Методика подсчета ретикулоцитов. Норма ретикулоцитов в крови

Добавил пользователь Skiper
Обновлено: 21.12.2024

Для дифференциальной диагностики типов анемий, а также для определения активности процессов образования эритроцитов в костном мозге; Для определения тяжести анемии вместе с данным исследованием должен выполняться общий анализ крови, в рамках которого оценивается количество эритроцитов и эритроцитарные индексы, гематокрит и концентрация гемоглобина.

Наименование метода

Тип биоматериала/Тип пробирки/Цвет крышки

Необходимый объем биоматериала

Преаналитические требования

Подготовка к исследованию:

Взятие крови осуществляют из вены, натощак, при минимальной физической активности непосредственно перед взятием (в течение 30 мин), в положении пациента сидя или лежа. Исключается курение и прием алкоголя. Кровь должна поступать свободным током непосредственно в вакуумную пробирку с К2ЭДТА (фиолетовая крышка). Для точного соотношения кровь-антикоагулянт необходимо набрать полностью всю пробирку до метки! После взятия крови пробирку плавно переворачивают 8–10 раз на 180º (не встряхивать!) с целью тщательного перемешивания с антикоагулянтом.

Условия хранения и транспортировки:

До приезда курьера пробирку хранить в штативе в вертикальном положении при температуре +2 +8ºС. Доставка в лабораторию осуществляется в день взятия биоматериала (не позднее 8 часов с момента взятия пробы). До следующего дня хранить кровь нельзя!

Примечание:

При длительном хранении происходит изменение клеток крови. Клетки крови могут изменяться и разрушаться вследствие апоптоза. На результаты исследований могут влиять факторы, связанные с индивидуальными особенностями и физиологическим состоянием организма пациента.

Стабильность аналитов

Клиническая информация о тесте

Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся в костном мозге и в небольшом количестве находящиеся в крови. Они являются переходной формой между предшественниками эритроцитов в костном мозге и взрослыми эритроцитами, в большом количестве находящимися в кровяном русле. Если происходит разрушение эритроцитов (гемолиз) или нарушается их синтез в костном мозге, возникает анемия. Также ее развитию способствует потеря эритроцитов из-за кровотечения – тогда организм усиливает образование эритроцитов в костном мозге и количество ретикулоцитов в крови возрастает. Поражение костного мозга (например, опухолью, химиопрепаратами или ионизирующим излучением) приводит к снижению производства эритроцитов и количества ретикулоцитов в костном мозге и периферической крови. Недостаточное образование эритроцитов приводит к уменьшению их циркуляции в кровяном русле, количества гемоглобина и способности переносить кислород. Соответственно, образуется меньше ретикулоцитов.

Интерпретация результатов

Увеличение количества: Повышенный эритропоэз при гемолитических анемиях, анемии при кровопотере (до развития дефицита железа), анемии при специфическом лечении (дефицит железа, мегалобластная анемия). Снижение количества: Аплазия эритроцитов (включая преходящую эритробластопению у детей), апластическая анемия (включая медикаменты, вызывающие апластическую анемию), заболевания почек, эндокринные болезни, замещение костного мозга.

Методика подсчета ретикулоцитов. Норма ретикулоцитов в крови

Синонимы русские

Количество ретикулоцитов, подсчет количества ретикулоцитов, ретикулоцитарный индекс.

Синонимы английские

Retic count, reticulocyte index, corrected reticulocyte, reticulocyte count.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Единицы измерения

*10^9/л (10 в ст. 9/л), % (проценты).

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
Не принимать пищу за 2-3 часа до исследования (можно пить чистую негазированную воду).
Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
Не курить за 30 минут до взятия крови.

Общая информация об исследовании

Ретикулоциты – молодые красные кровяные клетки (эритроциты). Они образуются в костном мозге, когда стволовые клетки дифференцируются и делятся, превращаясь во взрослые эритроциты через стадию ретикулоцитов, постепенно теряя ядро и уменьшаясь в размере.

У новорождённых ретикулоцитов больше, чем у взрослых.

Большинство эритроцитов уже полностью созревшие, когда они покидают костный мозг и выходят в кровяное русло, однако 0,5-2 % из всех циркулирующих в крови – это ретикулоциты, которые превращаются во взрослые эритроциты в течение двух дней. Данный анализ показывает число и процент ретикулоцитов в крови и выявляет адекватность производства эритроцитов костным мозгом и степень его активности.

Организм старается поддерживать примерно одинаковое число циркулирующих эритроцитов, в норме продолжительность жизни каждого из них – около 120 дней. При этом старые эритроциты уничтожаются в селезенке, а новые образуются в костном мозге. Этот процесс регулируется эритропоэтином – гормоном, который производится в почках. В ответ на снижение уровня кислорода в крови почкой вырабатывается эритропоэтин, который затем кровью доставляется в костный мозг, где стимулирует образование эритроцитов. Как только количество эритроцитов повышается, выработка эритропоэтина в почках снижается.

Если происходит разрушение эритроцитов (гемолиз) или нарушается их синтез в костном мозге, возникает анемия. Также ее развитию способствует потеря эритроцитов из-за кровотечения – тогда организм усиливает образование эритроцитов в костном мозге и количество ретикулоцитов в крови возрастает.

Поражение костного мозга (например, опухолью, химиопрепаратами или ионизирующим излучением) приводит к снижению производства эритроцитов и количества ретикулоцитов в костном мозге и периферической крови.

Недостаточное образование эритроцитов приводит к уменьшению их циркуляции в кровяном русле, количества гемоглобина и способности переносить кислород. Соответственно, образуется меньше ретикулоцитов.

В свою очередь, число ретикулоцитов и эритроцитов увеличивается при более активной работе костного мозга. К этому могут приводить разные причины, например увеличение продукции эритропоэтина, хронические расстройства, повышающие число эритроцитов (истинная полицитемия), или курение.

Анализ крови на ретикулоциты

Общеклинический анализ крови ребенка - наиболее важный метод обследования, позволяющий выявить в детском организме различные нарушения. В ходе анализа определяется множество различных показателей, важнейшим из них является гемоглобин, выполняющий роль «посредника» в обмене газов между легкими и тканями организма. За уровень его содержания отвечают эритроциты. В случаях, когда их количество резко снижается, костный мозг начинает усиленную выработку ретикулоцитов – молодых красных клеток, имеющих сетчатую зернистость.

Через несколько дней «юные» эритроциты под воздействием биологически активного вещества эритропоэтина, выделяемого почками и надпочечниками, трансформируются в полноценные зрелые клетки и полностью возмещают их дефицит.

Уровень содержания ретикулоцитов в циркулирующей крови ребенка является важнейшим показателем степени активности функциональной деятельности костного мозга при выработке эритроцитов. Подсчет их количества при исследовании крови ребенка дает возможность оценить регенеративную способность детского организма при кровотечениях, нарушении эритропоэза, патологиях крови и кроветворных органов.

Когда назначают анализ крови

контроле восстановления функции костного мозга после проведенной трансплантации;
оценивании эффективности образования эритроцитов (эритропоэза);
при подозрении на гемолиз (процесс распада эритроцитов);
мониторинге применения препаратов железа.

Методика проведения анализа

Биологическим материалом анализа крови на ретикулоциты у детей является капиллярная кровь. Рекомендуется накануне обследования уменьшить физическую активность ребенка и сдача крови натощак.

В лабораториях, оснащенных современным оборудованием, подсчет численности ретикулоцитов осуществляется с помощью автоматического гематологического анализатора. Технология метода основана на кондуктометрическом способе, принцип которого заключен в анализе амплитуды электрических импульсов, возникающих при прохождении через апертуру форменных клеток периферической крови.

Расшифровка анализа

новорожденные малыши до 2 недель: 0,13 - 1,25%;
до 1 месяца: 0,5 - 1,55%;
до 2-х месяцев: 0,45 - 2,0%;
до полугода: 0,35 - 0,95%;
до 2-х лет: 0,35 - 1,05%;
до 6 лет: 0,3 - 0,85%;
до 12 лет: 0,3 - 1,35%;
до 18 лет у девочек: 0,13 - 2,2; у мальчиков: 0,26 - 1,8%.

гемолизе;
кровопотере;
гемолитической анемии;
кислородном голодании;
талассемии (генетическом дефекте эритроцитов);
приеме витамина В-12 и препаратов железа.

аутоиммунных патологий кроветворной системы;
анемий различного генеза;
заболеваний почек;
интоксикации угарным газом.

Ретикулоциты

Ретикулоциты - незрелые клетки крови, предшествующие эритроцитам. Они также содержат гемоглобин и могут доставлять кислород к клеткам организма, но их эффективность ниже, чем у зрелых эритроцитов. Название клеток связано с наличием ретикулума - субстанции, образованной из элементов распавшегося ядра, рибосом и митохондрий.

Ретикулоциты образуются в костном мозге, после выхода в кровь за период от нескольких часов до 3 дней превращаются в эритроциты.

клетки имеют плотную зернистость вокруг ядра;
клетки имеют зернисто-сетчатую структуру похожую на клубок;
клетки имеют зернистость похожую на густую смесь;
клетки имеют зернисто-сетчатую структуру похожую на отдельные нити;
клетки содержат отдельные зернышки в цитоплазме.

Для чего определяют количество ретикулоцитов?

Образование молодых эритроцитов происходит в костном мозге (мягкой ткани внутренней полости кости) в период дифференцировки и деления стволовых клеток. Постепенно красные тельца уменьшаются в размере и теряют ядро, превращаясь в созревшие эритроциты, которые покидают костный мозг, выходя в кровяное русло. Продолжительность их жизни составляет 4 месяца. В организме человека происходит множество биологических реакций, которые поддерживают в циркулирующей крови одинаковую численность эритроцитов: уничтожение «старых» клеток обеспечивает селезенка, образование «новых» – костный мозг. Регулирует этот процесс гормон эритропоэтин, который продуцируют почки в ответ на уменьшение количества в их тканях кислорода. Это биологически активное вещество поступает в кровяное русло, достигает костного мозга и стимулирует выработку эритроцитов. Увеличение числа красных клеток снижает секрецию эритропоэтина.

Гемолиз – разрушение эритроцитов, и нарушение их синтеза в костном мозге провоцируют возникновение анемии. Ее развитие также может быть обусловлено кровотечением, которое сопровождается потерей красных телец – это явление приводит к усиленному образованию эритроцитов и возрастанию в периферической крови количества ретикулоцитов. При поражении костного мозга опухолевидным образованием либо радиацией снижается производство эритроцитов, уменьшается уровень содержания в них гемоглобина и ухудшается способность транспортировать кислород – это сопровождается снижением образования ретикулоцитов. Более активное функционирование кроветворной системы приводит к увеличению числа клеток.

Проведение исследования крови, в ходе выполнения которого подсчитывают ретикулоциты, требуется для дифференциального диагностирования различных анемий и определения активности костного мозга. Для оценивания степени тяжести малокровия используются специфичные показатели – гематокритное число, эритроцитарные и ретикулоцитарные индексы.

Подсчет ретикуоцитарных индексов

На сегодняшний день распространенность анемических состояний довольно высока – это явление требует искать простые, точные и высокочувствительные способы их диагностирования на ранних стадиях развития. С этой целью используются новые лабораторные методики, которые позволяют изучить такие параметры, как:

среднее содержание гемоглобина в ретикулоците (СНR);
скорректированное число ретикулоцитов (CRC);
индекс созревания ретикулоцитов (RPI);
ретикулоцитарный индекс продукции.

Полученные показатели предоставляют возможность врачу классифицировать анемию по:

1. Оценке регенеративной способности костного мозга – на:

а-регенераторную указывает отсутствие ретикулоцитов;
гипо-регенераторную – число клеток меньше 0,2%;
регенераторную – численность клеток соответствует показателям нормы;
гипер-регенераторную – превышение верхнего предела нормы (>1,2%).

2. Ретикулоцитарному индексу продукции – на:

гипо-пролиферативные – с низкой продукцией молодых эритроцитов (менее 2 фл);
макро- либо микро-цитарные, вызванные низким эритропоэзом – процессом кроветворения, при котором производятся и созревают эритроциты;
нормо-цитарные, ассоциированные с гемолизом и высокой продукцией ретикулоцитов (более 3-5 фл).

Показания для проведения анализа

при подозрении на кровотечение, гемолиз, нарушения эритропоэза;
для диагностики эффективности проведенного лечения различных видов анемии и регенерации костного мозга после трансплантации;
для оценки состояния пациента при почечной патологии и после трансплантации почки, так как за созревание эритроцитов отвечает гормон эритропоэтин, вырабатываемый почками.

Подготовка к исследованию

Исследование проводят утром натощак.
За 8 часов до него можно употреблять только воду.
За 2-3 дня рекомендуется отказаться от жирной пищи, алкоголя, чрезмерных нагрузок.
Врач по возможности отменяет принимаемые лекарства за 2-3 недели до исследования.

Методика проведения и интерпретация результатов

Подсчет количества ретикулоцитов осуществляется при микроскопии мазков. Под увеличением видны окрашенные элементы ретикулума. По их форме определяется вид ретикулоцитов. В норме 80% клеток относятся к видам 4 и 5. Для интерпретации анализа важно оценить процентное содержание ретикулоцитов. Верхняя граница нормы у женщин выше из-за периодических кровопотерь. Высокий показатель наблюдается у новорожденных.

Нормальным считается содержание ретикулоцитов у женщин в пределах 0,12-2%, у мужчин - 0,24-1,7%.

Ответ может быть выражен в промилле. В этом случае цифры будут выше в 10 раз.

гемолитических анемиях;
кровопотере и разрушении эритроцитов;
эффективной терапии железодефицитной анемии препаратами железа;
остром кислородном голодании;
малярии;
талассемии;
метастазах в костном мозге;
полицитемии.

гипопластической, мегалобластной, сидеробластной анемиях;
лучевой и химиотерапии;
аутоиммунной патологии системы кроветворения; ;
костных метастазах;

Что оказывает влияние на результат исследования?

До недавнего времени количество ретикулоцитов подсчитывали под микроскопом. Принцип этой методики заключался в осаждении остаточных рибонуклео-протеинов зрелых эритроцитов и суправитальном окрашивании 1% раствором бриллиант-крезил блау. Сетевидная ткань молодых эритроцитов имеет синий оттенок и зернисто-нитевидную структуру. Этот способ в некоторых случаях используется и в настоящее время, однако более достоверные данные получают при автоматическом подсчете с помощью гематологического анализатора.

На результат исследования могут повлиять:

пребывание пациента на большой высоте – в этой ситуации в организме запускаются адаптивные механизмы, вызванные снижением концентрации кислорода, соответственно количество ретикулоцитов увеличивается;
пагубные пристрастия – алкоголизм и табако-курение;
беременность – в период вынашивания малыша в женском организме происходят физиологические изменения;
физическое и психоэмоциональное перенапряжение;
применение жаропонижающих и сульфаниламидных препаратов.

Важно помнить, что на основании определения только количества ретикулоцитов поставить диагноз невозможно! С помощью исследования их уровня врач может предположить, что именно происходит в организме пациента, выбрать тактику дальнейшего обследования и контролировать эффективность лечебных мероприятий.

Миелограмма в норме - цитология исследования костного мозга

На основании общеклинического анализа крови сложно дать оценку состояния гемопоэза. Более полное представление дает изучение костного мозга (цитологическое, цитохимическое и др.).

Цитологический анализ костного мозга играет большую роль в диагностике заболеваний кроветворной системы. Подсчет миелограммы дает представление о характере эритропоэза (нормобластический или мегалобластический), позволяет обнаружить клетки, характерные для различных заболеваний системы крови (множественной миеломы, острых лейкозов, хронического миелолейкоза, хронического лимфолейкоза, лейкемизированных неходжкинских лимфом, болезни Гоше, Ниманна-Пика, метастазов рака в костном мозге и др.).

Данные миелограммы необходимы для проведения дифференциального диагноза с лейкемоидными реакциями. Сопоставление данных костномозгового кроветворения с картиной периферической крови и клинической симптоматикой позволяет уточнить причину анемии.

Имеются абсолютные и относительные показания к стернальной пункции.
Абсолютные показания: все анемии (кроме типичной железодефицитной), различные цитопении (одноростковая, двуростковая, панцитопения), острые лейкозы, хронические лейкозы в начальной стадии (для подтверждения диагноза и исключения лейкемоидных реакций), выраженное изолированное увеличение СОЭ (для исключения множественной миеломы и макроглобулинемии Вальденстрема), подозрение на метастазы злокачественной опухоли в костном мозге.
Относительные показания: железодефицитные анемии, хронические лейкозы в развернутой стадии.

Аспирационная биопсия костного мозга является технически простым, безопасным и легкодоступным методом. Наиболее часто используется стернальная пункция, предложенная в 1927 г. М. И. Аринкиным и впервые выполненная на кафедре факультетской терапии Военно-медицинской академии. При необходимости можно пунктировать гребень или бугристость подвздошной кости, у детей — пяточную кость. Пункция грудины выполняется иглой И. А. Кассирского с предохранительным щитком. После взятия аспирата костного мозга производят подсчет количества миелокариоцитов, мегакариоцитов, ретикулоцитов, готовят мазки для подсчета миелограммы.

Миелокариоциты миелограммы. У здоровых людей количество миелокариоцитов (всех ядросодержащих клеток костного мозга) в камере Горяева составляет 50-250•10 9 /л.

Мегакариоциты миелограммы. Нормальное количество мегакариоцитов в камере Фукса-Розенталя составляет 0,05-0,1•10 6 /л. Необходимо также определять количество мегакариоцитов в окрашенных мазках в 250 полях зрения под малым увеличением и при подсчете миелограммы в процентах.

Следует помнить, что снижение уровня миелокариоцитов и мегакариоцитов в миелограмме отмечается также при разведении аспирата периферической кровью (технические погрешности при выполнении стернальной пункции).

Ретикулоциты миелограммы. Нормальное количество ретикулоцитов в костном мозге составляет 20-30%о. Увеличение их числа наблюдается при гемолитических и постгеморрагических анемиях.

Морфологический анализ клеток костного мозга (подсчет миелограммы) производят на 500 клеток костного мозга, после чего вычисляют процентное содержание каждого вида клеток.

При анализе миелограммы необходимо оценить клеточность костного мозга (нормо-, гипо- или гиперклеточный), дать качественную характеристику всех клеточных рядов с определением индексов созревания, лейкоэритробластического соотношения, характера эритропоэза (нормобластический, мегалобластический или с мегалобластоидными чертами) и количества митозов. Отдельно следует оценить мегакариоцитопоэз (количество и функция мегакариоцитов).

Костномозговой индекс созревания нейтрофилов определяется по формуле: (промиелоциты + миелоциты + метамиелоциты)/ (палочкоядерные + сегментоядерные нейтрофилы)
В норме костномозговой индекс созревания нейтрофилов равен 0,6-0,8.

Уменьшение индекса свидетельствует о задержке гемоглобинизации и/или преобладании молодых базофильных нормоцитов, дает возможность ориентировочно оценить запасы и обмен железа в организме.

Лейкоэритробластическое соотношение определяется по формуле: (гранулоциты): (ядросодержащие клетки эритроидного ряда) и в норме составляет 3-4:1.

Количество митозов в норме составляет 3,5 на 1000 для клеток гранулоцитарного ряда и 5 на 1000 — для клеток эритроидного ряда.

Заключение по миелограмме не должно быть категоричным, поскольку для постановки диагноза необходимо учитывать клинические данные и показатели периферической крови.

Для более полной характеристики гемопоэза, особенно мегакариоцитопоэза, в ряде случаев требуется гистологическое исследование костного мозга методом трепанобиопсии.

Определение сидеробластов и сидероцитов в миелограмме

При железодефицитных и сидеробластных анемиях важно определять количество сидероцитов и сидеробластов — эритроцитов и эритробластов, содержащих в цитоплазме железо в виде гемосидерина и ферритина (зернышки синего цвета при окраске по Перлсу диаметром 0,2-1,5 мкм). У здоровых людей в периферической крови содержится 1,1-3,0% (в среднем 1,6%) сидероцитов. Содержание сидеробластов в костном мозге составляет 15-40% от всех клеток эритроидного ряда; количество гранул в них обычно 1-2 (не более 4).

Клиническое значение. При хронических железодефицитных анемиях отмечается снижение количества сидероцитов и сидеробластов в костном мозге, гранулы железа в них практически выявить не удается.

Увеличение количества сидеробластов с большим количеством гранул железа в каждом из них, появление кольцевых форм сидеробластов наблюдается при наследственных и приобретенных сидеробластных анемиях (интоксикация свинцом, один из вариантов миелодиспластического синдрома — рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами).

Наряду с исследованием крови и костного мозга для диагностики специфических поражений и осложнений проводимой терапии в ряде случаев необходим анализ биологических жидкостей (мочи, кала, мокроты, экссудатов, ликвора).

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Читайте также: