях: суспензии клеток ФЭК, инфицированных хламидиями, брали 99,25 мас.%; фенола - 0,35 мас.%, поливинилпирролидона - 0,4 мас.%. Затем проводили контроль на иммуногенность как в примере 1. Результаты РСК следующие: в разведении 1:5 - ++++; в разведении 1: 10 - ++++; в разведении 1:20 - +++. Аналогично делали для 99 мас.%; 98 мас. %; 99,5 мас.%; 99,7 мас.% суспензии клеток ФЭК, инфицированных хламидиями штамма chlamydia psittaci (var. avis) "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП. Результат представлен в таблице 6.

Как указано в таблице, содержание суспензии клеток ФЭК инфицированных хламидиями штамма "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП в пределах от 99,0 мас.% до 99,5 мас. %, обеспечивает иммуногенность вакцины в соответствии с ее контролем. Количество культуральной клеточной суспензии выше 99,5 мас.% не применяется, т.к. это не улучшает качество вакцины, а увеличивает расход ее дорогостоящих компонентов. Использование культуральной клеточной суспензии в количестве ниже 99,0 мас.% также не допускается, т.к. вакцина при этом не обладает иммуногенностью, соответствующей установленному контролю вакцины и не вызывает развитие надежного иммунитета у птицы.

Вакцина профилактирует возникновение у птиц на почве хламидиоза: пневмонии, артрита, аэросаккулита. Повышает процесс выводимости птенцов на 10-12%, увеличивает сохранность молодняка на 18-24%. Увеличивается яйценоскость, возрастают привесы. Кроме того, вакцина сокращает загрязнение окружающей среды хламидиями, являющимися антропозоонозами, а также снижает затраты неблагополучного хозяйства на проведение малоэффективных лечебно-профилактических мероприятий с применением антибиотиков и других лечебных средств. Вакцина безвредна. В целом эффективность вакцины составляет 90-93%.

Источники информации 1. Л.П.Дьяконов, В.Ф.Глухов и др. Культивирование клеток и тканей животных. Учебно-методическое пособие (часть 1), Ставрополь, 1986 г.

2. Описание к патенту США N 4386065 МКИ A 61 K 39/, 1983.

3. А.с. N 645369 з. N 2528058 МКИ C 12 K 5/00.

4. А.с. N 660390 з. N 2528670 МКИ C 12 K 5/00.

5. А.с. N 661017 з. N 2528672 МКИ C 12 K 5/00.

6. А.с. N 666203 з. N 2528672 МКИ C 12 K 5/00.

7. А.с. N 666202 з. N 2528669 МКИ C 12 K 5/00.

8. А.с. N 655160 з. N 2528668 МКИ C 12 K 5/00.

Вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза (орнитоза) птиц, содержащая антиген хламидий, адъювант и инактиватор, отличающаяся тем, что в качестве антигена она содержит штамм Chlamydia psittaci var, avis "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП, выращенный на монослое первичной культуры клеток фибробластов эмбрионов кур с титром не ниже 10 -7,0 ТЦД_50/мл, в качестве адъюванта - поливинилпирролидон, а в качестве инактиватора - фенол при следующем соотношении их, мас.%: Суспензия клеток ФЭК, инфицированных хламидиями штамма Chlamydia psittaci var, avis "ДЖ-87" ВГНКИ N 23-ДЭП с титром не ниже 10 -7,0 ТЦД_50/мл - 99,0 - 99,5 Фенол - 0,3 - 0,5 Поливинилпирролидон - 0,4 - 0,6п

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6