Стрептококки в диагностическом титре

Но не все оказалось так просто. Выявляемость АСЛ-О существенно снизилась, и часто не соответствовала клинической картине, которую видели врачи-клиницисты. Когда провели сравнительные исследования, то оказалось, что результаты, полученные латексными реагентами для определения АСЛ-О, независимо от производителя, не совпадают с данными гемолитического теста. Зачастую латексные реагенты дают отрицательные реакции, когда уровень АСЛ-О гемолитическим тестом выявляет слабоположительные результаты. Как правило, титры АСЛ-О выявляемые латексными реагентами ниже, чем титры гемолитического теста.

Это происходит из-за принципиальных отличий в принципе обоих методов. Разница между ними в чувствительности как между иммуноферментным тестом и тестом агглютинации, то есть на уровне десятков раз. Гемолитический тест принципиальнее чувствительней латексного, что еще раз подтвердилось на примере АСЛ-О. Помимо этого, что еще более важно, оказалось, что латексный тест и гемолитический тест выявляют разные формы стрептолизина-О. Поэтому, нельзя один тест просто механически заменить другим. Поэтому, по настоятельной просьбе ревматологов, мы снова ввели в работу гемолитический тест.

Наличие стрептококковой инфекции часто сопровождается ростом титра РФ. Так, по нашим данным у 61% пациентов с положительными титрами анти-стрептококковых антител выявлялся одновременно и повышенный уровень РФ.

Поэтому при лабораторной дифференциальной диагностике ревматического и ревматоидного артрита, судить о РФ, как маркере ревматоидного артрита, можно лишь при сохранении его повышенного значения, и после того, как титр АСЛ-О придет в норму. Исчезновение РФ вместе с нормализацией АСЛ-О говорит о вторичном характере его появления.

Заключение

Благодаря использованию классических и современных методов определения антител к стрептолизину-О и гиалуронидазе стрептококка возможно наиболее достоверное определение наличия стрептококковой инфекции, что особенно важно при диагностике ревматоидных состояний.

Streptococcus viridans входит в состав естественной микрофлоры человека. Микроб обитает на слизистой оболочке респираторного, пищеварительного и урогенитального трактов. В норме его количество не должно превышать 30% от числа всех микроорганизмов, населяющих данные локусы.

Streptococcus viridans в переводе с латинского означает зеленый. Такое название связано со способностью бактерий давать при гемолизе зеленую окраску. Обнаружить микроб в биологическом материале можно с помощью бактериологического исследования или ПЦР. Лечение инфекции этиотропное, патогенетическое, симптоматическое. Больным назначают пенициллины, иммуномодуляторы и препараты, устраняющие клинические проявления и улучшающие общее состояние пациентов.

Этиология

Streptococcus viridans под микроскопом

Streptococcus viridans — аспорогенные шаровидные или овоидные кокки, лишенные жгутиков. Они образуют капсулу, которая защищает их от фагоцитов, а при определенных условиях трансформируются в L-форму, которая позволяет им скрыться от компонентов иммунной системы.

Бактерии окрашиваются по Граму в синий цвет, в мазке располагаются цепочками. Они очень прихотливы к условиям роста. Для посева используют среды с кровью или сывороткой — кровяной или сывороточный агар. На твердых питательных средах вырастают очень мелкие, сероватые колонии с зоной зеленящего гемолиза по периферии. В жидких средах они образуют диффузную муть с осадком на дне.

Стрептококки способны осуществлять процессы своей жизнедеятельности как в присутствии кислорода, так и без него. Бактерии устойчивы к оптохину и нерастворимы в желчи. Streptococcus viridans обладает резистентностью к некоторым факторам внешней среды — высушиванию, нагреванию, охлаждению, замораживаю. Погибают микробы при кипячении и дезинфекции, но не сразу, а спустя 15-30 минут. Находясь долгое время во внешней среде, они теряют свою патогенность.

Стрептококк вириданс считается слабовирулентным микробом. Это связано с ограниченным набором факторов патогенности, к которым относится капсула, белки-адгезины, эндотоксин, гемолизины и ферменты, обеспечивающие развитие патологического процесса.

Эпидемиология

Streptococcus viridans в определенной концентрации не опасен для человека. Скорее наоборот, бактерии предотвращают нашествие других патогенов и защищают организм человека от таких опасных микробов, как Pseudomonas.

Когда количество стрептококка начинает стремительно расти, возникает патология. Пополнение стрептококка также возможно извне – от больных людей, особенно с респираторными формами недуга, а также от бессимптомных бактерионосителей. Пациенты с поражением органов дыхания постоянно выделяют микробы в окружающую среду.

Источниками инфекции могут стать собственные очаги — воспаленные пазухи носа или кариозные зубы. Слизь из носа, стекая по задней стенке глотки, вызывает периодически воспаление горла и миндалин.

Пути распространения инфекции:

• Аэрационный – при заглатывании воздуха, содержащего микробы,
• Контактный, в том числе половой — при поцелуе, объятии, коитусе,
• Алиментарный — при употреблении инфицированных продуктов питания: яиц, молока, ветчины,
• Трансплацентарный — внутриутробное заражение плода.

Восприимчивость людей к стрептококковой инфекции довольно высокая. Для недуга характерна осенне-зимняя сезонность. Микроб поражает преимущественно маленьких детей и пожилых людей.

Факторы, способствующие развитию патологии:

1. Иммунодефицит,
2. Перенесенная ОРВИ,
3. Переохлаждение,
4. Контактирование с больным человеком,
5. Онкопатологии,
6. Длительная иммуносупрессия,
7. Сопутствующие хронические заболевания в стадии декомпенсации.

После внедрения Streptococcus viridans в организм человека происходит развитие местных воспалительных процессов и формирование первичного очага поражения. Данный микроб обладает тропностью к эпителию респираторного тракта, поэтому чаще всего местом его локализации становятся верхние дыхательные пути. В более редких случаях воспаляются органы мочевыделительной и пищеварительной систем. Бактерии активно размножаются в эпителиоцитах. Когда их количество становится запредельным, стрептококки прорываются в кровеносное русло и разносятся к внутренним органам.

Streptococcus viridans способен вызвать тяжелую интоксикацию с диспепсией и спутанностью сознания. Клеточная стенка бактерий воспринимается организмом как аллерген, к которому вырабатываются аутоантитела и гиперчувствительность. Происходит аллергизация организма, развиваются аутоиммунные процессы, протекающие в форме гломерулонефрита, миокардита, ревматизма. Не смотря на свою низкую вирулентность, стрептококк вириданс способен проникать с током крови даже в стерильные среды – ликвор, мочу.

Заболевания, которые вызывает Streptococcus viridans:

• Деминерализация и разрушение твердых тканей зуба с образованием полостного дефекта,
• Воспаление тканей пародонта,
• Тонзиллит, фарингит,
• Отит,
• Воспаление почечных клубочков,
• Уретрит,
• Цервицит,
• Воспаление лимфоузлов, мышц, кожи,
• Эндокардит.

Симптомы

Streptococcus viridans обычно вызывает заболевания верхних отделов дыхательного тракта. У ребенка этот микроб обнаруживается в горле и становится возбудителем фарингита или ангины. На фоне выраженного интоксикационного синдрома с лихорадкой, недомоганием и апатией появляется боль в горле, тошнота, охриплость. Больные дети часто капризничают, плачут, отказываются от еды, не берут грудь. У них появляются желто-зеленые выделения из носа, кашель, головная боль.

При осмотре специалисты обнаруживают гиперемированную слизистую оболочку зева, отек и гипертрофию миндалин. У больных лицо становится одутловатым, возникает регионарный лимфаденит, появляется гнойничковая сыпь на коже, миалгия, артралгия, гипергидроз.

Осложнения заболеваний, вызванных Streptococcus viridans:

1. Острый средний отит,
2. Ревматизм,
3. Воспаление миокарда,
4. Гломерулонефрит,
5. Бактериальное воспаление мозговых оболочек,
6. Абсцессы паренхиматозных органов,
7. Сепсис,
8. Шок.

Патогенез подобных осложнений до конца не известен. Их причиной считается аутоиммунное воспаление: антитела, вырабатываемые для борьбы с инфекцией, реагируют на собственные клетки, пораженные стрептококком.

Лабораторные методы исследования

Диагностика заболеваний, вызванных Streptococcus viridans, заключается в проведении микробиологического исследования клинического материала и постановке полимеразной цепной реакции. Начинается лабораторная диагностика с отбора материала. Микробиологи исследуют мазок из зева и миндалин, отделяемое носа, влагалищный секрет, соскоб с пораженного участка кожи, кровь, мочу, мокроту, ликвор.

ПЦР-диагностика – современный метод, позволяющий обнаружить инфекцию путем выделения генетического материала возбудителя. Этот экспресс-тест дает точный результат за считанные минуты. Но по современным стандартам больным необходимо пройти всестороннее обследование, которое длится несколько дольше, но дает более достоверный результат. Поскольку стрептококк вириданс является нормальным обитателем организма человека, с помощью ПЦР он может обнаруживаться и у здоровых людей. Именно поэтому данный метод не является универсальным.

К дополнительным исследованиям относятся параклинические анализы крови и мочи, ЭКГ, УЗИ внутренних органов. Эти исследования необходимы для определения состояния сердца и почек. Очень часто стрептококк распространяется гематогенным путем из очагов, расположенных в клубочковых образованиях или клапанном аппарате.

Общетерапевтические мероприятия

Стрептококковая инфекция опасна своими осложнениями, поэтому ее лечение следует начинать незамедлительно. Лечение инфекции, вызванной Streptococcus viridans, заключается в воздействии на первопричину — микроб и в устранении клинических проявлений, ухудшающих самочувствие больных. Для этого применяют традиционные лекарственные и физиотерапевтические методики, а также средства народной медицины. Комплексный подход дает максимально положительный результат. В среднем курсовой прием препаратов длится 7-10 дней. Проводится лечение под контролем специалистов — ЛОР-врачей, инфекционистов или пульмонологов.

Особое внимание следует уделять уходу за больными, их питанию и соблюдению питьевого режима.

Профилактические процедуры

Специфическая профилактика стрептококковой инфекции в настоящее время не разработана. Чтобы предупредить развитие патологии, специалисты дают следующие рекомендации:

1. Соблюдать правила личной гигиены: проводить регулярно влажную уборку помещения, мыть руки перед едой, содержать в чистоте предметы обихода, посуду, детские игрушки.
2. Закаляться, вести активный образ жизни, заниматься посильными видами спорта.
3. Полноценно и правильно питаться, включать в рацион обогащенный витаминами и микроэлементами продукты питания, готовить каждый день свежие блюда, следит за сроком годности сырья и продуктов.
4. Бороться с вредными привычками, отказаться от чрезмерного и частого употребления спиртных напитков, не курить, не допускать пассивного курения.
5. Своевременно выявлять и изолировать больных в стационар для адекватного и комплексного лечения под наблюдением специалистов.

Стрептококк вириданс может спокойно сосуществовать с людьми. Развитие патологии происходит при снижении иммунитета или проникновении микробов с патогенными свойствами извне. При отсутствии леченых мероприятий стрептококк из своих традиционных очагов — зева и горла опускается в нижние отделы респираторного тракта — бронхи и легкие, а также проникает с током крови в другие органы. Своевременная и адекватная терапия делает прогноз патологии благоприятным, не позволяя развиться опасным для жизни осложнениям.

Видео: стрептококк – доктор Комаровский

Для лабораторного анализа используются микроскопический, бактериологический и серологический методы диагностики.

Назначение, особенности и диагностическая ценность микроскопического исследования такие же, как и при стафилококковых инфекциях.

1. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Для выделения чистой культуры стрептококков важное значение имеет создание оптимальной питательной среды, так как стрептококки предъявляют к ней особые требования. Им необходимо значительное количество углеводов и нативного белка. Поэтому наряду с общепринятыми сахарным МПБ, кровяным МПА, молочно-солевым МПА и МПБ (см. рецепты выше) при стрептококковых инфекциях применяются асцитические и сывороточные среды.

АСЦИТИЧЕСКИЙ МПБ И МПА готовятся с добавлением отчетной жидкости, получаемой стерильно из брюшной полости больных терапевтического и хирургического профиля. Жидкость прогревают 3 дня при +56-58 °C по 1 часу, стерилизуют фильтрованием через фильтр Зейтца или добавляют 40% глицерина и хранят на холоду. Для приготовления асцит-бульона и асцит-агара 1 часть жидкости смешивают с 2-3 частями МПБ (или Хоттингеровского бульона) или растопленного и остуженного МПА.

СЫВОРОТОЧНЫЙ МПБ готовят из простого свежего мясопептонного бульона с pH 7,6, к 1 части которого добавляют 2 части свежей сыворотки человека или лошади. Сыворотку перед прибавлением к среде инактивируют при + 56 °C в течение 30 минут.

При осложнении капельных стрептококковых инфекций сепсисом необходим и посев крови. Для бактериологического исследования крови Э. Г. Кассирская рекомендует комплексное использование трех видов питательных субстратов, засеваемых из расчета 1 часть патологического материала на 10-15 частей среды. В качестве последней используются 0,2% полужидкий агар с 10% асцитической жидкости, бульон Левинталя с кровью и печеночная среда Китт-Тароцци.

ДЛЯ БУЛЬОНА ЛЕВИНТАЛЯ отдельно готовят следующие компоненты: № 1 - к 100 мл мясного фарша добавляют 300 мл дистиллированной воды и 10 мл нормального раствора соды; № 2 - 0,5 г панкреатина растворяют в 20-30 мл воды с 2 мл 1 N раствора соды и 10 мл хлороформа; № 3 - буферный раствор фосфорно-кислого натрия в дистиллированной воде (разведение 8:1000). С помощью раствора НСl устанавливают pH, равное 5,6-6.

В первый день смесь № 1 инкубируют в термостате при + 37 °C 1-2 часа, добавляют к ней раствор № 2, перемешивают и при тех же условиях выдерживают еще 24 часа. Сосуд со средой периодически встряхивают. После этого берут равные количества мясной кашицы и буферного раствора № 3. Кипятят, фильтруют. Устанавливают рН-7,2-7,4. Вновь кипятят. Разливают по пробиркам и стерилизуют 2 дня подряд по 30 минут текучим паром.

СРЕДУ КИТТ-ТАРОЦЦИ готовят из говяжьей печени или мяса. Последние нарезают кусочками, взвешивают, заливают тройным количеством МПБ (рН-7,4-7,6) кипятят 30 минут. Затем бульон фильтруют, кусочки печени отмывают водопроводной водой. Далее пробирки с 3-4 кусочками печени, залитыми 7-8 мл фильтрата и слоем вазелинового масла, стерилизуют под давлением 1 атм. в течение 30 минут.

Высеваемость стрептококков возрастет при использовании ПОЛУЖИДКОГО АГАРА ГАРОЦЦИ: в бульон Мартена (рН-7,6-7,8) добавляют 0,3-0,5% глюкозы и 0,1-0,15% агар-агара. В стерильные пробирки помещают кусочки печени или вареного мяса, добавляют по 9 мл среды и стерилизуют при температуре +120 °C в течение 30 минут.

Зеленящий стрептококк, выделяемый при септическом эндоркардите, развивается очень медленно. В связи с этим посевы крови выдерживают 2-3 суток в термостате.

В некоторых случаях выделить культуру стрептококка при широкой аэрации не удается. Более успешным оказывается применение анаэробиоза. Для создания последнего можно использовать три простейших способа.

I. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ЗАСЕВАЮТ В ПРОБИРКУ с 0.25% глюкозным бульоном и быстро всасывают его в стерильные пастеровские пипетки, концы которых тотчас же запаивают над пламенем горелки. Пипетки устанавливают вертикально в термостате. Через 24 часа нижние концы пипеток отламывают (стрептококки растут только внизу), первые капли используют для микроскопии и дальнейшего выделения чистой культуры возбудителя.

2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ПОСЕВОВ В АТМОСФЕРЕ, НАСЫЩЕННОЙ УГЛЕКИСЛЫМ ГАЗОМ. Необходимую концентрацию СО₂ получают при добавлении в загруженный пробирками эксикатор вначале 1г двууглекислой соды на 1 литр объема, а затем из того же расчета 8-9 мл 10% Н₂SO₄ или HCl.

3. ДОВОЛЬНО ПРОСТ и менее эффективен следующий прием: на дно неплотно закрытого эксикатора ставят зажженную свечку. Она горит 1-3 минуты и гаснет. По окончании первой или второй процедуры эксикаторы покрывают крышками, края которых смазаны вазелином и помещают в термостат.

Выделение чистой культуры

Биохимическая активность стрептококков непостоянна и ее выяснение не имеет диагностического значения. Изучение стрептококков в этом плане используется лишь для дифференциации с энтерококками (табл. 1.).

Состав дифференциально-диагностических сред, применяемых для этой цели следующий.

• ЖЕЛЧНЫЙ И ЖЕЛЧНО-КРОВЯНОЙ МПА Д. 3. Беленького и Н. Н. Поповой готовятся из расплавленного и отфильтрованного 3% МПА с любой бульонной основой. К 60 мл этого МПА добавляют 40 мл нативной профильтрованной желчи, разливают по флаконам и стерилизуют при давлении в 1 атм. 30 минут. Для приготовления агара с кровью к этому желчному МПА добавляют 5% дефибринированной крови.
• МОЛОКО С МЕТИЛЕНОВЫМ СИНИМ приготовляется из обезжиренного стерильного молока, к 100 мл которого добавляют 2 мл 10% водного раствора метиленового синего.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУЛЕНТНОСТИ СТРЕПТОКОККОВ

Для доказательства патогенности стрептококков важное значение имеют гиалуронидазная активность, выявление стрептокиназы или фибринокиназы, плазмокоагулазы, лейкотоксическое действие стрептококка, наличие гемолизина. Определение этих показателей осуществляется по методикам, описанным выше, но выявление гемолизирующей активности стрептококка лучше идет на средах с человеческой кровью.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕЙКОЦИДИНА. Берут цитратную кровь человека или какого-либо животного, центрифугируют, верхний желтый слой лейкоцитов отсасывают пипеткой, переносят в другую пробирку и готовят 2-5% лейкоцитарную взвесь. Последнюю разливают по 1-1,5 мл в узкие пробирки. Сюда же вносят 1 петлю 1-2 млрд. суточной культуры стрептококка и на 1 час помещают в термостат при +37 °C. После инкубации, из лейкоцитарно-микробной массы делают мазки (по типу мазков из цельной крови), высушивают, фиксируют 15 мин. в смеси Никифорова, окрашивают 45-60 минут по Романовскому-Гимза, микроскопируют. Массовое разрушение лейкоцитов свидетельствует о наличии лейкоцидина.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ выделенных культур к лекарственным веществам производится общепринятыми способами.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ТИПИЗАЦИЯ обнаруженных стрептококков после их изоляции требуется только для особых эпидемиологических целей и применяется редко.

II. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ СТЕПТОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ

Ферменты вирулентности стрептококков (гиалуронидаза, фибринокиназа, плазмокоагулаза) и их токсины (например, гемотоксин) являются мощными антигенами, в ответ на действие которых вырабатываются соответствующие антитела: антигиалуронидаза, антистрептокиназа, антистрептолизин и т. д. По обнаружению этих антител можно диагностировать заболевание и фазу развития инфекционного процесса.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИСТРЕПТОЛИЗИНА (АНТИГЕМОЛИЗИНА)

Стрептолизин представляет собой разновидность гемотоксина. Его присутствие проверяют на эритроцитариой массе. В ответ на действие этого антигена в организме формируются антитела, способные нейтрализовать его гемолизирующую активность. При выявлении антистрептолизина необходимы: сыворотка больного с антистрептолизинами (антителами); стрептолизин (очищенный), стандартный, лиофилизированный; 5% взвесь кроличьих, бараньих или человеческих эритроцитов; фосфатный буфер для разведения сывороток и приготовления взвеси эритроцитов: в 1 л дистиллированной воды растворяют 7,6 NaCl, 3,17 г КН₂Р0₄ и 1,81 г Na₂HPO₄, добавляют по каплям концентрированную NaОН и доводят pH до 6.5-6,7. Буферный раствор сохраняется в рефрижераторе при -4 °C 2-3 недели.

Определение антистрептолизина складывается из двyx этапов: первый - установление титра и рабочей дозы стандартного стрептолизина, второй - выявление и количественное определение антистрептолизина. Схемы их выполнения приводятся ниже.

Титром и рабочей дозой стрептолизина считается его минимальное количество, давшее четкий гемолиз эритроцитов. В данном примере они равны 1,0 мл.

В последнее время выпускается стандартный лиофилизированный стретолизин, на флаконе с которым и в приложенной инструкции указан способ разведения препарата для получения рабочей дозы. Такой стрептолизин обеспечивает хорошую повторяемость результатов.

Антистрептолизин в данной пробе сыворотки обследуемого больного обнаружен в титре 1:200.

Принцип выявления основан на регистрации разрушительного действия фермента гиалуронидазы на гиалуроновый субстрат. Антитела сыворотки больного, направленные против этого фермента, нейтрализуют его и гиалуроновая кислота остается неизмененной.

Необходимые реактивы: сыворотка больного с антителами (антигиалуронидазой); экстракт гиалуроновой кислоты с известной рабочей дозой (способ описан выше); гиалуронидаза (химически чистый препарат); 15% уксусная кислота - индикатор; физиологический раствор.

Определение антигиалуронидазы состоит из трех этапов: первый - определение титра и рабочей дозы гиалуроновой кислоты, второй - гиалуронидазы, третий - выявление наличия и титра антигиалуронидазы.

Титрование гиалуронового субстрата описано выше. Титр и рабочая доза стандартной гиалуронидазы соответствует тому минимальному ее количеству, которое способно разрушить гиалуроновую кислоту, взятую в рабочей дозе.

После выяснения титра гиалуронидазы проводят определение титра антигиалуронидазы.

В данном примере титр антигиалуронидазы в сыворотке крови больного 1:200. Это количество антител при указанном разведении сыворотки еще обладает нейтрализующим действием в отношении гиалуронидазы и предотвращает разрушение гиалуроновой кислоты. Ее целостность регистрируется по образованию сгустка после добавления индикатора - 15% раствора уксусной кислоты.

Источник: Мотавкина Н.С., Пьянова Р.Е. Микробиологическая диагностика некоторых капельных инфекций и токсоплазмоза. Методическая разработка для студентов. ВГМУ, 1973

Читайте также:

• Аллергия на сыворотку от столбняка
• Плевральный выпот при сепсисе
• Санбюллетень по теме дифтерия
• Львиного лица при лепре
• Козий жир от коклюша