Препарат интест или тест-культура термофильного стрептококка инструкция
Методы определения ингибирующих веществ
Milk. Methods for determination of the inhibitors
Дата введения 2017-09-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт маслоделия и сыроделия" (ФГБНУ ВНИИМС)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 22 ноября 2016 г. N 93-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Минэкономики Республики Армения
Госстандарт Республики Казахстан
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2016 г. N 1876-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 23454-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 сентября 2017 г.
5 ВЗАМЕН ГОСТ 23454-79
6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Февраль 2019 г.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 7, 2019 год
Поправка внесена изготовителем базы данных
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молоко сырое цельное и обезжиренное, термически обработанное, предварительно восстановленное из сгущенного, концентрированного или сухого молока (далее - молоко) и устанавливает методы определения ингибирующих веществ, в том числе антибиотиков, дезинфектантов на основе хлора, перекиси водорода и надуксусной кислоты; поверхностно активных веществ; фальсифицирующих веществ, добавляемых в молоко для ограничения развития микрофлоры, в том числе перекиси водорода и формалина.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
________________
В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 .
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 745-2003 Фольга алюминиевая для упаковки. Технические условия
________________
Заменен на ГОСТ 754-2014*.
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать ГОСТ 745-2014. - Примечание изготовителя базы данных.
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 32901-2014 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины в соответствии с [1], а также следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 ингибирующие вещества: Любые вещества в молоке, которые независимо от их природы тормозят или препятствуют развитию микроорганизмов.
3.2 тест-культура: Штамм микроорганизмов определенного вида, характеризующийся устойчивой способностью интенсивно развиваться в молоке и проявлять повышенную чувствительность к ингибирующим веществам.
3.3 чувствительность диагностического метода: Способность метода фиксировать по развитию тест-культуры отсутствие или наличие ингибирующего эффекта.
3.4 препарат СКИВ: Сухое обезжиренное молоко, гарантированно не содержащее ингибирующие вещества и предназначенное для постановки контрольной пробы при определении ингибирующих веществ в молоке.
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы
5 Отбор проб
5.1 Основные понятия и общие правила отбора проб - по ГОСТ 26809.1.
5.3 Перед вскрытием упаковок с молоком крышки фляг, цистерн, потребительских упаковок и т.д. очищают от загрязнений, промывают и протирают сухой марлей или другими неткаными материалами (салфетки и т.п.) для удаления остатков воды.
Отбор проб проводят в стерильную посуду достаточной вместимости и удобной формы (стеклянные колбы, банки и т.д.), закрывают стерильными пробками или крышками, которые закрывают стерильной бумагой и обвязывают.
5.4 Анализ сырого молока на наличие ингибирующих веществ следует проводить не раньше, чем через 4 ч после дойки.
6 Условия проведения испытаний
При выполнении испытаний в лаборатории следует соблюдать следующие условия:
температура окружающего воздуха
относительная влажность воздуха
от 84 до 106 (от 630 до 795) кПа (мм рт. ст.).
7 Метод определения ингибирующих веществ с использованием тест-культуры термофильного стрептококка и индикатора резазурина
7.2 Подготовка к анализу
7.2.1 Приготовление стерильного обезжиренного молока
Обезжиренное молоко разливают по 100 см в колбы вместимостью не менее 200 см или по 10 см в пробирки вместимостью не менее 20 см и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.
7.2.2 Приготовление основного раствора резазурина натриевой соли
Основной раствор резазурина натриевой соли массовой концентрации 0,0005 г/см готовят следующим образом.
0,100 г резазурина натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см и растворяют в небольшом количестве прокипяченной и охлажденной до температуры (25±2)°С дистиллированной воды. Объем раствора доводят до метки прокипяченной и охлажденной до температуры (25±2)°С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.
Раствор резазурина натриевой соли хранят при температуре от 4°С до 10°С не более 30 сут.
7.2.3 Приготовление коллекционной тест-культуры
7.2.3.1 Для восстановления активности тест-культуры колбу со 100 см обезжиренного стерилизованного молока, подготовленного по 7.2.1, подогревают до температуры (43±1)°С. Порцию сухой бактериальной закваски тест-культуры Streptococcus thermophilus В19 вносят в стерилизованное молоко и тщательно перемешивают.
Культуру термостатируют при температуре (41±1)°С в течение 16-18 ч до образования плотного сгустка, затем охлаждают до температуры (4±2)°С и используют для приготовления коллекционной тест-культуры.
