Выявление пневмококка при проведении быстрых тестов

Экспресс-тесты Бинакс выполнены на оригинальной тест-кассете в форме открывающейся книги. Позволяют проводить дифференциальную диагностику респираторных заболеваний. Образцы для анализа (в зависимости от вида теста): мазок из горла/аспират, моча/спинномозговая жидкость (ликвор), цельная кровь. Результат анализа через 5-15 минут.

Тесты Бинакс имеют регистрацию в США (FDA) и в странах ЕС (имеют CE марку), зарегистрированы РосЗдравнадзором.

Производитель: Alere Inc., США

Чувствительность: 97,7% (0,951 до 1,00, доверительный интервал 95%)
Специфичность: 100%
Совпадение: 99,0%

Информация для заказа: кат. № 851-000. Legionella Urinary Antigen EIA 96 Test Kit (96 определений).

Binax NOW Legionella

Экспресс-тест для определения антигена L.pneumophila (Легионеллёз) в моче.

Легионеллез более распространен, чем может показаться. Legionella pneumophila является одним из ведущих причин бактериальной внутрибольничной пневмонии. Тест для определения антигена легионелл в моче тест на легионеллёз Binax NOW® Legionella – один из наиболее широко известных быстрых тестов по моче, благодаря его чувствительности, специфичности и простоте использования.

Чувствительность: 95%
Специфичность: 95%

Информация для заказа: кат. № 852-000. Binax NOW Legionella (22 теста).

Binax NOW Streptococcus pneumoniae

Экспресс-тест для определения антигена Пневмококка в моче, спинномозговой жидкости (СМЖ).

Пневмококк (Streptococcus pneumoniae) является главной причиной пневмонии, приобретенной в обществе (community acquired pneumonia, CAP) и, согласно недавнему исследованию, может быть наиболее важным агентом в CAP неизвестной этиологии. Этот простой в использовании быстрый тест позволяет определять и назначать сфокусированную терапию в течение 4 часов, удовлетворяя нормативам Hospital Quality Initiative. Быстрое определение может приводить к решениям о сфокусированной терапии, улучшенным результатам лечения и уменьшению суммарных затрат на лечение. Поддерживается всемирными руководствами по внебольничной пневмонии.

Чувствительность: моча 86%, СМЖ 97% Специфичность: моча 94%, СМЖ 99%
Информация для заказа: кат. № 710-000. Binax NOW Streptococcus pneumoniae (22 теста).

Binax NOW Strep A

Экспресс-тест для определения антигена Streptococcus pyogenes группы A (Стрептококка А) по мазку из горла. Тест очень прост в использовании: всего 3 простых шага и 5 минут до считывания результата.

Чувствительность : 92% Специфичность : 100%

Информация для заказа: кат. № 735-025. Binax NOW Strep A (25 тестов).

Binax NOW Influenza A&B

Экспресс-тест для дифференцированного определения нуклеопротеиновых антигенов гриппа А и В по носоглоточному или назальному мазку, или назальному смыву/аспирату. Набор позволяет дифференцировать грипп А и грипп В при помощи одного одностадийного теста. Теперь вы сможете сосредоточиться на результатах и на лечении пациента, а не на проведении анализа.

Чувствительность (аналитическая): 96% Специфичность (аналитическая): 100%

Информация для заказа: кат. № 416-000 . Binax NOW Influenza A&B (22 теста).

Binax NOW Malaria

Экспресс-тест для дифференцированного определения антигена Plasmodium falсiparum и пан-малярийного антигена, общего для видов P. falciparum, P. vivax (P.v.), P. ovale (P.o.), и P. malariae (P.m.). Тест проводится на венозной и капиллярной EDTA цельной крови, сыворотке или плазме. Простой трехшаговый тест дает результат через 15 минут, позволяя назначать более точную терапию и улучшая исход заболевания.

Чувствительность: P.falciparum 99,7%, P. vivax 93,5% Специфичность: P.falciparum 94,2% P. vivax 99,8%

Информация для заказа: кат. № 660-000. Binax NOW Malaria (25 тестов).

