Селективная среда для выделения пневмококков

а) Питательные основы сред для выделения и культивирования пневмококка. Для выделения и культивирования пневмококка используют среды на высокопитательных основах с обязательным добавлением нормальной сыворотки или крови. В качестве основы применяют триптические перевары белка — мяса, бычьего сердца, сои, казеина, плаценты, кровяных сгустков с конечным содержанием 1,6-1,8 г/л аминного азота. Рекомендовано добавление к основам экстракта кормовых дрожжей (ЭКД).

Из питательных основ лабораторного изготовления чаще всего используют агар на триптическом переваре мяса по Хоттингеру. Специально для пневмококка разработан рецепт питательного агара ВНИИП.

б) Питательный агар ВНИИП. Из питательных основ лабораторного изготовления чаще всего используют агар на триптическом переваре мяса. Специально для пневмококков разработан рецепт питательного агара ВНИИП, основа которого содержит:

70-75% гидролизата мяса по Хоттингеру или казеина (1,8-2,0 г/л аминного азота);
20-25% гидролизата бычьих сердец (1,4-1,6 г/л аминного азота);
1,7-2,0% агара;
pH 7,6.

Стерилизация при 112°С 20 мин. Перед употреблением к расплавленной и остуженной до 45°С среде асептично добавляют 0,5% стерильного раствора ЭКД (вместе с сывороткой или кровью).

в) Кровяной агар, неселективный и селективный. К расплавленной и остуженной до 45°С питательной агаровой основе для пневмококка добавляют 5,0-7,0% свежей дефибринированной крови барана, лошади или кролика. Среду разливают в чашки Петри. Цвет готовой среды — ярко-красный; среда непрозрачна.

Для облегчения выделения пневмококка из полимикробного материала (мокрота — 1:10, бронхиальные смывы, отделяемое среднего уха, слизь из носоглотки) с целью подавления посторонней флоры на участок засеянного кровяного агара стерильным пинцетом накладывают стандартный диск с антибиотиками — мономицином или гентамицином. После инкубации в термостате через 22-24 ч вокруг диска вырастают преимущественно колонии пневмококка.

Можно приготовить селективный кровяной агар с гентамицином. К расплавленной и остуженной до 45°С питательной агаровой основе для пневмококка добавляют 5,0-7,0% дефибринированной крови и раствор гентамицина из расчета создания его конечной концентрации в среде 5 мкг/мл.

г) Сывороточный агар. Используется не только для посевов стерильных в норме жидкостей (СМЖ, плевральная, асцитическая, синовиальная и т.д.), но и является основной средой для культивирования и изучения выделенных чистых культур пневмококка. К расплавленному и остуженному до 45°С питательному агару для пневмококка добавляют 20% нормальной сыворотки лошади или крупного рогатого скота, стерильной или с консервантом хлороформом. Смесь перемешивают и разливают в чашки Петри или в пробирки по 3,0-3,5 мл для получения скошенного агара. Среда полупрозрачна, имеет кремово-желтоватый цвет.

Чашки с кровяным и сывороточным агарами можно сохранять в холодильнике не более 2 сут.; пробирки со скошенным сывороточным агаром — не более 5 сут.

д) Тесты для дифференциации пневмококка и сходных с ним α-гемолитических стрептококков и энтерококков:

2. Желчный тест. Для постановки теста используют желчь крупного рогатого скота без консервантов (лучше взятую стерильно на бойне) или свежевзятую желчь кролика.

Метод диска. На 20-22-часовую испытуемую культуру, выросшую в результате густого посева газоном на кровяном агаре, накладывают стерильный диск фильтровальной бумаги (диаметром 1,0 см), свежепропитанный 20%-ным раствором желчи. Чашку снова помещают в термостат на 2-3 ч. По истечении этого времени вокруг диска наблюдается зона (1-2 мм) полного исчезновения колоний пневмококка; рост колоний других стрептококков и энтерококков не нарушается.

Желчный бульон. В пробирку с 3,0 мл мясопептонного бульона с 10% желчи добавляют 1,0 мл взвеси (или бульонной культуры) испытуемого штамма; смесь помещают в термостат на 1 ч. Для контроля эту же взвесь испытуемой культуры вносят в другую пробирку с бульоном, но без желчи. Если через 1 ч в опытной пробирке заметно просветление (по сравнению с контролем), то тест положителен, т.е. испытуемая культура чувствительна к желчи. При нечетко выраженном результате обе пробирки могут быть оставлены на одни сутки при комнатной температуре.