7.2.3.2 Для приготовления коллекционной тест-культуры в пробирку с 10 см стерильного обезжиренного молока вносят одну петлю культуры, приготовленной по 7.2.3.1, и выдерживают в термостате при температуре (41±1)°С в течение 16-18 ч.
Коллекционную культуру хранят при температуре (4±2)°С и пересевают через 10-14 сут. Через 3-4 пересадки ее снова готовят из сухой тест-культуры.
Допускается использовать культуру дольше, если она не утратила своей активности и по микроскопическому препарату соответствует предъявленным требованиям: продолжительность сквашивания при пересеве - не более 16-18 ч; сгусток плотный; консистенция однородная, допускается мягкая крупитчатость или вязкая; в поле зрения микроскопа в препарате тест-культуры - диплококки одиночные или собранные в цепочки.
7.2.4 Приготовление рабочей тест-культуры
7.2.4.1 Рабочую тест-культуру готовят из коллекционной тест-культуры в пробирках или колбах в зависимости от необходимого количества или из сухой бактериальной закваски термофильного молочнокислого стрептококка, предназначенной для определения ингибирующих веществ.
7.2.4.2 При приготовлении рабочей тест-культуры из коллекционной в пробирку с 10 см стерильного обезжиренного молока вносят одну петлю коллекционной тест-культуры, а в колбу со 100 см стерильного обезжиренного молока вносят 0,1 см коллекционной тест-культуры или сухой бактериальной закваски на кончике ланцета и выдерживают в термостате при температуре (41±1)°С 16-18 ч до образования плотного сгустка.
Полученную рабочую тест-культуру используют для проведения анализа.
В случае необходимости рабочую тест-культуру хранят в холодильнике температурой (4±2)°С и используют в течение 24 ч.
Непосредственно перед применением рабочую тест-культуру перемешивают путем интенсивного встряхивания.
7.2.5 Приготовление контрольного раствора препарата СКИВ
Для получения контрольного раствора препарата вскрывают флакон с сухим препаратом СКИВ. Во флакон вносят пипеткой 10 см дистиллированной воды, подогретой до температуры (50±10)°С, закрывают пробкой и встряхивают до полного растворения.
Контрольный раствор препарата СКИВ готовят непосредственно перед испытанием, после проведения испытаний раствор хранению не подлежит.
7.3 Проведение анализа
7.3.1 В чистые пробирки наливают по 10 см анализируемого молока и закрывают сухими резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (4±2)°С.
При наличии большого количества проб анализируемого молока анализ проводят сериями. Количество пробирок с анализируемым молоком в каждой серии должно быть не более двадцати.
Проводят два параллельных определения одной пробы молока.
7.3.2 Одновременно проводят контрольный анализ. Для этого используют контрольный раствор препарата СКИВ, подготовленный по 7.2.5.
7.3.3 Пробирки с анализируемым молоком и контрольной пробой нагревают в водяной бане до температуры (87±2)°С и выдерживают при указанной температуре 10 мин, затем охлаждают до температуры (46±1)°С и стерильной пипеткой вносят 0,5 см рабочей тест-культуры, приготовленной по 7.2.4.
Содержимое пробирок тщательно перемешивают трехкратным переворачиванием. Затем пробирки выдерживают в течение 75 мин при температуре (45±1)°С в жидкостном термостате или водяной бане.
7.3.4 В пробирки с анализируемым молоком и контрольной пробой вносят по 1 см основного раствора резазурина натриевой соли, подготовленной по 7.2.2, температурой (20±2)°С. Содержимое пробирок перемешивают путем двукратного переворачивания.
7.3.5 Пробирки с анализируемым молоком и контрольной пробой выдерживают в редуктазнике или водяной бане при температуре (45±1)°С в течение 10-15 мин.
7.4 Обработка результатов
При отсутствии в анализируемом молоке (и в контрольной пробе) ингибирующих веществ или их наличие в количестве равном или меньшем, чем предел обнаружения, содержимое пробирок будет иметь розовый с сиреневым оттенком или розовый, или белый цвет. При наличии в молоке ингибирующих веществ содержимое пробирок будет иметь цвет от серо-сиреневого до сиреневого в соответствии с приложением А.