Экспресс-тест для определения нуклеопротеиновых антигенов респираторно-синцитиального вируса (РСВ). Быстрые результаты доступны через 15 минут без необходимости действий лаборанта в это время. Наиболее важные инструкции по уходу могут быть предоставлены родителям до того как ребенок покинет педиатра, ценная информация может быть получена до госпитализации для того чтобы предотвратить распространение инфекции RSV.

Набор предназначен для анализа образцов назального смыва (НС, nasal wash) и носоглоточного мазка (НГМ, nasopharyngeal swab) симптоматичных пациентов, возрастом до 5 лет. Рекомендуется подтверждать отрицательные результаты культуральным методом.

Чувствительность: НС 89% НГМ 93% Специфичность: НС 100% НГМ 93%
Информация для заказа: кат. № 430-000 для набора на 42 теста; кат. № 430-022 для набора на 22 теста.

Binax NOW G6PD

Экспресс-тест для определения дефицита Глюкозо-6-Фосфат-Дегидрогеназы (Г6ФД) в цельной крови, сыворотке или плазме. Дефицит фермента Г6ФД наблюдается у 400 миллионов пациентов. Таких пациентов необходимо идентифицировать перед проведением терапии сульфамидными антималярийными и другими препаратами, содержащими сильные окислители.

Чувствительность: 98% Специфичность: 97.9%
Информация для заказа: кат. № 780-000. Binax NOW G6PD (25 тестов).

Экспресс-тест BinaxNOW Filariasis - это in vitro иммунохроматографический тест для определения антигена Wuchereria bancrofti в образцах цельной крови, сыворотки или плазмы. Считается одним из ведущих методов диагностики. Используется Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ).

Информация для заказа: кат. № 620-000. BinaxNOW Filariasis (25 тестов).

Пакет стерильных носоглоточных тампонов для взятия образцов носоглоточных мазков для тестов грипп BinaxNOW Influenza A&B и тестов РСВ BinaxNOW RSV.

Состав: стерильные пенотампоны для взятия образцов, флаконы с элюционным раствором.

Информация для заказа: кат. № 400-065. Binax NOW NP Swab Pack (20 штук).

Широко доступный, быстрый и простой в выполнении тест позволяет определять в моче С-полисахаридный антиген Streptococcus pneumoniaе основного возбудителя внебольничной пневмонии. В проведённых ранее исследованиях данный тест продемонстрировал достаточно высокую чувствительность и специфичность. Тем не менее, его пригодность в клинической практике на настоящий момент недостаточно определена, и в имеющихся рекомендациях нет чёткого разъяснения ситуаций, в которых данный тест следует применять.

Целью проведённого в Испании исследования было оценить влияние теста на выявление пневмококкового антигена на определение тактики ведения пациентов с внебольничной пневмонией и назначение антибактериальной терапии.

В проспективное исследование было включено 464 взрослых пациента старше 16 лет, госпитализированных по поводу внебольничной пневмонии в период с февраля 2007 г. по январь 2008 г. с 474 зарегистрированными эпизодами внебольничной пневмонии, из них 66,9% были мужчины, а средний возраст составил 64 года.

S. pneumoniae был идентифицирован в качестве причинно-значимого патогена в 171 случае (36,1%), из которых в 75 случаях (43,8%) исключительно при использовании теста на определение пневмококкового антигена в моче. У 69 пациентов внебольничная пневмония была вызвана другими микроорганизмами.

Специфичность теста на определение пневмококкового антигена в моче составила 96%, при этом положительное прогнозируемое значение варьировало от 88,8% до 96,5%, а отношение правдоподобия положительного результата теста от 14,6 до 19,9.

Полученные положительные результаты теста на пневмококковый антиген привели к сокращению спектра назначаемых антибактериальных препаратов у 41 пациента (8,6%), при этом улучшенная модификация эмпирической антибактериальной терапии была достигнута в 18 случаях, оптимальная в 23 случаях.

В среднем, на выполнение данных модификаций понадобился 1 день в группе пациентов с улучшенной модификацией и 3 дня в группе с оптимальной модификацией. В среднем время, необходимое для оптимизации антибактериальной терапии, исходя из результата теста на пневмококковый антиген в моче, составило 2 дня.

Пневмония была вылечена у всех пациентов. Всем участникам исследования в течение 3 дней после поступления в стационар назначалась этиотропная антибактериальная терапия препаратами, обладающими активностью против пневмококка. При этом полученные хорошие клинические исходы позволили сделать предположение, что целенаправленное назначение антибактериальных препаратов, активных в отношении пневмококка эффективная стратегия по ведению пациентов с внебольничной пневмонией. Более того, следует отметить, что не наблюдалось ни одного рецидива заболевания у 23 пациентов с оптимальной модификацией антибактериальной терапии.

Ограничениями данного исследования является отсутствие учёта длительности промежутка времени, в течение которого наблюдался положительный результат теста на пневмококковый антиген уже после излечения пневмококковой инфекции. Кроме того, специфические диагностические тесты на пневмококк были выполнены лишь при посещении врача, что не позволило исследователям включить в анализ полноценные микробиологические данные по всем пациентам. Отсутствие рандомизации является другим потенциальным ограничением исследования.

Таким образом, выявление пневмококкового антигена в моче является важным моментом в ведении взрослых пациентов с внебольничной пневмонией. В случае получения положительного результата становится возможным оптимизировать антимикробную терапию, что приводит к улучшению клинических исходов заболевания.

По мнению авторов исследования, данный тест следует включить в клинические рекомендации наряду с традиционными микробиологическими исследованиями, поскольку они смогут эффективно дополнять друг друга.

Sordé R., Falcó V., Lowak M., Domingo E., Ferrer A., Burgos J., Puig M., Cabral E., Len O., Pahissa A.

Current and Potential Usefulness of Pneumococcal Urinary Antigen Detection in Hospitalized Patients With Community-Acquired Pneumonia to Guide Antimicrobial Therapy.

Arch Intern Med. 2010 Sep 27.

тест на пневмококковый антиген в моче, внебольничная пневмония, оптимизация антимикробной терапии, Streptococcus pneumoniaе

1. Метод Нойфельда или феномен набухания капсулы пневмококка. По одному комочку свежевыделенной мокроты больного наносят на три покровных стекла, к каждому из них прибавляют каплю неразведенной специфической антипневмококковой сыворотки (1, II, IIIтипов) и каплю синьки Лёффлера. Капли тщательно смешивают, покрывают предметным стеклом с лункой, смазанной по краям вазелином. Через две минуты рассматривают висячие капли под микроскопом с иммерсионной системой. При положительном случае видно резкое увеличение капсул пневмококков. При отрицательном результате капсулы едва заветны. Реакция набухания специфична и не даёт положительного результата с другими капсульными бактериями. Её не применяю г для исследования мокроты от больных, леченных сульфаниламидами и антибиотиками, т.к. в этом случае могут выделяться безкапсульные пневмококки. [11,15]

К преимуществам данной методики относится ее быстрота, а к недостаткам- необходимость выделения чистой культуры и недостаточная чувствительность( не все штаммы имеют капсулу) [23].

2. Метод преципитации. 5-10 мл мокроты кипятят в водяной бане до получения плотного сгустка. Сгусток растирают и добавляют небольшое количество физиологического раствора, вновь кипятят несколько минут для извлечения специфического полисахарида из пневмококков. Взвесь центрифугируют, с полученной прозрачной жидкостью и специфическими типовыми сыворотками в преципитационных пробирках ставят реакцию кольцепреципитации. Появление кольца на границе соприкосновения жидкостей указывает на положительный результат[ 11,15].

3. Определение капсул пневмококков по Бурри. На конец предметного стекла наносят каплю исследуемого материала и каплю туши. Смесь перемешивают и делают мазок, высушивают на воздухе и, не фиксируя, микроскопируют. Фон препарата -- тёмно-дымчатый, микробные тела и их капсулы не окрашиваются. Препарат, изготовленный по Бурри, можно зафиксировать смесью Никифорова, промыть водой, окрасить фуксином Циля, разведенным 1:3 в течение 3-5 минут. На тёмном фоне мазка выделяются неокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии ярко малинового цвета (метод Гинса) [ 11,16].

Существуют также разработки выявления пневмококковых антигенов с помощью встречного иммуноэлектрофореза, иммунофлюоросцентного и иммуноферментного анализов. Хотя эти методы имеют определенные достоинства, их стоимость, трудоемкость и сравнительно низкая чувствительность и специфичность являются основными ограничениями к их широкому использованию в рутиной практике [23]. Методики выявления пневмококковых аутолизина и пневмолизина в клиническом материале с поощью ПЦР находятся на стадии разработки. В недавно опубликованном исследовании чувствительность ПЦР на аутолизин и пневмолизин составила, соответственно, 82% и 89%, а специфичность - 38% и 27% [23]. Вследствие низкой специфичности ПЦР, данный метод в настоящее время рассматривается только как перспективный, но требующий дальнейшего усовершенствования[23].

В последние годы все большую популярность приобретает иммунохроматографический экспресс-тест для выявления пневмококкового клеточного полисахарида (С- полисахарида) в моче. Он представляет собой нитроцеллюлозную мембрану с абсорбированными на ней кроличьими антипневмококковыми антителами и имеет диагностический порог 0.5 нг/ мл. Выполнение исследования занимает около 15 мин; чувствительность теста составляет 86% и специфичность- 94%. Ряд международных обществ уже рекомендует его в качестве дополнительного метода диагностики пневмококковой пневмонии [23].

Современные подходы к профилактике пневмококковых инфекций. В 1911 году группа А.Райта разработала неочищенную цельноклеточную пневмококковую вакцину, которая была использована для иммунизации золотоискателей в Южной Африке. Результаты показали некоторые снижение частоты пневмонии и летальных исходов от неё вакцинированных по сравнению с неиммунизированными лицами. После описания в 1923г. М.Хейдельбергом и О.Эвери полисахаридного строения капсулы, уже в 1927г. О.Шиманном и В.Каспером было установлено на животной модели, что введение пневмококковых полисахаридов стимулирует иммунитет. Позднее к 1945г. Стало возможно проведение С.Мак Леодом первого успешного клинического исследования тетравалентной пневмококковой вакцины в военном тренировочном лагере. Примерно в это же время в клиническую практику были внедрены антимикробные препараты, активные в отношении пневмококков, что привело к значительному улучшению исходов терапии.

Работы в области создания пневмококковых вакцин были приостановлены до клинического описания Р.Аустрианом и Дж.Голдом в 1964г. Не смотря на повышение выживаемости пациентов с пневмококковыми пневмониями летальность оставалось на уровне 25% при наличии бактериемии и была самой высокой у пожилых и лиц с хроническими заболеваниями. Непосредственным результатом этих исследований стало возобновление работ по разработке поливалентных полисахаридных пневмококковых вакцин, которые были оценены в двойных слепых, рандомизированных исследованиях у золотоикателей в Южной Африке. Их результаты подтвердили эффективность вакцинации для профилактики пневмонии, что привело к лицензированию в 1974г. 14-валентной вакцины, содержащей 50 мкг капсулярного полисахарида каждого серотипа, в неё входящего. В 1981г. Эта вакцина была заменена на 23-валентную, содержащую по 25 мкг очищенных капсулярных полисахаридных антигенов серотипов 1,2,3,4,5, 6B, 7F,8,9N,9V,10A,11A,12F,14,15B,17F,18C,19A,19F,20,22F,23F,33F,которая используется ив настоящее время. Пневмококки этих серотипов по данным эпидемиологических исследований в различных странах мира вызывают до 90% инвазивных инфекций у взрослых.

Пневмококковые капсулярные полисахаридные антигены стимулируют выработку сератипоспецифичных антител, которые, в свою очередь, повышают эффективность опсонизации, комплементзависимый фагоцитоз и разрушение пневмококков лейкоцитами и другими фагоцитирующими клетками. Концентрации этих антител начинают возрастать в течение первой недели после вакцинации и, для большинства входящих в вакцину антигенов, превышают допрививочные титры у здоровых взрослых в течение > 5 лет.

Иммунный ответ ко всем 23 серотипом входящим в вакцину, в значительной степени является вариабельным. Не смотря на то, что адекватный иммунный ответ на вакцину отмечается и у пациентов в возрасте ? 85 лет, её более низкая эффективность может быть связана с функциональными различиями антител у пожилых и более молодых лиц. Важная роль в иммунном ответе на полисахаридные антигены принадлежит и генетическим фактором. Клиническую значимость поствакцинальных титров антител сложно определить вследствие отсутствия четкого определения защитных уровней. Кроме того, при измерении концентрации антител не принимается во внимание функциональная активность антител. Лабораторные методы, оценивающие функциональность иммунного ответа, например, опсонофагоцитарную активность и разновидность антител, потенциально могут являться более значимыми и достоверными для оценки защищенности по сравнению с простым измерением уровня антител.

Постлицензионные эпидемиологические исследования подтвердили эффективность пневмококковых полисахаридных вакцин для профилактики инвазивных инфекций (бактериями и менингита) у пожилых лиц и пациентов 2 лет определенными хроническими заболеваниями.

На основании 25-летнего клинического опыта использования пневмококковые полисахаридные вакцины в целом считаются безопасными.

Согласно рекомендациям Комитета советников по иммунизационной практике (ACIP), вакцинация рекомендуется лицам ? 65 лет с высоким риском развития пневмококковых инфекций, а также от 2 до 64 лет с наличием определенных хронических заболеваний. Вакцинация также рекомендована лицам с неизвестным иммунизационным статусом.

Как отмечалось ранее, частота инвазивных пневмококковых инфекций является самой высокой у детей в возрасте до 2 лет. К сожалению, пневмококковая полисахаридная вакцина представляет собой Т-независимые антигены, и, как следствие, недостаточно стимулирует иммунный ответ у детей в этом возрасте.

Многообещающим альтернативным подходом к профилактике пневмококковых инфекций является разработка вакцин к некапсульным антигеном, общим для всех пневмококковых серотипов. Белковыми антигенами, используемыми для подобной цели, являются: нейраминидаза, аутолизин, пневмолизин, пневмококковые поверхностные протеины, А и С (PspA и PspC), пневмококковой поверхностной адгезин А (PsaA). Эти белки теоретически могут обеспечивать не только защиту против всех пневмококковых серотипов, но и приводить к стимуляции Т-зависимого ответа с развитием иммунологической памяти.

Таким образом, необходимо отметить, что в настоящее время существуют эффективные пути специфической профилактики инвазивных пневмококковых инфекций у взрослых и детей. Однако перед широким использованием полисахаридной вакцины в РФ, необходимо проведение многоцентровых эпидемиологических исследований по определению преобладающих серотипов пневмококков, вызывающих инвазивные и неинвазивные инфекции в различных регионах. Только такие результаты позволят определить возможную эффективность вакцин с точки зрения принципов доказательной медицины.

Эпидемиологический надзор за инвазивными пневмококковыми инфекциями - комплексное слежение за эпидемическим процессом на определенной территории и в конкретный период времени в целях организации профилактических, противоэпидемических и лечебных мероприятий. Эта работа осуществляется при совместном участии эпидемиологов, клиницистов, врачей-бактериологов, медицинских статистиков и организаторов здравоохранения.

Основными задачами эпидемиологического надзора за инвазивными пневмококковыми инфекциями являются оценка эпидемиологической ситуации, ретроспективный эпидемиологический анализ заболеваемости инвазивными пневмококковыми инфекциями, создание условий для адекватного проспективного слежения за заболеваемостью пневмококковым менингитом и другими формами инвазивных пневмококковых инфекций; выработка рекомендаций для проведения наиболее рациональных мер борьбы с ИПИ. Поскольку наиболее радикальной мерой борьбы с инвазивными и неинвазивными пневмококковыми инфекциями, является вакцинопрофилактика, эпидемиологический надзор должен послужить основанием для решения вопроса о проведении вакцинопрофилактики, выборе места, времени и порядка ее проведения, и, в случае принятия решения, должен позволить контролировать изменение эпидемиологической ситуации в результате выполнения программ вакцинации.

Организация системы эпидемиологического надзора за инвазивными пневмококковыми инфекциями предусматривает понимание актуальности проблемы пневмококковых инфекций, клинических и эпидемиологических особенностей клиницистами и эпидемиологами, совершенствование диагностики ГБМ у детей, в том числе за счет внедрения некультуральных методов диагностики.

Санитарно-просветительные мероприятия в системе профилактики пневмококковой инфекции. Информирование специалистов о возможности и целесообразности вакцинопрофилактики пневмококковой инфекции должно основываться на фактах и принципах, изложенных в данных методических рекомендациях, и осуществляться в различных формах и на различных уровнях: федеральном (организация научных конференций, секций на съездах и конгрессах, издание монографий и пособий, публикаций в медицинской периодике), региональном (проведение совещаний с участием специалистов различного профиля, проведение обучающих школ и семинаров для организаторов здравоохранения, бактериологов, инфекционистов, педиатров и иммунологов).

Рекомендуется усиление общих санитарно-просветительных и информационно-разъяснительных мероприятий, при которых родители получают информацию о пневмококковой инфекции и возможности ее вакцинопрофилактики непосредственно на приеме у врача-педиатра, а также через средства массовой информации, наглядные пособия и раздаваемые информационные материалы в детских поликлиниках и прививочных кабинетах. Должны быть разъяснены: общераспространенность пневмококковой инфекции, многообразие и тяжесть ее клинических проявлений; наличие возможности предотвращения заболевания пневмококковой инфекцией, безопасность и эффективность вакцинации, показания, противопоказания и схема применения пневмококковой вакцины. Следует довести до сведения родителей, что вероятность заболевания пневмококковой инфекцией повышена: у детей из многодетных семей, особенно если у новорожденного есть брат/сестра на 1-4 года старше; у детей, проживающих в общежитиях и/или коммунальных квартирах, особенно если совместно с новорожденным проживает ребенок на 1-4 года старше; у детей с хроническими заболеваниями, а также у часто и длительно болеющих детей и у детей с неврологически отягощенным фоном (родовая травма, гипертензионный и судорожный синдром, парезы, отставание в развитии) [5].

ВНИМАНИЕ! САЙТ ЛЕКЦИИ.ОРГ проводит недельный опрос. ПРИМИТЕ УЧАСТИЕ. ВСЕГО 1 МИНУТА.

Цель исследования: выявление пневмококка.

Материал для исследования

1. Мокрота (пневмония).

2. Слизь из зева (ангина).

3. Отделяемое из язвы (ползучая язва роговицы).

4. Выделение из уха (отит).

6. Плевральный пунктат (плеврит).

7. Кровь (подозрение на сепсис).

Способы сбора материала

Способы сбора материала

1 (Лучше брать утреннюю мокроту (при специфической пневмонии мокрота имеет ржавый цвет).)

Основные методы исследования

Ход исследования

Первый день исследования

Первый день исследования

Биологическая проба. Немного (3-5 мл мокроты) эмульгируют в стерильном бульоне, 0,5 мл этой смеси вводят внутрибрюшинно белой мыши. Через 6-8 ч у мыши отмечаются признаки заболевания. В это время пневмококк уже можно обнаружить в экссудате брюшной полости. Экссудат берут стерильным шприцем. Из него делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для выделения чистой культуры экссудат засевают на агар с сывороткой. Если мышь погибает или заболевает, делают посев крови из сердца на агар с сывороткой крови для выделения чистой культуры. Посевы ставят в термостат.

Ускоренный метод определения типа пневмококка (реакция микроагглютинации). 4 капли экссудата из брюшной полости зараженной мыши наносят на предметное стекло. К первой капле прибавляют агглютинирующую сыворотку I типа, ко второй - сыворотку II типа, к третьей - III типа, к четвертой - изотонический раствор натрия хлорида (контроль).

Сыворотки I и II типа предварительно разводят в соотношении 1:10, а сыворотку III типа - 1:5. Все капли размешивают, высушивают, фиксируют и окрашивают разведенным фуксином. При положительном результате в одной из капель отмечается скучивание микробов (агглютинация).

Второй день исследования

Посевы вынимают из термостата, просматривают и из подозрительных колоний делают мазки. При наличии в мазках грамположительных ланцетовидных диплококков 2-3 колонии выделяют на скошенный агар с сывороткой для получения чистой культуры. Посевы помещают в термостат. Из бульона делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Третий день исследования

Посевы вынимают из термостата. Проверяют чистоту культуры - делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии в выделенной культуре грамположительных ланцетовидных диплококков проводят идентификацию выделенной культуры путем посева:

1) на среды Гисса (лактоза, глюкоза, сахароза, мальтоза) проводят посев обычным способом - уколом в среду;

2) на среду с инулином;

3) на среду с оптохином;

4) ставят пробу с желчью.

Проба на инулин. Исследуемую культуру засевают на питательную среду, содержащую инулин и лакмусовую настойку, и ставят в термостат. Через 18-24 ч посевы вынимают из термостата. При наличии пневмококков среда окрашивается в красный цвет (стрептококки консистенцию и цвет среды не меняют).

Определение чувствительности к оптохину. Выделенную культуру засевают на 10% агар с кровью, содержащий оптохин 1:50000. Пневмококки, в отличие от стрептококков, не растут на средах, содержащих оптохин.

Проба с желчью. В агглютинационные пробирки наливают по 1 мл исследуемой бульонной культуры. В одну из них добавляют каплю кроличьей желчи, вторая пробирка служит контролем. Обе пробирки помещают в термостат. Через 18-24 ч наступает лизис пневмококков, который выражается в просветлении мутного бульона. В контроле взвесь остается мутной.

Пробу с желчью можно поставить на плотной питательной среде. Для этого на колонию пневмококков, выросших в чашках с агаром и сывороткой, наносят крупинку сухой желчи - колония растворяется - исчезает.

Четвертый день исследования

Производят учет результатов (табл. 26).

Таблица 26. Дифференциация пневмококка от зеленящего стрептококка

Примечание. к - расщепление углеводов с образованием кислоты.

В настоящее время широко используются серологические методы исследования (РСК и РИГА) для определения стрептококковых антител. Определение группы и серовара выделенной культуры производят с помощью флюоресцирующих антител.

Определение вирулентности пневмококка. Суточную бульонную культуру пневмококка разводят 1% пептонной водой от 10 -2 до 10 -8 , 0,5 мл каждого разведения вводят двум белым мышам. Культуру, вызвавшую гибель мышей в разведении 10 -7 , оценивают как вирулентную, в разведении 10 -4 -10 -6 считают средневирулентной. Культура, не вызвавшая гибель мышей, авирулентна.

Контрольные вопросы

1. Какие методы выделения чистой культуры пневмококков Вы знаете?

2. Какое животное наиболее чувствительно к пневмококку?

3. Какие реакции ставят с экссудатом зараженной мыши и с какой целью?

4. От каких представителей гноеродных кокков следует дифференцировать пневмококк и с помощью какой пробы?

5. Как определить вирулентность пневмококков?

Задание

Составьте схему исследования мокроты, указав его этапы по дням.

Питательные среды

Агар с сывороткой (см. главу 7).

Бульон с сывороткой (см. главу 7).

Агар с кровью (см. главу 7).

Среды Гисса (сухие).

Среда для пробы с инулином. К 200 мл дистиллированной воды прибавляют 10 мл инактивированной бычьей сыворотки, 18 мл лакмусовой настойки и 3 г инулина. Стерилизуют текучим паром при 100° С 3 дня подряд. Желчный бульон (см. главу 7).

Глава 16. Менингококки

Род Neisseria включает два вида микробов, патогенных для человека: N. meningitidis и N. gonorrhoeae. Neisseria meningitidis были выделены из цереброспинальной жидкости больного Вексельбаумом (1887).

Морфология. Менингококки - это парные кокки, состоящие из двух бобовидных кокков, лежащих вогнутыми сторонами друг к другу, наружные стенки у них выпуклые (см. рис.4). Размер каждого кокка 0,6-0,8 × 1,2-1,5 мкм. Они полиморфны. Менингококки неподвижны, не имеют спор, образуют капсулу. Грамотрицательны. В чистых культурах располагаются тетрадами и в виде отдельных кокков без определенного порядка, а в мазках, приготовленных из спинномозговой жидкости, чаще располагаются попарно. В гнойном материале находятся внутри лейкоцита.

Культивирование. Менингококки - аэробы. Они требовательны к питательным средам, размножаются только на средах, содержащих нативный белок (сыворотку, кровь). Растут при температуре 36-37° С (при 25° С рост прекращается), рН среды 7,4-7,6. Для их размножения необходима влажная среда и повышенное количество углекислоты (фактор, стимулирующий их рост). Посев следует производить на свежеприготовленную среду.

На плотных питательных средах менингококки образуют небольшие 2-3 мм в диаметре, нежные, полупрозрачные, голубоватые, вязкие колонии. В бульоне с сывороткой менингококки дают легкую муть и небольшой осадок. Свежевыделенные штаммы в S-форме. Старые культуры могут диссоциировать, образовывать шероховатые R-формы колоний.

Ферментативные свойства. Биохимически менингококки мало активны. Они расщепляют глюкозу и мальтозу с образованием кислоты. Протеолитические свойства у них не выражены (не створаживают молоко, желатин не разжижают).

Патогенность менингококков обусловливается наличием капсулы, которая препятствует фагоцитозу, пи лей, способствующих прикреплению микроба к поверхности эпителиальных клеток, и образованием ферментов: гиалуронидазы и нейраминидазы.

Токсинообразование. При разрушении бактериальных клеток высвобождается сильный термоустойчивый эндотоксин, который является липополисахаридом клеточной стенки. При заболевании он обнаруживается в крови и в спинномозговой жидкости больных. Тяжесть заболевания часто зависит от количества накопившегося токсина.

Антигенная структура. По полисахаридному (капсульному) антигену менингококки разделяют на серогруппы: А, В, С, D, X, Y U-135 29E (всего девять серогрупп).

Согласно международной классификации основными группами являются А, В и С. Менингококки группы А часто вызывают генерализованные процессы и имеют наибольшее эпидемиологическое значение. Менингококки групп В и С вызывают спорадические заболевания. Остальные серогруппы мало изучены.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Менингококки малоустойчивы. Температура 70° С губит их через 2-3 мин, 55° С - через 5 мин. В отличие от других кокков этой группы они плохо переносят низкую температуру, особенно чувствительны к температурным колебаниям.

Обычные концентрации дезинфицирующих растворов губят их быстро.

Восприимчивость животных. В естественных условиях животные не чувствительны к менингококкам. Но при субдуральном введении менингококков обезьянам можно вызвать у них заболевание.

Внутрибрюшинное заражение морских свинок и белых мышей вызывает их гибель за счет действия эндотоксина.

Источники инфекции. Больной человек и бактерионоситель.

Пути передачи. Основной путь воздушно-капельный.

Заболевания у человека:

3) цереброспинальный эпидемический менингит.

Патогенез. Попав на слизистую оболочку носоглотки, менингококки могут там локализоваться, обусловив носительство или вызвать острый назофарингит. Если они проникают в лимфатические сосуды, кровь и генерализуются, то вызывают глубокие изменения в паренхиматозных органах за счет действия эндотоксина. Развивается менингококкцемия. При проникновении менингококков в мозговые оболочки возникает гнойное воспаление - менингит. При менингококковом менингите спинномозговая жидкость мутная (в отличие от туберкулезного менингита). При спинномозговой пункции жидкость вытекает струей вследствие повышенного внутричерепного давления. Менингеальные явления характеризуются головной болью, ригидностью затылка, рвотой и т. д. Менингитом чаще болеют дети. У взрослых чаще заражение ограничивается носительством или назофарингитом.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет напряженный, он обусловливается опсонинами, комплементсвязывающими и бактериоцидными антителами. От интенсивности образования антител к полисахаридным и белковым антигенам зависит течение заболевания.

Профилактика. Сводится к раннему выявлению носителей, изоляции заболевших назофарингитом. Больные подлежат госпитализации.

Специфическая профилактика. Разработана химическая вакцина, состоящая из полисахаридов серогрупп А и С. Для экстренной профилактики используется иммуноглобулин.

Лечение. Антибактериальные препараты - пенициллин, левомицетин, ампициллин.

Контрольные вопросы

1. Каковы морфологические свойства менингококков?

2. На каких средах выращивают менингококки и какие условия необходимы для их размножения?

3. Какова биохимическая активность менингококков и их устойчивость во внешней среде?

4. Какие заболевания вызывают менингококки?

5. По какому антигену делят менингококки на серогруппы?

Читайте также: