Среда м17 для определения лактококков и термофильного стрептококка
МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ
Методы определения молочнокислых микроорганизмов
Milk and milk products. Methods for determination of the lactic acid bacteria
Дата введения 2017-09-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" (ФГБНУ "ВНИМИ")
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 октября 2016 г. N 92-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Минэкономики Республики Армения
Госстандарт Республики Казахстан
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 ноября 2016 г. N 1827-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33951-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 сентября 2017 г.
5 ВЗАМЕН ГОСТ 10444.11-89 в части молока и молочной продукции
6. Исключен. (Поправка. ИУС N 4-2017).
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 4, 2017 год
Поправка внесена изготовителем базы данных
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочную продукцию и устанавливает методы определения молочнокислых бактерий:
- посевом в стерильное молоко и подсчетом наиболее вероятного числа (НВЧ);
- посевом на или в твердые питательные среды и подсчетом КОЕ.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 13928-84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу
ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты
ГОСТ 32901-2014 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
3.1 молочнокислые бактерии: Грамположительные, неподвижные, неспорообразующие, каталазоотрицательные, нитрат-редуктаза-отрицательные и цитохром-оксидазоотрицательные, не разжижающие желатин и не продуцирующие индол кокки или прямые палочки.
Примечание - Основные роды и виды молочнокислых бактерий в производстве молочных продуктов: вид Lactococcus lactis , род Lactobacillus , вид Streptococcus thermophilus , род Leuconostoc .
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы
4.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы - по ГОСТ 32901 со следующими дополнениями:
- стерильное обезжиренное молоко;
- гидролизованное молоко;
- агар с гидролизованным молоком;
- подкисленная среда MRS;
- среда MRS агаризованная;
- основа селективного агара;
- среда М 17;
- среда для определения L. casei ;
- раствор мальтозы;
- гидролизованный бульон;
- среда для определения лактококков и термофильных стрептококков.
4.2 Допускается применять одноразовую посуду, если она отвечает соответствующим требованиям.
5 Отбор проб
6 Подготовка к проведению анализа
6.1 Подготовка посуды и материалов - по ГОСТ 32901.
6.2 Приготовление питательных сред
6.2.1 Приготовление стерильного обезжиренного молока
Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см и затем стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.
Стерильное обезжиренное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.
6.2.2 Приготовление гидролизованного молока
Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или обрабатывают текучим паром в течение 20 мин, охлаждают до температуры (45±1)°С и устанавливают активную кислотность рН (7,6-7,8). К 1000 см молока добавляют (0,5-1,0) г порошка панкреатина и 5 см хлороформа. Колбу со смесью закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате при температуре 40°С в течение (18-24) ч. В течение первых (3-5) ч молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания приоткрывают для удаления паров хлороформа). Через (18-24) ч колбу вынимают из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1, устанавливают активную кислотность рН (7,0-7,2) и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (15±1) мин.
Гидролизованное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.
6.2.3 Приготовление агара с гидролизованным молоком или бульоном
К 1000 см гидролизованного молока (6.2.2) или гидролизованного бульона (6.2.3.1) добавляют 15 г агара. Смесь нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы. Смесь стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.
Агар с гидролизованным молоком допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.
6.2.3.1 Приготовление гидролизованного бульона
Состав:
- сухой гидролизат белков молока
- сухой дрожжевой автолизат
- фосфат калия двузамещенный
Все компоненты вносят в колбу, перемешивают и нагревают до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50±2)°С и устанавливают рН (7,3±0,1) при температуре 25°С. Готовый гидролизованный бульон разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (15±1) мин.
При использовании готового гидролизованного бульона (35±1) г сухой среды вносят в (1000±50) см холодной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят (3-5) мин, не допуская пригорания. При наличии осадка фильтруют через ватно-марлевый фильтр. В полученной среде проверяют активную кислотность и корректируют рН до (7,3±0,1). При необходимости среду вновь подогревают, разливают в колбы или пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин.