8 Определение ингибирующих веществ с использованием стандартного диффузионного теста, содержащего в качестве тест-культуры споры Вас. stearothermophilus var. calidolactis и индикатор бромкрезолпурпур (Delvotest T)
8.2 Проведение анализа
8.2.1 Тест-набор состоит из набора ампул вместимостью 1,0 см , содержащих смесь агаризованной питательной среды со спорами Bacillus stearothermophilus various calidolactis и индикатором бромкрезолпурпур.
Необходимое количество ампул маркируют и выдерживают до достижения температуры (20±2)°С. Ампулы открывают, проколов фольгу с помощью любого острого предмета.
С помощью специальной пипетки, находящейся в комплекте, добавляют в ампулу 0,1 см анализируемого молока. Для каждой пробы используют отдельную пипетку.
Пробирки термостатируют в термостате или водяной бане при температуре (64±2)°С в течение (180±5) мин.
8.3 Обработка результатов
Для оценки результатов ампулы извлекают из термостата и определяют цвет их содержимого. Изменение цвета среды на желтый цвет в соответствии с приложением Б свидетельствует об отсутствии ингибирующих веществ на уровне чувствительности метода.
Отсутствие изменения цвета среды или изменение в пределах оттенков фиолетового цвета свидетельствует о присутствии ингибирующих веществ.
Изменение цвета среды на сизый цвет свидетельствует о неопределенном результате и требует проведения повторного анализа.
9 Определение ингибирующих веществ с использованием теста, содержащего в качестве тест-культуры споры Вас. stearothermophilus var. calidolactis и индикатор бриллиантовый черный (BRT-inhibitor тест)
9.2 Проведение анализа
9.3 Обработка результатов
Для оценки результатов ампулы извлекают из термостата и определяют цвет содержимого.
Изменение цвета среды в ампуле на желтый цвет в соответствии с приложением В свидетельствует об отсутствии ингибирующих веществ на уровне чувствительности метода.
Отсутствие изменения цвета среды или изменение в пределах оттенков фиолетового цвета свидетельствует о присутствии ингибирующих веществ.
Изменение цвета среды в ампуле на бурый цвет свидетельствует о неопределенном результате и требует проведения повторного анализа.
10 Требования безопасности
10.1 При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования:
- помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021;
- требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019;
- работу со споровой тест-культурой проводят в соответствии с санитарными правилами, действующими на территории государства, принявшего стандарт.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.
10.2 Требования к оператору
Выполнение измерений может проводить специалист-микробиолог, имеющий специальное образование и освоивший методы микробиологического анализа.
Участники и результаты
44-ФЗ, Электронный аукцион
ИНН 7810323620 КПП 781001001
| Наименование | Кол-во | Цена за ед. | Стоимость, ₽ |
|---|---|---|---|
Портал отображает информацию о закупках, публикуемых в сети интернет Состав
ОписаниеДля выявления и определения возбудителя традиционными методами требуется от 24 до 48 часов. Но методы иммунохроматографии сегодня позволяют непосредственно выявлять специфический антиген стрептококка группы А с помощью одного мазка, что в свою очередь позволяет врачу незамедлительно поставить диагноз и назначить необходимый курс лечения. Меры предосторожностиТак как экстрагирующие реагенты А и В представляют потенциальную опасность,в случае ненадлежащего использования и/или попадания на кожу, в глаза - незамедлительно промыть поврежденный участок большим количеством воды, при проглатывании реагента А — спровоцировать рвоту, затем обильное питье; при проглатывании реагента В — промыть рот, затем обильное питье. Во всех приведенных случаях — обратитесь к врачу. Cразу же после использования закрывайте баночки с реагентами А и В, храните их в недоступном для пациентов месте. Не меняйте крышки от баночек с реагентами. Образцы могут быть заражены инфекционными возбудителями. Материал, находившийся в непосредственном контакте с образцами, считается зараженным. Следуйте инструкциям, соблюдая меры предосторожности. Исключительно для диагностики in vitro! Не использовать повторно! Способ применения и дозы
Положтельный: в контрольной и тест-зоне отображаются две цветные полосы пурпурного цвета Отрицательный: в контрольной зоне отображается только одна пурпурная полос Примечание: если в контрольной и тест-зонах не проявилось ни одной полосы, значит, анализ выполнен неправильно. Необходимо повторить процедуру еще раз Срок годностиВсе элементы, входящие в состав набора, подлежат хранению при комнатной температуре или в холодильнике (от 2°C до 30°C). Не замораживать. Не используйте набор по истечении срока годности, указанного на упаковке. Срок годности 24 месяца. Читайте также:
|