Желчь в бульоне может быть заменена дезоксихолатом натрия в конечной концентрации 10%.

3. Термическая проба. Взвесь суточной испытуемой 24-часовой культуры в изотоническом растворе натрия хлорида прогревают в водяной бане при 60°С 30 мин. После остывания при комнатной температуре из прогретой взвеси делают высев на кровяной (или сывороточный) агар для пневмококка. Для контроля делают высев из непрогретой взвеси. Если через 1 сут. инкубации высев из прогретой взвеси оказался положительным, как и в контроле, то испытуемая культура не является пневмококком.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 25.2.2020

Современные подходы к повышению элективных свойств питательных сред для культивирования пневмококков

Л.И. Железова, А.С. Кветная

В ФГБУ НИИДИ ФМБА России разработан способ приготовления питательной среды, основанный на замене нативной сыворотки животного стандартным препаратом – лецитином, производным холина. Добавление лецитина к питательному бульону в пределах 0,1 – 0,01 г/л оказывало стимулирующий эффект на размножение пневмококков, стабилизацию популяции in vitro. Четырех-пятикратное пассирование штамма на данной среде (в отличие от широко используемого 20% сывороточного бульона) приводило к усилению капсулообразования, повышению вирулентности и выраженной ß-гемолитической активности.

Ключевые слова : пневмококк, пневмококковые инфекции, диагностика, лецитин.

Заболевания, вызываемые пневмококком, являются серьезной проблемой здравоохранения во всем мире в связи с повсеместным распространением, разнообразием клинических форм (менингит, пневмония, сепсис, отит, синусит и др.), развитием инвазивных форм, нередко с осложненным течением (20-40%%) и высокой частотой формирования бактерионосительства (до 60-70%%) [1, 2, 3, 4, 5]. Пневмококковая инфекция (ПИ) признается ВОЗ ведущей причиной заболеваемости и смертности во всех регионах мира. Особенно актуальна проблема ПИ среди детей первых лет жизни, пожилых людей и лиц с хроническими болезнями. Наибольшая частота заболеваемости приходится на детей первых 2 лет жизни и пожилых людей [1,2,3,4,5]. Пневмококк – это условно патогенный микроорганизм, колонизирующий слизистые оболочки верхних дыхательных путей его колонизация сдерживается механизмами местной иммунной защиты. Морфологически Streptococcus pneumonia представлен как инкапсулированный грамположительный диплококк, окруженный полисахаридной капсулой – главным фактором патогенности и вирулентности микроорганизма, основанный на способности ослаблять фагоцитоз клеток пневмококка [6,7,8]. Разнообразие клинических форм пневмококковых инфекций (ПИ) и высокая частота носительства в детских дошкольных учреждениях объясняется неоднозночной восприимчивостью к развитию генерализованных форм ПИ, так и неодинаковой способностью разных штаммов возбудителя колонизировать слизистые и инвазироваться во внутреннюю среду организма. В этой связи значимость приобретают вопросы, связанные с изучением физиологических свойств пневмококка. Установлено, что пневмококк отличается высокой прихотливостью к условиям культивирования. Он требует для своего развития максимально обогащенных искусственных питательных сред с содержанием большого набора аминокислот. Однако, основной питательной потребностью пневмококка, как известно, является холин. Добавление к жидким или плотным питательным основам 10-15% нормальной лошадиной сыворотки обеспечивает в той или иной степени его потребность в холине. Развитие пневмококка на плотных питательных средах стимулируется повышенным содержанием СО₂ в атмосфере, поэтому пневмококк относится к факультативным анаэробам, так как не имеет цитохрома и может утилизировать кислород атмосферы при помощи энзиматической системы флавопротеина. Необходимо заметить, что около 10% штаммов вообще не развивается без избытка углекислоты. В результате дыхания образуется перекись водорода, которую микроорганизм не в состоянии обезвредить, так как не содержит каталазы. Поэтому в состав питательных сред для культивирования пневмококка включают кровь (эритроциты), субстракт, содержащий этот фермент. Предпочтительным для пневмококка являются среды с пониженным парциальным давлением кислорода (бульон, заполняющий большую часть пробирки, полужидкий агар, тиогликолевые среды), на которых он может развиваться и без добавления крови, источника каталазы. Оптимум для культивирования пневмококка — рН 7,6 и 35-37 0 С, но рост возможен в пределах рН 7,0-7,8 и при температурных границах роста — 25-42 0 С [5, 6, 7].

Учитывая биологическую потребность пневмококка в холине, изучение эффективности действия препарата фосфотидилхолина (лецитина) на биологические свойства пневмококка с использованием питательной среды с лецитином явилось целью нашего исследования.

II . Цель исследования

Разработать и изучить эффективность питательной среды с фосфотидилхолином (лецитином) для выделения и культивирования Streptococcus pneumoniae .

Таким образом, постоянный поиск путей совершенствования питательных сред для выделения и культивирования пневмококка обусловлен высокой прихотливостью этого микроорганизма к условиям культивирования. Впервые разработанная в НИИДИ (Санкт-Петербург, Россия) питательная среда на основе бульона Хоттингера (аминный азот, pH 7,2-7,4) с добавлением лецитина в пределах от 0,1 до 0,01 г/л обладает высокими элективными свойствами по отношению к пневмококку и может использоваться, во- первых - для накопления чистых культур пневмококка, свободных от балластных белков крови, во-вторых - для эффективного выделения пневмококка при исследовании материала из закрытых полостей (ЦСЖ, отделяемого ушей, плевральной жидкости и крови). Полученные результаты позволяют считать лецитин поставщиком холина – основного структурного компонента тейхоевой (С-карбогидрат) и липотейхоевой кислот, составляющих клеточную стенку пневмококка. Потребность пневмококка в холине, хотя и не имеет непосредственного отношения к детерминантам патогенности, однако, видимо, существенна для экспрессии вирулентности пневмококка в связи с обеспечением функции питания .

1. CDC. Preventing Pneumococcal Disease Among Infants and Jung Children. MMWR-2000.-V 49. - № RR- 9.- H.1-24.

2. Козлов Р.С. Пневмококки: прошлое, настоящее и будущее. Смоленск: Смоленская государственная медицинская академия, 2005. - 128 с.

4. Таточенко, В.К. Пневмококковая инфекция: современный взгляд на проблему и профилактику / В.К.Таточенко // Вопросы современной педиатрии. – 2007.- Т. 5. - № 1. – С. 107-112.

5. Ряпис Л.А. Проблема пневмококковых инфекций в России / Л.А. Ряпис, Н.И. Брико //Эпидемиология и инфекционные болезни. 2010.- № 1.- С.4-8.

7. Выделение, идентификация и определение чувствительности кантибиотикам Streptococcus pneumonia / Л.С.Страчунский, О.И.Кречикова, Р.С.Козлов, Т.М.Богданович, О.У.Стецюк, М.М.Суворов, Л.К.Катосова, Л.А.Вишнякова, М.Е.Фаустова // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2000. - Т.2, № 1. С.88-98.

9. Кветная, А.С. Экспериментальное обоснование эффективности фосфотидилхолина (лецитина) на физиологию пневмококка / А.С. Кветная, Л.И. Железова // Журн. Медицинский алфавит. Эпидемиология и гигиена. – 2013.- № 1.- С. 18-21.

Сведения об авторах:

Железова Людмила Ильинична, кандидат медицинских наук,

ст.н.с. отдела микроэкологии человека

Кветная Ася Степановна, доктор медицинских наук, профессор,

Естественные среды представляют собой природные субстраты (молоко, кровь, желчь, сыворотка, картофель). Искусственные содержат смесь природных органических веществ и продуктов их кислотного или ферментативного распада. Синтетические среды состоят из буферной солевой основы и растворов аминокислот, углеводов, пуринов, пиримидинов, нуклеотидов, нуклеозидов, жирных кислот, витаминов в точно установленных дозировках. В качестве источников азота в них используются аминокислоты. Достоинство этих сред в том, что они имеют постоянный состав, по ним можно определить потребности микробов в тех или иных питательных веществах.

Плотные питательные среды готовят из жидких с добавлением уплотнителя. В качестве уплотнителя обычно применяют агар-агар. Агар-агар – продукт, получаемый из морских водорослей, представляет собой желтоватый порошок или пластинки, содержит высокомолекулярные полисахариды, не расщепляется большинством микроорганизмов, не разрушается при автоклавировании, питательную ценность сред не изменяет, не подавляет рост микробов. Для иммунологических и бактериологических полей используется вымороженный, осветленный агар, который при кипячении или автоклавировании смеси порошка с водой расплавляется при температуре 85–100°С, а при охлаждении до 45–48°С образует гель.

Для приготовления, плотных питательных сред агар-агар добавляют в концентрации от 1,5 до 3%.

Мясо-пептонный бульон (МПБ) является белковой основой всех сред.

Существует несколько способов приготовления МПБ:

а) на мясной воде с добавлением готового пептона – это так называемый мясо-пептонный бульон;

б) на переварах продуктов гидролиза исходного сырья при помощи ферментов (трипсина – бульон Хоттингера, пепсина – бульон Мартена).

Мясо-пептонный агар (МПА) – получают путей добавления к МПБ arap-arapa (1,5–3%). Если МПА распределен по диагонали пробирки или флакона – это скошенный агар. Для его получения пробирки для засты­вания среды оставляют в наклонном положении. Если среда распределе­на в пробирке вертикально высотой 5–7 см, это агар столбиком. МПА, застывший в чашках Петри в виде пластинки – пластинчатый агар. Если среда имеет вертикальный слой высотой 2–3 см, и диагональный слой такой же величины, это полускошенный агар.

Специальные питательные среды – среды, на которых создаются условия для выращивания тех бактерий, которые не растут на простых средах.

Кровяной агар или кровяной бульон – получают путем добавле­ния к питательной среде 5–10% подогретой стерильной дефибринированной крови барана, кролика лошади, человека. Среда используется для выделения стрептококков, пневмококков и других бактерий, а также для изучения гемолитической активности.

Сывороточный бульон или сывороточный агар получают путем добавления к простым средам 15–20% лошадиной или бычьей сыворотки. Среда применяется для выделения пневмококков, менингококков.

Желчный бульон или желчный агар получают путем добавления к питательной среде медицинской желчи без консерванта, или свежеполученной от крупного рогатого скота. Среда применяется для выделения брюшнотифозных, паратифозных и дизенте­рийных палочек.

Специальные среды для культивирования анаэробных бактерий: среда Китта-Тароцци состоит из питательного бульона, глю­козы и кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода.

Желатин – животный белок, продукт частичного гидролиза коллагена. Имеет вид бесцветных или светло-желтых пластинок без запаха и вкуса. В холодной воде набухает, сильно поглощая воду. При темпера­туре 30°С растворяется, при охлаждении до 20–22°С превращается в гель (студень). Используется в микробиологии для изучения протеолитических ферментов.

Дифференциально-диагностические среды позволяют различить один вид микроба от другого. Принцип построения дифференциально-диагностических сред основан на разной биохимической активности бактерий. В состав дифференциально-диагностических сред входит основная пи­тательная среда, обеспечивающая размножение бактерий, определенный химический субстрат, различное отношение к которому является диагнос­тическим признаком, индикатор, изменение цвета которого свидетельству­ет о разложении субстрата и образовании кислых продуктов.

Агар Эндо – плотная среда, применяется для выделения и первичной идентификации энтеробактерий. В состав ее входят, кроме питательной основы, лактоза и основной фуксин, обесцвеченный сульфитом и фосфатом натрия. Правильно приготовленная среда бесцветна или имеет слегка розовый оттенок. Колонии бактерий (кишечная палочка), ферментирующие лактозу, окрашиваются на ней в красный цвет; бактерии, не ферментирующие лактозу (сальмонеллы), остаются бесцветными.

Среда Левина (лактозоэозинметиленовый агар) – среда для выделения энтеробактерий. Колонии лактозоферментирующих бактерий окрашены в темно-синий или черный цвет, колонии лактозоотрицательных бактерий вырастают под цвет среды (светло-фиолетового цвета).

Среды Гисса – набор определенных углеводов для изучения ферментативной активности бактерий и их дифференциации по этим признакам.

Элективные питательные среды содержат дополнительные вещества, задерживающие рост грамположительных бактерий. Селективные питательные среды стимулируют рост одних микробов и угнетают рост других. Селективные условия получают путем добавления в сре­ду химических веществ. Так как в этих средах патогенные бактерии размножаются и накапливаются, их называют также средами обогащения.

Среда Плоскирева – плотная питательная среда, содержащая со­ли желчных кислот, бриллиантовый зеленый, лактозу и индикатор. Эта среда является не только селективной, так как подавляет рост многих микробов и способствует лучшему росту возбудителей брюшного тифа, паратифов, дизентерии, но и дифференциально-диагностической, так как лактозоотрицательные бактерии (шигеллы) образуют на ней бесцветные колонии, а лактозоположительные – кирпично-красные.

Селенитовая среда - является лучшей средой обогащения для сальмонелл и дизентерийных микробов Зонне. Селенит натрия, содержащийся в среде, стимулирует рост этих бактерий и подавляет рост сопутствующей флоры.

Среда Мюллера служит для накопления сальмонелл. К питатель­ной среде добавляют мел, раствор Люголя и гипосульфит натрия. При взаимодействии этих веществ образуется тетратионат натрия, который угнетает рост кишечных палочек, но создает благоприятные условия для размножения сальмонелл.

Висмут-сульфит агар (среда Вильсона-Блера) – содержит соли висмута, бриллиантовую зелень. Сальмонеллы растут на этой среде в виде колоний чернота цвета. Другие виды бактерий на этой среде роста не дают.

Теллуритовые среды (сывороточно-теллуритовый агар, кровяно-теллуритовый агар) – селективные среды для выделения дифтерийных бактерий, содержат теллурит калия. Бесцветная соль теллура, содержащаяся в питательной среде, восстанавливается дифтерийными бактерия­ми до металла, окрашивающего колонии в черный цвет.

Щелочной агар элективен для холерных вибрионов, щелочная реакция среды (рН 9,0) не препятствует росту холерных вибрионов, но тормозит рост других микроорганизмов.

Консервирующие среды – среды, содержат добавки, предупреждающие размножение и гибель микробов, что способствует сохранению их жизнеспособности. Консервирующие среды применяются, когда нет возможности быстрого посева на питательные среды.

Для бактерий наиболее употребительны консерванты:

а) глицериновая смесь, состоящая из 0,5 л химически чистого глицерина и 1,0 л физиологического раствора;

б) боратная смесь;

в) фосфатно-буферная смесь.

Для длительного сохранения свежевыделенных и производствен­ных культур применяют полужидкий голодный агар, в этой среде при пониженной жизнедеятельности микробов продукты обмена накапливаются незначительно, что способствует хорошему сохранению культур.

В бактериологии широко применяются сухие питательные среды промышленного производства, которые представляют собой гигроскопические порошки, содержащие все компоненты среды, кроме воды. Для их приготовления используются триптические перевары дешевых непищевых продуктов (рыбные отходы, мясокостная мука, технический казеин).

Они удобны при транспортировке, могут длительно храниться, избавляют лаборатории от громадного процесса приготовления сред, приближают к разрешению вопроса о стандартизации сред. Медицинская промышлен­ность производит сухие среды Эндо, Левина, Плоскирева, висмутсульфит агар, питательный агар, углеводы с индикатором ВР и другие.

Термостаты

Для культивирования микроорганизмов используют термостаты.

Термостат – это аппарат, в котором поддерживают постоянную температуру. Прибор состоит из нагревателя, камеры, двойных стенок, между которыми циркулирует воздух или вода. Температура регулируется тер­морегулятором. Оптимальная температура для размножения большинства микроорганизмов 37°С.

Методика приготовления пластинчатого агара

МПА расплавляют на водяной бане, затем остужают до 50-55°С. Горлышко флакона обжигают в пламени спиртовки, открывают чашки Петри так, чтобы вошло горлышко флаконы, не прикасаясь к краям чашки, выливают 10–15 мл МПА, закрыв крышку, покачивают чашку, чтобы среда равномерно распределилась, оставляют на горизонтальной поверхности до застывания. После подсушивания чашки с пластинчатым агаром хранят на холоде.

Посев петлей

Стерильной остуженной петлей берут каплю материала, левой рукой приоткрывают один край чашки, вносят петлю внутрь и у противоположного края делают петлей несколько штрихов на одном месте, затем петлю отрывают и засевают материал параллельными штрихами от одного края чашки к другому с интервалом 5–6 мм. В начале посева, когда микробов на петле будет много, они дадут сливной рост, но с каждым штрихом микробов на петле остается все меньше, и они будут оставаться одиночными и давать изолированные колонии.

Посев по методу Дригальского

Этот метод используется при посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой (гной, испражнения, мокрота). Для посева по методу Дригальского берут шпатель и несколько чашек (3–4). Шпатель – это инструмент, изготовленный из металлической проволоки или стеклянного дрота, загнутого в виде треугольника или Г-образно. Материал петлей или пипеткой вносят в первую чашку и равномерно распределяют шпателем по поверхности среды, этим же шпателем, не прожигая его, втирают материал в питательную среду во второй чашке, а затем – в третьей. При таком посеве в первой чашке будет сливной рост, а в последующих чашках вырастают изолированные колонии.

Выделение чистой культуры по Щукевичу

В результате самостоятельной работы студент должен знать:

1. Классификацию, морфологию грибов, их методы изучения.

2. Классификацию и морфологию актиномицетов.

3. Правила противоэпидемических режимов и техники безопасности.

Уметь:

1. Дифференцировать микроорганизмы при микроскопии.

2. Микроскопировать окрашенные препараты.

3. Обеззараживать материал, обрабатывать руки дезинфирующими препаратами.

4. Приготавливать препараты из чистых культур.

Питательные среды — биологические препараты, используемые для выращивания микроорганизмов и изучения культуральных, биохимических, антигенных свойств, фаголизабельности и чувствительности к антибиотикам.

Питательные среды широко используют в лабораторной практике при диагностике инфекционных заболеваний, а также для контроля за стерильностью лекарственных средств. Для того чтобы микроорганизмы росли и развивались, питательные среды должны отвечать следующим требованиям.

1. Оптимальный состав. В их состав должны входить все необходимые компоненты, которые нужны для развития микробов: белки, витамины, углеводы, минеральные вещества.

2. Оптимальное значение pH. Большинство микроорганизмов развивается при pH 7,2…7,4.

3. Стерильность. Она необходима для того, чтобы избегать конкурентной борьбы между микробами.

4. Прозрачность. Для лучшего изучения характера микробных колоний.

5. Влажность. Питание и дыхание осуществляются путем осмоса и диффузии, поэтому питательные среды должны быть слегка влажными.

Классификация сред. Питательные среды подразделяют по следующим признакам.

1. По консистенции: а) плотные (твердые) — агара 1,2…2 % (мясопептонный агар); б) полужидкие — агара 0,2…0,3 % (полужидкий агар); в) жидкие — мясопептонный бульон.

Для придания средам плотной или полужидкой консистенции чаще всего используют агар-агар — полисахарид, выделяемый из морских водорослей. Агар способен образовывать в воде гель, плавящийся при 80…100 °С и затвердевающий при 37…40 °С. Устойчивость агара к разжижающему действию большинства микроорганизмов, а также способность образовывать прочные студни обусловили его широкое применение в бактериологии.

2. По происхождению: а) искусственные: животного (МПА, МПБ) и растительного происхождения (пивное сусло); б) естественные: животного (кровь, молоко) и растительного происхождения (кусочки картофеля).

3. По составу: а) белковые; б) безбелковые; в) минеральные.

4. По назначению: а) среды для культивирования (простые, специальные); б) среды для обогащения (для накопления микроорганизмов при их низкой концентрации в исходном материале); в) среды консервирующие для первичного посева и транспортировки патогенов; г) среды для идентификации (дифференциально-диагностические) — микробы одного вида образуют колонии, отличающиеся по внешнему виду от колоний других микроорганизмов.

Если материал слабо загрязнен посторонней микрофлорой, то для выделения культур применяют простые среды общего назначения (МПА), при обильной контаминации сапрофитами используют специальные среды: элективные (для отдельных видов) и дифференциально-диагностические (для облегчения идентификации).

Характеристики сред. Консервирующие транспортные среды (глицериновая смесь, фосфатный буфер, тиогликолевая среда для анаэробов и др.). Предупреждают отмирание патогенных микробов и подавляют рост сапрофитов.

Среды обогащения (селективный бульон, желчный бульон, среда Мюллера, Раппопорт, среда Кауфмана, щелочная пептонная вода). Применяют для накопления определенной группы бактерий за счет создания условий, оптимальных для одних видов и неблагоприятных для других. Наиболее часто используют различные красители и химические вещества — соли, желчные кислоты, теллурит калия, антибиотики, фуксин и т. д.

Элективные (селективные среды). Обеспечивают более благоприятные условия для изолируемого микроба с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры. Например, среды Плоскирева и солевой агар применяют для первичного посева материала или для пересева с консервирующих сред или сред обогащения с целью получения чистой культуры.

Дифференциально-диагностические среды. Предназначены для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ.

Среды для выявления протеолитической, гемолитической способности микробов. Содержат в своем составе белковые вещества (кровь, молоко, желатин и др.).

Среды с индифферентными химическими веществами. Служат источником питания для одних видов микробов и не усваиваются другими видами (цитратный агар Симмонса).

Среды с углеводами (моносахариды, дисахариды, полисахариды), многоатомными спиртами (сорбит, маннит), гликозидами (салицин, инозит) для обнаружения соответствующих ферментов.

Среды для определения редуцирующей способности микробов. В своем составе содержат краски, обесцвечивающиеся при восстановлении (агар Омелянского с индигокармином), а также нитраты для определения денитрифицирующей способности микроорганизмов.

Сухие питательные среды. В бактериологических лабораториях используют в основном коммерческие сухие среды. Они представляют собой высушенные и измельченные до порошкообразного состояния готовые питательные среды. У сухих сред имеется ряд преимуществ перед средами обычного изготовления: их можно хранить длительно в сухом затемненном помещении в герметически закрытой таре, они транспортабельны, удобны в применении и стандартны, что облегчает получение сравнимых результатов при бактериологическом исследовании.

Плотные среды состоят из питательной основы, агар-агара, индикаторов и других органических и минеральных веществ, улучшающих рост одних и задерживающих рост других микроорганизмов.

В качестве питательной основы сухих сред используют различные источники белка. За рубежом сухие среды чаще всего изготавливают на мясопептонном бульоне, требующем большого расхода говяжьего мяса. В нашей стране в качестве источника белка используют гидролизаты кильки, казеина, кормовых дрожжей.

Для упаковки сухих питательных сред используют стеклянные банки из оранжевого стекла (250 г), полиэтиленовые банки (250, 500, 1000 г), а также пакеты из трехслойной ламинированной бумаги (50…200 г). Сроки хранения в стеклянных и полиэтиленовых банках составляют 2…4 года, а в пакетах из трехслойного ламината — от 1 года до 4 лет.

Сухие дифференциально-диагностические среды. Если раньше в практике ветеринарных бактериологических лабораторий для идентификации микроорганизмов широко использовались среды Гисса, содержащие какой-либо одни углевод, то в последнее время все шире стали применяться среды, позволяющие дифференцировать микроорганизмы по двум-трем признакам.

Среда подавляет рост сопутствующей бактериальной флоры (кишечной палочки, протея, стафилококка).

Питательная среда для контроля микробной загрязненности сухая № 1. Используют для определения общей обсемененности нестерильных лекарственных препаратов и пищевых продуктов.

Питательная среда для контроля микробной загрязненности (Сабуро-агар) № 2. Рекомендуется для культивирования грибов, а также определения содержания грибов в нестерильных лекарственных средах и других объектах внешней среды.

Эритрит-агар и эритрит-бульон. Предназначен для выделения и культивирования бруцелл.

Питательная среда для выделения и культивирования сибиреязвенного микроба.

Кетоглутаровый агар. Эффективен для изоляции и культивирования возбудителя туляремии.

Питательная среда для листерий. Рекомендуется для изоляции листерий из инфицированного материала (кровь, ликвор, околоплодные воды и др.) и культивирования штаммов.

Среда АГВ. Предложена для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам дискодиффузным методом.

Питательная среда для экспресс-определения антибиотикочувствительности условно-патогенных бактерий. Предложена для ускоренного определения антибиотикочувствительности грамотрицательных условно-патогенных микроорганизмов. Учет результатов можно проводить через 4…5 ч.

Ассортимент выпускаемых отечественной промышленностью сухих питательных сред постоянно расширяется. Приведено лишь небольшое количество тех, которые могут быть использованы в повседневной работе ветеринарных лабораторий. Кроме того, в настоящее время имеется возможность приобретать и импортные питательные среды. Коммерческие названия можно узнать, заказав соответствующие каталоги. Однако их внедрение и широкое использование в ветеринарных лабораториях РФ возможно лишь в отдаленной перспективе из-за довольно высокой стоимости. Кроме того, в этой главе не упомянуты готовые коммерческие питательные среды довольно хорошего качества производства НИЦФ (г. Санкт-Петербург). Они расфасованы во флаконы по 400 мл; срок хранения 1 год. Среды, безусловно, могут быть полезны при проведении бактериологических работ в полевых условиях.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.