Гидролизованный бульон допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.
6.2.4 Приготовление среды для определения лактококков и термофильных стрептококков
Состав:
О пользе кисломолочных продуктов людям известно давно. Научное обоснование и выделение бактерий, которые ответственны за их образование, принадлежит русскому микробиологу Илье Мечникову. Группа молочнокислых бактерий (лактобациллы и молочнокислые стрептококки) – это микроорганизмы, которые организовывают процессы сбраживания углеводов с образованием молочной кислоты. Сегодня их способности широко используются в пищевой промышленности, в сельском хозяйстве и даже в образовании газа. О пользе и вреде молочнокислых стрептококков и лактобацилл, об их строении и микробиологии поговорим ниже.
Бактериальная кооперация
С самых давних времен молочнокислые стрептококки и лактобациллы помогали людям в приготовлении полезной пищи. Кроме того, многие из них входят в состав нормальной микрофлоры нашего организма. Но этим не исчерпывается польза молочнокислых стрептококков и всех бактерий, которые обеспечивают процессы брожения.
Молочные стрептококки и палочки довольно крупные, хорошо окрашиваются и легко обнаруживаются.
Lactobacillus plantarum – молочнокислая гетероферментная палочка - отвечает за сквашивание капусты и огурцов. Кроме того, она в норме присутствует в микрофлоре слюны.
Молочной кислотой обрабатывают сырокопченые колбасы. При этом они не теряют своих вкусовых качеств, безопасны для человека и долгое время не портятся.
Не только в пищевой промышленности
В кожевенной промышленности также используются молочнокислые стрептококки и палочки, а в сельском хозяйстве они помогают в приготовлении кормов для животных (силоса).
Об использовании лактобактерий в фармацевтике знают все. Биологические добавки и препараты с живыми культурами этих организмов применяются при самых различных заболеваниях. Сегодня молочнокислые бактерии называют надеждой мировой медицины. Вполне вероятно, что в ближайшие десятилетия именно благодаря им человечество сможет победить многие серьезные болезни.
Термофильные молочнокислые стрептококки широко используются при переработке органических веществ, в процессе которой образуется газ метан. При этом он довольно чистый и пригоден для отопления различных помещений.
Разновидности лактобактерий
При всем своем многообразии эти микроорганизмы делятся на две группы:
- Гомоферментативные – главным продуктом их жизнедеятельности является молочная кислота (до 90 %), а также этиловый спирт, фумаровая и янтарная кислоты, диоксид углерода.
- Гетероферментативные – продуктами жизнедеятельности являются уксусная и молочная кислота, этиловый спирт и диоксид углерода.
Дружные семейства
Все молочнокислые бактерии - это представители семейства Lactobacillaceae (лактобациллы) и семейства Streptococcaceae (лактококки или молочнокислые стрептококки). Наиболее распространенными представителями, которые обнаруживаются в кислом молоке, являются:
- Lactobacillus acidophilus – ацидофильная палочка, которая используется не только в пищевой промышленности, но и в производстве лекарственных препаратов. Высокая ее жизнестойкость позволяет образовывать колонии в кишечнике человека, а ее способность вырабатывать естественные антибиотики создает неблагоприятную среду для жизнедеятельности патогенных микроорганизмов.
- Lactobacillus bulgaricus – болгарская палочка. Вырабатывает кроме молочной кислоты еще и витамины, аминокислоты и полисахариды. Болгарская палочка и молочнокислые стрептококки – основа качества йогуртов. Эти бактерии стабилизируют микрофлору кишечника, способствуют нормальной работе желудка и поджелудочной железы, оказывают благоприятное воздействие на иммунную систему.
- Lactobacillus casei – эти лактобациллы входят в состав нормальной микрофлоры ротовой полости, кишечника и половых органов. Они вытесняют из среды Helicobacter pylori – патогенную палочку, которая ответственна за возникновение язв желудочно-кишечного тракта и гастрита.
- Молочнокислые стрептококки – термофильные и мезофильные. Ниже о них расскажем подробнее.
- Acetobacter aceti – уксуснокислые бактерии, которые в процессе жизнедеятельности образуют никотиновую кислоту, витамины В6 и В12.
Семейство лактококков
По отношению к оптимальной температуре для жизнедеятельности, молочнокислые стрептококки бывают:
- Теплолюбивые или термофильные – это бактерии, оптимальные температуры для которых 40-42 °С.
- Мезофильные молочнокислые стрептококки наиболее хорошо развиваются при температуре 30-35 °С.
Все они относятся к грамположительным бактериям (окрашиваются по методу Грамма), в культуре образуют короткие или длинные цепочки. Форма клеток молочнокислых стрептококков имеет овальные очертания, без жгутиков. Это неподвижные бактерии, которые не образуют спор или капсул и размножаются преимущественно простым делением. Все они являются факультативно-анаэробными организмами, могут существовать в среде без кислорода.
Мезофильные стрептококки
Это неоднородная группа бактерий, которая состоит из кислотообразователей (Streptococcus lactis, Streptococcus. cremoris) и ароматообразующих кокков (Leuconostoc citrovorum и Leuconostoc dextranicum).
Streptococcus lactis – главный молочный стрептококк. В молоке образует диплококки (парные клетки) или короткие цепочки. Овальные бактерии величиной до 1 микрометра. При внесении культуры в 10 мл молока, при температуре 25-30 °С, свертывание происходит в течении 10-12 часов с образованием ровного и плотного сгустка. Это основной компонент заквасок при приготовлении творога, простокваши и сметаны. Вред молочнокислый срептококк приносит при попадании в пастеризованное молоко, что приводит к снижению его стойкости.
Сливочный стрептококк (Streptococcus. cremoris) чаще образует длинные цепочки в культуре. Именно эта бактерия образует в молоке сгустки сметанообразной консистенции.
Ароматообразующие лактококки придают специфический вкус и аромат кисломолочным продуктам. А при излишнем количестве могут приводить к газообразованию.
Термофильные лактококки
Польза и вред термофильных молочнокислых стрептококков была доказана И. И. Мечниковым. Именно он выделил их в сгустках, которые образуются при сбраживании молока при температуре около 50 °С. И он ввел в продажу первую закваску с содержанием этих микроорганизмов.
Клетки этих бактерий овальные, чуть больше мезофильных кокков, образуют в культуре цепочки различной длины. Именно эти бактерии способны перерабатывать лактозу и эффективно используются при лечении лактазной недостаточности у детей, способствует улучшению переваривания молочных смесей и нормализует микрофлору кишечника.
Термофильные стрептококки реагируют на антибиотики из разряда пенициллинов. Это их свойство используется для определения наличия в молоке антибиотиков.
Эти бактерии используются для лечения и профилактики болезней желудочно-кишечного тракта (энтероколиты, дисбактериозы, диареи), входит в большинство биологически активных добавок. Медицинская косметология использует эти лактококки как один из компонентов маски для восстановления и омоложения кожи.
Что происходит в нашем организме
Попадая в наш кишечник, молочнокислые лактобактерии собираются в колонии и прикрепляются к слизистым оболочкам, создавая условия, которые подавляют жизнедеятельность патогенной микрофлоры. Но их действие временно. Именно поэтому употреблять продукты с их содержанием необходимо регулярно. Только так можно поддержать нужное их количество и продлить их эффективность.
В молоке содержится лактоза, а в кисломолочных продуктах она превращается в молочную кислоту. Последняя активизирует работу желудочно-кишечного тракта, увеличивая выработку желудочного сока, способствует перистальтике кишечника и улучшает метаболизм.
Действие лактобактерий основано на выработке ими ферментов, которые способны ускорять различные процессы. Сегодня врачи могут подобрать специальный состав бактерий в зависимости от того, какой именно процесс в организме необходимо активизировать. Такие препараты называются эубиотики и могут содержать бифидобактерии (жителей нашего кишечника), лактобактерии (корректировщики пищеварительной системы) и колибактерии (безопасные штаммы кишечной палочки).
Для организма они полезны
Современными исследованиями доказано, что употребление этих бактерий детьми значительно снижает риск кариеса зубов и значительно повышает общий иммунный статус организма.
Систематическое употребление кисломолочной продукции оказывает благоприятное воздействие на профилактику онкологических патологий. А ежедневное употребление натуральных йогуртов повышает уровень в крови липопротеидов, что приводит к снижению риска возникновения атеросклероза и патологий сердечно-сосудистой системы.
Однако следует учесть и возможный вред для организма. Кисломолочные продукты противопоказаны при непереносимости живых компонентов и пищевых добавок.
Многообразие продуктов из молока
Современная пищевая промышленность предлагает множество продуктов, приготовление которых происходит при участии молочнокислых бактерий:
Самые любимые - йогурт и кефир
Йогурт – самый любимый продукт детей. Для его приготовления требуется закваска с правильными пропорциями различных лактобактерий. Если в йогурты добавляют различные добавки и загустители, тогда для его хранения необходима термизация. Такой продукт имеет срок хранения до месяца, но живых культур бактерий в нем нет.
Кефир – продукт смешанного молочнокислого и спиртового брожения. В его приготовлении принимают участие палочки и кокки, грибки и дрожжи. Все они содержатся в готовом продукте, который незаменим при патологиях желудка и кишечника, расстройствах нервной системы, хронической усталости, инфекционных заболеваниях.
Квас – от ста болезней спас
Кисломолочные бактерии используются и при приготовлении этого старинного русского напитка. При его приготовлении используются дрожжи, которые запускают спиртовое брожение, и молочнокислые бактерии, которые отвечают за брожение. Этот кислый напиток готовят из муки и солода, ржаного хлеба, свеклы, фруктов, ягод. Иногда с добавлением вощины, ароматных трав, меда.
Квашение овощей – это организация спонтанного молочнокислого брожения при ограничении доступа кислорода. Этот же принцип используется и при силосовании кормов для домашних животных, что существенно повышает их питательные свойства.
Приготовление различных сыров и сливочного масла также не обходится без участия лактобактерий. Ведь первый этап приготовления этих продуктов – сбраживание молока.
Две стороны одной медали
Молочнокислые бактерии распространены там, где есть субстрат для их жизнедеятельности – углеводы. Их много в молоке, на поверхности растений, фруктов и овощей, в местах гниения органики, в пищеварительном тракте и на слизистых оболочках животных и людей. Несмотря на все положительные аспекты, которые связаны с их деятельностью, они могут приводить к порче продуктов и даже вреду для здоровья человека.
Некоторые из молочнокислых бактерий могут быть небезопасными для человека. Это касается в основном споробразующих лактобактерий, которые вызывают расстройство работы кишечного тракта. Патогенность штаммов лактобактерий определяется только лабораторными методами.
Пятна на поверхности сыров, горький вкус молока и прогорклый привкус масла – эти все явления также связаны с деятельностью данных микроорганизмов. Уксуснокислые бактерии приводят к прокисанию вина, а кокки, расщепляя белки, приводят к гниению продуктов. Молочнокислые бактерии портят муку и уже готовый хлеб, расщепляя крахмал и делая хлеб липким и неприятно пахнущим.
Группа компаний "Униконс"
Продвижение и реализация пищевых добавок, антисептиков и другой продукции НПО Альтернатива.
"Бесплатные образцы"
Комплексные пищевые добавки "Униконс".
Для всех отраслей пищевой промышленности!
"Петритест"
Микробиологические экспресс-тесты. Первые результаты уже через 4 часа.
- Вы здесь:
- Библиотека технолога
![]()
- Молочная промышленность
![]()
- Микробиология молока и молочных продуктов
2.2. МОЛОЧНОКИСЛЫЕ КОККИ: ЛАКТОКОККИ, СТРЕПТОКОККИ, ЛЕЙКОНОСТОКИ
Молочнокислые кокки относятся к семейству Streptococcaceae и представлены 3 родами - лактококков Представители рода Lactococcus выглядят под микроскопом как сферические или овальные клетки диаметром 0,5-1,5 мкм, располагающиеся в виде отдельных одиночных клеток, попарно или короткими цепочками (рис. 2.2а). Лактококки - мезофилы (оптимальная температура 30°С). Вызывают, как правило, гомоферментативное брожение, с образованием L+ молочной кислоты. На плотной среде ATM с мелом образуют мелкие (менее 1 мм) каплевидные колонии с ровным краем и зонами просветления, так как преобразуют нерастворимый карбонат кальция в растворимый лактат кальция. Глубинные колонии имеют форму лодочки или зерна чечевицы. Типовой вид - Lac. lactis (старое название*- Streptococcus lactis). В молочной промышленности используют подвиды:
Lac. lactis subsp. lactis biovar diacetilactis (биовариант молочного лак- тококка, образующий диацетил; сокр. Lac. diacetilactis) вызывает гетерофер- ментативный тип брожения; ЭК более 16 ч, КП70-100°Т; может образовывать глубинные колонии в виде кусочков ваты.
Рис. 2.2
Морфология клеток заквасочной микрофлоры (вид фиксированных препаратов, окрашенных метиленовым синим, при увеличении 90х15 с использованием светового микроскопа Primo Star iLED Carl Zeiss):
а -Lactococcus lactis spp.; б - Streptococcus thermophilus;
в -Lactobacillus acidophilus; г -Lactobacillus casei + Lactococcus lactis.
В молоке лактококки образуют ровный, плотный сгусток с колющейся или сметанообразной консистенцией, с приятным чистым кисломолочным вкусом и запахом. Лактококки входят в состав заквасок для кисломолочных напитков, сметаны, творога, кислосливочного масла, сыров.
В молочной промышленности используется один вид рода Streptococcus - Streptococcus salivarius subsp. thermophilus (сокр. Str. thermophilus), термофильный стрептококк. По морфологии это шарообразные или крупные эллипсовидные клетки, обычно в виде длинных цепочек (рис. 2.26). На плотных (рис. 2.2б). На плотных средах Str. thermophilus образует мелкие колонии с зернистой структурой, глубинные колонии- в виде чечевичек с выростами. В небольших количествах образует ацетоин, поэтому занимает промежуточное положение между гомо- и гетероферментативными микроорганизмами (факультативный гетероферментативный), термофил (оптимальная температура 40°С), энергичный кислотообразователь ЭК 3,5-6 ч, КП110-115°Т. Str. thermophilus чувствителен к пенициллину и стрептомицину, поэтому используется как тест-культура для их определения в молоке.
Str. thermophilus образует экзополисахаридные капсулы, в молоке - вязкие тягучие сгустки. Входит в состав заквасок для ряженки, варенца, йогурта, Мечниковской простокваши, а также используется при производстве кисломолочных напитков низкой жирности и творога ускоренной выработки, сыров с высокой температурой второго нагревания.
Молочнокислые микроорганизмы рода Leuconostoc (от греч. бесцветные водоросли) вызывают гетероферментативное брожение, образуя кроме молочной кислоты этанол, ацетоин, диацетил, бутиленгликоль, СОг; мезофилы (25- 28°С). Лейконостоки - слабые кислотообразователи (ЭК 2-3 суток или вообще не свертывают молоко), Кп 50-80°Т; оптимальная температура ароматообразо- вания- 18-20°С. В молоке образуют сферические, иногда вытянутые клетки, которые располагаются парами или цепочками. Требовательны к ростовым факторам (витамины, аминокислоты, глюкоза). На плотных средах с цитратами образуют мелкие гладкие серовато-белые колонии, рост медленный.
Для молочной промышленности имеет значение вид Leu. mesenteroides, который включает 3 подвида:
- Leu. mesenteroides subsp. cremoris;
- Leu. mesenteroides subsp. dextranicum;
- Leu. mesenteroides subsp. mesenteroides.
Лейконостоки используются для ароматообразования в производстве кислосливочного масла, сыров, реже кисломолочных напитков, сметаны, творога.
Текст ГОСТ 33951-2016 Молоко и молочная продукция. Методы определения молочнокислых микроорганизмов
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ. МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION. METROLOGY AND CERTIFICATION
МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ
Методы определения молочнокислых микроорганизмов
Сведения о стандарте
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про* токол от 25 октября 2016 г. № 92*П)
За принятие проголосоааги:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166)004-97
по МК (ИСО 3166) 004-97
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Минэкономики Республики Армения
Госстандарт Республики Казахстан
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 ноября 2016 г. Не 1827-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33951—2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 сентября 2017 г.
5 ВЗАМЕН ГОСТ 10444.11—69 в части молока и молочной продукции
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ Методы определения молочнокислых микроорганизмов
Milk and milk products. Methods for determination of the lactic add bacteria
Дата введения — 2017—09—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочную продукцию и устанавливает методы определения молочнокислых бактерий:
• посевом в стерильное моло 3 и затем стерилизуют при температуре (121 ± 1) ®С в течение (10 ± 1) мин.
Стерильное обезжиренное молоко допускается хранить при температуре (4 ± 2) в С в течение 30 дней.
6.2.2 Приготовление гидрслиэованного молока
Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или обрабатывают текучим паром в течение 20 мин. охлаждают до температуры (45 ± 1) 'С и устанавливают активную кислотность pH (7.6 - 7.8). К 1000 см 3 молска добавляют (0.5 - 1.0) г порошка панкреатина и 5 см 3 хлороформа. Колбу со смесью закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате при температуре 40 *С в течение (18 - 24) ч. В течение первых (3 - 5) ч молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания приоткрывают для удаления паров хлороформа). Через (18 - 24> ч колбу вынимают из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят дистиллированной ведой е соотношении 1:1. устанавливают активную кислотность pH (7.0 - 7.2) и стерилизуют при темпе* ратуре (121 ± 1) ®С в течение (1511) мин.
Гидролизованное молоко допускается хранить при температуре (4 ± 2) *С в течение 30 дней.
6.2.3 Приготовление агара с гидролизованным молоком или бульоном
К1000 см 3 гидролиэованнсго молока (6.2.2) или гидролиэованного бульона (6.2.3.1) добавляют 15 г агара. Смесь нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы. Смесь стерилизуют при температуре (121 ± 1) ®С в течение (10 ± 1) мин.
Агар с гидролизованным молоком допускается хранить при температуре (4 ± 2) 'С в течение 30 дней.
6.2.3.1 Приготовление гидролизованного бульона
• сухой гидролизат белков молока - 31 г;
• сухой дрожжевой автолизат - 2.5 г;
• фосфат калия двузамещанный -1.5 г;
• дистиллированная веда -1000 см 3 .
Все компоненты вносят е колбу, перемешивают и нагревают до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2) *С и устанавливают pH (7.3 ± 0.1) при температуре 25 ®С.
Готовый гидролизованный бульон разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение (15 ± 1) мин.
При использовании готового гидролизованного бульона (35 ± 1) г сухой среды вносят в (1000150)см 3 холодной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят (3 - 5) мин. не допуская пригорания. При наличии осадка фильтруют через ватно-марлевый фильтр. В полученной среде проверяют активную кислотность и корректируют pH до (7.3 ± 0.1). При необходимости среду вновь подогревают, разливают в колбы или пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 ± 2) *С в течение (1511) мин.
Гидролиэованный бульон допускается хранить при температуре (4 ± 2) в С в течение 30 дней.
6.2.4 Приготовление среды для определения лактококкое и термофильных стрептококков
• сухой гидролизат белков молока -31,5 г.
• сухой дрожжевой автолизат - 5.0 г;
• фосфат калия двузамещенный - 1,5 г,
- дистиллированная вода -1000 см 3 .
Все компоненты вносят в колбу, перемешивают и нагревают до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2) °С и устанавливают pH (7.3 ± 0.1) при температуре 25 *С. Готовую среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) ®С в течение (15 ± 1) мин.
При использовании готовой питательной среды (50 ± 1) г сухой среды вносят в (1000 ± 50) см 3 холодной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят 3 — 5 мин. не допуская пригорания. При наличии осадка фильтруют через ватко-марлевый фильтр. В полученной среде проверяют активную кислотность и корректируют pH до (7.3 ± 0.1). При необходимости среду вновь подогревают, разливают в колбы или пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 ±2) в С в течение (15±1) мин. Готовая среда прозрачная и имеет желтовато-коричневый цвет.
Рабочую среду допускается хранить при температуре (4 ± 2) *С в течение 30 дней.
6.2.5 Приготовление среды М 17 для определения лактококкое и термофильного стрептококка
Состав основной среды:
• пептон 3 (перевар сои) - 5.0 г,
• дрожжевой экстракт -2.5 г;
• мясной экстракт - 5,0 г;
• глицерофосфат -19.0 г.
• сернокислый магний -0,25 г.
• аскорбиновая кислота - 0.5 г,
• дистиллированная вода - 950 см 3 .
Все компоненты основной среды вносят в колбу, перемешивают и нагревают до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2) *С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации pH составил (7.210,2) при температ/ре 25 в С. Готовую среду разливают по 95 см 3 в колбы вместимостью 250 см 3 и стерилизуют при температ/ре (121 ± 1) *С в течение (15 ± 1) мин.
При использовании готовой питательной среды 55 г питательной среды вносят в колбу, добавляют 950 см 3 дистиллированной веды и нагреваю* при перемешивании до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2)*С и устанавливает pH таким образом, чтобы после стерилизации pH составил (7.2 ±0,2). Готовую среду разливают по 95 см 3 в колбы вместимостью 250 см 3 и стерилизуют при температуре (121 ± 1)®С в течение 3 основной среды расплавляют на водяной бане и охлаждают до температуры (48—56) *С. 5 см 3 раствора лактозы (6.3.1) подогревают до температуры (48—56) *С. добавляют его к основной среде и перемеривают.
6.2.6 Приготовление подкисленной среды MRS для молочнокислых палочек
• мясной экстракт - 10 г;
• дрожжевой экстракт - 5 г;
- теин 80 - 1 см 3 ;
• фосфат калия однозамещенный - 2 г;
• ацетат натрия тригидрат - 5 г,
• диаммоний цитрат - 2 г.
• сернокислый магний - 0.2 г:
• сернокислый марганец -0.05 г;
• дистиллированная вода - 1000 см 3 .
Все компоненты (кроме теин 80) вносят в колбу, перемешивают, нагревают до полного растворения. Добавляют 1 см 3 теин 80. Охлзадают до температуры (50 ± 2) ®С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации pH составил (5.4 ± 0.2) при температуре 25 ®С. Готовую среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение (15 ± 1) мин.
При использовании готовой питательной среды 60 г сухой питательной среды вносят в колбу, добавляют 1000 см 3 дистиллирсванной воды и нагревают при перемешивании до полного растворения. Добавляют 1 см 3 теин 80. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2) *С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации pH составил (5.4 ± 0.2). Готовую среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение (1511) мин.
6.2.7 Приготовление среды для определения молочнокислых палочек Состав:
Читайте также: