Выявление хеликобактер пилори окраска по граму

ВВЕДЕНИЕ

Важной особенностью Helicobacter pylori является тропность к поверхностному эпителию слизистой оболочки желудка: адгезия этих микроорганизмов в слизистую оболочку двенадцатиперстной кишки возможна только в тех случаях, когда происходит метаплазия желудочного эпителия в двенадцатиперстную кишку. Оптимальной для внедрения и активации Helicobacter pylori в слизистой оболочке является рН от 4 до 8. Более кислое желудочное содержание (рН ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ метод исследования

Материалом для цитологического исследования служат мазки-отпечатки биоптатов, полученные при эндоскопии из участков слизистой оболочки антрального отдела желудка или двенадцатиперстной кишки с наиболее выраженными морфологическими изменениями (гиперемия, отек и т.п.). Мазки высушивают и окрашивают по Романовскому-Гимзе, по Папенгейму или метанолазурэозиновой смесью. Микроскопия окрашенных мазков-отпечатков позволяет выявить наличие Helicobacter pylori и ориентировочно оценить количество микроорганизмов.

Выделяют три степени обсемененности слизистой оболочки:
I. слабая (+) - до 20 микробных тел в поле зрения
II. средняя (++) - от 20 до 40 микробных тел в поле зрения
III. высокая (+++) - более 40 микробных тел в поле зрения

УРЕАЗНЫЙ ДЫХАТЕЛЬНЫЙ тест

В развитых странах в последние годы стандартным методом контроля за эрадикацией стал уреазный дыхательный тест, который основан на способности уреазы разлагать мочевину до НСО3 и NH4 +. Из НСО3 образуется СО2, который, попадая в кровоток, затем транспортируется в легкие. Для проведения УДТ необходима мочевина, меченная радиоактивным углеродом С или 14С. Чаще в клинической практике применяется нерадиоакивный стабильный углерод С. 14С используется реже, так как является источником излучения низкоэнергетических -частиц, которые обнаруживаются сцинтилляционным счетчиком. Изотоп количественно определяют газовым хроматомасс-спектрометром или с помощью инфракрасного и лазерного оборудования.

В начале исследования берутся 2 фоновые пробы выдыхаемого воздуха. Далее пациент съедает легкий завтрак и тестовый субстрат; в течение 1 часа, с интервалами в 15 минут, у него берут 4 пробы выдыхаемого воздуха. Уровень радиоактивного изотопа в выдыхаемом воздухе определяют в течение 10-30 минут. Затем пробирки направляются на масс-спектрометрию. Результат выражается как приращение СО2 – СО 2, его экскреция (‰) и считается положительной при значениях выше 5‰.

В ряде стран используется определение изотопного отношения концентраций СО2/СО2, что позволяет свести к минимуму влияние на конечный результат методических и инструментальных погрешностей.

При использовании дыхательного уреазного теста ложноположительные результаты считаются редкими (4-10%), ложноотрицаельные результаты возможны у пациентов, принимавших перед исследованием антисекреторные и висмутсодержащие препараты, которые ингибируют уреазу бактерий, в связи с чем рекомендуется осуществлять диагностику эрадикации уреазными методами не ранее чем через месяц после приема этих препаратов.

Метод быстрый, удобный, но ограничен в распространении из-за необходимости использовать дорогостоящее оборудование и изотопные препараты. Поскольку уменьшение стоимости изотопа невозможно, были предложены варианты масс-спектрометров на основе лазерного и инфракрасного излучения, стоимость которых существенно ниже. С другой стороны, использование микрокапсул для упаковки мочевины, меченной радиоактивным изотопом, позволило свести к минимуму трудности, связанные с хранением, утилизацией и безопасностью данного изотопа. В США продажа микрокапсул с мочевиной, меченной углеродом, разрешена FDA наравне с обычными лекарственными препаратами через аптечную сеть, что является свидетельством полной безопасности данного изотопа для обследуемых и окружающей среды. Появление такой формы меченной мочевины существенно повышает конкурентноспособность этой методики, т.к. стоимость и самого изотопа, и оборудования для его проведения в среднем меньше в 10 раз, чем масс-спектрометра.

БЫСТРЫЙ УРЕАЗНЫЙ тест

В качестве источника хеликобактерной уреазы используют биоптаты слизистой оболочки, которые помещают в луночку специальной плашки из синтетического материала, заполненную готовой стерильной средой.

Появление малинового окрашивания теста свидетельствует о наличии в биоптате микробных тел Helicobacter pylori.

О количестве Helicobacter pylori в биоптате косвенно судят по времени изменения окраски теста:
• значительное инфицирование слизистой оболочки НР (+++) - малиновая окраска теста появляется в течение 1 часа от начала исследования
• умеренное инфицирование слизистой оболочки НР (++) - окраска индикатора изменяется через 2–3 часа
• незначительное инфицирование слизистой оболочки НР (+) - малиновое окрашивание теста появляется к концу суток

Более позднее окрашивание теста относят к отрицательным результатам.

При проведении уреазного теста нужно учитывать и тот факт, что он может быть положительным у лиц, желудок которых колонизирован Helicobacter heilmanii, имеющим близкое сродство с Helicobacter pylori.

ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ методы ("золотой стандарт" диагностики)

Данные методы методы исследования биоптатов, наряду с возможностью детального изучения морфологических изменений в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки, позволяют выявить Helicobacter pylori при обычной окраске по Романовскому–Гимзе. При эндоскопии биоптаты берут прицельно из антрального отдела желудка в 2–3 см от привратника и из участка с наиболее выраженными воспалительными изменениями слизистой.

Различные новые модификации этого метода, в частности, иммуноцитохимический метод с применением моноклональных антител или метод гибридизации ДНК, дают возможность не только существенно повысить чувствительность и специфичность гистологического выявления Helicobacter pylori, но и идентифицировать различные штаммы Helicobacter pylori, что важно для выяснения природы повторного инфицирования слизистой оболочки после эффективного антихеликобактерного лечения.

ФАЗОВО-КОНТРАСТНАЯ микроскопия

Helicobacter pylori может быть обнаружен до микробиологического или гистологического исследования при помощи фазово-контрастной микроскопии. Этот метод весьма удобен для обнаружения Helicobacter pylori, при условии достаточно высокой степени обсеменения.

Преимущества фазово-контрастной микроскопии:
•нет необходимости проводить фиксацию материала и дополнительных окрасок ткани
•исследование можно проводить в обычных лабораторных условиях
•результат может быть получен через 1-2 мин.

Процедура выполнения исследования:
•поместить биоптат на предметное стекло
•измельчить биоптат на стекле и добавить каплю физиологического расвора
•поместить на измельченный биоптат покровное стекло
•оместить приготовленный препарат в фазово-контрастный микроскоп

Микроскопия проводится с увеличением в 100 раз с спользованием иммерсионного масла. В препарате - типичные изогнутые бактерии в хаотичном движении.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ методы

Иммунологические методы основаны на выявлении у больных, инфицированных Helicobacter pylori, специфических антител, которые можно обнаружить в сыворотке крови уже через 3–4 недели после инфицирования. Достаточно высокий титр антител сохраняется даже в периоде клинической ремиссии заболевания. Отрицательным тест становится после успешного антибактериального лечения, что позволяет использовать метод для контроля эффективности такой терапии. Для выявления специфических антител используют различные методики, в частности, метод иммуноферментного анализа (ИФА) с определением антител IgG и IgA классов в сыворотке крови.

При оценке результатов иммунологического анализа следует помнить, что антитела к различным антигенам бактерии могут присутствовать в крови на протяжении года после эрадикации бактерий, что не позволяет применять методы для контроля результатов антигеликобактерного лечения.

Иммуногистохимический метод

Биопсийный материал, фиксированный в формалине и залитый в парафин, обрабатывается моноклональными антителами против Helicobacter pylori. Готовые к применению коммерческие наборы с моноклональными антителами работают при разведении 1:200000 и избирательно окрашивают только Helicobacter pylori. Этот метод хорошо зарекомендовал себя при исключительно низкой степени обсемененности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori, когда морфологический метод и уреазный тест дают ложноотрицательные или сомнительные результаты. Он также используется для выявления морфологически измененных (кокковых форм) Helicobacter pylori.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ метод

Наибольшую информацию о Helicobacter pylori возможно получить только при выделении его из прижизненных биопсийных образцов. Это единственный метод исследования, обладающий 100% специфичностью. При этом виде исследования возможно не только выделение чистой культуры Helicobacter pylori и ее идентификация, но и изучение морфологических, биохимических и биологических свойств возбудителя.

Бактериологический метод исследования дает возможность определять антибиотикорезистентность у Helicobacter pylori и проводить за ней динамические наблюдения. Без бактериологического метода планировать клиническое испытание лекарственных препаратов, учитывая причины неудачи эрадикации, нельзя, так как основная причина, снижающая процент эрадикации – антибиотикорезистентность Helicobacter pylori.

В эпидемиологической практике выделение чистой культуры Helicobacter pylori необходимо для внутривидового типирования штаммов, что может быть использовано при мониторинге для дифференциации между реинфекцией новым штаммом и рецидивированием, которое может быть обусловлено тем же штаммом.

В научной практике бактериологический метод важен, так как позволяет изучать факторы патогенности Helicobacter pylori, изготовлять препараты для серологической диагностики, создать банк штаммовдля эпидемиологических и других исследований, так как штаммы бактерии в замороженном виде при температуре -70°С могут храниться в течение 5-7 лет. Без этого метода невозможно дальнейшее научное изучение микроорганизма. Однако этот метод достаточно дорогой. Кроме того, он сопряжен с определенными трудностями, обусловленными необходимостью наличия специальных сред, оптимальной температуры, влажности, качества атмосферного воздуха и т.д. Это приводит к тому, что рост колоний микроорганизмов удается получить далеко не всегда. Неудобство метода связано и с тем, что его результатов приходится ждать, как правило, не менее 10-14дней. В клинической практике он применяется в основном вслучаях инфекции Helicobacter pylori, резистентной к обычным схемам антигеликобактерной терапии.

Посевы инкубируются при температуре 37°С, влажности 98%, в микроаэрофильных условиях в течение 3-10 сут. Helicobacter pylori растет в атмосфере, содержащей 5% кислорода, 5-10% углекислого газа, остальное составляет азот. Для данного микроорганизма губительны как анаэробные условия, так и более высокое содержание кислорода. Для создания микроаэрофильной атмосферы используют газогенераторные пакеты, которые продуцируют газовые смеси после добавления в них воды. Оптимальный рост колоний наблюдают при рН среды от 6,7 до 8,0. Многие штаммы Helicobacter pylori могут расти и развиваться в достаточно широком диапазоне температур при +32°С. +39°С, но не растут при +27°С . +42°С. Время инкубации: первичное исследование – 7 дней, контроль лечения - 14 дней.

Для идентификации мазки окрашивают по Граму. Под микроскопом в случае Helicobacter pylori обнаруживают грамотрицательные изогнутые палочки. Проводят биохимическое типирование – уреазная, каталазная, оксидазная активность, Helicobacter pylori не ферментирует глюкозу, не продуцирует нитраты, не образует индол.

ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ (ПЦР)

Метод предназначен для качественного обнаружения ДНК Helicobacter pylori в биологических образцах (биоптаты антрального отдела желудка, биоптаты двенадцатиперстной кишки, биоптаты десен, мазки из зубодесневого кармана, слюна.). Позволяет оценить генотипические и фенотипические характеристики возбудителя. Почти у каждого пациента имеется уникальный штамм Helicobacter pylori. Выявлено, что вирулентность Helicobacter pylori во многом обусловливает клинические проявления инфекции. Существует ряд генов, продукты которых – белки Cag A, Vac A, Ice A, Bab A – полагают факторами патогенности. В зависимости от их наличия выделяютдва типа штаммов Helicobacter pylori. Экспрессирующие Cag A- и Vac A-токсин относятся к первому типу, штаммы второго типа не экспрессируют указанные гены и считаются менее патогенными. Среди большого многообразия гибридизационных методов анализа ДНК, метод ПЦР наиболее широко используется в клинической лабораторной диагностике.

ПЦР (относится к молекулярно-биологическим методам) представляет собой многократное увеличение числа копий (амплификация) специфического участка ДНК катализируемое ферментом ДНК-полимеразой.

Метод ПЦР в средах позволяет идентифицировать Helicobacter pylori без выделения чистой культуры по присутствующим в исследуемом материале фрагментам его генома.

В основе метода ПЦР лежит природный процесс - комплементарное достраивание ДНК матрицы, осуществляемое с помощью фермента ДНК-полимеразы. Эта реакция носит название репликации ДНК. Данный процесс можно использовать для получения копий коротких участков ДНК, специфичных для конкретных микроорганизмов, т.е. осуществлять целенаправленный поиск таких специфических участков, что и является целью генодиагностики для выявления возбудителей инфекционных заболеваний.

ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ АЛГОРИТМ

Какой именно метод выбрать для первичной диагностики инфекции, зависит от конкретной клинической ситуации, возможностей лечебного учреждения, состояния пациента. Полученные результаты во многом зависят от соблюдения правил забора биологического материала, условий и сроков его хранения, консервации и транспортировки в лабораторию для каждого конкретного исследования. Даже при соблюдении этих правил, каждый из методов имеет свои пределы диагностических возможностей, которые отражены в их основных рабочих характеристиках. Точность метода определяется его чувствительностью (инфекция диагностируется, когда она есть) чем она выше, тем меньше процент ложноположительных результатов и специфичностью (инфекция не диагностируется, когда ее нет) чем она выше, тем меньше процент ложноотрицательных результатов.

Если имеются показания к проведению диагностической эндоскопии (язвенная болезнь желудка, язвенное кровотечение, геморрагический гастрит, новообразования желудка и др.), то на фоне прицельной биопсия слизистой оболочки из преддверия привратника (из одного участка) и тела (из двух участков - передняя и задняя стенки) желудка - наиболее предпочтительными методами для выявления Helicobacter pylori считаются:
• проведение гистологического исследования - фиксация и окраска препаратов для гистологического исследования обычно занимают несколько дней
• определение уреазной активности (ускоренные уреазные тесты) - оценка результата уреазного теста занимает несколько часов

По особым показаниям могут быть проведены (перечисленные исследования являются трудоемкими, дорогостоящими и пока еще используются редко):
• посев бактериальной культуры
• полимеразная цепная реакция (ПЦР)
• уреазный дыхательный тест

Если диагноз, например язвенная болезнь желудка, был установлен ранее, во время эзофагогастродуоденоскопии, то методом выбора для выявления инфицирования слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori могут быть (данные методы неинвазивны и достаточно точны):
• серологический (иммунологический) тест
• уреазный дыхательный тест

Само по себе выявление Helicobacter pylori в слизистой оболочке не всегда свидетельствует о наличии заболеваний желудка или двенадцатиперстной кишки, ассоциированных с этим инфекционным агентом. Обсеменение слизистой оболочки может встречаться и у совершенно здоровых людей, генетически невосприимчивых к Helicobacter pylori, у которых бактерия не способна к адгезии на эпителии. Значение имеют случаи сочетания инфицирования Helicobacter pylori и характерных эндоскопических признаков хронического антрального гастрита, пангастрита, хронического активного дуоденита, язвенной болезни желудка и язвенной болезни двенадцатиперстной кишки.

Рисунок 21. Helicobacter pylori в биоптате слизистой оболочки желудка. Окраска по Гимзе, х 1000

Биохимические тесты выявления Helicobacter pylori (HP)

Для ускорения диагностики предлагаютсяинвазивные методики, дающие результат непосредственно во время исследования. Из них можно назвать такие биохимические тесты, как промышленно выпускаемые системы CLO- тест, Кампи-тест, Хелпил-тест и др.

Они основаны на способности Helicobacter pylori разрушать мочевину с образованием аммиака и углекислого газа. При этом в случае внесения биоптата в раствор мочевины с индикатором типа фенолрот меняется окраска раствора. Несмотря на высокую чувствительность, эти тесты могут давать отрицательные результаты в связи с отсутствием Helicobacter pylori в биоптате. В последнее время для повышения чувствительности исследования предложены иммунологические тесты, выполняемые непосредственно на слизистой желудка о время эндоскопии. Во время эндоскопии на слизистую наносят специальные антисыворотки против Helicobacter pylori или раствор мочевины с индикатором и по изменению окраски слизистой судят о наличии микроорганизма.

Значительно более простым и эффективным способом диагностики хеликобактериоза считается использованиенеинвазивных биохимических и иммунологических тестов.

Биохимические методы диагностики хеликобактериоза в настоящее время распространяются повсеместно. Они основаны на способности Helicobacter pylori расщеплять мочевину. Для исследования используется мочевина, меченная изотопами углерода С 13 и С 14 . Это так называемые уреазные дыхательные тесты.

При их проведении пациент после пробного завтрака получает 20,0 воды, содержащей мочевину, меченную изотопом углерода. Спустя 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120 минут пациент выдыхает воздух в специальный сосуд, содержащий вещества, связывающие выдыхаемый углекислый газ, или на специальную пластину. В зависимости от количества выделяемого меченного углекислого газа судят о наличии или отсутствии HP на слизистой желудка. Диагностическая чувствительность и специфичность данных тестов превышает 95%. Однако работа с мочевиной, меченной С 13 и С 14 . требует очень дорогого оборудования (до 250000 долларов США), а изотоп С 14 обладает радиоактивностью. Близкие методики предполагают использование мочевины, содержащей изотоп азота N 15 . По выделяемому с мочой меченному азоту в течение 2 часов получают результат исследования. Чувствительность этого метода составляет 96% при 100% специфичности.

В настоящее время в широкую практику входит уреазный дыхательный тест с использованием нерадиоактивной мочевины. В выдыхаемом пациентом воздухе автоматически определяется уровень аммиака, а не радиоактивного азота. Газоанализаторная аппаратура для этого исследования выпускается в нашей стране и отличается низкой ценой при высокой чувствительности и портативности.

Используемая в настоящее время диагностическая система Pronto Dry позволяет выявлять инфицированность Helicobacter pylori непосредственно при выполнении эндоскопического исследования в течение 5 минут. Для этого достаточно нанести на слизистую желудка специальный реактив и по изменению окраски судить о наличии или отсутствии Helicobacter pylori.

Биохимические методики диагностики хеликобактериоза в настоящее время считаются наиболее удобными для скрининг-диагностики и оценки эффективности эрадикации Helicobacter pylori.

ПЦР-диагностика

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой многократно повторяющиеся циклы синтеза (амплификации) специфической области ДНК-мишени в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы, дезоксинуклеотидтрифосфатов, соответствующего солевого буфера и олигонуклеотидных затравок-праймеров, которые определяют границы амплифицируемого участка.

Каждый цикл состоит из трех стадий с различными температурными режимами. На первой стадии при +94°C происходит разделение цепей ДНК, затем при +56°С - +60°C - присоединение (отжиг) праймеров к комплементарным последовательностям на ДНК-мишени, и при температуре +72°C протекает синтез новых цепей ДНК путем достраивания цепей праймеров в направлении 5` -3`.

В каждом цикле происходит удвоение числа копий амплифицируемого участка, что позволяет за 25-40 циклов наработать фрагмент ДНК, ограниченный парой выбранных праймеров, в количестве, достаточном для ее детекции с помощью электрофореза или альтернативными ему технологиями.

В мире накоплен обширный клинико-лабораторный опыт по использованию метода ПЦР (полимеразная цепная реакция) для выявления ДНК Н.pylori в биопсийном материале. Высокие показатели чувствительности и специфичности ПЦР делают этот метод во многом революционным в лабораторной диагностике.

Стоимость услуги:

2060 руб.* Заказать

Срок исполнения: 4 - 10 к.д. Заказать Указанный срок не включает день взятия биоматериала

(в соответствии с Приказом Правительства Москвы главного медицинского управления № 182 от 15 апреля 1994 г.)

Направление на исследование оформляется лечащим врачом или врачом, взявшим материал для исследования. Обязательными для заполнения являются следующие поля:

название лечебно-профилактического учреждения, Ф.И.О. врача
данные о пациенте полностью: Ф.И.О., дата рождения, пол
указывается диагноз, важнейшие клинические данные: наличие или отсутствие опухоли, выделений и т.п.
приводятся сведения о проведенном лечении: оперативном (дата операции); лучевом (доза, дата начала и окончания лечения)
указываются сведения о локализации процесса и способе (методике) взятия биологического материала для гистологического исследования
четко указывается код исследования, в зависимости от категории сложности биопсийного материала (биопсийный материал подчеркивается)
бланк заверяется подписью лица (разборчиво), направляющего биологический материал

" ["serv_cost"]=> string(4) "2060" ["cito_price"]=> NULL ["parent"]=> string(3) "315" [10]=> string(1) "1" ["limit"]=> NULL ["bmats"]=> array(1) < [0]=>array(3) < ["cito"]=>string(1) "N" ["own_bmat"]=> string(2) "12" ["name"]=> string(29) "Биоптат желудка" > > >

Биоматериал и доступные способы взятия:

Тип	В офисе
Биоптат желудка

Подготовка к исследованию:

(в соответствии с Приказом Правительства Москвы главного медицинского управления № 182 от 15 апреля 1994 г.)

название лечебно-профилактического учреждения, Ф.И.О. врача
данные о пациенте полностью: Ф.И.О., дата рождения, пол
указывается диагноз, важнейшие клинические данные: наличие или отсутствие опухоли, выделений и т.п.
приводятся сведения о проведенном лечении: оперативном (дата операции); лучевом (доза, дата начала и окончания лечения)
указываются сведения о локализации процесса и способе (методике) взятия биологического материала для гистологического исследования
четко указывается код исследования, в зависимости от категории сложности биопсийного материала (биопсийный материал подчеркивается)
бланк заверяется подписью лица (разборчиво), направляющего биологический материал

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Комплексный анализ, предназначенный для выявления H . pylori у пациентов с подозрением на гастрит, язву желудка или двенадцатиперстной кишки, включающий основные серологические тесты и метод РТ-ПЦР.

Комплексная диагностика геликобактериоза.

H. pylori diagnostic panel, H. pylori Abs, IgA, IgG, H. pylori, PCR.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, кал.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

H. pylori – это грамотрицательный, факультативно-анаэробный микроорганизм, способный инфицировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. В большинстве случаев инфицирование H. pylori (геликобактериоз, или хеликобактериоз) носит постоянный, хронический характер. Геликобактериоз очень распространен: бактерия H. pylori может быть выявлена у 50 % людей земного шара. При этом H. pylori-ассоциированные заболевания (гастрит, язва желудка или двенадцатиперстной кишки, аденокарцинома желудка, MALT-лимфома) возникают только у 15-20 % инфицированных пациентов. Особенностью этих заболеваний является их благоприятный прогноз при условии их ранней диагностики и полной эрадикации H. pylori. Ведущее значение в диагностике геликобактериоза принадлежит лабораторным методам исследования.

Существует несколько методов выявления H. pylori. Прямые методы позволяют непосредственно выявить сам микроорганизм. Для большинства прямых методов необходим образец ткани слизистой оболочки (биоптат) и/или содержимое желудка и двенадцатиперстной кишки (аспират), которые обычно получают во время эндоскопического исследования. Таким образом, прямые методы исследования, как правило, являются инвазивными. В отличие от этого, непрямые методы выявляют не сам микроорганизм, а косвенные признаки инфекции, например специфические антитела в сыворотке крови (серологические тесты) или содержание меченого атома углерода в выдыхаемом воздухе (дыхательный уреазный тест). Так как для проведения непрямых тестов не требуется эндоскопического исследования, они называются неинвазивными. Как прямые, так и непрямые тесты на H. pylori, имеют свои преимущества и недостатки. Для точной диагностики геликобактериоза требуется сразу несколько тестов. В связи с этим особенно удобным для врача и пациента является комплексный анализ, включающий все необходимые тесты на H. pylori.

Одним из самых чувствительных методов выявления H. pylori является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). РТ-ПЦР – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в образце ткани) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. Так как анализ основан на выявлении генетического материала, РТ-ПЦР позволяет выявлять присутствие любых форм H. pylori (не только активных спиралевидных, но и неактивных кокковых, некультивируемых), в результате чего исследование характеризуется очень высокой чувствительностью, превосходящей чувствительность метода бактериологического посева. Теоретически для осуществления РТ-ПЦР достаточно присутствие 1 молекулы ДНК. На практике концентрация возбудителя в образце должна составлять около 10-100 КОЕ/мл. Такая высокая чувствительность теста означает, что получение отрицательного результата исследования позволяет исключить H. pylori как причину заболевания. Это имеет принципиальное значение при дифференциальной диагностике НПВС-ассоциированных, стрессовых и ишемических гастритов и язв.

Следует отметить, что, несмотря на очень высокую чувствительность теста (85-98 %), ложноотрицательные результаты все же возможны. Так, например, ложноотрицательный результат может быть получен, если бактериальная нагрузка очень низкая (например, на фоне приема некоторых антибиотиков). Ошибок диагностики можно избежать при комбинации этого прямого теста с серологическими исследованиями.

Инфицирование H. pylori сопровождается значительным нарастанием иммуноглобулинов класса IgG и IgA в сыворотке крови. Эти иммуноглобулины (антитела) определяются в крови с помощью непрямых тестов. IgG обнаруживаются в 95-100 % случаев геликобактериоза, а IgA – в 68-80 %. Исследование позволяет определить титр антител, то есть является количественным. Как правило, высокие титры антител более характерны для активной, текущей инфекции. Следует отметить, однако, что четкой корреляции между титром антител и степенью тяжести инфекции нет.

Серологические тесты, как и метод РТ-ПЦР, имеют некоторые ограничения. Так, результат анализа зависит от особенностей иммунного ответа пациента. Иммунный ответ пациентов, принимающих цитостатические препараты, и пожилых людей характеризуется пониженной выработкой специфических антител (любых, в том числе к H. pylori). По этой причине во избежание диагностических ошибок серологические тесты целесообразно дополнять прямыми тестами. Эта особенность была учтена при составлении комплексного анализа на H. pylori.

Таким образом, комплексный анализ на H. pylori – это комбинация необходимых и достаточных тестов для выявления этого микроорганизма. Комплексный анализ не предназначен для контроля лечения. Результат как РТ-ПЦР, так и исследования иммуноглобулинов IgG и IgA будет оставаться положительными даже в случае полной эрадикации H. pylori. Ложноположительный результат РТ-ПЦР в этом случае обусловлен способностью этого метода выявлять ДНК любых, даже разрушенных микроорганизмов, ложноположительный результат серологических тестов − особенностями динамики иммунного ответа.

Для чего используется исследование?

Для выявления H. pylori у пациентов с подозрением на гастрит, язву желудка или двенадцатиперстной кишки.

Когда назначается исследование?

При обследовании пациента с признаками диспепсии: дискомфорт или боли в эпигастральной области, тошнота, рвота, нарушение аппетита.

Что означают результаты?

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

Читайте также: